Zebra Balığı Tol2 Sistemi: Modüler ve Esnek Ağ Geçidi Tabanlı Transgenez Yaklaşımı

Transgenik zebra balığı, embriyo gelişimini anlamamız için kritik öneme sahip olduğunu kanıtlamıştır. Tol2 sistemi, araştırmacıların FASD çalışmaları için hızlı ve sistematik olarak birden fazla transgenik zebra balığı üretmelerini sağlayan çok yönlü bir araçtır. Modüler tasarım ve yeni kit bileşenleri üretme kolaylığı, Tol2 sistemini, kitin herhangi bir bileşenini yeniden tasarlamak zorunda kalmadan yeni transgenikler üretmek için çok yönlü bir araç haline getirir.

Bu tekniği ilk kez uygulayan araştırmacılara tavsiyem, transgenik yapıların üretilmesi ve enjekte edilmesinin hassasiyeti konusunda eğitim almak için birkaç deneme çalışması yapmalarıdır. Başlamak için, transpozaz içeren Tol2 kiti plazmidini, 10 mikrolitre transpozaz plazmidi, 1.5 mikrolitre kısıtlama endonükleaz reaksiyon tamponu ve 0.3 mikrolitre sıfır bir endonükleazı 500 mikrolitrelik bir mikrosantrifüj tüpünde birleştirerek bir sıfır kısıtlama endonükleazı ile doğrusallaştırın. 20 mikrolitreye kadar reaksiyonu RNAse içermeyen suyla doldurun.