Name: Ixodes scapularis için Kene Yapay Membran Besleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Öğrenin, Ixodes scapularis kene türleri için yapay membran besleme yöntemiyle patojen etkileşimlerini ve tedavileri hayvan kullanmadan inceleyin. Bu protokol, kene biyolojisi araştırmalarında kontrollü koşullar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Kene zarı odasının hazırlanması
<ol><li>Bir kol standının cam düzlemi veya seramik kaplı metal tabanı gibi düz, gözeneksiz bir yüzeyi,% 70 etanol ile silerek hazırlayın ve ardından plastik ambalajın düz ve kabarcıklar veya kırışıklıklar olmadığından emin olarak tek bir plastik sargı tabakasıyla örtün (bkz. Şekil 1A).</li>
	<li>%100 rayon lens temizleme kağıdını hazırlanan yüzeye bantlayın. Kağıdın dört tarafında da bantla düz ve hafif gergin olduğundan emin olun. Lens kağıdındaki 4 inç x 6'dan oluşan iki parça, adım 1.3'te açıklanan hacimler kullanılarak membran haline getirilebilir. NOT: Bu, 12 adede kadar besleme odası oluşturmak için yeterlidir (bkz. Şekil 1B). Membran larva keneleri içinse, lens temizleme kağıdı yerine unryu kağıdı kullanın.</li>
	<li>00-10 sertlikteki silikon karışımını, silikon kitinin her bir parçasının 5 mL'sini tek kullanımlık bir kaba ölçerek hazırlayın, 1,5 mL hekzan eklemeden önce iki sıvıyı hafifçe karıştırın. Karışım homojen hale gelene ve iyice karışana kadar karıştırmaya devam edin. NOT: Yetişkin keneler için membran yapıyorsanız, 00-50 sertlikte silikon kullanın.</li>
	<li>Silikon karışımını lens kağıdının üzerine dağıtmak için küçük bir silecek kullanın. Silikonun lens kağıdına batırıldığından emin olmak için 1 dakika bekletin. Az miktarda aşağı doğru basınç kullanarak fazla silikonu silecekle yana doğru sürekli kazıyın. Herhangi bir silikon çizgisini çıkarmak ve pürüzsüz bir tabaka oluşturmak için aşağı doğru basınç uygulamadan silecek ile ikinci bir geçiş yapın. NOT: Prosedürün bu adımı, her yaşam aşaması için optimum kalınlıkta membranlar üretmek için bazı uygulamalar gerektirebilir (yetişkinler: 150-200 μm; nimfler: 90-120 μm; larvalar: 80-100 μm). Daha kalın bir membran (yaşam aşamasının besleme toleransları dahilinde), odadaki yoğuşmayı azaltarak ve membranın kendi kendini iyileştirme özelliğini geliştirerek genellikle daha iyi sonuçlar üretecektir.</li>
	<li>Sadece larvalar için, besleme odasının üst kısmını birkaç kez Fluon floropolimer reçinesine (PTFE-30) batırın ve tutarlı bir tabaka üretmek için uygulamalar arasında kurumasını sağlayın. NOT: Fluon uygulaması, yapışmaz bir pişirme tavasına benzer yapışmaz bir floropolimer reçine tabakası oluşturacaktır. Bu, odanın tepesine tırmanan larva sayısını azaltacaktır21.</li>
	<li>Bir sonraki adıma geçmeden önce, kapalı bir kimyasal veya biyogüvenlik kabini gibi tozsuz bir ortamda membranı en az 24 saat kürlenmeye bırakın. Silikonun kurumasına izin verildikten sonra rayon lens kağıdının nasıl göründüğünü öğrenmek için Şekil 1C'ye bakın.</li>
	<li>Silikon karışımı A ve B'nin eşit parçalarını karıştırarak odaları membrana tutturmak için 30 sertlikteki silikon karışımını hazırlayın.</li>
	<li>Polikarbonat odalarını silikon karışımına yaklaşık çeyrek inç (6 mm) batırın ve ardından bandın herhangi birinin üst üste binmemesine dikkat ederek membran tabakasına yerleştirin (Şekil 1D).</li>
	<li>Sonraki adımlara geçmeden önce tutturulan silikonun en az 24 saat sertleşmesine izin verin.</li>
	<li>Bir neşter kullanarak, bağlı odaların her birinin etrafındaki zarı dikkatlice kesin, kenarları kırpın, böylece yanlarda fazla kazıma olmadan 6 delikli plakanın bir kuyusuna düzgün bir şekilde sığabilir (Şekil 1E). Membranın yapışmasını en üst düzeye çıkarmak için odanın dışına yeterli malzemeye izin verin. NOT: Çok fazla dış malzeme kalırsa, haznenin 6 delikli plakadan tekrar tekrar çıkarılması, membranın odadan kısmen ayrılmasına neden olabilir. Müstakil membranların onarımı bölüm 5'te açıklanmıştır.</li>
	<li>Artık membranın küçük bir parçasını köşelerin her birinden ve membran tabakasının merkezinden kesin. Plastik ambalajı her parçadan çıkarın. Ortalama membran kalınlığını belirlemek için parçaları bir mikrometre ile ölçün. NOT: Membran kalınlığı yaşam aşaması için tolerans aralığına girmiyorsa (bkz. adım 1.4), membranlar atılmalı ve yeniden yapılmalıdır. Unryu kağıt kalınlığı, kalın lif telleri ve ince bölgeleri nedeniyle oldukça değişkendir. Bu özellik larvaların optimal kalınlıktaki bölgeleri bulmasına izin verirken, gerçek membran kalınlığını belirlemeyi zorlaştırır.</li>
	<li>Besleme odalarını, oda başına bir O-ring ile birlikte, sterilize etmek için en az 20 dakika boyunca 121 ° C'de otoklavlanacak bir cam beherin içine yerleştirin. Kullanmadan önce odaların soğumasını bekleyin.</li>
</ol>2. Kene beslemesini ayarlama
<ol><li>Işıkların 16 saat boyunca yanması ve ardından 8 saat boyunca kapanması için bir lamba veya oda hazırlayın. Bir lamba kullanıyorsanız, bir sonraki adımdaki su banyosunun bu 8 saat boyunca karanlıkta olduğundan emin olun.</li>
	<li>34 ° C'de ve desteklerle bir su banyosu kurun, böylece 6 delikli bir plaka oturabilir ve hafifçe yüzebilir. Su banyosuna batırılmış küçük cam bardakları destek olarak kullanın. Keneler için açık-karanlık bir döngü sürdürmek için su banyosu için şeffaf bir kapak kullanın; Gerekirse, bir kapak yapmak için bir T-standı ve plastik bir sargı kullanın. Kirlenme riskini azaltmak için, su banyosuna% 0.02 benzalkonyum klorür ekleyin ve soğutulmuş kanı ısıtmak için başka bir su banyosunu 36 ° C'ye ayarlayın.</li>
	<li>Önceden hazırlanmış, otoklavlanmış membran odalarını çıkarın, O-ringi odanın etrafına yerleştirin (Şekil 1F) ve ardından her odayı membranı örtmek için yeterli% 70 etanol ile doldurun. 6 delikli bir plakada 5 dakika bekletin ve ardından oda ile membran arasında ve membranın kendisinde herhangi bir sızıntı olup olmadığına bakın. NOT: Membran sızıntı yapıyorsa, kuyunun tabanında etanol birikecektir. Sızdıran membranlar atılmalıdır.</li>
	<li>Etanol'ü odalardan boşaltın ve ardından bir biyogüvenlik kabini veya laminer akış davlumbazının içinde hava ile kurumasını bekleyin. NOT: Bu işlem, ortam nemine bağlı olarak birkaç dakika sürebilir.</li>
	<li>Beklerken, kandaki tamamlayıcıyı 40 dakika boyunca 56 ° C'de ısıtarak etkisiz hale getirin. Mekanik olarak defibrinlenmiş sığır kanını 2 g / L glikoz ile destekleyin.</li>
	<li>Membran kuruduktan sonra, odanın içine ~ 20 μL fagostimülan uygulayın ve daha sonra odayı eğerek yüzeyin etrafına yayın. Kene frassından bir fagostimülan hazırlanması ile ilgili talimatlar için bölüm 6'ya bakınız.</li>
	<li>Kenelerin odaya bir fırça veya forseps ile eklenmesinden önce fagostimülanın kurumasını bekleyin. Kaçışı önlemek için keneleri odaya aktarırken mümkün olduğunca çabuk çalışın. Keneler, kaçma yeteneklerini yavaşlatmak için aktarmadan önce 1-2 dakika boyunca buz üzerindeki bir tüpe koyun. Keneler transfer edildikten sonra, üstünü parafilm ile kapatın; Parafilmi aşırı germeyin, çünkü su banyosundan gelen ısı yırtılmasına neden olabilir. NOT: Forsepsler nimf ve yetişkin yaşam evrelerinde en iyi şekilde çalışır ve fırçalar larva yaşam evrelerinde en iyi şekilde çalışır.</li>
	<li>Kuyu / oda başına ısıyla inaktive edilen kanı konik bir tüpe ekleyin ve 36 ° C'de ayarlanmış su banyosuna yerleştirin. Keneler maruz bırakmadan önce soğutulmuş kanı en az oda sıcaklığına getirin. Odaların kolay kullanımı için 6 delikli plaka başına dört hazne ayırın. Plaka başına daha fazla odacıktan kaçınılmalıdır, ancak su banyosunun boyutuna bağlı olarak daha fazla plaka kullanılabilir.</li>
	<li>Tüpe 5 mL kan başına 5 μL 3 mM ATP ve 50 μL 100x penisilin / streptomisin / fungizone stoğu ekleyin.</li>
	<li>Kanın, 4.5 mL'sini 6 kuyucuklu bir plakanın kuyusuna aktarın ve daha sonra odayı yavaşça kuyuya yerleştirin, odadaki O-ring yüksekliğini, zarın kanda oturması için ayarlayın, ancak yan taraftaki kan seviyesi kuyunun üzerine çıkmaz. Kan ve zar arasında hava kabarcığı oluşumunu önlemek için kuyuyu kana bir açıyla yerleştirin. NOT: Tamamlanmış bir plaka Şekil 2'de gösterilmiştir.</li>
	<li>6 delikli plakanın kapağını besleme odalarının üzerine yerleştirin; Daha sonra, hazneli 6 delikli plakayı hazırlanan 34 °C su banyosuna koyun ve kapağı kapatın. NOT: Üstteki kapak, yoğunlaştırılmış suyun parafilmle temas etmesini ve kuyulardaki kanı seyreltmesini önlemeye yardımcı olacaktır.</li>
</ol>3. Her 12 saatte bir kanı değiştirerek beslenme kenelerini korumak
<ol><li>Kuyu başına ısıl olarak inaktive edilen kanın 5 mL'sini bir tüpe boşaltın ve 36 ° C'lik bir su banyosunda ısıtın. ATP ve penisilin / streptomisin / mantar bölgesini aynı anda su banyosunda çözün.</li>
	<li>Kan tüpüne kuyucuk başına 5 μL 3 mM ATP ve 50 μL 100x penisilin / streptomisin / fungizone stoğu ekleyin. 4.5 mL kanı taze bir 6 delikli plakanın kuyucuğuna aktarın.</li>
	<li>6 kuyucuklu plakayı kene odasıyla su banyosundan çıkarın. Odayı kuyudan çıkarın ve kanı çıkarmak için odanın ve zarın dışını 10 mL steril 1x PBS ile durulayın.</li>
	<li>Otoklavlanmış filtre kağıdı kullanarak, fazla PBS'yi gidermek için membranı ve hazneyi nazikçe kurulayın. Odanın üstündeki parafilmi değiştirin. Odanın içinde çok fazla yoğuşma varsa, taze parafilm ile kapatmadan önce ıslak lekeleri otoklavlanmış filtre kağıdı ile kurulayın.</li>
	<li>Kene odacığını taze kanla yeni 6 delikli plakaya yerleştirin ve gerekirse O-ring yüksekliğini ayarlayın. Plakadaki her oda için 3.3-3.5 arasındaki adımları tekrarlayın. 6 delikli plakanın kapağını odaların üst kısımlarına yerleştirin. Yeni 6 delikli plakayı 34 °C su banyosuna geri taşıyın.</li>
	<li>Kene beslemesinin sonuna kadar her 12 saatte bir 3.1-3.5 adımlarını tekrarlayın. Kenelerin tıkandığında zardan kendi başlarına ayrılmasını bekleyin veya kısmen engorge keneler elde etmek için hala bağlıyken yumuşak dokunuşlu cımbızla membrandan yavaşça çıkarın.</li>
</ol>4. Antifungal tedavi
NOT: Sadece membranda mantar büyümesi görüldüğünde gerçekleştirin. Beslenmenin yeterli süreli olması durumunda mantarın zarın kan tarafında oluşması muhtemeldir. Mantar kontaminasyonunun ilk belirtisi, zarda görülebilen küçük (1-3 mm) pıhtılaşmış kan pullarıdır. Mantar kontaminasyonu not edildiğinde, antifungal tedaviler deneyin süresini uzatabilir ve engorgement başarısını artırabilir.
<ol><li>mL başına 10.000 U nistatin, damıtılmış suda, besleme odası başına 5 mL çözün. 0,1 μm şırınga filtresi ile filtre-sterilize edin.</li>
	<li>Her besleme odası için bir kuyucuk olan yeni bir 6 delikli plakanın kuyucuğu başına 5 mL nistatin çözeltisi ekleyin.</li>
	<li>PBS ile durulanmış odaları çözeltinin içine yerleştirin. 10 dakika bekletin.</li>
	<li>Tedavi edilen membranları taze kana geri koymadan önce PBS ile durulayın.</li>
	<li>Deneyin tamamlanmasına kadar antifungal tedaviyi her 2-3 günde bir (mantar kontaminasyonunun derecesine bağlı olarak) tekrarlayın.</li>
</ol>5. Müstakil membranların siyanoakrilat tutkal ile yeniden yapıştırılması
NOT: Yalnızca membran sökümü fark edildiğinde gerçekleştirin.
<ol><li>Membranlar, özellikle 6 delikli plakadan çıkarılırken besleme odalarından kısmen ayrılabilir. Bu durumda, kan zarını PBS ile durulayın.</li>
	<li>Etkilenen bölgeyi nazikçe kurulayın. Tamamen kuru olması gerekmez, ancak nemin varlığı tutkalın daha hızlı ayarlanmasına neden olur. NOT: Membranın yeniden yapıştırılması çalışma süresini sınırlar, ancak ayrılma boyutuna bağlı olarak daha hızlı bir ayar süresi istenebilir.</li>
	<li>Membranın odadan çekildiği boşluğa az miktarda siyanoakrilat yapıştırıcı sıkın. Tutkalın ayarlanmasına izin vermek için ~ 2 dakika yerinde tutun.</li>
	<li>Odayı 6 delikli plakadaki kana geri yerleştirin.</li>
</ol>6. Fagostimülan yapmak
NOT: Bir beslemenin sonunda veya bir membran beslemesi başlamadan önce gerçekleştirin.
<ol><li>Kene dışkısını önceki bir membran beslemesinden veya başka bir besleme kene kaynağından toplayın. Fagostimülanı yapmadan önce dışkıyı -20 ° C'de saklayın. Kene dışkısı topaklarını ezin ve 1 mL su başına 0.1 g karıştırın. 1 mM tripeptid indirgenmiş glutatyon ekleyin, çözün ve vorteks yaparak iyice karıştırın.</li>
	<li>0,1 μm şırınga filtresi ile filtre-sterilize edin.</li>
	<li>Gerekene kadar -20 °C'de dondurun.</li>
</ol>

<ol><li>Rosenberg, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+signs%3A+trends+in+reported+vectorborne+disease+cases+-+United+States+and+territories%2C+2004-2016%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Vital signs: trends in reported vectorborne disease cases - United States and territories, 2004-2016.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 67 (17), 496-501 (2018).</li>
<li>Busch, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+movement+of+invasive+cattle+fever+ticks+%28Rhipicephalus+microplus%29+in+southern+Texas+leads+to+shared+local+infestations+on+cattle+and+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+%26+Vectors%22%5BJournal%5D)">Widespread movement of invasive cattle fever ticks (Rhipicephalus microplus) in southern Texas leads to shared local infestations on cattle and deer.</a> Parasites & Vectors. 7, 188(2014).</li>
<li>Süss, J., Klaus, C., Gerstengarbe, F. W., Werner, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+makes+ticks+tick%3F+Climate+change%2C+ticks%2C+and+tick-borne+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Travel+Medicine%22%5BJournal%5D)">What makes ticks tick? Climate change, ticks, and tick-borne diseases.</a> Journal of Travel Medicine. 15 (1), 39-45 (2008).</li>
<li>Gray, J. S., Dautel, H., Estrada-Peña, A., Kahl, O., Lindgren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+climate+change+on+ticks+and+tick-borne+diseases+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22Interdisciplinary+Perspectives+on+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effects of climate change on ticks and tick-borne diseases in Europe.</a> Interdisciplinary Perspectives on Infectious Diseases. 2009, 593232(2009).</li>
<li>Sonenshine, D. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSonenshine%2C+DE+%22Biology+of+Ticks%22">Biology of Ticks</a>. , Oxford University Press. New York. (1991).</li>
<li>Schwan, T. G., Piesman, J., Golde, W. T., Dolan, M. C., Rosa, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+an+outer+surface+protein+on+Borrelia+burgdorferi+during+tick+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Induction of an outer surface protein on Borrelia burgdorferi during tick feeding.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 92 (7), 2909-2913 (1995).</li>
<li>Massung, R. F., Priestley, R. A., Miller, N. J., Mather, T. N., Levin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inability+of+a+variant+strain+of+Anaplasma+phagocytophilum+to+infect+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Inability of a variant strain of Anaplasma phagocytophilum to infect mice.</a> The Journal of Infectious Diseases. 188 (11), 1757-1763 (2003).</li>
<li>Koci, J., Bernard, Q., Yang, X., Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Borrelia+burgdorferi+surface+protein+Lmp1+facilitates+pathogen+dissemination+through+ticks+as+studied+by+an+artificial+membrane+feeding+system%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Borrelia burgdorferi surface protein Lmp1 facilitates pathogen dissemination through ticks as studied by an artificial membrane feeding system.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1910(2018).</li>
<li>Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+for+maintenance+of+multi-host+ixodid+ticks+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Applied+Acarology%22%5BJournal%5D)">Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory.</a> Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).</li>
<li>Hart, T., Yang, X., Pal, U., Lin, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Lyme+borreliae+proteins+promoting+vertebrate+host+blood-specific+spirochete+survival+in+Ixodes+scapularis+nymphs+using+artificial+feeding+chambers%5BTitle%5D)+AND+%22Ticks+and+Tick-Borne+Diseases%22%5BJournal%5D)">Identification of Lyme borreliae proteins promoting vertebrate host blood-specific spirochete survival in Ixodes scapularis nymphs using artificial feeding chambers.</a> Ticks and Tick-Borne Diseases. 9 (5), 1057-1063 (2018).</li>
<li>Hart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+tropism+determination+by+convergent+evolution+of+immunological+evasion+in+the+Lyme+disease+system%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Host tropism determination by convergent evolution of immunological evasion in the Lyme disease system.</a> PLoS Pathogens. 17 (7), (2021).</li>
<li>Bernard, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+in+early+immune+evasion+strategies+of+a+bacterial+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Plasticity in early immune evasion strategies of a bacterial pathogen.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (16), 3788-3797 (2018).</li>
<li>Pierce, A. E., Pierce, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+note+on+the+cultivation+of+Boophilus+microplus+%28Canestrini%2C+1887%29+%28Ixodidae%3A+Acarina%29+on+the+embyonated+hen+egg%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">A note on the cultivation of Boophilus microplus (Canestrini, 1887) (Ixodidae: Acarina) on the embyonated hen egg.</a> Australian Veterinary Journal. 32 (6), 144-146 (1956).</li>
<li>Doube, B. M., Kemp, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+temperature%2C+relative+humidity+and+host+factors+on+the+attachment+and+survival+of+Boophilus+microplus+%28Canestrini%29+larvae+to+skin+slices%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+for+Parasitology%22%5BJournal%5D)">The influence of temperature, relative humidity and host factors on the attachment and survival of Boophilus microplus (Canestrini) larvae to skin slices.</a> International Journal for Parasitology. 9 (5), 449-454 (1979).</li>
<li>Kröber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+feeding+assay+to+test+acaricides+for+control+of+hard+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Management+Science%22%5BJournal%5D)">An in vitro feeding assay to test acaricides for control of hard ticks.</a> Pest Management Science. 63 (1), 17-22 (2007).</li>
<li>Kuhnert, F., Diehl, P. A., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+life-cycle+of+the+bont+tick+Amblyomma+hebraeum+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+for+Parasitology%22%5BJournal%5D)">The life-cycle of the bont tick Amblyomma hebraeum in vitro.</a> International Journal for Parasitology. 25 (8), 887-896 (1995).</li>
<li>Kröber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Parasitology%22%5BJournal%5D)">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).</li>
<li>Andrade, J. J., Xu, G., Rich, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+silicone+membrane+for+in+vitro+feeding+of+Ixodes+scapularis+%28Ixodida%3A+Ixodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">A silicone membrane for in vitro feeding of Ixodes scapularis (Ixodida: Ixodidae).</a> Journal of Medical Entomology. 51 (4), 878-879 (2014).</li>
<li>Oliver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+immature+Ixodes+scapularis+%28Acari%3A+Ixodidae%29+by+membrane+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">Infection of immature Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) by membrane feeding.</a> Journal of Medical Entomology. 53 (2), 409-415 (2016).</li>
<li>Oliver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+dynamics+and+antibiotic+elimination+of+symbiotic+Rickettsia+buchneri+in+the+tick+Ixodes+scapularis+%28Acari%3A+Ixodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Growth dynamics and antibiotic elimination of symbiotic Rickettsia buchneri in the tick Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae).</a> Applied and Environmental Microbiology. 87 (3), (2021).</li>
<li>Graham, E. E., Poland, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Fluon+conditioning+for+capturing+cerambycid+beetles+in+different+trap+designs+and+persistence+on+panel+traps+over+time%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Economic+Entomology%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Fluon conditioning for capturing cerambycid beetles in different trap designs and persistence on panel traps over time.</a> Journal of Economic Entomology. 105 (2), 395-401 (2012).</li>
<li>Munderloh, U. G., Liu, Y., Wang, M., Chen, C., Kurtti, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment%2C+maintenance+and+description+of+cell+lines+from+the+tick+Ixodes+scapularis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Establishment, maintenance and description of cell lines from the tick Ixodes scapularis.</a> Journal of Parasitology. 80 (4), 533-543 (1994).</li>
<li>Lehane, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+single+and+coinfections+of+human+pathogens+in+Ixodes+ticks+from+five+geographical+regions+in+the+United+States%2C+2013-2019%5BTitle%5D)+AND+%22Ticks+and+Tick-Borne+Diseases%22%5BJournal%5D)">Prevalence of single and coinfections of human pathogens in Ixodes ticks from five geographical regions in the United States, 2013-2019.</a> Ticks and Tick-Borne Diseases. 12 (2), (2021).</li>
<li>González, J., Bickerton, M., Toledo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+artificial+membrane+feeding+for+ixodid+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Tropica%22%5BJournal%5D)">Applications of artificial membrane feeding for ixodid ticks.</a> Acta Tropica. 215, (2021).</li>
<li>Król, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+transmission+paths+for+three+different+Bartonella+spp.+in+Ixodes+ricinus+ticks+using+artificial+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Evaluating transmission paths for three different Bartonella spp. in Ixodes ricinus ticks using artificial feeding.</a> Microorganisms. 9 (5), 901(2021).</li>
<li>Anderson, J. F., Magnarelli, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Biology of ticks.</a> Infectious Disease Clinics of North America. 22 (2), 195-215 (2008).</li>
</ol>

Kenelerin yapay membran beslenmesi, çeşitli deneysel prosedürler için yararlı bir araç sağlar, ancak tüm uygulamalar için hayvan beslemenin yerini alması muhtemel değildir. Hayvan besleme olmadan tüm yaşam aşamalarında büyük kene kolonilerinin korunması genellikle savunulamaz. Bunun yerine, yapay besleme sistemi, keneleri model konakçılar tarafından desteklenmeyen patojenlerle enfekte etmek, kontrollü bileşik veya mikroorganizma dozajlarının basitleştirilmiş bir beslenme ortamında keneler üzerindeki etkilerini değerlendi...

Kene kaynaklı hastalıklar, 2004'ten 2016'ya kadar ABD'deki tüm vektörle ilişkili hastalıkların üçte ikisinden fazlasından sorumlu olarak, dünyadaki insan ve hayvanların sağlığını güçlü bir şekilde etkilemektedir1. Ek olarak, vaka sayıları son yıllarda artmakta, daha fazla insan ve hayvancılık keneler ve bunlarla ilişkili hastalıklardan etkilenmektedir 2,3. Vaka sayılarındaki artış eğiliminin çok sayıda nedeni olsa da, değişen iklim önemli bir faktördür 3,4. Kene kaynaklı hastalık vakalarının sayısında öngörülen devam eden artış, keneler ve ilettikleri patojenler arasındaki ilişkileri araştırmak için yeni araçlar geliştirme ihtiyacının altını çizmektedir.
Kenelerin beslenme sırasında fizyoloji ve gen ekspresyonunda değişikliklere uğradığı ve bu değişikliklerin patojen iletiminde rol oynadığı bilinmektedir 5,6. Özellikle kemirgen modellerinin belirli bir patojen tarafından enfeksiyona duyarlı olmadığı durumlarda, hayvan modellerini kullanarak tam ve kısmi beslenmenin patojen iletimi ve edinimi üzerindeki etkilerini inceleyen çalışmalar yapmak zor olabilir. Örneğin, Anaplasma phagocytophilum Variant-1 suşu doğal olarak Ixodes scapularis ve geyik arasında bulaşır, ancak fareleri enfekte edemez ve laboratuarda kene enfeksiyonunu karmaşıklaştırır7. Yapay besleme sistemleri, Borrelia burgdorferi gibi patojenlerin, iletimi veya enfeksiyonu engelleyen gen delesyonlarına sahip transgenik mutantların kullanımı yoluyla incelenmesine yardımcı olmak için de uygulanabilir8. Yapay bir besleme sistemi kullanmak, araştırmacıların enfeksiyon veya bulaşmanın yalnızca kene tarafında gerçekleşmesine izin vererek genlerin rolünü izole etmelerine yardımcı olur, böylece bu tür çalışmaları karıştırabilecek herhangi bir konakçı tepkisini izole eder.
Benzer şekilde, hastalık ve hayvan bulaşmasında rol oynayan kenelerin bazı yaşam aşamaları, ortak laboratuvar modeli türleriyle beslenmeye teşvik edilemeyebilir. Örneğin, Ixodes scapularis dişileri, daha büyük hayvanlarla, tipik olarak tavşanlarla beslenmelidir9. Laboratuvar deneyleri için genellikle erişilebilir olsa da, tavşan kullanmanın idari ve hayvancılık gereksinimleri küçük kemirgenlerinkini aşmaktadır ve bazı laboratuvarlar için engelleyici olabilir. Diğer kene türleri, özellikle veterinerlikle ilgili olanlar, çoğu laboratuvarda kullanımı pratik olmayan sığırlar veya diğer büyük hayvanlarla beslenmelidir. Yapay membran besleme gibi in vitro besleme ve enfeksiyon yöntemleri, büyük veya egzotik konakçı hayvanların kullanımına alternatifler sunar.
Ek olarak, yapay bir besleme sisteminin kullanılması, geleneksel hayvan besleme yöntemleriyle mümkün olmayabilecek bazı analizlere izin verir. Böyle bir örnek, kan kaynağını beslenme mekanizmasından ayırarak, farklı konakçıların kanının B. burgdorferi iletiminde sahip olabileceği rolün incelenmesinin mümkün olmasıdır10. Konakçı kanın ve konakçı immün yanıtının yokluğunda kanın kendisinin oynadığı rolün incelenmesi, patojen bulaşma döngülerini anlayabilmede önemli bir faktördür ve yapay beslenme sistemlerinin11'i cevaplamaya yardımcı olabileceği bir faktördür. Ayrıca,bir yem sırasında bir patojenin kesin bulaşma sayılarını ölçmek sadece bulaşma başarısını ve bir konakçıdaki 8,12'deki kuruluşu incelemek yerine mümkün hale gelir.
Sert keneler için yapılan ilk yapay besleme zarlarından bazıları, 1950'lerde ve 1960'larda hayvan derilerinden veya hayvan kaynaklı zarlardan yapılmıştır13,14. Bu membranların biyolojik doğası nedeniyle, hem yeni membranların üretiminde hem de raf ömründe sorunlar yaşanmıştır. 1990'larda, silikon emprenye15,16 ile ağ, kağıt veya kumaş desteğini kullanan tamamen yapay membranlar geliştirildi. Silikon, fiziksel özellikleri cildin gerginliğini ve hafif yapışkanlığını ve biyo-doğal doğasıyla birlikte taklit ettiği için idealdi. Buna dayanarak, bu tekniğin çalışmalarına dayanan Krober ve Guerin, I. ricinus17'nin yapay beslenmesi için silikon emdirilmiş bir rayon membranı besleme tekniğini tanımladılar.
Yakından ilişkili bir tür olan I. skapulalis için yöntemlerin iyileştirilmesi, membran emprenyesinde kullanılan silikonun sertliğinde, membran üretim reçetesinde, odanın boyutlarında ve ataşman uyarıcısında dikkate değer farklılıklara yol açmıştır. Bu çalışmada bildirilen iyileştirmeler, I. scapularis'te kullanılmak üzere Krober ve Guerin'e dayanan silikon bazlı bir membran geliştiren Andrade ve ark. tarafından bildirilenlerle benzer membran özelliklerine neden olsa da, silikon emprenye adımlarında, I. scapularis15'in olgunlaşmamış yaşam aşamaları için bu protokolü kullanma esnekliğine izin veren bir fark vardır. 18. Bu çalışmada ayrıca, bu yöntemin tekrar tekrar kullanılmasına, başarılı bir beslemeyle sonuçlanan en iyi uygulamalara ve ortaya çıkabilecek sorunların giderilmesine dayanan eklemeler ve teknik değişiklikler açıklanmaktadır. Bu yöntem, tüm aktif yaşam aşamalarını beslemek, keneleri patojenik bakterilerle enfekte etmek ve keneleri çoklu antibiyotik dozlarına maruz bırakmak için kullanılmıştır19,20. Gösterilen yapay membran besleme yöntemi I. skapulalis için olsa da, bu yöntem membran kalınlığında küçük değişikliklerle diğer kene türlerine kolayca adapte olabilir.

<table><tbody><tr><td>00-10 Sertlik Silikon</td><td>Smooth-On</td><td>Ecoflex 00-10</td><td>Smooth-On Store'dan deneme boyu</td></tr><tr><td>00-50 Sertlik Silikon</td><td>Smooth-On</td><td>Ecoflex 00-50</td><td>Smooth-On Store'dan deneme boyu</td></tr><tr><td>30 Sertlik Silikon</td><td>Smooth-On</td><td>Mold Star 30</td><td>Smooth-On Store'dan deneme boyutu</td></tr><tr><td>6 kuyucuklu hücre kültürü plakaları</td><td>Corning Incorporated</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Adenozin trifosfat (ATP)</td><td>Millipore Sigma</td><td>A1852-1VL</td><td>0,2 mikrometre filtresi ile filtrelenmiş 3 mM ATP'lik sulu bir çözelti yapmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Sığır kanı</td><td>HemoStat</td><td>DBB500</td><td>Mekanik olarak defibrine edilmiş; Bir deney için genellikle 500 mL yeterlidir</td></tr><tr><td>Clingerwrap</td><td>Fisherbrand</td><td>22-305654&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Filtre Kağıdı</td><td>Fisherbrand</td><td>09-790-2C</td><td>Kullanmadan önce otoklavlayın ve soğumaya bırakın. Orta yerine ince kalite de kullanabilir</td></tr><tr><td>Fluon (sulu politetrafloroetilen)</td> <td>Bioquip</td><td>2871</td> https://canada-ant-colony.com/products/fluon-ptfe-10ml <td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Millipore Sigma</td><td>G8270-100G</td><td></td></tr><tr><td>Hekzan</td><td>Millipore Sigma</td><td>139386-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Lens kağıdı</td> gibi diğer kaynaklardan temin edilebilir <td>Fisherbrand</td><td>11-995</td>% <td>100 suni ipek</td></tr><tr><td>Nystatin & nbsp;</td><td>Altın Biyoteknoloji</td><td>N-750-10</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Fisherbrand</td><td>S37440&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / streptomisin / mantar bölgesi</td><td>Gibco</td><td>15240-096</td><td>Veya aşağıdaki gibi konsantrasyona sahip eşdeğer jenerik (10.000 birim / mL penisilin, 10.000 &mikro; g / mL streptomisin ve 25 & mikro; g / mL Amfoterisin B)</td></tr> <tr><td>Evde</td><td></td> Yapılan <td>Fagostimulan</td><td>Önceki kene beslemelerinden toplanan</td></tr><tr><td>Polikarbonat Boru</td><td>McMaster-Carr</td><td>8585K204&nbsp;</td><td>45 mm uzunluğa, 1,25 inç dış çapa, 1 inç iç çapa kadar kesin. Kesme işlemi bir doğrama testeresi, taşlama çarkı gerektirir.</td></tr><tr><td>Kauçuk O-ringler</td><td>McMaster-Carr</td><td>9452K38&nbsp;</td><td>5 mm kalınlık, 1.25 inç iç çap</td></tr><tr><td>Yumuşak dokunuşlu forseps</td><td>VWR</td><td>470315-238&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Süper tutkal</td><td></td><td></td><td>siyanoakrilat tutkal</td></tr><tr><td>Unryu kağıdı&nbsp;</td><td>Sanat malzemeleri dut</td> lifi 10 g / m 2 depolar<td></td><td>. Wet Paint sanat malzemeleri mağazası, St. Paul, MN, ABD'den satın alındı</td></tr></tbody></table>

ixodes scapularis için kene yapay membran besleme

Tick Artificial Membrane Feeding for Ixodes scapularis

Keneler ve bunlarla ilişkili hastalıklar, halk sağlığı ve veterinerlik yükü nedeniyle önemli bir çalışma konusudur. Bununla birlikte, hem çalışma hem de yetiştirme sırasında kenelerin beslenme gereksinimleri, deneysel soruları veya laboratuvarların keneleri ve bunlarla ilişkili patojenleri araştırma yeteneğini sınırlayabilir. Yapay bir membran besleme sistemi bu sorunları azaltabilir ve geleneksel hayvan besleme sistemleriyle mümkün olmayabilecek yeni araştırma yolları açabilir. Bu çalışmada, tüm Ixodes skapularis yaşam evreleri için beslenme ve engorgement başarısı için rafine edilmiş yapay bir membran besleme sistemi açıklanmaktadır. Ayrıca, bu çalışmada açıklanan yapay membran besleme sistemi, istenen membran kalınlığının basit bir şekilde iyileştirilmesi yoluyla diğer kene türleriyle kullanılmak üzere değiştirilebilir. Yapay membran besleme sisteminin faydaları, sistemin emek yoğunluğu, besleme başarısını etkileyebilecek ek çevresel faktörler ve kenelerin her yeni türü ve yaşam aşaması için tekniğin rafine edilmesi ihtiyacı ile dengelenir.

Başarılı bir beslenme, kısmi veya tam bir engorgementin istenip istenmediğine bağlıdır. Başarıyla beslenen I. skapularis yetişkinler için gunmetal grisinin bir tonunu çevirir ve zardan kendi başlarına ayrılır. Bununla birlikte, en azından bezelye büyüklüğündeyse, beslemeyi bitirirken zardan ayrılabilirler. I. scapularis'in olgunlaşmamış aşamaları için, tamamen engorged kenelerin büyüklüğü değişir ve yetişkinlerin aksine, renk değişikliği göstermedikleri için, ayrılma, bir kenenin tamamen engorge olup ol...

Burada sunulan, çeşitli kene yaşam aşamalarının kısmi veya tam olarak engorgementine izin vermek için yapay bir membran sistemi aracılığıyla keneleri in vitro olarak kan beslemek için bir yöntemdir.

Ixodes scapularis için Kene Yapay Membran Besleme

Ticks and their associated diseases are an important topic of study due to their public health and veterinary burden. However, the feeding requirements of ...

Yapay membran besleme daha önce yapılmış olsa da, protokolümüzün kurulması daha kolaydır ve bazı değişikliklerle diğer kene türlerine uyarlanabilir. Suni membran beslemenin temel avantajı, hayvan besleme yoluyla mümkün olmayabilecek patojenlere ve tedavilere maruz kalmaya izin vermesidir. Bu yapay membran besleme sistemi, ideal fagostimülanlar ve ideal membran kalınlığındaki modifikasyonlar için bazı testlerle diğer eklembacaklı türlerine uygulanabilir.Doğru membran kalınlığının üretilmesi biraz pratik gerektirir. Membran üzerindeki çeşitli yerlerdeki kalınlığı ölçmek için bir mikrometre kullandığınızdan emin olun. Laboratuvarımızda doktora sonrası araştırmacı olan Benjamin Cull, prosedürü göstermeme yardımcı olacak.Başlamak için,% 70 etanol içeren bir kol standının cam bölmesi veya seramik kaplı metal tabanı gibi düz, gözeneksiz bir yüzeyi silin ve ardından tek bir plastik kaplama tabakasıyla örtün. Plastik ambalajın düz olduğundan ve kabarcıklar veya kırışıklıklar olmadığından emin olun. %100 rayon lens temizleme kağıdını hazırlanan yüzeye bantlayın.Kağıdın dört tarafında da bantla düz ve hafif gergin olduğundan emin olun. 0010 sertlikteki silikon karışımını, silikon kitin her bir parçasının beş mililitresini tek kullanımlık bir kaba ölçerek hazırlayın. İki sıvıyı hafifçe karıştırın ve 1,5 mililitre altıgen ekleyin.Karışım homojen hale gelene ve iyice karışana kadar karıştırmaya devam edin. Silikon karışımını lens kağıdının üzerine dağıtmak için küçük bir silecek kullanın ve silikonun lens kağıdına batırıldığından emin olmak için bir dakika bekletin. Sabit olarak, fazla silikonu, az miktarda aşağı doğru basınç kullanarak silecek ile yana doğru kazıyın.Herhangi bir silikon çizgisini çıkarmak ve pürüzsüz bir tabaka oluşturmak için aşağı doğru basınç uygulamadan silecek ile ikinci bir geçiş yapın. Sadece larvalar için, besleme odasının üst kısmını birkaç kez Fluon floropolimer reçinesine batırın ve tutarlı bir tabaka oluşturmak için uygulamalar arasında kurumasını sağlayın. Membranı, kapalı kimyasal veya biyogüvenlik kabini gibi tozsuz bir ortamda en az 24 saat kürlenmeye bırakın.Daha sonra, odaları membrana tutturmak üzere 30 sertlikteki silikon karışımını hazırlamak için eşit miktarda silikon karışımı A ve B'yi karıştırın. Polikarbonat odalarını silikon karışımına yaklaşık çeyrek inç batırın ve daha sonra bantların hiçbirinin üst üste binmemesine dikkat ederek membran tabakasına yerleştirin. Tutturulan silikonun en az 24 saat boyunca sertleşmesine izin verin.Bir neşter kullanarak, bağlı odaların her birinin etrafındaki zarı dikkatlice kesin, kenarları kesin, böylece yanlarda fazla kazıma olmadan altı kuyucuklu plakanın bir kuyusuna düzgün bir şekilde sığabilir. Membran ilavesini en üst düzeye çıkarmak için odanın dışına yeterli malzemeye izin verin. Artık membranın küçük bir parçasını her köşeden ve membran tabakasının merkezinden kesin.Plastik ambalajı her bir parçadan çıkarın ve ortalama membran kalınlığını belirlemek için parçaları bir mikrometre ile ölçün. Besleme odalarını, oda başına bir O-ring ile birlikte, sterilize etmek için en az 20 dakika boyunca 121 santigrat derecede otoklavlanacak bir cam kabın içine yerleştirin. Kullanmadan önce odaların soğumasını bekleyin.Önceden hazırlanmış, otoklavlanmış membran odalarını çıkardıktan ve O-ringi etraflarına yerleştirdikten sonra, her odayı membranı örtmek için yeterli% 70 etanol ile doldurun. Altı kuyucuklu bir plakada beş dakika bekletin ve ardından oda ile membran arasında ve membranın kendisinde herhangi bir sızıntı olup olmadığına bakın. Etanol'ü odalardan boşaltın ve ardından bir biyogüvenlik kabini veya laminer akış davlumbazının içinde hava ile kurumasını bekleyin.Kandaki tamamlayıcıyı ısıtmak ve aktive etmek için, 40 dakika boyunca 56 santigrat derecede ısıtın ve mekanik olarak defibrillenmiş sığır kanını litre glikoz başına iki gram ile destekleyin. Membran kuruduktan sonra, odanın içine yaklaşık 20 mikrolitre fagostimülan uygulayın ve odayı yüzeye yaymak için eğin. Fagostimülan kuruduğunda, keneleri bir fırça veya forseps ile odaya hızla ekleyin.Su banyosundan gelen ısı yırtılmasına neden olabileceğinden üstünü parafilm ile kapatın. Daha sonra konik bir tüpe kuyu veya oda başına beş mililitre ısı ve aktif kan ekleyin ve 36 santigrat derece olarak ayarlanmış su banyosuna yerleştirin. Tüpe beş mililitre kan başına beş mikrolitre üç milimolar ATP ve 50 mikrolitre 100X penisilin streptomisin mantar bölgesi stoğu ekleyin ve 4.5 mililitre kanı altı kuyucuklu bir plakanın kuyusuna aktarın.Odayı yavaşça kuyuya yerleştirin, oda üzerindeki O-ring yüksekliğini ayarlayın, böylece zar kanda oturur, ancak yan taraftaki kan seviyesi kuyunun üzerine çıkmaz. Daha sonra kan ve zar arasında hava kabarcığı oluşumunu önlemek için kuyuyu kana bir açıyla yerleştirin. Altı kuyucuklu plakanın kapağını besleme odalarının üzerine yerleştirin.Hazneli altı kuyucuklu plakayı hazırlanan 34 santigrat derece su banyosuna ve kapağa yerleştirin. Kan tüpüne kuyucuk başına beş mikrolitre üç milimolar ATP ve 50 mikrolitre 100X penisilin streptomisin mantar bölgesi stoğu ekleyin ve 4.5 mililitre kanı daha önce gösterildiği gibi taze altı kuyucuklu bir plakanın kuyucuğuna aktarın. Kene haznesi ile altı kuyu plakasını su banyosundan çıkarın ve odayı kuyudan çıkarın.Kanı çıkarmak için odanın dışını ve zarı 10 mililitre sterilize edilmiş 1X PBS ile durulayın. Otoklavlanmış filtre kağıdı kullanarak, fazla PBS'yi gidermek için membranı ve hazneyi nazikçe kurulayın. Odanın içinde çok fazla yoğuşma varsa, taze parafilm ile kapatmadan önce ıslak lekeleri otoklavlanmış filtre kağıdı ile kurulayın.Ardından odanın üstündeki parafilmi değiştirin. Kene haznesini taze kanla yeni altı kuyucuklu plakaya yerleştirin ve gerekirse O-ring yüksekliğini ayarlayın. Plakadaki her oda için bu adımları tekrarlayın.Son olarak, altı kuyu plakasının kapağını odaların üstüne yerleştirin ve yeni altı kuyu plakasını 34 santigrat derece su banyosuna geri taşıyın. Burada kısmen engorge edilmiş ixodes scapularis nimfleri ile devam eden bir besleme gösterilmektedir. Bağlantı bölgelerinin etrafındaki siyah veya kahverengi noktalar, fagostimülantı yapmak için yem sırasında ve sonrasında toplanabilen dondur.Kısmen engorge ixodes scapularis nimfleri membrana bağlı olarak görülür. Burada engorged larva kalıbının bir kabuğu da görülebilir. Kene engorgement sayıları ve yumurta kütle ağırlıkları bu tabloda sunulmuştur.Larva ve nimf engorgement deneysel koşullarında, bu teknikte kullanılan takviyelere ek olarak kana geyik organı homojenatı eklenmiştir. Burada, başarılı engorgement, ya bir sonraki canlı aşamaya başarılı bir şekilde erimiş engorge keneler ya da başarılı bir şekilde yumurta bırakan engorge dişiler olarak tanımlanmıştır. Lens kağıdına silikon uygularken kabul edilebilir kalınlık elde etmek pratik gerektirir, bu nedenle kullanmadan önce membranın kalınlığını ölçmek her zaman önemlidir.Membran besleme, keneleri patojenlere veya antibiyotiklere maruz bırakabilir. Bunların kene biyolojisinin erime başarısı, yumurtlama ve hayatta kalma gibi yönleri üzerindeki etkileri yem sonrası değerlendirilebilir.

tick-artificial-membrane-feeding-for-ixodes-scapularis

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Keneler hemolimf, tükrük bezleri ve tükürük toplama patojenler hastalıklara nasıl neden kene kaynaklı incelemek önemlidir. Bu protokolü biz beslenmesini hemolimf ve tükrük bezleri toplamak nasıl...

Ixodes scapularis Keneler gelen tükürük, Tükürük Bezi ve hemolimf Koleksiyonu

Lyme hastalığı Kuzey Amerika'daki en sık bildirilen vektör kaynaklı bir hastalıktır. Etkeni, Borrelia burgdorferi keneler kene ile bulaşan bir spioket bakteridir. Hayvan modellerinde enfeksiyonun İletim ve saptama burada açıklandığı kene besleme, kullanılmasıyla optimize edilir.

Lyme Hastalığı Araştırma İletim ve Xenodiagnosis için Hayvanlar Keneler besleme

Sağlıklı laboratuarda yetiştirilen kenelerin üretimi, kene biyolojisi ve kene patojen etkileşimleri üzerine çalışmalar için gereklidir. Burada, fare için düşük maliyetli ve stresli olgunlaşmamış kene beslemesi için basit bir protokolü gösteriyoruz.

yetiştirme<em&gt; Geyik kenesi,</em&gt; Siyah Ayaklı Tik Tak: Fare üzerinde Olgunlaşmamış Evreleri Besleme

Bu çalışmada, laboratuvar faresine bağlı bir kapsül kullanılarak sert kenenin nymphal ve larva evreleri için bir besleme sistemi geliştirilmiştir. Besleme kapsülü esnek malzemelerden yapılır ve en az bir hafta boyunca fareye sıkıca bağlı kalır ve kene beslemenin rahat bir şekilde izlenmesini sağlar.

Laboratuvar Farelerde Olgunlaşmamış Sert Kene Aşamaları Enfestasyon için Kapsül Tabanlı Model

Bu protokolün amacı, yapay bir membran besleyici aracılığıyla Aedes aegypti sivrisineklerine hayvansal türevli ve yapay kan yemekleri sunmak ve yutturılan yemek hacmini tam olarak ölçmektir.

Aedes aegypti Sivrisineklerinde Hayvansal Türevli Kan ve Yapay Yemeklerin Beslenmesi ve Ölçülmesi

Mevcut protokol, mikroRNA'ların kene tükürük bezlerinden ve saflaştırılmış hücre dışı veziküllerden izolasyonunu tanımlamaktadır. Bu, yaygın olarak kullanılan reaktifleri ve sarf malzemelerini birleştiren evrensel bir prosedürdür. Yöntem aynı zamanda az sayıda kene kullanımına izin verir, bu da kolayca sıralanabilen kaliteli mikroRNA'larla sonuçlanır.

MikroRNA'ların Kene Ex Vivo Tükürük Bezi Kültürlerinden ve Hücre Dışı Veziküllerden İzolasyonu

Bu makale, klinik araştırmalar için insanları larva Ixodes scapularis'e maruz bırakma metodolojisini sunmaktadır. Teknik nispeten basittir, araştırma gönüllüleri tarafından tolere edilebilir ve deneysel ihtiyaçlara göre değiştirilebilir. İnsan denekleri içeren bu tür araştırmalar, uygun düzenleyici makamlar tarafından onaylanan klinik çalışma protokolleri kapsamında yürütülmelidir.

İnsanların Larva Ixodes scapularis Kenelerine Deneysel Maruziyeti İçin Bir Model

Bu yöntem, 3D baskılı bir oda ve laboratuvarda üretilmiş silikon membranı içeren in vitro kene kan besleme sisteminin geliştirilmesini öngörür. Sistem, kenelerin yapay beslenmesini sağlar, çeşitli beslenme evrelerinde kolayca örnekleme alınır ve düşük miktarda kan kullanılır; bu da ixodid kenelerini incelemek için paha biçilmez bir araç sağlar.

Ixodid kene araştırmalarında 3D baskılı bir odada yapay bir zardan beslenen kene kanı

Bu video test gösterilmiştir nikotin değil saha ve bir tütün bitkileri infests aphids bir iki tür tolerans testleri.

Yapay Diyet Deney kullanarak Yaprak bitleri Nikotin Tolerans Testi

Düzlemsel çift katlı lipit katmanını da adlandırılan yapay çift katlı lipit katmanını, çalışma izin iyon iletken, iyi tanımlanmış bir ortamda kanal. Burada, bilayeri odası hazırlamak için gerekli bireysel adımlar, elektrotlar ve nasıl bilayeri tek kanal ölçümleri için uygun olup olmadığını test etmek için ortaya koymaktadır.

Elektrofizyoloji Deneyler Yapay Bilayers hazırlanması

Öğrenin, Ixodes scapularis kene türleri için yapay membran besleme yöntemiyle patojen etkileşimlerini ve tedavileri hayvan kullanmadan inceleyin. Bu protokol, kene biyolojisi araştırmalarında kontrollü koşullar sağlar.

Ixodes scapularis için Kene Yapay Membran Besleme

Daha fazla video keşfet