Name: Sessiz Kök Hücre Popülasyonlarının Bireysel İskelet Kaslarından İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-09T13:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: Öğrenin, fare iskelet kaslarından kas kök hücreleri ve fibro-adipojenik progenitörleri izole etme yöntemini. Bu protokol, hücre döngüsü analizi ve rejeneratif tıp araştırmaları için yüksek saflıkta canlı hücre popülasyonları sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Hücre ayıklama, Danimarka'daki Aarhus Üniversitesi, FACS Çekirdek Tesisi'nde gerçekleştirildi. Rakamlar Biorender.com kullanılarak oluşturulmuştur. Tavşan anti-PDGFRa antikorunu paylaştığı için Dr. J. Farup'a teşekkür ederiz. Bu çalışma, NovoNordiskFonden'den E.P.'ye (0071113) ve A.D.M.'ye (0071116) bir AUFF Başlangıç Hibesi ve Başlangıç Paketi hibeleri ile desteklenmiştir.

<ol><li>Mauro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+cell+of+skeletal+muscle+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biophysical+and+Biochemical+Cytology%22%5BJournal%5D)">Satellite cell of skeletal muscle fibers.</a> The Journal of Biophysical and Biochemical Cytology. 9 (2), 493-495 (1961).</li>
<li>Relaix, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspectives+on+skeletal+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Perspectives on skeletal muscle stem cells.</a> Nature Communications. 12 (1), 692(2021).</li>
<li>Cheung, T. H., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+stem+cell+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of stem cell quiescence.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 14 (6), 329-340 (2013).</li>
<li>Kann, A. P., Hung, M., Krauss, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-cell+contact+and+signaling+in+the+muscle+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell-cell contact and signaling in the muscle stem cell niche.</a> Current Opinion in Cell Biology. 73, 78-83 (2021).</li>
<li>Tedesco, F. S., Dellavalle, A., Diaz-Manera, J., Messina, G., Cossu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repairing+skeletal+muscle%3A+regenerative+potential+of+skeletal+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Repairing skeletal muscle: regenerative potential of skeletal muscle stem cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 120 (1), 11-19 (2010).</li>
<li>Murphy, M. M., Lawson, J. A., Mathew, S. J., Hutcheson, D. A., Kardon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+cells%2C+connective+tissue+fibroblasts+and+their+interactions+are+crucial+for+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Satellite cells, connective tissue fibroblasts and their interactions are crucial for muscle regeneration.</a> Development. 138 (17), 3625-3637 (2011).</li>
<li>Lepper, C., Partridge, T. A., Fan, C. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+absolute+requirement+for+Pax7-positive+satellite+cells+in+acute+injury-induced+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">An absolute requirement for Pax7-positive satellite cells in acute injury-induced skeletal muscle regeneration.</a> Development. 138 (17), 3639-3646 (2011).</li>
<li>Sambasivan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7-expressing+satellite+cells+are+indispensable+for+adult+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Pax7-expressing satellite cells are indispensable for adult skeletal muscle regeneration.</a> Development. 138 (17), 3647-3656 (2011).</li>
<li>Sacco, A., Doyonnas, R., Kraft, P., Vitorovic, S., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-renewal+and+expansion+of+single+transplanted+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Self-renewal and expansion of single transplanted muscle stem cells.</a> Nature. 456 (7221), 502-506 (2008).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 153-163 (2010).</li>
<li>Wosczyna, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+are+required+for+regeneration+and+homeostatic+maintenance+of+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells are required for regeneration and homeostatic maintenance of skeletal muscle.</a> Cell Reports. 27 (7), 2029-2035 (2019).</li>
<li>Uezumi, A., Fukada, S. -I., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+progenitors+distinct+from+satellite+cells+contribute+to+ectopic+fat+cell+formation+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat cell formation in skeletal muscle.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 143-152 (2010).</li>
<li>Seale, P., Sabourin, L. A., Girgis-Gabardo, A., Mansouri, A., Gruss, P., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+Is+Required+for+the+Specification+of+Myogenic+Satellite+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Pax7 Is Required for the Specification of Myogenic Satellite Cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li>
<li>Shea, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sprouty1+regulates+reversible+quiescence+of+a+self-renewing+adult+muscle+stem+cell+pool+during+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Sprouty1 regulates reversible quiescence of a self-renewing adult muscle stem cell pool during regeneration.</a> Cell Stem Cell. 6 (2), 117-129 (2010).</li>
<li>Fukada, S. -I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+signature+of+quiescent+satellite+cells+in+adult+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Molecular signature of quiescent satellite cells in adult skeletal muscle.</a> Stem Cells. 25 (10), 2448-2459 (2007).</li>
<li>Liu, L., Cheung, T. H., Charville, G. W., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+skeletal+muscle+stem+cells+by+fluorescence-activated+cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation of skeletal muscle stem cells by fluorescence-activated cell sorting.</a> Nature Protocols. 10 (10), 1612-1624 (2015).</li>
<li>Joe, A., Wang, J., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+isolation+of+adipogenic+progenitors+from+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Prospective isolation of adipogenic progenitors from skeletal muscle.</a> Journal of Investigative Medicine. 55 (1), 124(2007).</li>
<li>Yi, L., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+progenitors+from+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Purification of progenitors from skeletal muscle.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), e2476(2011).</li>
<li>Sherwood, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adult+mouse+myogenic+progenitors%3A+functional+heterogeneity+of+cells+within+and+engrafting+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Isolation of adult mouse myogenic progenitors: functional heterogeneity of cells within and engrafting skeletal muscle.</a> Cell. 119 (4), 543-554 (2004).</li>
<li>Montarras, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+isolation+of+satellite+cells+for+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration.</a> Science. 309 (5743), 2064-2067 (2005).</li>
<li>Conboy, M. J., Cerletti, M., Wagers, A. J., Conboy, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immuno-analysis+and+FACS+sorting+of+adult+muscle+fiber-associated+stem%2Fprecursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+In+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Immuno-analysis and FACS sorting of adult muscle fiber-associated stem/precursor cells.</a> Methods In Molecular Biology. 621, 165-173 (2010).</li>
<li>de Morree, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+polyadenylation+of+Pax3+controls+muscle+stem+cell+fate+and+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Alternative polyadenylation of Pax3 controls muscle stem cell fate and muscle function.</a> Science. 366 (6466), 734-738 (2019).</li>
<li>Stuelsatz, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraocular+muscle+satellite+cells+are+high+performance+myo-engines+retaining+efficient+regenerative+capacity+in+dystrophin+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Extraocular muscle satellite cells are high performance myo-engines retaining efficient regenerative capacity in dystrophin deficiency.</a> Developmental Biology. 397 (1), 31-44 (2015).</li>
<li>Mookhtiar, K., Randall Steinbrink, D., Van Wart, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mode+of+hydrolysis+of+collagen-like+peptides+by+class+I+and+class+II+Clostridium+histolyticum+collagenases%3A+evidence+for+both+endopeptidase+and+tripeptidylcarboxypeptidase+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Mode of hydrolysis of collagen-like peptides by class I and class II Clostridium histolyticum collagenases: evidence for both endopeptidase and tripeptidylcarboxypeptidase activities.</a> Biochemistry. 24 (23), 6527-6533 (1985).</li>
<li>Stenn, K. S., Link, R., Moellmann, G., Madri, J., Kuklinska, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispase%2C+a+neutral+protease+from+Bacillus+polymyxa%2C+is+a+powerful+fibronectinase+and+type+IV+collagenase%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Dispase, a neutral protease from Bacillus polymyxa, is a powerful fibronectinase and type IV collagenase.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 93 (2), 287-290 (1989).</li>
<li>Baghdadi, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+signalling+by+Notch-Collagen+V-CALCR+retains+muscle+stem+cells+in+their+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reciprocal signalling by Notch-Collagen V-CALCR retains muscle stem cells in their niche.</a> Nature. 557 (7707), 714-718 (2018).</li>
<li>van Velthoven, C. T. J., de Morree, A., Egner, I. M., Brett, J. O., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+profiling+of+quiescent+muscle+stem+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Transcriptional profiling of quiescent muscle stem cells in vivo.</a> Cell Reports. 21 (7), 1994-2004 (2017).</li>
<li>Machado, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+fixation+redefines+quiescence+and+early+activation+of+skeletal+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">In situ fixation redefines quiescence and early activation of skeletal muscle stem cells.</a> Cell Reports. 21 (7), 1982-1993 (2017).</li>
<li>Machado, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+damage+induces+a+conserved+stress+response+that+initiates+quiescent+muscle+stem+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Tissue damage induces a conserved stress response that initiates quiescent muscle stem cell activation.</a> Cell Stem Cell. 28 (6), 1125-1135 (2021).</li>
<li>vanden Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nature Methods. 14 (10), 935-936 (2017).</li>
<li>Moore, D. K., Motaung, B., du Plessis, N., Shabangu, A. N., Loxton, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SU-IRG+consortium+isolation+of+B-cells+using+Miltenyi+MACS+bead+isolation+kits%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">SU-IRG consortium isolation of B-cells using Miltenyi MACS bead isolation kits.</a> PloS One. 14 (3), 0213832(2019).</li>
<li>Liou, Y. -R., Wang, Y. -H., Lee, C. -Y., Li, P. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buoyancy-activated+cell+sorting+using+targeted+biotinylated+albumin+microbubbles%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Buoyancy-activated cell sorting using targeted biotinylated albumin microbubbles.</a> PloS One. 10 (5), 0125036(2015).</li>
<li>Brett, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+rejuvenates+quiescent+skeletal+muscle+stem+cells+in+old+mice+through+restoration+of+Cyclin+D1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Exercise rejuvenates quiescent skeletal muscle stem cells in old mice through restoration of Cyclin D1.</a> Nature Metabolism. 2 (4), 307-317 (2020).</li>
<li>Tabula Muris Consortium. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+transcriptomic+atlas+characterizes+ageing+tissues+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A single-cell transcriptomic atlas characterizes ageing tissues in the mouse.</a> Nature. 583 (7817), 590-595 (2020).</li>
<li>de Morrée, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staufen1+inhibits+MyoD+translation+to+actively+maintain+muscle+stem+cell+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Staufen1 inhibits MyoD translation to actively maintain muscle stem cell quiescence.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (43), 8996-9005 (2017).</li>
</ol>

Yazarların birbiriyle çelişen finansal çıkarları ve çıkar çatışmaları yoktur.

İyi verim elde etmek için bu protokolün yürütülmesinde birkaç adım anahtardır. Bireysel kaslar, toplu izolasyon protokollerinde kullanılan kas miktarına kıyasla küçük bir hacme sahiptir. Bu, diseksiyon sırasında kasın kuruma riski ile sonuçlanır ve bu da verimi azaltır. Bunu önlemek için, diseksiyondan hemen sonra kaslara orta eklemek önemlidir. Ek olarak, diseksiyon daha uzun sürüyorsa, kasların havaya maruz kalma süresini azaltmak için cilt bir seferde bir uzuvdan çıkarılabilir. Daha küçük hacim aynı zamanda aşırı sind...

İskelet kası, kas kök hücrelerinin (MuSC'ler) varlığı nedeniyle yenilenme için yüksek bir kapasiteye sahiptir. MuSC'ler miyofiberler üzerinde, bazal laminanın altında bulunur ve uzamış, geri dönüşümlü hücre döngüsü çıkışı 1,2,3,4'ün sessiz bir durumunda bulunur. Yaralanma üzerine, MuSC'ler aktive olur ve yeni miyofiberler oluşturmak için farklılaşabilen ve kaynaşabilen çoğaltıcı progenitörlere yol açmak için hücre döngüsüne girer 2,5. Önceki çalışmalar, MuSC'lerin kas yenilenmesi için kesinlikle gerekli olduğunu göstermiştir 6,7,8. Dahası, tek bir MuSC hem yeni kök hücreleri hem de yeni miyofiberleri aşılayabilir ve üretebilir9. İskelet kası ayrıca, kas rejenerasyonu sırasında MuSC fonksiyonunu desteklemede çok önemli bir rol oynayan fibro-adipojenik progenitörler (FAP'ler) adı verilen mezenkimal stromal hücrelerin bir popülasyonunu barındırır 6,10,11,12.
Kas rejenerasyonunu koordine etme potansiyelleri nedeniyle, MuSC'lerin ve FAP'ların nasıl çalıştığını anlamaya büyük ilgi duyulmuştur. Sessiz MuSC'ler, transkripsiyon faktörleri Pax7 ve Sprouty1'in ve hücre yüzey proteini kalsitonin reseptörünün ekspresyonu ile işaretlenirken, sessiz FAP'lar hücre yüzeyi proteini trombosit kaynaklı büyüme faktörü reseptörü alfa (PDGFRa) 10,12,13,14,15 ile işaretlenir . Önceki çalışmalar, MuSC'lerin ve FAP'ların hücre yüzey belirteçleri ve floresan ile aktive hücre sıralama (FACS) kullanılarak iskelet kaslarından saflaştırılabileceğini göstermiştir9,15,16,17,18,19,20,21. Bu protokoller MuSC'leri ve FAP'ları inceleme yeteneğini büyük ölçüde geliştirmiş olsa da, bir dezavantajı, bu protokollerin çoğunun MuSC'lerin farklı kas dokularından oluşan bir havuzdan izole edilmesini gerektirmesidir. Bizden ve diğerlerinden yapılan son çalışmalar, farklı dokulardan izole edilen MuSC'ler arasındaki hücre fenotipinde ve gen ekspresyon düzeylerinde farklılıklar olduğunu ortaya koymuştur22,23. Diyafram, triseps ve gracilisten gelen MuSC'ler, alt arka ekstremite kaslarından MuSC'lerdendaha hızlı aktivasyon gösterirken, ekstraoküler kaslardan MuSC'ler, diyaframdan ve alt arka ekstremite kaslarından MuSC'lerden daha hızlı farklılaşma gösterir23.
Bu protokol, MuSC'lerin ve FAP'ların bireysel iskelet kaslarından izolasyonunu tanımlar (Şekil 1). Buna diyafram, triseps, gracilis, tibialis anterior (TA), soleus, ekstansör digitorum longus (EDL), gastroknemius (GA) ve masseter kaslarının diseksiyonu dahildir. Disseke kaslar daha sonra kollajenaz II (kollajendeki Pro-X-Gly-Pro amino dizisini spesifik olarak hedef alan, bağ dokusunun ve doku ayrışmasının bozulmasını sağlayan bir proteaz)24) ve dispaz (fibronektin ve kollajen IV'ü parçalayan ve daha fazla hücre ayrışmasını sağlayan bir proteaz) kullanılarak enzimatik sindirim ile ayrıştırılır25). MuSC'ler ve FAP'lar, FACS tarafından tek hücreli süspansiyonlardan izole edilir. Hücre analizi için aşağı akış tahlillerine örnek olarak, kök hücre aktivasyonu 5-etinil-2'-deoksiüridin (EdU) katılımı ile belirlenirken, hücre saflığı, hücre tipine özgü belirteçler Pax7 ve PDGFRa için immünofloresan boyaması ile belirlenir.

<table><tbody><tr><td>1,5 mL tüp (PCR performansı test edilmiş, PP, 30.000 xg, DNA/DNaz-/RNaz içermeyen, Düşük DNA bağlanması, Steril</td>) <td>Sarstedt AG & Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>72.706.700</td><td>1,5 mL tüp</td></tr><tr><td>15 mL tüp (PP/HD-PE, 20.000 xg, IVD/CE, IATA, DNA/DNaz-/RNaz içermez, Sitotoksik olmayan, pirojen içermez, Steril)</td><td>Sarstedt AG & Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>62.554.502</td><td>15 mL tüp</td></tr><tr><td>5 mL polistiren yuvarlak tabanlı tüp</td><td>Falcon, Fisher Scientific&nbsp;</td><td>352054</td><td>Süzgeç kapaksız FACS tüpü</td></tr><tr><td>5 mL polistiren Hücre süzgeç kapaklı yuvarlak tabanlı tüp</td><td>Falcon, Fisher Scientific&nbsp; &nbsp;</td><td>352235</td><td>Süzgeç kapaklı FACS tüpü</td></tr><tr><td>5 mL tüp (PP, steril olmayan otoklavlanabilir)</td><td>VWR koleksiyonu</td><td>525.0946</td><td>5 mL tüp</td></tr><tr><td>50 mL tüp (PP/HD-PE, 20.000 xg, IVD/CE, ADR, DNA/DNase-/RNaz içermez, sitotoksik olmayan, pirojen içermez, Steril)</td><td>Sarstedt AG & Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>62.547.254</td><td>50 mL tüp</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 Eşek anti-tavşan IgG (H + L)</td> <td>Canlandırıcı, Thermo Fisher</td><td>Lot: 2387458 (Cat # A31572)</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 eşek önleyici fare IgG (H+L)</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher</td><td>Lot: 2420713 (Cat#A31571)</td><td></td></tr><tr><td>ARIA 3</td><td>BD</td><td></td><td>FACS, Çekirdek tesis Aarhus Üniversitesi</td></tr><tr><td>Santrifüj 5810</td><td>eppendorf</td><td>EP022628188</td><td>Görüntüleme</td></tr><tr><td>için Santrifüj Click-iT EdU Hücre Proliferasyon Kiti, Alexa Fluor 488 boya</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher</td><td>Lot: 2387287 (Cat# C10337)</td><td>Hücre Proliferasyon</td></tr><tr><td>Kiti Dana derisinden kollajen&nbsp;</td><td>Biyoreaktif, Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>Kaynak: SLCK6209 (Cat# C8919)</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz tip II</td><td>Worthington, Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Lot: 40H20248 (cat# L5004177 )</td><td>Kollajenaz</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Gibco, Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Lot: 2309415 (cat# 17105-041 )</td><td>Dispase</td></tr><tr><td>Donkey serum (steril olmayan)</td><td>Sigma Aldrich, Merck</td><td>Lot: 2826455 (Cat# S30-100mL)</td><td></td></tr><tr><td>Dumont nr. 5, 110 mm</td><td>Dumont, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>1606.327</td><td>İnce uçlu düz forseps</td></tr><tr><td>Dumont nr. 7, 115 mm</td><td>Dumont, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>1606.335</td><td>Kavisli forseps</td></tr><tr><td>F-10 Besin karışımı (Jambon) (1x), +L-glutamin</td><td>Gibco, Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Lot. 2453614 (kedi # 31550-023)</td><td></td></tr> <tr><td>FITC anti-fare CD31</td><td>BioLegend, NordicBioSite</td><td>MEC13.3 (Cat # 102506)</td><td></td></tr><tr><td>FITC Anti-fare CD45</td><td>BioLegend, NordicBioSite</td><td>30-F11 (Cat# 103108)</td><td></td></tr><tr><td>Buzlu asetik asit (%100)</td><td>EMSURE, Merck&nbsp; &nbsp;</td><td>K44104563 9Cat # 1000631000)</td><td></td></tr><tr><td>Baş üstü mini tüp döndürücü&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>15534080 (Model no. 88861052)</td><td>Baş üstü mini tüp döndürücü</td></tr><tr><td>At serumu</td><td>Gibco, Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Lot. 2482639 (cat# 10368902 )</td><td></td></tr><tr><td>Isotemp SWB 15</td><td>FisherBrand, Fisher Scientific</td><td>15325887</td><td>Sallanan su banyosu</td></tr><tr><td>MS2 mini çalkalayıcı&nbsp;</td><td>IKA&nbsp;</td><td></td><td>Vorteks ünitesi</td></tr><tr><td>İğne 20 G (0,9 mm x 25 mm)</td><td>BD mikromızrak, Fisher Scientific&nbsp;</td><td>304827</td><td>20G iğne&nbsp;</td></tr><tr><td>Nötr formalin tamponu% 10</td> <td>CellPath, Hounisen Laboratorieudstyr A / S</td><td>Lot: 03822014 (Cat # HOU / 1000.1002)</td><td></td></tr> <tr><td>Pirojenik olmayan hücre süzgeci (40 ve mikro; M)</td> <td>Sarstedt AG & Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>83.3945.040</td><td>Hücre süzgeci& nbsp;</td></tr><tr><td>Pasifik Mavisi anti-fare Ly-6A/E (Sca-1)</td><td>BioLegend, NordicBioSite</td><td>D7 (Cat# 108120)</td><td></td></tr><tr><td>Pax7 birincil antikor</td><td>DSHB</td><td>Lot: 2/3/22-282ug/mL (Cat# AB 528428)</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x toz konsantresi</td><td>Fisher BioReagents, Fisher Scientific</td><td>BP665-1</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 anti-fare CD106 (VCAM1)</td><td>BioLegend, NordicBioSite</td><td>429 (MVCAM. A) (Kedi # 105720)</td><td></td></tr><tr><td>Kalem/strep</td><td>Gibco, Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Öğr. 163589 (cat# 11548876 )</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları p10</td><td>Sanat uçları, kendinden sızdırmaz bariyer, Thermo Scientific</td><td>2140-05</td><td>Düşük tutma, önceden sterilize edilmiş, filtre uçları</td></tr><tr><td>Pipet uçları p1000</td><td>Sanat uçları, kendinden sızdırmaz bariyer, Thermo Scientific</td><td>2279-05</td><td>Düşük tutma, önceden sterilize edilmiş, filtre uçları</td></tr><tr><td>Pipet uçları p20</td><td>Sanat uçları, kendinden sızdırmaz bariyer, Thermo Scientific</td><td>2149P-05</td><td>Düşük tutma, önceden sterilize edilmiş, filtre uçları</td></tr><tr><td>Pipet uçları p200</td><td>Sanat uçları, kendinden sızdırmaz bariyer, Thermo Scientific</td><td>2069-05</td><td>Düşük tutma, önceden sterilize edilmiş, filtre uçları</td></tr><tr><td>Koruyucu alt ped</td><td>Abena&nbsp;</td><td>ACTC-7712</td> <td>ve nbsp; 60 x 40cm, 8 kat</td></tr><tr><td>Rainin, pipet-lite XLS</td><td>Mettler Toledo, Thermo Scientific&nbsp;</td><td>2140-05, 2149P-05, 2279-05, 2069-05</td><td>Pipetler (P10, P20, P200, P1000)</td></tr><tr><td>Rekombinant anti-PDGFR-alfa</td><td>RabMAb, abcam</td><td>AB134123</td><td></td></tr><tr><td>Neşter (şaft no. 3)</td><td>Hounisen, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>1902.502</td><td>Neşter Neşter</td></tr><tr><td>bıçağı no. 11</td><td>Heinz Herenz, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>1902.0911</td><td>Neşter</td></tr><tr><td>Scanlaf mars</td><td>Labogene</td><td>2. sınıf kabin: Mars</td><td>Akış tezgahı</td></tr><tr><td>ScanR</td><td>Olympus</td><td></td><td>Mikroskop, Çekirdek tesis Aarhus Üniversitesi</td></tr><tr><td>Makas</td><td>FST</td><td>14568-09</td><td></td></tr><tr><td>Serisi 8000 DH</td><td>Thermo Scientific</td><td>3540-MAR</td><td>İnkübatör</td></tr><tr><td>Serolojik pipet 10 mL</td><td>VWR</td><td>612-3700</td><td>Steril, pirojenik olmayan</td></tr><tr><td>Serolojik pipet 5 mL</td><td>VWR, Avantor VWR</td><td>612-3702</td> tarafından teslim edilen <td>Steril, pirojenik</td></tr><tr><td>olmayan Şırınga 5 mL, Luer ucu (% 6), steril ve nbsp;</td><td>BD Emerald, Fisher Scientific</td><td>307731</td><td>Şırınga</td></tr><tr><td>TC Dish 100, standart</td><td>Sarstedt AG & Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>83.3902</td><td>Petri kabı&nbsp;</td></tr><tr><td>Doku Kültürü (TC) ile muamele edilmiş yüzey, siyah polistiren, düz tabanlı, steril, kapaklı, 20'li paket</td><td>Corning, Sigma Aldrich</td><td>3764</td><td>96 kuyulu Yarım alt plaka</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich, Merck</td><td>Kaynak: SLCJ6163 (Cat # T8787)</td><td></td></tr></tbody></table>

sessiz kök hücre popülasyonlarının bireysel İskelet kaslarından İzolasyonu

Isolation of Quiescent Stem Cell Populations from Individual Skeletal Muscles

İskelet kası, dokunun homeostazına ve onarımına katkıda bulunan yetişkin kök hücrelerin farklı popülasyonlarını barındırır. İskelet kası kök hücreleri (MuSC'ler) yeni kas yapma yeteneğine sahipken, fibro-adipojenik progenitörler (FAP'ler) stromal destek dokularına katkıda bulunur ve fibroblastlar ve adipositler yapma yeteneğine sahiptir. Hem MuSC'ler hem de FAP'lar, sessizlik adı verilen uzun süreli geri dönüşümlü hücre döngüsü çıkışı durumunda bulunur. Sessiz durum, işlevlerinin anahtarıdır. Sessiz kök hücreler genellikle tek bir numunede bir araya getirilen çoklu kas dokularından saflaştırılır. Bununla birlikte, son zamanlarda yapılan çalışmalar, farklı kaslardan izole edilen MuSC'lerin moleküler profillerinde ve sessizlik derinliğinde belirgin farklılıklar ortaya koymuştur. Bu protokol, MuSC'lerin ve FAP'ların bireysel iskelet kaslarından izolasyonunu ve çalışmasını açıklamakta ve kök hücre aktivasyonunun moleküler analizini gerçekleştirmek için stratejiler sunmaktadır. Diyafram, triceps, gracilis, tibialis anterior (TA), gastroknemius (GA), soleus, ekstansör digitorum longus (EDL) ve masseter kasları gibi farklı gelişimsel kökenli, kalınlıklı ve fonksiyonlardaki kasların nasıl izole edileceğini ve sindirileceğini ayrıntılarıyla açıklar. MuSC'ler ve FAP'lar floresan ile aktive edilmiş hücre sıralama (FACS) ile saflaştırılır ve immünofloresan boyama ve 5-etinil-2'-deoksiüridin (EdU) birleştirme testi ile analiz edilir.

Bireysel iskelet kası izolasyonu protokolünü takiben (Şekil 2), gracilis, TA, EDL, GA, soleus, triceps, masseter ve diyafram kasları, yerel bir üreme programından kesilen üç İsviçreli erkek dışlanmış fareden izole edildi (Şekil 2). Doku ayrışması ve antikor boyamasını takiben, bireysel kaslardan MuSC'ler ve FAP'lar FACS ile saflaştırıldı (Şekil 3). İlk geçit, hücreleri tanımlamak ve singlet'ları çiftlerden ayırmak için lekesiz bir n...

Bu protokol, kas kök hücrelerinin ve fibro-adipojenik progenitörlerin farelerde bireysel iskelet kaslarından izolasyonunu tanımlar. Protokol, tek kas diseksiyonu, floresan aktive hücre sıralama ile kök hücre izolasyonu, immünofloresan boyama ile saflık değerlendirmesi ve 5-etinil-2'-deoksiüridin dahil etme testi ile S-faz girişinin kantitatif ölçümünü içerir.

Sessiz Kök Hücre Popülasyonlarının Bireysel İskelet Kaslarından İzolasyonu

Skeletal muscle harbors distinct populations of adult stem cells that contribute to the homeostasis and repair of the tissue. Skeletal muscle stem cells ...

Bu protokol önemlidir, çünkü farklı iskelet kaslarında kök hücre fonksiyonunun incelenmesini sağlar ve homeostaz, rejenerasyon ve hastalık ilerlemesine nasıl katkıda bulunduklarına dair anlayışımızı derinleştirir. Bu protokolü kullanarak, iki canlı kök hücre popülasyonunu belirli kaslardan izole edebilir ve nasıl çalıştıklarını inceleyebiliriz. Kas izolasyonuna başlamak için, ötenazi fareyi etanol ile püskürtün ve karnı yukarı bakacak şekilde yerleştirin.Makas kullanarak, karın derisine 0,5 santimetre uzunluğunda yatay bir kesi yapın. Her iki elinizi kullanarak, gövdeyi ve alt ekstremiteleri arka bacaklara kadar açığa çıkarmak için cildi çekin. Gracilis veya iç uyluk kasını bulun ve bir çift kavisli forseps kullanarak üzerine tutun ve kası hafifçe kaldırın.Makas kullanarak, gracilis kasını kesmek için 0,5 santimetrelik bir kesi yapın. Diğer bacaktaki prosedürü tekrarlayın. Bir neşter kullanarak, tibianın lateral tarafı boyunca 0,5 santimetrelik bir kesi yaparak fasyayı kesin.Daha sonra kavisli forseps kullanarak fasyayı tutun ve arka bacağın distal ucundaki tendonları açığa çıkararak çekerek çıkarın. Daha sonra, TA'nın distal tendonu ile EDL kası arasına süper ince uçlu bir çift düz forseps yerleştirin. Forsepsleri kasların proksimal ucuna doğru kaydırarak kasları ayırın.Forsepsleri distal uca geri getirin ve distal tendonu kesin. TA'nın distal tendonunu kavisli forseps ile yavaşça tutun ve kası yukarı ve proksimal ataşmanın üzerine kaldırın. Proksimal tendonu dikkatlice kesmek için, diğer ucu bağlantısına mümkün olan en yakın şekilde kesin ve TA'yı bir Petri kabına aktarın.Daha sonra EDL'nin distal tendonunun altına girmek için süper ince uçlu düz forsepsleri kullanın ve kasları birbirinden ayırmak için forsepsleri kasın proksimal ucuna doğru kaydırın. Forsepsleri distal uca geri getirin ve kaslara zarar vermeden distal tendonu kesin. EDL'nin distal tendonunu kavisli forsepslerle nazikçe tutarak, proksimal tendonu ataşmanına mümkün olduğunca yakın kesmek için kası yukarı ve proksimal ataşmanı üzerine kaldırın.Diğer ucu kesin ve EDL kasını bir Petri kabına aktarın. Diğer arka bacak için prosedürü tekrarlayın. Aşil tendonu ile alt arka bacak kemikleri arasına ulaşmak için süper ince uçlu düz forseps kullanın.Kasları kemiklerden ayırmak için forsepsleri kasın proksimal ucuna doğru kaydırın. Forsepsleri distal uca geri getirin ve distal tendonu kesin. Gastroknemius veya GA kasını yukarı ve fibulanın üzerine çekin.Proksimal soleus tendonunu bulmak için. Soleus ve GA kasları arasına düz forsepsleri yerleştirin ve soleusu GA'dan ayırmak için forsepsleri kasların distal ucuna doğru hareket ettirin. Şimdi proksimal soleus tendonunu kesin. Kavisli forseps ile tutun ve distal tendonuna erişmek için sous'u dikkatlice kaldırın.Soleusu GA'dan izole etmek için distal tendonu kesin ve soleusu yıkama ortamını içeren Petri kabına yerleştirin. Sonra GA'yı kesin ve Petri kabına yerleştirin. Triseps kasını izole etmek için, triseps ve humerus kemiği arasına ulaşmak için süper ince uçlara sahip düz forseps kullanın ve kası kemikten ayırmak için forsepsleri kasın proksimal ucuna doğru kaydırın.Daha sonra, triseps kasının distal ucunu kesin ve kavisli forseps kullanarak proksimal tendona erişmek için dirseğin üzerine ve üstüne çekin. Trisepsin proksimal tendonunu kesin ve kası bir Petri kabına aktarın. Diğer dört uzuv için prosedürü tekrarlayın.Kürkü ve cildi çeneden çıkarmak için, gözün altında 0,5 santimetrelik bir kesi yapmak için makas kullanın ve kaudal yönde kesin. Daha sonra her iki elin başparmaklarını ve işaret parmaklarını kullanarak, insizyonun her iki tarafına sıkıştırın ve cildi yukarı ve aşağı doğru çekerek çıkarın. Masseterin ana tendonunu gözün altındaki kaudal tarafa yerleştirin ve tendonu kesmek için düz neşter bıçağını kemik ve kas arasına yerleştirin.Büyük masseter tendonunu kavisli forseps ile tutun ve masseter kasını çene kemiğinden ayırmak için rostral yönde bir neşter bıçağı veya makasla kesin. İzole edilmiş masseter kasını Petri kabına yerleştirin ve ikinci masseter kası için prosedürü tekrarlayın. Sternumun ortasında torakotomi yapmak ve sternumu kesmek için makas kullanın.Göğüs kafesinden 360 derece keserek diyaframı açığa çıkarın. Daha sonra üst vücudu karından ayırmak için trakea, yemek borusu, vena kava ve abdominal aortu kesmek için makas kullanın. Daha sonra, makas kullanarak, sternumun bir santimetre altında bir laparotomi hazırlayın ve yaklaşık 360 derecelik bir kesim yapın.Kapalı makası göğüs kafesi ile karın organları arasına yerleştirin ve aşağı doğru bastırın. Karın organlarından ayırmak için göğüs kafesini yavaşça çekin. Diyaframı göğüs kafesinden ayırmak için, diyaframı iki parmağınız arasında gevşek bir şekilde tutun ve göğüs kafesini makasla kesin.Diyaframı kaburgalara mümkün olduğunca yakın 360 derece kesin ve izole diyaframı bir Petri kabına yerleştirin. İzole edilmiş kasları kabaca bir milimetrelik parçalara ayırarak tek tek kıyın. Kıyılmış kasları beş litre ayrışma tamponu içeren 15 litrelik bir konik tüpe aktarın ve tüpü dakikada 60 dönüş hızında sallanan bir su banyosunda 35 dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.Kıyılmış kasların enzimatik sindiriminden sonra, süspansiyonu 15 mililitrelik tüpten 50 mililitrelik bir tüpe aktarın. 20 gauge iğne ile donatılmış 10 mililitrelik bir şırınga kullanarak, numuneyi iğneden beş kez yukarı ve aşağı çekerek tekrar askıya alın. Hücre süspansiyonunu şırıngaya çekin ve numuneyi, üstüne bir hücre süzgeci takılı yeni bir 50 mililitrelik konik tüpe süzün.Tüm mono çekirdekli hücreleri almak için, boş konik tüpü 20 mililitre yıkama ortamı ile yıkayın ve gergin numune ile birleştirmek için süzgeçten dökün. Hücre süzgecinin altında kalan hacmi bir P1000 pipet ile alın. Doku ayrışması ve antikor boyamasını takiben, iskelet kası kök hücreleri veya MuSC'ler ve bireysel kaslardan fibro adipojenik progenitörler veya FAP'lar, floresan aktive hücre sıralama ile saflaştırıldı.Hücreleri tanımlamak ve singlet'ları çiftlerden ayırmak için ilk geçitten sonra, boyama eşiklerini tanımlamak için FMO kontrolleri kullanılarak sonraki kapılar ayarlandı. Leke örneği kapılı olarak FAP'lara karşılık gelen SCA1 pozitif CD31 negatif ve CD45 negatif popülasyon ayrı bir toplama tüpüne ayrıldı. Çift negatif popülasyon, MuSC'lere karşılık gelen VCA pozitif popülasyonunu sıralamak için daha da geçitlendi.Diyafram ve triseps kas tek hücreli süspansiyonları, diğerlerinden farklı olarak, FAP'lardan daha yüksek bir MuSC göreceli bolluğuna sahipti. EDU boyaması, sağlam olmasına rağmen, iki kök hücre tipi için ve farklı kaslar arasında EDU pozitif hücrelerin fraksiyonlarında bir fark olduğunu göstermiştir. Bununla birlikte, tüm dokular için, EDU pozitif MuSC'lerin ortalama fraksiyonu, EDU pozitif FAP'larınkinden daha yüksekti.EDL ve GA'dan izole edilen MuSC'ler, TA, diyafram, gracilis veya trisepslere kıyasla anlamlı derecede daha düşük EDU katılımı göstermiştir. Benzer şekilde, EDU katılımında önemli farklılıklar farklı kaslardan izole edilen FAP'larda da gözlenmiştir. Son olarak, kök hücre izolasyon protokolünün özgüllüğünü gösteren immünofloresan boyama ile hücre saflığı doğrulandı.En kritik adım, dokunun mekanik sindirimidir. Doku çok fazla kesildiğinde, canlılık azalır. Doku çok az kesildiğinde, EEL azalır.Protokol, in vivo kök hücre fonksiyonlarını daha iyi anlamak için transplantasyon sonrası engraftman gibi hücre davranışını ölçen testlerle birleştirilebilir. Bu teknik, bireysel kaslardaki kök hücre davranışındaki farklılıkların, etkilenen kasların benzersiz kalıpları ile karakterize edilen hastalık fenotiplerine ve hastalıklarına katkıda bulunup bulunamayacağını cevaplayabilir.

isolation-quiescent-stem-cell-populations-from-individual-skeletal

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Balona hücre bağlılık hızına göre kas-iskelet yumuşak dokulardan Yalıtımlı yetişkin kök hücreleri.

Yumuşak Kas-iskelet Dokular Kök Hücre Yalıtımlı

Mikro-disseke eksplantlar tekniği, iskelet kas kök hücre kaynağı olarak çocuk, yetişkin ya da embriyonik kasları proliferatif iskelet kas hücreleri izole için sağlam ve güvenilir bir yöntemdir. Benzersiz, bu hücrelerin klonal in vivo nakli için kullanılan iskelet kas kök hücre hatları üretmek için türetilmiştir.

Yetişkin ve Embriyonik İskelet, Kas Microexplant Kültür ve İskelet Kası Kök Hücre İzolasyonu

Myofibers izolasyonu ve kültürü altın...

Yetişkin İskelet Kası gelen bireysel Myofibers ve Uydu Hücre İzolasyonu ve Kültür

Hareketsiz uydu hücrelerin saf nüfusun izolasyonu ve kültürü, kas kök hücre topluluğu, kas kök hücre biyolojisi ve rejenerasyon, hem de kas distrofisi ve diğer dejeneratif hastalıklarda tedavileri için kök hücre nakli anlaşılması için gereklidir.

Kas Uydu Hücreleri İzolasyon, Kültür ve Transplantasyon

Rejeneratif uygulamalar için idealdir insan iskelet kası liman birkaç çok-soy öncü nüfus içindeki kan damarları. Intima gelen Miyojenik endotel hücreleri, medya perisitler ve adventisyanın gelen adventisyal hücreler: Bu izolasyon yöntemi, kan damarlarının üç yapısal katmanları sırasıyla üç multipotent öncü hücre popülasyonlarının eşzamanlı arınma sağlar.

İnsan İskelet Kası Kan-damar-türevli Multipotent Öncüleri İzolasyonu

İnsan kasından türetilen ana yapışık hücre tipleri miyojenik hücreler ve fibroblastlardır. Burada, hücre popülasyonları, CD56 antijenine dayalı olarak manyetik olarak aktive edilen hücre sıralaması kullanılarak zenginleştirilir. Spesifik antikorlarla müteakip immüno-etiketleme ve görüntü analiz tekniklerinin kullanılması, tek tek hücrelerde sitoplazmik ve nükleer özelliklerin miktar tayinine izin verir.

İnsan İskelet Kası İlköğretim andMyogenic Hücreleri ve Fibroblast İzolasyon ve Kantitatif İmmünositokimyasal Karakterizasyonu

İskelet kas biyopsi sözünde nizolating, culturing, karakterizasyonu ve insan primer kas atası hücreleri (hMPCs) ayırt etme teknikleri salıyoruz.  bu yöntemlerle elde edilen ve karakterize edilen hMPC'ler daha sonra insan miyogenezi ve iskelet kası rejenerasyonu ile ilgili araştırma sorularını ele almak için kullanılabilir.

İskelet Kas Biyopsisi Prosedüründen İnsan Kas Atası Hücrelerinin İzolasyon, Kültür, Karakterizasyonu ve Farklılaşması

Burada, homozigot mutant Lamin Δ8-11 fare modeli, Emery-Dreifuss kas distrofisi (EDMD) için çok ciddi bir model erken doğum sonrası gelişim aşamalarında verimli bir şekilde tek kas lifleri elde etmek için bir yöntem öneriyoruz.

Erken Doğum Sonrası Gelişimde Emery-Dreifuss Musküler Distrofi'nin Murine Modelinden Tek Miyofiber İzolasyon ve Kültür

Bu protokolde, kas kök hücreleri için endojen nişleriyle etkileşimlerinin çoğunu koruyan bir in vitro kültleme ve fonksiyonel analiz yöntemi tanımlanmıştır.

Yetişkin Kas Kök Hücre İşlevselliğinin Değerlendirilmesi için Tek Miyofiber Kültür Tahlil Ex Vivo

İskelet kası, her biri kas homeostazına ve rejenerasyonuna özel bir katkısı olan yerleşik kök hücreler de dahil olmak üzere birden fazla hücre tipinden oluşur. Burada, fizyolojik, in vivo ve çevresel özelliklerin çoğunu koruyan ex vivo bir ortamda kas kök hücrelerinin 2 boyutlu kültürü ve kas hücresi nişi açıklanmaktadır.

Niş ve Kök Hücre Sessizliğini Özetlemek için Fare İskelet Kasının Fraksiyone Edilmemiş Toplu Kültürü

Bu protokol, yetişkin ve yenidoğan fare iskelet kaslarından birincil miyoblastların doku ayrışması, ardışık filtrasyon, ön kaplama ve tanımlanmış kültür koşulları yoluyla izole edilmesi ve zenginleştirilmesi için standartlaştırılmış bir yöntem sunar; böylece uydu hücresinden türetilen miyoblast kültürlerinin sonraki deneysel uygulamalar için oluşturulması ve bakımı mümkün olur.

In vitro miyogenez çalışmaları için iskelet kası uydu hücrelerinin izolasyonu

Öğrenin, fare iskelet kaslarından kas kök hücreleri ve fibro-adipojenik progenitörleri izole etme yöntemini. Bu protokol, hücre döngüsü analizi ve rejeneratif tıp araştırmaları için yüksek saflıkta canlı hücre popülasyonları sağlar.

Sessiz Kök Hücre Popülasyonlarının Bireysel İskelet Kaslarından İzolasyonu

Daha fazla video keşfet