Name: Osteositlerin Analizi ve Görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: Öğrenin, konfokal mikroskopi ve hesaplamalı akışkanlar dinamiği kullanarak osteositlerin üç boyutlu modellerini nasıl oluşturacağınızı. Bu yöntem, kemik sağlığı araştırmalarında mekanosensasyon mekanizmalarını anlamak için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Kemikte Mekanosensasyonu İncelemek için CFD Analizi için Osteositlerin 3D Modellemesi

<ol><li>Li, M. C. M., Chow, S. K. H., Wong, R. M. Y., Qin, L., Cheung, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+osteocytes-specific+molecular+mechanism+in+regulation+of+mechanotransduction+-+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Translat%22%5BJournal%5D)">The role of osteocytes-specific molecular mechanism in regulation of mechanotransduction - A systematic review.</a> J Orthop Translat. 29, 1-9 (2021).</li>
<li>Fritton, S. P., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+and+solute+transport+in+bone%3A+Flow-induced+mechanotransduction%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Fluid+Mech%22%5BJournal%5D)">Fluid and solute transport in bone: Flow-induced mechanotransduction.</a> Annu Rev Fluid Mech. 41, 347-374 (2009).</li>
<li>Klein-Nulend, J., Bacabac, R. G., Bakker, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+loading+and+how+it+affects+bone+cells%3A+the+role+of+the+osteocyte+cytoskeleton+in+maintaining+our+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">Mechanical loading and how it affects bone cells: the role of the osteocyte cytoskeleton in maintaining our skeleton.</a> Eur Cell Mater. 24, 278-291 (2012).</li>
<li>Knothe Tate, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%26%2334%3BWhither+flows+the+fluid+in+bone%3F%26%2334%3B+An+osteocyte%27s+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">&#34;Whither flows the fluid in bone?&#34; An osteocyte's perspective.</a> J Biomech. 36 (10), 1409-1424 (2003).</li>
<li>Tiede-Lewis, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degeneration+of+the+osteocyte+network+in+the+C57BL%2F6+mouse+model+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Degeneration of the osteocyte network in the C57BL/6 mouse model of aging.</a> Aging (Albany NY). 9 (10), 2190-2208 (2017).</li>
<li>Lai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dependences+of+osteocyte+network+on+bone+compartment%2C+age%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Res%22%5BJournal%5D)">The dependences of osteocyte network on bone compartment, age, and disease.</a> Bone Res. 3 (1), 15009(2015).</li>
<li>Schurman, C. A., Verbruggen, S. W., Alliston, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disrupted+osteocyte+connectivity+and+pericellular+fluid+flow+in+bone+with+aging+and+defective+TGF-%CE%B2+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Disrupted osteocyte connectivity and pericellular fluid flow in bone with aging and defective TGF-β signaling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (25), e2023999118(2021).</li>
<li>van Tol, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanoresponse+of+bone+is+closely+related+to+the+osteocyte+lacunocanalicular+network+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The mechanoresponse of bone is closely related to the osteocyte lacunocanalicular network architecture.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (51), 32251-32259 (2020).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+flow+in+the+osteocyte+mechanical+environment%3A+a+fluid-structure+interaction+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomech+Model+Mechanobiol%22%5BJournal%5D)">Fluid flow in the osteocyte mechanical environment: a fluid-structure interaction approach.</a> Biomech Model Mechanobiol. 13 (1), 85-97 (2014).</li>
<li>Ganesh, T., Laughrey, L. E., Niroobakhsh, M., Lara-Castillo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiscale+finite+element+modeling+of+mechanical+strains+and+fluid+flow+in+osteocyte+lacunocanalicular+system%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Multiscale finite element modeling of mechanical strains and fluid flow in osteocyte lacunocanalicular system.</a> Bone. 137, 115328(2020).</li>
<li>Schneider, P., Meier, M., Wepf, R., Müller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+FIB%2FSEM+imaging+for+quantitative+3D+assessment+of+the+osteocyte+lacuno-canalicular+network%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Serial FIB/SEM imaging for quantitative 3D assessment of the osteocyte lacuno-canalicular network.</a> Bone. 49 (2), 304-311 (2011).</li>
<li>Kamioka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+observing+silver-stained+osteocytes+in+situ+in+3-microm+sections+using+ultra-high+voltage+electron+microscopy+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">A method for observing silver-stained osteocytes in situ in 3-microm sections using ultra-high voltage electron microscopy tomography.</a> Microsc Microanal. 15 (5), 377-383 (2009).</li>
<li>Ciani, C., Doty, S. B., Fritton, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+effective+histological+staining+process+to+visualize+bone+interstitial+fluid+space+using+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">An effective histological staining process to visualize bone interstitial fluid space using confocal microscopy.</a> Bone. 44 (5), 1015-1017 (2009).</li>
<li>Sharma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+osteocyte+lacunar-canalicular+microenvironment+due+to+estrogen+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Alterations in the osteocyte lacunar-canalicular microenvironment due to estrogen deficiency.</a> Bone. 51 (3), 488-497 (2012).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+amplification+in+bone+mechanobiology%3A+a+computational+investigation+of+the+in+vivo+mechanics+of+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Strain amplification in bone mechanobiology: a computational investigation of the in vivo mechanics of osteocytes.</a> J R Soc Interface. 9 (75), 2735-2744 (2012).</li>
<li>Goggin, P. M., Zygalakis, K. C., Oreffo, R. O., Schneider, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+3D+imaging+of+osteocytes+and+computational+modelling+in+mechanobiology%3A+insights+on+bone+development%2C+ageing%2C+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">High-resolution 3D imaging of osteocytes and computational modelling in mechanobiology: insights on bone development, ageing, health and disease.</a> Eur Cell Mater. 31, 264-295 (2016).</li>
<li>Kamioka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscale+fluid+flow+analysis+in+a+human+osteocyte+canaliculus+using+a+realistic+high-resolution+image-based+three-dimensional+model%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol%22%5BJournal%5D)">Microscale fluid flow analysis in a human osteocyte canaliculus using a realistic high-resolution image-based three-dimensional model.</a> Integr Biol. 4 (10), 1198-1206 (2012).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+measurement+of+solute+transport+in+the+bone+lacunar-canalicular+system%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In situ measurement of solute transport in the bone lacunar-canalicular system.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (33), 11911-11916 (2005).</li>
<li>Manfredini, P., Cocchetti, G., Maier, G., Redaelli, A., Montevecchi, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poroelastic+finite+element+analysis+of+a+bone+specimen+under+cyclic+loading%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Poroelastic finite element analysis of a bone specimen under cyclic loading.</a> J Biomech. 32 (2), 135-144 (1999).</li>
<li>Steck, R., Niederer, P., Knothe Tate, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+finite+element+analysis+for+the+prediction+of+load-induced+fluid+flow+and+mechanochemical+transduction+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Theor+Biol%22%5BJournal%5D)">A finite element analysis for the prediction of load-induced fluid flow and mechanochemical transduction in bone.</a> J Theor Biol. 220 (2), 249-259 (2003).</li>
<li>You, L., Cowin, S. C., Schaffler, M. B., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+strain+amplification+in+the+actin+cytoskeleton+of+osteocytes+due+to+fluid+drag+on+pericellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">A model for strain amplification in the actin cytoskeleton of osteocytes due to fluid drag on pericellular matrix.</a> J Biomech. 34 (11), 1375-1386 (2001).</li>
<li>Weinbaum, S., Cowin, S. C., Zeng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+excitation+of+osteocytes+by+mechanical+loading-induced+bone+fluid+shear+stresses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">A model for the excitation of osteocytes by mechanical loading-induced bone fluid shear stresses.</a> J Biomech. 27 (3), 339-360 (1994).</li>
<li>Niroobakhsh, M., Laughrey, L. E., Dallas, S. L., Johnson, M. L., Ganesh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+modeling+based+on+confocal+imaging+predicts+changes+in+osteocyte+and+dendrite+shear+stress+due+to+canalicular+loss+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Biomech+Model+Mechanobiol%22%5BJournal%5D)">Computational modeling based on confocal imaging predicts changes in osteocyte and dendrite shear stress due to canalicular loss with aging.</a> Biomech Model Mechanobiol. 23 (1), 129-143 (2024).</li>
<li>Dallas, S. L., Moore, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+confocal+imaging+approaches+to+understand+the+structure+and+function+of+osteocytes+and+the+lacunocanalicular+network%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Using confocal imaging approaches to understand the structure and function of osteocytes and the lacunocanalicular network.</a> Bone. 138, 115463(2020).</li>
<li>Boyde, A., Wolfe, L. A., Maly, M., Jones, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+confocal+microscopy+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Scanning%22%5BJournal%5D)">Vital confocal microscopy in bone.</a> Scanning. 17 (2), 72-85 (1995).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.200 Kumlu zımpara kağıdı</td><td>Buehler</td><td>30-5170-012-100</td><td></td></tr><tr><td>3-Matic yazılımı</td><td>Materialize</td><td>https://www.materialise.com/en/industrial/software/3-matic</td><td>3D veri optimizasyon yazılımı</td></tr><tr><td>600 kumlu zımpara kağıdı</td><td>Buehler</td><td>30-5118-600-100</td><td></td></tr><tr><td>800 Kumlu zımpara kağıdı</td><td>Buehler</td><td>30-5170-800-100</td><td></td></tr><tr><td>ANSYS yazılımı</td><td>ANSYS</td><td>https://www.ansys.com/</td> <td>simülasyon yazılımı</td></tr><tr><td>Floresein İzotiyosiyanat (FITC)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>F7250</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ yazılımı</td><td></td><td>https://imagej.net/ij/</td><td></td></tr> <tr><td>Mikroskoplar için Daldırma Yağı</td><td>Leica Microsystems</td><td>195371-10-9</td><td></td></tr><tr><td>Leica TCS Sp5 II konfokal mikroskop&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>TCS SP5 II&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Leitz 1600 iç delikli elmas testere</td><td>Leica&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MIMICS Innovation Suite yazılımı</td><td></td><td>3D görüntü tabanlı işleme yazılımı</td><td>https://www.materialise.com/en/healthcare/mimics-innovation-suite</td></tr><tr><td>Performize montaj ortamı</td><td>Fisher scientific</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>Sampl-Kwick Fast Cure Akrilik Kit</td><td>Buehler</td><td>20-3560</td><td></td></tr><tr><td>Tek Platformlu Laboratuvar Çalkalayıcı</td><td>Güvenilir bilimsel INC</td><td>55S Modeli</td><td></td></tr></tbody></table>

osteositlerin analizi ve görüntülenmesi

Analysis and Imaging of Osteocytes

Bu protokol, bir osteositin ve dendritik süreçlerinin mekanik yükleme nedeniyle maruz kaldığı sıvı akış kesme gerilimi miktarını araştırmak için konfokal türevli osteosit modellerinin nasıl geliştirileceğini açıklar. Genç ve yaşlı konfokal görüntü tabanlı osteosit modelleri oluşturmak için yaşlı bir fare ve genç bir C57BL6 fare seçildi. Yaşlanma veya kemik hastalığına bağlı LCN morfolojisinin değişimini incelemek için geometri modifikasyon tekniği kullanılarak aynı genç osteosit modelinden altı başka simüle edilmiş osteosit modeli oluşturuldu. Geometrisi değiştirilmiş parametreler lakünar-kanaliküler kalınlığı, kanal yoğunluğu ve çapı içeriyordu. Modifiye osteosit modelleri, her seferinde bir parametrenin değiştirilmesi ve diğer parametrelerin aynı tutulmasıyla geliştirilmiştir. Bu nedenle, morfolojik parametrelerin her birinin FFSS üzerindeki etkisi ayrı ayrı incelenir. Sonuçlar, bir osteosit tarafından deneyimlenen FFSS miktarının bu osteosit modellerinde farklı olduğunu ve FFSS'nin LCN morfolojisine bağımlılığını gösterdiğini ortaya koydu. FFSS değerleri, osteosit hücre gövdesi veya dendritik membranlar gibi osteosit modelinin çeşitli kısımlarında tahmin edildi. Tüm modellerdeki dendritler, osteosit hücre gövdesi zarından daha yüksek FFSS değerlerine sahipti.
Şekil 5, doğrudan konfokal FITC görüntü yığınlarından oluşturulan genç ve yaşlı osteosit modelleri ve geometri modifikasyon tekniği kullanılarak Model 1'den geliştirilen diğer altı osteosit modeli için FFSS konturlarını göstermektedir. Genç osteosit modelinde (Model 1) osteosit ve dendritik membranlar üzerindeki ortalama FFSS 0.42 Pa idi, bu da yaşlı osteosit modelindeki (Model 2) ortalama 0.13 Pa'dan daha anlamlıdır. Elde edilen veriler, daha geniş lakünar-kanaliküler aralığa sahip osteositlerde ortalama FFSS'de bir artış (Model 7 ve Model 8) ve daha düşük kanaliküler yoğunluğa sahip osteositlerde FFSS'de bir azalma (Model 3 ve Model 4) gösterirken, Model 5 ve Model 6'da FFSS'de dendrit çapı değiştikçe anlamlı olarak değişmedi. Model 2 ve Model 4 sırasıyla 0.19 Pa ve 0.13 Pa ile en düşük FFSS değerlerine sahipti. Model 8'deki FFSS'nin büyüklüğü diğer osteosit modellerinden daha büyüktür. Model 8'de dendritlerin çoğu kırmızı renkte olmakla kalmaz, aynı zamanda osteosit hücre gövdesi de diğer modellere göre daha yüksek FFSS'ye maruz kalır.
Osteositler tarafından deneyimlenen FFSS, FFSS ile LCN'nin değişen yapısı arasındaki korelasyonu bulmak için ANSYS CFX'te son işlemle elde edilen lakunar-kanaliküler boşluk hacmi ve yüzey alanına dayalı olarak da sunuldu. FFSS'ye maruz kalan her modelin yüzey alanının, kemik oluşumuna neden olanFFSS seviyesi olduğu düşünülen 0.8 Pa'dan daha büyük olması da mümkün olmuştur 21,22. Osteosit modellemesi, Tablo 1'de gösterildiği gibi, tüm osteosit modelleri için ortalama FFSS ile lakünar-kanaliküler boşluk hacmi veya yüzey alanı arasında bir korelasyon göstermiştir. En düşük kanal yoğunluğuna sahip yaşlı osteosit (Model 2) ve simüle edilmiş orta yaşlı osteosit (Model 4) 1372.7μm2 ve 1122.6μm2 ile en düşük laküner-kanaliküler yüzey alanına sahipti. Model 2 ve Model 4 ayrıca sırasıyla 229.4μm3 ve 203.5μm3 ile en düşük lakünar-kanaliküler boşluk hacmine sahipti ve bu da düşük FFSS miktarları ile ilişkilendirilebilir. En büyük dendrit çapına sahip olan Model 6, en büyük lakünar-kanaliküler yüzey alanına sahipti. Model 8, en büyük lakünar-kanaliküler boşluk hacmine ve en büyük FFSS değerlerine sahipti.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig01.jpg"> 
Şekil 1: 5x, 20x ve 100x yağ objektifleri ile çekilen FITC ile boyanmış bir uyluk kemiğinin enine kesitinin tek Z-düzlemi konfokal görüntüleri. Lacunar-kanaliküler ağ, 100x objektif ile çekilen görüntüde görülebilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig02.jpg"> 
Şekil 2: 4 aylık ve 22 aylık C57BL6 farenin FITC ile boyanmış uyluk kemiğinden oluşturulan genç (Model 1) ve yaşlı (Model 2) osteositin konfokal görüntü tabanlı modelleri. Büyütülmüş görüntü, genç osteosit için lakünar-kanaliküler (LC) kalınlığını ve yaşlı osteosit için aynı kalınlığı gösterir. Model 1 görüntüsü, Niroobakhsh ve ark.23'ün izniyle değiştirilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig03.jpg"> 
Şekil 3: Geometri modifikasyon tekniği kullanılarak Model 1'den geliştirilen altı osteosit modeli. Kanal yoğunluğu, Model 3 (simüle edilmiş orta yaşlı) ve Model 4 (simüle edilmiş yaşlı) oluşturmak için azaltılırken, dendrit çapı ve LC kalınlığı Model 1 ile aynıydı. Model 5 ve Model 6, Model 1 ile aynı kanal yoğunluğu ve LC kalınlığı ile geliştirilirken, dendrit çapları Model 1'den iki ve dört kat daha büyüktü. Model 7 ve Model 8 sırasıyla iki kat ve dört kat daha fazla laküner-kanal kalınlığına sahipken, kanal yoğunluğu ve dendrit çapı Model 1'deki ile aynı kalmıştır. Model 1 görüntüsü, Niroobakhsh ve ark.23'ün izniyle değiştirilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig04.jpg"> 
Şekil 4: 3D görünüm konfokal görüntü tabanlı genç osteosit modeli. Osteosit ve dendritler etrafında sıvı analizi için kullanılan lakunar-kanaliküler boşluğun modellenmesini gösteren konfokal görüntü tabanlı genç osteosit modelinin kesit alanının 3 boyutlu görünümü. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig05.jpg"> 
Şekil 5: Tüm osteosit modelleri için FFSS dağılımı, FFSS büyüklüğünün osteosit morfolojisine bağımlılığını göstermektedir. Kırmızı bölgeler, özellikle osteosit hücre gövdesinden ziyade dendritik membranlarda en yüksek FFSS değerlerini gösterir. Bu görüntü, Niroobakhsh ve ark.23'ün izniyle değiştirilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Model</td>
			<td>Lakünar-kanaliküler yüzey alanı (μm2)</td>
			<td>Lakünar-kanaliküler boşluk hacmi (μm3)</td>
			<td>Cadde FFSS (PA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Konfokal görüntü tabanlı osteosit modelleri</td>
			<td>Model 1</td>
			<td rowspan="2">2652.9</td>
			<td rowspan="2">261</td>
			<td rowspan="2">0.42</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genç (4 aylık)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 2</td>
			<td rowspan="2">1372.7</td>
			<td rowspan="2">229.4</td>
			<td rowspan="2">0.19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yaşlı (22 aylık)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="12">Geometri modifikasyon tekniği kullanılarak oluşturulan simüle edilmiş osteosit modelleri</td>
			<td>Modelleri 3</td>
			<td rowspan="2">1530.4</td>
			<td rowspan="2">242.6</td>
			<td rowspan="2">0.27</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Simüle edilmiş orta yaşlı)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 4</td>
			<td rowspan="2">1122.6</td>
			<td rowspan="2">203.5</td>
			<td rowspan="2">0.13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Simüle edilmiş yaşlı)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 5</td>
			<td rowspan="2">3724.9</td>
			<td rowspan="2">302.9</td>
			<td rowspan="2">0.49</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(2 x dendrit çapı)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 6</td>
			<td rowspan="2">4791</td>
			<td rowspan="2">337</td>
			<td rowspan="2">0.57</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(4 x dendrit çapı)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 7</td>
			<td rowspan="2">3116.3</td>
			<td rowspan="2">440.6</td>
			<td rowspan="2">1.17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(2 x LC kalınlığı)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 8</td>
			<td rowspan="2">3542.2</td>
			<td rowspan="2">658.2</td>
			<td rowspan="2">1.89</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(4 x LC kalınlığı)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 1: Osteosit modellerinin karşılaştırılması. İki konfokal görüntü tabanlı model ve geometri modifikasyon tekniği kullanılarak Model 1'den oluşturulan altı simüle edilmiş model dahil olmak üzere sekiz farklı osteosit modelinde ortalama FFSS, lakünar-kanaliküler boşluk hacmi ve yüzey alanının karşılaştırılması.

Osteositlerin Analizi ve Görüntülenmesi

Osteocytes are the bone cells that are thought to respond to mechanical strains and fluid flow shear stress (FFSS) by activating various biological ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Retinoik asit ile osteoblastların primer fare tedavisi kemik hücresinin morfolojik ve moleküler özellikler taşıyan dallanmış homojen bir hücreler popülasyonu üretir. Yöntem, elde edilmesi ve kültürü birincil kemik hücresinin korumanın zorluğu üstesinden gelir ve transjenik modelleri türetilen hücreler çalışma avantajlı olabilir.

İlköğretim Fare Osteoblastlar gelen osteositlere Kültürler Edinme Retinoik Asit Uygulama

Osteoklastlar vücutta ana kemik-rezorbe hücresi vardır. Çok sayıda osteoklastlar izole etmek için bir yeteneği osteoklast biyoloji anlama konusunda önemli ilerlemelere yol açmıştır. Bu protokol, yetiştirilmesi ve in vitro olarak osteoklast aktivitesi miktarının, izole edilmesi için bir yöntem açıklanmaktadır.

Fare Kemik İliği osteoklast türetilmesi

Floresan aracılı tomografi (FMT) ile mikro bilgisayarlı tomografiyi (μBT) birleştiren hibrit görüntüleme için bir protokol tarif ediyoruz. Füzyon ve rekonstrüksiyondan sonra, floresan dağılımının kantitatif ölçümlerini çıkarmak için etkileşimli organ segmentasyonu gerçekleştiriyoruz.

Hibrid uCT-FMT görüntüleme ve görüntü analizi

Otolog ve allojenik kemik greft implantasyonu önemli kraniofasial kemik kaybını tedavi yaklaşımları kabul teşkil. Oysa neovaskülarizasyon, hücre farklılaşması ve kemik oluşumu arasındaki etkileşime greft bileşiminin etkisi belirsizdir. Biz greft yakınlık anjiyogenez-osteogenesis bağımlılığın aydınlatmak için amaçlandığı multimodal görüntüleme protokol mevcut.

Bilgisayarlı Tomografi ve Osteogenezi-anjiyogenez bağlamalar Optik Görüntüleme Kranial Kemik Otogreftlerin ve allogreft Entegrasyon değerlendirmek için

Uranyum kemik metabolizması etkilediği bilinmektedir. Burada, doğal uranyum pozlama etkisini canlılığı, farklılaşma ve Osteoklastlar, kemik rezorpsiyonu sorumlu hücrelerin fonksiyonlarını araştıran amaçlı bir iletişim kuralı mevcut.

Vitro Osteoclastogenesis üzerinde doğal uranyum etkileri analiz yöntemleri

Biz iki kemiğin insan hücre hatları ile yayımlanan veziküller mineraller durumunu karşılaştırmak için bir iletişim kuralı mevcut: hFOB 1.19 ve SAO'lar-2. Qafqaz profillerini Alizarin Red-boyama, ultraviyole (UV) ışık görselleştirme, transmisyon elektron mikroskobu (TEM) görüntüleme ve enerji dağıtıcı x-ışını microanalysis (EDX) tarafından S (AR-S) analiz edildi.

Mineraller hFOB 1.19 tarafından üretilen ve SAO'lar-2 hücreleri kullanarak transmisyon elektron mikroskobu ile enerji dağıtıcı x-ışını Microanalysis Analizi

İnsan femorasının ön yönünden SRμCT deneyleri için tek tip boyutta kortikal kemik örnekleri temin etmek için jeolojik (koring) örnekleme protokolü yaptık. Bu yöntem minimal yıkıcı, verimlidir, düzensiz örnek şekillerinden görüntüleme yapıtlarını en aza indiren ve mikroarşitektif görselleştirme ve analizi geliştiren silindirik örneklerle sonuçlanır.

Synchrotron Micro-CT için Yüksek Verimli Kortikal Kemik Örneği Alımı ve Analizi için Kesitleme, Coring ve Görüntü İşleme Kılavuzu

Bu protokol, floresan aktive hücre sıralama (FACS) için osteosit hazırlığına ek olarak, yenidoğan dmp1-topaz fare kalvarisinin diseksiyonunu ve yeşil floresan proteinini hücre sindirimi ve fraksiyonasyonu yoluyla eksprese eden osteositlerin izolasyonunu açıklar.

GFP eksprese eden osteositlerin murin kalvarial fraksiyonasyonu yoluyla primer osteositlerin elde edilmesi

Bu makale, fare üçüncü metatarsalının doku düzeyinde mekanik yüklenmesine yanıt olarak gömülü osteositlerin mekanik olarak indüklenen kalsiyum sinyalini in vivo gerçek zamanlı olarak gözlemlemek için intravital bir görüntüleme yaklaşımının gerçekleştirilmesini açıklamaktadır.

Fare Osteositlerinde Yüke Bağlı Kalsiyum Sinyal Dinamiklerini İncelemek için Floresan İntravital Görüntüleme Yaklaşımı

Bu protokol, Hematoksilen-Eozin (HE) boyama ve mikro-bilgisayarlı tomografi (Mikro-BT) tekniklerini birleştirerek osteoporozun fare modelinde kemik mikromimarisinin kantitatif değerlendirilmesi için ekonomik ve etkili bir yöntem sunar.

Osteoporoz Fare Modelinde Trabeküler Kemik Mikromimarisinin Değerlendirilmesi

Kemik yenilenmesini çeşitli hiyerarşik seviyelerde değerlendirmek için bir protokol öneriyoruz. Bu çok modlu yaklaşım, farklı uzunluk ölçeklerinde yapısal analizlere olanak tanır ve örnek hazırlığındaki zorlukları etkili bir şekilde ele alır. Ayrıca, biyomalzemelerin kemik yenilenmesini teşvik etmedeki etkinliğini değerlendirmek için güvenilir bir iş akışı sağlar.

Kemik Yenilenmesi ve İskelet Performansını Değerlendirmek İçin Multimodal Yaklaşım

Öğrenin, konfokal mikroskopi ve hesaplamalı akışkanlar dinamiği kullanarak osteositlerin üç boyutlu modellerini nasıl oluşturacağınızı. Bu yöntem, kemik sağlığı araştırmalarında mekanosensasyon mekanizmalarını anlamak için değerlidir.

Osteositlerin Analizi ve Görüntülenmesi

Daha fazla video keşfet