Name: Bir Mikrodiyaliz Sistemi Kullanarak Bilinçli Sıçanlardan Hipokampal Hücre Dışı Sıvının Gerçek Zamanlı Dinamik Toplanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 43 s
Description: Öğrenin, uyanık sıçanlarda hipokampal hücre dışı sıvının gerçek zamanlı toplanması için beyin mikrodiyaliz tekniğini. Bu yöntem, merkezi sinir sistemi hastalıklarında hastalık belirteçlerini izlemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82104533), Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bölümü (2021YJ0175) ve Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (2020M683273) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, Tri-Angels D&H Trading Pte'de kıdemli bir ekipman mühendisi olan Bay Yuncheng Hong'a teşekkür etmek istiyor. Ltd. (Singapur) mikrodiyaliz tekniği için teknik hizmetler sağladığı için.

Deneysel protokol, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Laboratuvar Hayvanlarının Kullanımı ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin gerekliliklerine uygun olarak yürütülmüştür (Kayıt numarası: 2021-11). Bu çalışmada erkek Sprague Dawley (SD) sıçanları (280 ± 20 g, 6-8 haftalık) kullanıldı.
1. Beyin mikrodiyaliz probu implantasyon cerrahisi
<ol><li>Sıçan anestezisinin indüksiyonu ve bakımı için sırasıyla% 3 ve% 1.5 izofluran kullanın, 0.6 L / dak'da bir hava-oksijen karışımında bir hayvan anestezi sistemi kullanın. Sıçanların hem ağrı refleksi hem de kornea refleksi olmadan derin anestezi yapıldığından emin olun. Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için gözlerde veteriner merhem kullanın.</li>
	<li>Anestezi uygulanan sıçanın kafatasındaki kürkü, hazırlık alanındaki bir elektrikli tıraş makinesi ile çıkarın. Ardından, anestezi uygulanan sıçanı stereotaksik bir beyin bulucuya sabitleyin. Steril pamuk topu ile ameliyat bölgesine povidon-iyot ve etanol 3x uygulayarak operasyon öncesi ameliyat bölgesini dezenfekte edin. Lokal analjezi için bupivakaini topikal olarak uygulayın. NOT: Mikrodiyaliz bazlı HECF numunesi alma sürecinin tamamı Şekil 1'de gösterilmiştir.</li>
	<li>Cerrahi makasla ortadan aşağıya doğru 1,5 cm'lik bir kraniyofasiyal kesi yapın ve cerrahi makas ve oftalmik forseps kullanarak periosteumu çıkarın.</li>
	<li>Bregma'yı bazal pozisyon olarak düşünün ve bir kraniyal matkap kullanarak anteroposterior (AP) pozisyonunda (-2 mm), mediolateral (ML) pozisyonunda (-3.5 mm) ve dorsoventral (DV) pozisyonunda (-3.5 mm) (hipokampal CA1 bölgesi) 2 mm'lik bir açıklığı delmek için endokraniyumu delin.</li>
	<li>Kateter stilini stereotaksik beyin bulucunun tutucusuna sabitleyin ve mikrodiyaliz muhafazasının konumunu AP (-2 mm), ML (-3,5 mm) ve DV (0 mm) konumlarında ayarlayın. Beyin stereo bulucusunun DV değerini ayarlayın ve mikrodiyaliz gövdesini CA1 bölgesine 3,5 mm derinlikte implante edin. NOT: Bir hayvan sıcaklık tutucusu kullanarak işlem sırasında hayvanın sıcaklığını 37 ° C'de tutun.</li>
	<li>Üç diyafram açıklığının prob açıklığının merkezi olarak yerleştirildiği bir üçgen oluşturması için 2 mm çapında üç diyafram daha açın. İmplant, açıklıklara 1 mm derinlikte vidalar yerleştirir.</li>
	<li>Prob kateterini diş çimentosu ile sabitleyin ve cildi kapatmak için 4-0 cerrahi bir dikiş kullanın. Probun yerleştirilmesi için Şekil 2'ye bakınız.</li>
	<li>İyileşmek için sıçanı 7 gün boyunca kafeslere yerleştirin. Ameliyat  sonrası günde bir kez lokal olarak bupivakain (1.5 mg / kg) infiltrasyonu. Yiyecek ve su ad libitum sağlayın. Operasyon sonrası kuruluğu önlemek için günde 3 kez sodyum hyalüronat göz damlası kullanın. NOT: Tüm prosedürleri steril bir ameliyathanede gerçekleştirin. 37 ° C'lik bir koşulda sternal yatmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar hayvanı gözetimsiz bırakmayın. Tamamen iyileşene kadar ameliyat olmuş hayvanı diğer hayvanların şirketine iade etmeyin.</li>
</ol>2. Mikrodiyaliz sistemi bağlantısı ve prob kontrolü
<ol><li>Mikrodiyaliz pompasını, mikro şırıngayı, uyanık aktivite cihazını ve kriyojenik numune toplayıcıyı üreticinin talimatlarına göre bağlayın. ACSF'li mikro şırıngayı mikrodiyaliz pompasına takın ve boru hattındaki havayı boşaltmak için mikrodiyaliz pompasını 1 μL / dak hızına ayarlayın.</li>
	<li>Boru hattını ve beyin mikrodiyaliz probunu bağlayın (membran: PAES; membran uzunluğu: 4 mm; membran OD: 0,5 mm; kesme: 20 kDa; mil uzunluğu: 14 mm). Probun yüzeyi hafif nemli olana kadar proba ACSF enjekte etmek için mikrodiyaliz pompasını 1 μL / dak hızında çalıştırın. Probu daha sonra kullanmak üzere heparin sodyum enjeksiyon çözeltisine daldırın. NOT: ACSF'nin büyük bir akışı, yerçekimi altında çıplak gözle görüldüğü gibi, probun yarı geçirgen zarından düşerse, probu yenisiyle değiştirin.</li>
</ol>3. Uyanık sıçandan HECF toplanması
<ol><li>Beyin mikrodiyaliz probunu prob kateterine yerleştirin ve sıçanların hareket etmekte serbest olduklarından emin olmak için sıçanı dolgulu bir odaya (yükseklik: 360 mm; çap: 400 mm) yerleştirin.</li>
	<li>Boru hattını, mikroşırınga pompasını ve beyin mikrodiyaliz probunu bağlayın. Sıçanı, sıçan kısıtlama cihazının üstündeki delikten ve paslanmaz çelik döner tablalardan geçirin .</li>
	<li>Sıçanın serbest hareketi sırasında mikrodiyaliz boru hatlarının iç içe geçmesini önlemek için çok kanallı döner kontrolörü açın. Mikroşırınga pompasını açın ve ACSF'yi 1 μL / dak hızında pompalayın. Mikrodiyaliz HECF toplama sisteminin 60 dakikalık bir dengesinden sonra periyodik olarak HECF toplayın.</li>
	<li>Soğutulmuş fraksiyon toplayıcıdaki HECF numunelerinin akış hızının ACSF infüzyonu ile tutarlı olduğundan emin olun. 20 μL HECF toplayın ve otomatik olarak bir sonraki örnekleme tüpüne geçin. Probu yerleştirirken prob membranının hasar görüp görmediğini kontrol etmeye dikkat edin.</li>
</ol>4. HECF için ozmotik basıncın ölçülmesi
<ol><li>Osmometreyi açın ve algılama sistemine giriş yapın. Dokunmatik ekrandaki Cal düğmesine tıklayın ve önceki kalibrasyon belleğini temizlemek için sayfadaki Res düğmesine tıklayın.</li>
	<li>Ölçüm kafasında kabarcıklar olmadan 100 μL saf su içeren 1,5 mL'lik bir tüp takın. Ölçüm kafasını soğuk hidrazin kabının altına çekin.</li>
	<li>Dokunmatik ekrana 0 örnek numarasını girin ve test etmeyi onaylayın. Diyot iğnesini numune tüpüne hızlı bir şekilde daldırın ve ardından numunenin -6,2 ° C'lik bir sıcaklıkta kristalleşmesini sağlamak için hızlıca dışarı çekin.</li>
	<li>Ekranın görüntülenmesini bekleyin: Ölçüm kafasını yukarı doğru itin ve kalibre etmek için sırayla Cal ve Cal 0'a tıklayın. 300 mOsm kalibrasyon çözeltisi ile ölçümler yapın ve yukarıda açıklandığı gibi HECF numunelerinin ozmotik basıncını ölçün. NOT: Kalibrasyon veya ölçümden sonra ölçüm kafasını yumuşak bir kağıt havluyla silin. Kabarcıksız HECF örnekleri iyice karıştırılmalıdır.</li>
</ol>5. Numune alma sonrası mikrodiyaliz sistemi ve cihazlarının bakımı
<ol><li>Örnekleme sonlandırıldıktan sonra beyin mikrodiyaliz probunu prob kateterinden çıkarın. Probu deiyonize suya daldırın ve boru hattından ve probdan mahsur kalmış tuz birikimlerini gidermek için 12 saat boyunca deiyonize su ile lavajlayın.</li>
	<li>Probu 4 ° C'de% 0.05'lik bir tripsin çözeltisine yerleştirmek için çıkarın. Boru hatlarını hava ile kurutulmuş fırında 25 °C'de kurutun ve oda sıcaklığında saklayın. NOT: Mikrodiyaliz probları pahalıdır ve bu adım probların yeniden kullanılabilirliğini artırabilir. Prob yüzeyine yapışan proteinler, prob zarının proteinler tarafından bloke edilmesini önlemek için tripsin çözeltisi ile sindirilebilir ve tripsinin prob materyali üzerinde hiçbir etkisi yoktur.</li>
</ol>6. Örnekleme sonrası hayvan tedavisi
<ol><li>Örneklemeden sonra, sıçanları% 1.5 izofluran solumalarını sağlayarak ağrısız bir şekilde ötenazi yapın, ardından hayvan etiğine uygun olarak% 5 izofluran doz aşımı yapın.</li>
</ol>

<ol><li>Erkkinen, M. G., Kim, M. O., Geschwind, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+neurology+and+epidemiology+of+the+major+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">Clinical neurology and epidemiology of the major neurodegenerative diseases.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 10 (4), 033118(2018).</li>
<li>Salehi, A., Zhang, J. H., Obenaus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+the+cerebral+vasculature+following+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Response of the cerebral vasculature following traumatic brain injury.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 37 (7), 2320-2339 (2017).</li>
<li>Kurtzman, R. A. em3, Caruso, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-altitude+illness+death+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+Forensic+Pathology%22%5BJournal%5D)">High-altitude illness death investigation.</a> Academic Forensic Pathology. 8 (1), 83-97 (2018).</li>
<li>Matsumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetic+study+of+Ninjin%27yoeito%3A+Absorption+and+brain+distribution+of+Ninjin%27yoeito+ingredients+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetic study of Ninjin'yoeito: Absorption and brain distribution of Ninjin'yoeito ingredients in mice.</a> Journal of Ethnopharmacology. 279, 114332(2021).</li>
<li>Mahat, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+of+transcutaneous+cisterna+magna+puncture+for+cerebrospinal+fluid+sampling+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">An improved method of transcutaneous cisterna magna puncture for cerebrospinal fluid sampling in rats.</a> Journal of Neuroscience Methods. 211 (2), 272-279 (2012).</li>
<li>Ceaglio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+performance+collection+of+cerebrospinal+fluid+in+rats%3A+evaluation+of+erythropoietin+penetration+after+osmotic+opening+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">High performance collection of cerebrospinal fluid in rats: evaluation of erythropoietin penetration after osmotic opening of the blood-brain barrier.</a> Journal of Neuroscience Methods. 219 (1), 70-75 (2013).</li>
<li>Bothwell, S. W., Janigro, D., Patabendige, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+dynamics+and+intracranial+pressure+elevation+in+neurological+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+and+Barriers+of+the+CNS%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid dynamics and intracranial pressure elevation in neurological diseases.</a> Fluids and Barriers of the CNS. 16 (1), 9(2019).</li>
<li>Barthel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+step-by-step+guide+for+microsurgical+collection+of+uncontaminated+cerebrospinal+fluid+from+rat+cisterna+magna%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A step-by-step guide for microsurgical collection of uncontaminated cerebrospinal fluid from rat cisterna magna.</a> Journal of Neuroscience Methods. 352, 109085(2021).</li>
<li>Zhao, Y., Yang, Y., Wang, D. X., Wang, J., Gao, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+amino+acid+metabolite+signatures+of+diabetic+cognitive+dysfunction+based+on+targeted+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Alzheimer%27s+Disease%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid amino acid metabolite signatures of diabetic cognitive dysfunction based on targeted mass spectrometry.</a> Journal of Alzheimer's Disease. 86 (4), 1655-1665 (2022).</li>
<li>Lim, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+collection+of+cerebrospinal+fluid+from+anesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An improved method for collection of cerebrospinal fluid from anesthetized mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e56774(2018).</li>
<li>Hendrickx, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+capillary+LC-UV+method+for+the+simultaneous+analysis+of+olanzapine%2C+chlorpromazine+and+their+FMO-mediated+N-oxidation+products+in+brain+microdialysates%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">A sensitive capillary LC-UV method for the simultaneous analysis of olanzapine, chlorpromazine and their FMO-mediated N-oxidation products in brain microdialysates.</a> Talanta. 162, 268-277 (2017).</li>
<li>Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+brain+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Overview of brain microdialysis.</a> Current Protocols in Neuroscience. , Chapter 7, Unit 7.1 (2009).</li>
<li>Hammarlund-Udenaes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+as+an+important+technique+in+systems+pharmacology-a+historical+and+methodological+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis as an important technique in systems pharmacology-a historical and methodological review.</a> The AAPS Journal. 19 (5), 1294-1303 (2017).</li>
<li>Anderzhanova, E., Wotjak, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+microdialysis+and+its+applications+in+experimental+neurochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Brain microdialysis and its applications in experimental neurochemistry.</a> Cell and Tissue Research. 354 (1), 27-39 (2013).</li>
<li>Mohammadi, A., Rashidi, E., Amooeian, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain%2C+blood%2C+cerebrospinal+fluid%2C+and+serum+biomarkers+in+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Psychiatry+Research%22%5BJournal%5D)">Brain, blood, cerebrospinal fluid, and serum biomarkers in schizophrenia.</a> Psychiatry Research. 265, 25-38 (2018).</li>
<li>Lashley, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biomarkers+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Molecular biomarkers of Alzheimer's disease: progress and prospects.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (5), 031781(2018).</li>
<li>Kawata, K., Tierney, R., Langford, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+and+cerebrospinal+fluid+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Blood and cerebrospinal fluid biomarkers.</a> Handbook of Clinical Neurology. 158, 217-233 (2018).</li>
<li>Zhao, Q. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+dehydrocostuslactone+on+rat+hippocampal+slice+injury+induced+by+oxygen-glucose+deprivation%2Freoxygenation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Protective effects of dehydrocostuslactone on rat hippocampal slice injury induced by oxygen-glucose deprivation/reoxygenation.</a> International Journal of Molecular Medicine. 42 (2), 1190-1198 (2018).</li>
<li>Wang, X. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Protective+effects+of+dehydrocostuslactone+on+oxygen-glucose+deprivation+injury+in+rat+hippocampal+slices%22">Protective effects of dehydrocostuslactone on oxygen-glucose deprivation injury in rat hippocampal slices</a>. , Ningxia Medical University. Master's thesis (2017).</li>
<li>Coimbra-Costa, D., Alva, N., Duran, M., Carbonell, T., Rama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+and+apoptosis+after+acute+respiratory+hypoxia+and+reoxygenation+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biology%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress and apoptosis after acute respiratory hypoxia and reoxygenation in rat brain.</a> Redox Biology. 12, 216-225 (2017).</li>
<li>Liu, H. Y., Chou, K. H., Chen, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine+and+the+Hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pain+and+Headache+Reports%22%5BJournal%5D)">Migraine and the Hippocampus.</a> Current Pain and Headache Reports. 22 (2), 13(2018).</li>
<li>Toda, T., Parylak, S. L., Linker, S. B., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+adult+hippocampal+neurogenesis+in+brain+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">The role of adult hippocampal neurogenesis in brain health and disease.</a> Molecular Psychiatry. 24 (1), 67-87 (2019).</li>
<li>Wang, P., Lo Cascio, F., Gao, J., Kayed, R., Huang, X. F., F, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+and+neurotoxicity+mitigation+of+toxic+tau+oligomers+by+synthetic+heparin+like+oligosaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Communications%22%5BJournal%5D)">Binding and neurotoxicity mitigation of toxic tau oligomers by synthetic heparin like oligosaccharides.</a> Chemical Communications. 54 (72), 10120-10123 (2018).</li>
<li>Han, J. Y., Li, Q., Ma, Z. Z., Fan, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+and+mechanisms+of+compound+Chinese+medicine+and+major+ingredients+on+microcirculatory+dysfunction+and+organ+injury+induced+by+ischemia%2Freperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Effects and mechanisms of compound Chinese medicine and major ingredients on microcirculatory dysfunction and organ injury induced by ischemia/reperfusion.</a> Pharmacology & Therapeutics. 177, 146-173 (2017).</li>
<li>Peng, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+effects+of+traditional+Chinese+medicines+on+preclinical+in+vivo+models+of+brain+ischemia-reperfusion-injury%3A+Prospects+for+neuroprotective+drug+discovery+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory effects of traditional Chinese medicines on preclinical in vivo models of brain ischemia-reperfusion-injury: Prospects for neuroprotective drug discovery and therapy.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 204(2019).</li>
<li>König, M., Thinnes, A., Klein, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+and+its+use+in+behavioural+studies%3A+Focus+on+acetylcholine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Microdialysis and its use in behavioural studies: Focus on acetylcholine.</a> Journal of Neuroscience Methods. 300, 206-215 (2018).</li>
<li>Liu, M. Z., Wang, P., Yu, X. M., Dong, G. C., Yue, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+microdialysis+coupled+to+LC-MS%2FMS+for+the+determination+tramadol+and+its+major+pharmacologically+active+metabolite+O-desmethyltramadol+in+rat+brain+microdialysates%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Testing+and+Analysis%22%5BJournal%5D)">Intracerebral microdialysis coupled to LC-MS/MS for the determination tramadol and its major pharmacologically active metabolite O-desmethyltramadol in rat brain microdialysates.</a> Drug Testing and Analysis. 9 (8), 1243-1250 (2017).</li>
<li>de Lima Oliveira, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microdialysis+in+traumatic+brain+injury+and+subarachnoid+hemorrhage%3A+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Neurocritical+Care%22%5BJournal%5D)">Cerebral microdialysis in traumatic brain injury and subarachnoid hemorrhage: state of the art.</a> Neurocritical Care. 21 (1), 152-162 (2014).</li>
<li>Amiridze, N., Dang, Y., Brown, O. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydroxyl+radicals+detected+via+brain+microdialysis+in+rats+breathing+air+and+during+hyperbaric+oxygen+convulsions%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Report%22%5BJournal%5D)">Hydroxyl radicals detected via brain microdialysis in rats breathing air and during hyperbaric oxygen convulsions.</a> Redox Report. 4 (4), 165-170 (1999).</li>
<li>Chang, H. Y., Morrow, K., Bonacquisti, E., Zhang, W., Shah, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+pharmacokinetics+in+rat+brain+determined+using+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22MABS%22%5BJournal%5D)">Antibody pharmacokinetics in rat brain determined using microdialysis.</a> MABS. 10 (6), 843-853 (2018).</li>
<li>Wan, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+of+seven+major+active+components+of+Mahuang+decoction+in+rat+blood+and+brain+by+LC-MS%2FMS+coupled+to+microdialysis+sampling%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn-Schmiedeberg%27s+Archives+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics of seven major active components of Mahuang decoction in rat blood and brain by LC-MS/MS coupled to microdialysis sampling.</a> Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 393 (8), 1559-1571 (2020).</li>
<li>Zheng, H. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetic+analysis+of+Huangqi+Guizhi+Wuwu+decoction+on+blood+and+brain+tissue+in+rats+with+normal+and+cerebral+ischemia-reperfusion+Injury+by+microdialysis+with+HPLC-MS%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Design+Development+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetic analysis of Huangqi Guizhi Wuwu decoction on blood and brain tissue in rats with normal and cerebral ischemia-reperfusion Injury by microdialysis with HPLC-MS/MS.</a> Drug Design Development and Therapy. 14, 2877-2888 (2020).</li>
<li>Bongaerts, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+targeted+methods+for+brain+metabolomic+studies+in+microdialysis+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Sensitive targeted methods for brain metabolomic studies in microdialysis samples.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 161, 192-205 (2018).</li>
<li>Zhang, Y. Q., Jiang, N., Yetisen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+neurochemical+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Brain neurochemical monitoring.</a> Biosensors and Bioelectronics. 189, 113351(2021).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

SSS hastalıklarının patogenezi hala tam olarak anlaşılamamıştır, bu da yeni tedavilerin ve ilaçların geliştirilmesini engellemektedir. Çalışmalar, çoğu MSS hastalığının hipokampal lezyonlarla yakından ilişkili olduğunu göstermiştir20,21,22. Önerilen beyin mikrodiyaliz tekniği, beynin belirli bölgelerini, özellikle de hipokampüsü hedefleyebilir ve bu da onu geleneksel HECF toplama yaklaşımından ayırır. Problar, yapay bir zarın pa...

Nörodejeneratif hastalık, travmatik beyin hasarı, yüksek irtifa hipoksisine bağlı beyin hasarı ve iskemik inme gibi yüksek morbiditeleri olan santral sinir sistemi (SSS) hastalıkları, dünya çapında artan mortalitenin önemli nedenleridir 1,2,3. Belirli beyin bölgelerindeki sitokinlerin ve protein değişikliklerinin gerçek zamanlı izlenmesi, CNS hastalıklarının ve ilaç tedavisinden sonra beyin farmakokinetik çalışmalarının tanısal doğruluğuna katkıda bulunur. Geleneksel bilimsel araştırmalar, belirli maddelerin tespiti ve farmakokinetik çalışmalar için beyin dokusu homojenatı veya hayvan interstisyel beyin sıvısının manuel olarak toplanmasını kullanır. Bununla birlikte, bunun sınırlı örneklem büyüklüğü, göstergelerdeki değişiklikleri dinamik olarak gözlemleyememe ve eşit olmayan örnekleme kalitesi 4,5,6 gibi bazı eksiklikleri vardır. Bir interstisyel sıvı olan beyin omurilik sıvısı, beyni ve omuriliği mekanik hasarlardan korur. Bileşimi, kan-beyin bariyerinin (BBB) varlığından dolayı serumunkinden farklıdır7. Beyin omurilik sıvısı örneklerinin doğrudan analizi, CNS lezyonlarının mekanizmasını ve ilaç keşfini ortaya çıkarmak için daha elverişlidir. Kaçınılmaz olarak, bir şırınga yoluyla doğrudan cisterna magna ve serebral ventriküllerden manuel olarak elde edilen beyin omurilik sıvısı örnekleri, kan kontaminasyonu, rastgele numune toplama şansı, miktar belirsizliği ve neredeyse hiç çoklu gerialma olasılığı 8,9'a sahip değildir. Daha da önemlisi, konvansiyonel interstisyel beyin sıvısı örnekleme yöntemleri, hasarlı beyin bölgelerinden örnekler elde edememekte, bu da spesifik beyin bölgelerinde CNS hastalıklarının patogenezinin araştırılmasını ve hedeflenen etnotilaç tedavilerinin etkinlik değerlendirmesini engellemektedir 9,10.
Beyin mikrodiyalizi, uyanık hayvanlarda interstisyel beyin sıvısını örneklemek için kullanılan bir tekniktir11. Mikrodiyaliz sistemi, beyne implante edilen bir prob yardımıyla vasküler geçirgenliği taklit eder. Mikrodiyaliz probu yarı geçirgen bir zarla donanmıştır ve belirli beyin bölgelerine implante edilir. İzotonik yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF) ile perfüzyondan sonra, diyalize interstisyel beyin sıvısı, küçük örneklem boyutları, sürekli örnekleme ve dinamik gözlem12,13 faydaları ile olumlu bir şekilde toplanabilir. Konum açısından, beyin mikrodiyaliz probları seçici olarak beyin yapılarına veya ilgilenilen kranial sarnıçlara implante edilebilir14. Hipokampal hücre dışı sıvıdaki (HECF) endojen bir maddenin anormal seviyelerinin gözlemlenmesi, CNS hastalıklarının oluşumunu veya hastalığın patogenezini düşündürmektedir. Birçok çalışma, şizofrenide D-amino asitler, Alzheimer hastalığında β-amiloid ve tau proteinleri, travmatik beyin hasarında nörofilament hafif zincirleri ve hipoksik iskemi ensefalopatisinde ubikitin karboksi-terminal hidrolaz L1'ler gibi CNS hastalıkları için biyobelirteçlerin beyin omurilik sıvısında analiz edilebileceğini göstermiştir15,16,17 . Beyin mikrodiyaliz örnekleme tekniğine dayanan bir kimyasal analiz yöntemi, belirli beyin bölgelerinde yayılan ve dağılan etnotilacın aktif bileşenleri gibi eksojen bileşiklerin dinamik değişikliklerini izlemek için kullanılabilir14.
Bu makale, uyanık sıçanlarda dinamik HECF ediniminin spesifik sürecini sunmakta ve numune kalitesini sağlamak için ozmotik basıncını ölçmektedir.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Havayla kurutma fırını</td><td>Suzhou Great Electronic Equipment Co., Ltd</td><td>GHG-9240A</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan anestezi sistemi</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IE</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan sıcaklığı koruyucu</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>69020</td><td></td></tr><tr><td>Yapay beyin omurilik sıvısı</td><td>Pekin leagene biyoteknoloji. Co., Ltd</td><td>CZ0522</td><td></td></tr><tr><td>Beyin mikrodiyaliz probu</td><td>&nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>T56518</td><td></td></tr><tr><td>Kateter</td> <td>ve nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>T56518</td><td></td></tr><tr><td>Covance infüzyon demeti</td><td>Instech Laboratories, Inc.</td><td>CIH95</td><td></td></tr><tr><td>Protez tabanı reçineleri</td><td>Şangay Eryi Zhang Jiang Biomaterials Co., Ltd</td><td>190732</td><td></td></tr><tr><td>Elektrikli kraniyal matkap</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>78001</td><td></td></tr><tr><td>Elektrikli tıraş makinesi</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>Hayvanlar için serbest dolaşım tankı</td><td>&nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>CMA120</td><td></td></tr><tr><td>Heparin sodyum enjeksiyonu</td><td>Chengdu Haitong Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>H51021208</td><td></td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Sichuan Lekang İlaç Aksesuarları Co., Ltd</td><td>202201</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiyaliz kateter stylet&</td><td>nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>8011205</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiyaliz toplama tüpü</td><td>&nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>7431100</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiyaliz kollektörü</td><td> CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>CMA4004</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiyaliz fep tüpü</td><td>&nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>3409501</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiyaliz in vitro stand</td><td>&nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>CMA130</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiyaliz mikroenjeksiyon pompası</td><td>&nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>788130</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiyaliz şırıngası (1.0 mL)</td><td>&nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>8309020</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiyaliz boru adaptörü</td><td>&nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>3409500</td><td></td></tr><tr><td>Emilmeyen cerrahi sütürler</td><td>Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd</td><td>S19004</td><td></td></tr><tr><td>Oftalmik forseps</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F12016-15</td><td></td></tr><tr><td>Ozmometre</td><td>L&ouml; ser</td><td>OM 807</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hyaluronat göz damlası</td><td>URSAPHARM Arzneimittel GmbH</td><td>H20150150</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaksi cihazı</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>68025</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>S14014-15</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td><td>Shanghai Bingyu Akışkan teknolojisi Co., Ltd</td><td>BY-103</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga iğnesi</td><td>&nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB</td><td>T56518</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin çözeltisi</td><td>Boster Biyolojik Teknoloji, Ltd.</td><td></td><td></td>PYG0107</tr><tr><td>Ultrasonik temizleyici</td><td>Guangdong Goote Ultrasonic Co., Ltd</td><td>KMH1-240W8101</td><td></td></tr></tbody></table>

bir mikrodiyaliz sistemi kullanarak bilinçli sıçanlardan hipokampal hücre dışı sıvının gerçek zamanlı dinamik toplanması

Real-Time Dynamic Collection of Hippocampal Extracellular Fluid from Conscious Rats Using a Microdialysis System

Çeşitli merkezi sinir sistemi (CNS) hastalıkları, hipokampal hücre dışı sıvının (HECF) bileşimindeki değişikliklerle ilişkilidir. Bununla birlikte, bilinçli sıçanlardan gerçek zamanlı olarak HECF elde etmedeki zorluk, CNS hastalığının ilerlemesinin değerlendirilmesini ve etnottıp tedavisinin etkinliğini uzun zamandır kısıtlamıştır. Cesaret verici bir şekilde, dinamik gözlem, kantitatif analiz ve küçük bir örnekleme boyutunun avantajları ile sürekli örnekleme için bir beyin mikrodiyaliz tekniği kullanılabilir. Bu, geleneksel bitkilerden ve canlı hayvanların beynindeki metabolitlerinden gelen bileşikler için hücre dışı sıvı içeriğindeki değişikliklerin izlenmesini sağlar. Bu nedenle bu çalışmanın amacı, Sprague Dawley (SD) sıçanlarının hipokampal bölgesine üç boyutlu bir beyin stereotaksik aparatı ile bir beyin omurilik sıvısı mikrodiyaliz probunu doğru bir şekilde implante etmek ve 20 kDa'dan büyük moleküler ağırlıkları kesmektir. Yüksek kaliteli HECF daha sonra bilinçli sıçanlardan, 2.87 nL / dak - 2.98 mL / dak arasında ayarlanabilir bir örnekleme hızına sahip bir mikrodiyaliz örnekleme kontrol sistemi kullanılarak elde edildi. Sonuç olarak, protokolümüz, CNS ile ilişkili hastalıkların patogenezini daha fazla araştırmak ve ilaç etkinliğini değerlendirmek için bize sınırsız olanaklar sağlayan mikrodiyaliz teknolojisinin yardımıyla uyanık sıçanlarda HECF elde etmek için etkili, hızlı ve dinamik bir yöntem sunmaktadır.

Yukarıdaki deneysel protokol ve Tablo 1'de belirlenen örnekleme parametreleri takip edilerek, belirlenen örnekleme hızında su benzeri, renksiz ve şeffaf sıçan HECF elde edilmiştir (Şekil 1K). Elde edilen sıçan HECF'nin ozmotik basıncı 290-310 mOsm / L idi, bu da dolaylı olarak numunelerin kalitesini18,19 sağlayabilir.
<img alt="Figure 1" class="xf...

Buradaki protokol, bir mikrodiyaliz sistemi kullanarak uyanık sıçanların hipokampüsünden hücre dışı sıvının ayrıntılı bir gerçek zamanlı dinamik örneklemesini sağlar.

Bir Mikrodiyaliz Sistemi Kullanarak Bilinçli Sıçanlardan Hipokampal Hücre Dışı Sıvının Gerçek Zamanlı Dinamik Toplanması

A variety of central nervous system (CNS) diseases are associated with changes in the composition of hippocampal extracellular fluid (HECF). However, ...

Hipokampal hücre dışı sıvı ve beyin mikrodiyaliz tekniği ile kalabalık, santral sinir hastalıklarının hastalığa özgü mikro monitörizasyonuna katkıda bulunur. Beyin mikrodiyalizi tekniği, anestezi yapılmamış sıçanların belirli beyin bölgelerinde interstisyel beyin sıvısının dinamik ve sürekli engizisyonunu sağlar. Anestezi uygulanan sıçanı stereotaksik bir beyin bulucuya sabitleyerek başlayın ve traş edilen cerrahi bölgeyi operasyondan önce üç kez povidon iyot ve etanol çubukla silin.Daha sonra cerrahi makasla ortada 1,5 santimetrelik bir kraniyal yüz kesisi yapın ve cerrahi makas ve oftalmik forseps kullanarak periosteumu çıkarın. Bregma'yı bazal pozisyon olarak düşünürsek, kafatası matkabı kullanmak, hipokampal CA1 bölgesinde iki milimetrelik bir açıklığı delmek için endokranyumu delin. Şimdi kateter stiletini stereotaksik bir beyin bulucunun tutucusuna sabitleyin ve mikrodiyaliz muhafazasının anteroposterior, mediolateral ve dorsal ventral pozisyonlardaki konumunu ayarlayın.Beyin stereo bulucusunun dorsoventral kapağını ayarlayın ve mikrodiyaliz muhafazasını CA1 bölgesine 3,5 milimetre derinlikte implante edin. İki milimetre çapında üç diyafram açıklığı daha açın, böylece üç açık

real-time-dynamic-collection-hippocampal-extracellular-fluid-from

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Hayvanların serbestçe hareket eden, farklı beyin bölgeleri ekstrasellüler nörotransmitter düzeylerinin izlenmesi nörotransmitter salınımı ve davranış arasındaki bağlantıyı irdeliyoruz. Ve bazal nörotransmisyon farmakolojik veya fizyolojik manipülasyonlar nasıl değiştirdiğini hakkında bilgi; in vivo mikrodiyaliz elektrokimyasal algılama ile birleştiğinde mükemmel anatomik ve kimyasal çözünürlük sağlar.

Kemirgenler içinde Kurtarılabilir Stereotaksik Cerrahi

Doğrudan intrahippocampal mikroenjeksiyon ile hipokampal bağımlı uzaysal çalışma belleği Modülasyon, eşlik ve...

Hipokampal İnsülin Mikroenjeksiyon ve<em&gt; In vivo</emMekansal Bellek Test sırasında&gt; mikrodivaliz

Video, bir fare beyninin interstisyel sıvısından (ISF) hücre dışı proteinleri toplamak için bir mikrodiyaliz probu kullanma sürecini göstermektedir. Yüksek moleküler ağırlıklı kesik yarı geçirgen bir membran ile donatılmış bir mikrodiyaliz probu, implante edilmiş bir kılavuz kanül aracılığıyla anestezi uygulanmış bir farenin beynine yerleştirilir. Pompalara bağlı prob, fizyolojik bir tamponun beyin dokusunu perfüze etmesine ve İDF ile karışmasına izin verir. İDF'deki proteinler yarı geçirgen...

Hücre Dışı Proteinleri İzole Etmek için Bir Fare Beyninden İnterstisyel Sıvının Mikrodiyalizi

Burada, izole edilmiş bir tüm hipokampal preparattan ritmik nöronal ağ teta ve gama titreşimleri kaydetmek için bir protokol sunuyoruz. Hipokampusun çıkarılmasından teta ritminin optogenetik pacinginin yanı sıra alan, üniter ve tüm hücre yama klemp kayıtlarının ayrıntılarına kadar olan deneysel adımları açıklıyoruz.

Hipokampal Theta Bandında Tuning<em&gt; In vitro</em&gt;: İzole edilmiş Kemirgen Protokokal Circüse Kayıt için Metodolojiler

Bu iletişim kuralı yerel alan potansiyelleri ile çoklu şaftlı doğrusal silikon sondalar kayıt açıklar. Geçerli kaynak yoğunluk analiz kullanarak sinyalleri dönüşüm yerel elektrik etkinlik yeniden inşası farenin hipokampus sağlar. Bu teknik ile dağınık şekilde kısıtlı beyin salınımlarını serbestçe fare hareket okudu olabilir.

Dağınık şekilde kayıt sınırlı salınım oluşur içinde fareler davranmak

Vivo microdialysis molekülleri uyanık, özgürce davranmaya hayvanlardan beyin interstisyel sıvı (ISF) mevcut topluluğu sağlamıştır. ISF nispeten büyük molekülleri çözümlemek amacıyla geçerli madde özellikle probları yüksek molekül ağırlıklı membranlar kesim ile microdialysis iletişim kuralı'nı odaklanır.

Vivo Microdialysis beyin interstisyel sıvı yüksek moleküler ağırlık kesme ile gelen büyük hücre dışı proteinler toplamak için yöntem probları

Burada, in vivo microdialysis EEG kayıtları ile birlikte epileptik ve sigara-epileptik sıçan ventral hipokampus glutamat ve aspartat sürümde analiz etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Ekstraselüler glutamat ve aspartat konsantrasyonu hastalık farklı aşamalarında ile ilişkili.

Microdialysis fareler serbestçe hareket EEG kayıtları sırasında eksitatör Amino asit

Nörotransmitter değişimi, beyin sarsıntısı sonrası meydana gelen ve bazen-felaket uzun vadeli sonuçlara katkı sağlayan bir nöral fonksiyon bozukluğu mekanizmasıdır. Bu sıçan modeli, insan kraniyoerebral travmanın önemli bir faktörü olan baş ve gövdedeki hızlı hızlanma ve yavaşlama sağlayan bir ağırlık düşürme tekniği ile, in vivo nörotransmitter quantification ile mikrodiyalizi birleştirir.

In vivo serebral mikrodiyaliz ile kuvvet ve rotasyonu birleştiren bir yeni ve translasyonel rat modeli

Mevcut protokol, mikrodiyaliz tekniğini kullanarak sıçan kalp kanının gerçek zamanlı ve dinamik olarak toplanması için basit ve etkili bir yöntemi tanımlamaktadır.

Noninvaziv Mikrodiyaliz Tekniği ile Sıçan Kalbinden Dinamik Sürekli Kan Ekstraksiyonu

Bu protokol, yerel alan potansiyellerini kaydetmek ve fare hipokampusu ve prefrontal korteksindeki bilgi akışını araştırmak için özel olarak tasarlanmış bir kayıt cihazının ve elektrotların kullanımını ana hatlarıyla belirtir.

Fare Hipokampusu ve Prefrontal korteksinde ikili hücre dışı kayıtlar

Öğrenin, uyanık sıçanlarda hipokampal hücre dışı sıvının gerçek zamanlı toplanması için beyin mikrodiyaliz tekniğini. Bu yöntem, merkezi sinir sistemi hastalıklarında hastalık belirteçlerini izlemeye olanak tanır.

Bir Mikrodiyaliz Sistemi Kullanarak Bilinçli Sıçanlardan Hipokampal Hücre Dışı Sıvının Gerçek Zamanlı Dinamik Toplanması

Daha fazla video keşfet