Name: Farelerde Otoimmün Diyabetin Evlat Edinilen Transfer Modelinde Greft Sağkalımının Biyolüminesan İzlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Öğrenin, farelerde otoimmün diyabetin evlat edinilen transfer modelinde NIT-1 hücrelerinin biyolüminesan görüntülenmesiyle greft sağkalımını izleme yöntemini. Bu teknik, beta hücre replasmanı için terapötik hedeflerin belirlenmesine katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu protokolde açıklanan yöntemi geliştirdikleri için Dr. Erica P. Cai ve Dr. Yuki Ishikawa'ya teşekkür ederiz (bkz. ref. 11). SK ve P.Y.'nin laboratuvarlarındaki araştırmalar, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) (R01DK120445, P30DK036836), JDRF, Harvard Kök Hücre Enstitüsü ve Beatson Vakfı'ndan gelen hibelerle desteklenmektedir. TS, Ulusal Diyabet ve Sindirim ve Böbrek Hastalıkları Enstitüsü'nden (NIDDK) (T32 DK007260-45) doktora sonrası bir burs ile desteklendi ve KB, kısmen Mary K. Iacocca Vakfı'ndan bir burs ile desteklendi.

<ol><li>Katsarou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes mellitus.</a> Nature Reviews Disease Primers. 3, 17016(2017).</li>
<li>Shapiro, A. M., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature Reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Pagliuca, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+human+pancreatic+beta+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of functional human pancreatic beta cells in vitro.</a> Cell. 159 (2), 428-439 (2014).</li>
<li>Russ, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+induction+of+human+pancreatic+progenitors+produces+functional+beta-like+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Controlled induction of human pancreatic progenitors produces functional beta-like cells in vitro.</a> EMBO Journal. 34 (13), 1759-1772 (2015).</li>
<li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+diabetes+with+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 32 (11), 1121-1133 (2014).</li>
<li>Vertex Announces Positive Day 90 Data for the First Patient in the Phase 1_2 Clinical Trial Dosed With VX-880, a Novel Investigational Stem Cell-Derived Therapy for the Treatment of Type 1 Diabetes. Businesswire. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.businesswire.com/news/home/20211018005226/en/Vertex-Announces-Positive-Day-90-Data-for-the-First-Patient-in-the-Phase-12-Clinical-Trial-Dosed-With-VX-880-a-Novel-Investigational-Stem-Cell-Derived-Therapy-for-the-Treatment-of-Type-1-Diabetes">https://www.businesswire.com/news/home/20211018005226/en/Vertex-Announces-Positive-Day-90-Data-for-the-First-Patient-in-the-Phase-12-Clinical-Trial-Dosed-With-VX-880-a-Novel-Investigational-Stem-Cell-Derived-Therapy-for-the-Treatment-of-Type-1-Diabetes</a> (2021).</li>
<li>Gamble, A., Pepper, A. R., Bruni, A., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+journey+of+islet+cell+transplantation+and+future+development%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">The journey of islet cell transplantation and future development.</a> Islets. 10 (2), 80-94 (2018).</li>
<li>Pearson, J. A., Wong, F. S., Wen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+Non+Obese+Diabetic+%28NOD%29+mouse+model+in+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">The importance of the Non Obese Diabetic (NOD) mouse model in autoimmune diabetes.</a> Journal of Autoimmunity. 66, 76-88 (2016).</li>
<li>Hamaguchi, K., Gaskins, R. H., Leiter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIT-1%2C+a+pancreatic+%CE%B2-cell+line+established+from+a+transgenic+NOD%2FLt+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">NIT-1, a pancreatic β-cell line established from a transgenic NOD/Lt mouse.</a> Diabetes. 40 (7), 842-849 (1991).</li>
<li>Christianson, S. W., Shultz, L. D., Leiter, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+transfer+of+diabetes+into+immunodeficient+NOD-scid%2Fscid+mice%3A+Relative+contribution+of+CD4%2B+and+CD8%2B+T-cells+from+diabetogenic+versus+prediabetic+NOD.NON-Thy1a+donors%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Adoptive transfer of diabetes into immunodeficient NOD-scid/scid mice: Relative contribution of CD4+ and CD8+ T-cells from diabetogenic versus prediabetic NOD.NON-Thy1a donors.</a> Diabetes. 42 (1), 44-55 (1993).</li>
<li>Cai, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+in+vivo+CRISPR+screen+identifies+RNLS+as+a+target+for+beta+cell+protection+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Genome-scale in vivo CRISPR screen identifies RNLS as a target for beta cell protection in type 1 diabetes.</a> Nature Metabolism. 2 (9), 934-945 (2020).</li>
<li>Parent, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+deletion+of+human+leukocyte+antigens+protects+stem+cell-derived+islets+from+immune+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Selective deletion of human leukocyte antigens protects stem cell-derived islets from immune rejection.</a> Cell Reports. 36 (7), 109538(2021).</li>
<li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+acute+xenogeneic+graft-versus-host+disease%2C+but+retention+of+T-cell+function+following+engraftment+of+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+in+NSG+mice+deficient+in+MHC+class+I+and+II+expression%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Lack of acute xenogeneic graft-versus-host disease, but retention of T-cell function following engraftment of human peripheral blood mononuclear cells in NSG mice deficient in MHC class I and II expression.</a> FASEB Journal. 33 (3), 3137-3151 (2019).</li>
<li>Abdulreda, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+type+1+diabetes+immunopathology+using+eye-transplanted+islets+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of type 1 diabetes immunopathology using eye-transplanted islets in NOD mice.</a> Diabetologia. 62 (7), 1237-1250 (2019).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

T1D, şu anda tedavisi bulunmayan yıkıcı bir hastalıktır. Beta hücre replasman tedavisi, bu hastalığı olan hastalar için umut verici bir tedavi sunar, ancak bu stratejinin önündeki kritik engel, nakledilen beta hücrelerine karşı tekrarlayan otoimmün saldırı potansiyelidir. SC-beta hücrelerinin bağışıklık görünürlüklerini veya duyarlılıklarını azaltmak için genetik mühendisliği bu soruna potansiyel bir çözümdür. Burada tarif edilen, farelerde otoimmün diyabetin evlat edinilmiş bir transfer modelinde hayatta kalmalarını ölç...

Tip 1 diyabet (T1D), pankreasın insülin üreten beta hücrelerinin otoimmün yıkımından kaynaklanır. Beta hücre kütlesinin kaybı insülin eksikliği ve hiperglisemi ile sonuçlanır. T1D hastaları günlük birden fazla eksojen insülin enjeksiyonuna güvenir ve yaşamları boyunca ciddi hiperglisemi ve hipoglisemi atakları yaşarlar. Bu ataklara bağlı komplikasyonlar diyabetik retinopati, azalmış böbrek fonksiyonu ve nöropati1'dir.
İnsülin enjeksiyonları bir tedavidir, ancak T1D için bir tedavi değildir. Bununla birlikte, kaybedilen beta hücre kütlesinin değiştirilmesi, hastaların kendi insülinlerini üretmelerini sağlayarak hastalığı tersine çevirme potansiyeline sahiptir. Ancak kadavra donör adacıklarının arzı sınırlı2. Kök hücre kaynaklı adacıklar (SC-adacıkları), nakil için neredeyse sınırsız bir beta hücresi kaynağı sağlayabilir. Birkaç grup, insan embriyonik kök hücrelerinin (ESC'ler) ve indüklenmiş pluripotent kök hücrelerin (iPSC'ler) fonksiyonel beta benzeri hücreler üretmek için farklılaştırılabileceğini göstermiştir 3,4,5. Umut verici erken klinik çalışma verileri, bu hücrelerin nakil sonrası işlevlerini sürdürdüklerini ve hastaların insülinden bağımsız olmalarını sağlayabileceğini göstermektedir6. Bununla birlikte, kronik immünsüpresyon gereklidir, böylece kanser ve enfeksiyona duyarlılıkları artar. Ek olarak, immünsüpresif ajanlar uzun dönemde greftler için sitotoksik olabilir7. İmmünsüpresyon ihtiyacını ortadan kaldırmak için, SC-adacıkları, tekrarlayan otoimmüniteden ve nakil sonrası alloimmüniteden korumak için genetik olarak değiştirilebilir.
Kök hücre araştırması maliyet ve işçilik açısından oldukça talepkardır. Fare hücre çizgileri ve hayvan modelleri, nakledilen hücreleri otoimmüniteden korumak için stratejilerin ilk tanımlanması ve deneysel olarak doğrulanması için yararlı araçlardır. NOD faresi, insan T1D8 ile birçok benzerliğe sahip spontan otoimmün diyabet geliştirir ve NIT-1 insülinoma hücre hattı, bu fare suşu9 ile genetik bir arka planı paylaşır. Diyabet, replika deney farelerinde diyabetin başlangıcını geçici olarak senkronize etmek için NOD farelerinden diyabetik splenositlerin enjeksiyonu yoluyla ilgili immün yetmezlikli NOD-scid fare suşuna evlat edinilebilir10. Bu model, SC-adacıklarında daha fazla doğrulama için genetik hedefleri nispeten hızlı ve ucuz bir şekilde tanımlamak için kullanılabilir. Son zamanlarda, yöntem, birincil insan adacıklarını in vivo otoimmüniteden ve iPSC türevli adacıkları in vitro11 beta hücre stresinden koruduğu tespit edilen bir hedef olan RNLS'yi tanımlamak ve doğrulamak için uygulanmıştır. Burada tarif edilen, genetiği değiştirilmiş NIT-1 hücrelerini nakletmek ve farelerde otoimmün diyabetin evlat edinilmiş bir transfer modelinde hayatta kalmalarını invaziv olmayan bir şekilde izlemek için basit bir protokoldür.

<table><tbody><tr><td>% 0.05 Tripsin, 0.53 mM EDTA</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td> SV40 büyük T antijeni ACK Lysing Buffer Gibco A10492-01 <td>ile dönüştürülmüş insan embriyonal böbrek hücrelerinden türetilen hızlı büyüyen, yüksek oranda transfekte edilebilir klonal izolat</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> Alkol hazırlama pedleri, %70 İzopropil alkol Amazon/Ever Ready İlk Yardım B08NWF31DX <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD 5ml Şırınga Luer-Lok Ucu</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide İğne 26G x 5/8 (0,45 mm x 16 mm) Sub-Q</td><td>BD</td><td>305115</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 mL TB Şırınga Kayma Ucu</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Blasticidin S HCl</td><td>Corning</td><td>&nbsp; 30-100-RB</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci premium SureStrain, 70 & m, steril</td><td>Güney Laboratuvar Gereçleri</td><td>C4070</td><td>Veya 40-70um gözenek boyutuna sahip benzer steril süzgeç kullanın</td></tr><tr><td>CellDrop otomatik hücre sayacı</td><td>Denovix</td><td>CellDrop BF-PAYG</td><td>Veya benzer hücre sayaç cihazı kullanın</td></tr><tr><td>Corning 100 mL Penisilin-Streptomisin Çözeltisi, 100x</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Aspirasyon Pipetleri, Polistiren, Steril, Kapasite=2 mL</td><td>VWR</td><td>414004-265</td><td>Veya benzer aspirasyon pipeti</td></tr><tr><td>D-Luciferin, Potasyum Tuzu, Moleküler Biyoloji Sınıfı, Toz,% >99</td> <td>Goldbio</td><td>LUCK-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, yüksek glikoz, piruvat, glutamin yok</td><td>Gibco</td><td>10313039</td><td></td></tr><tr><td>Falcon BD tüpleri, 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr> <tr><td>kullanınDokular için forseps premium, 1 x 2 diş 5 inç, Alman</td><td>Çelik Fisher Scientific</td><td>13-820-074</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz idrar test şeridi</td><td>California Pet Pharmacy</td><td>u-tsg100</td><td>Veya idrar / kandaki glikoz ölçümleri için benzer test şeridi kullanın</td></tr><tr><td>GlutaMAX & ndash; 1 (100x)</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Kızılötesi ısıtma lambası</td><td>Cole Parmer</td><td>03057-00</td><td>Veya benzer kızılötesi lamba kullanın&nbsp;</td></tr><tr><td>İnsülin şırıngası 0.5 mL, U-100 29 G 0.5</td><td>Becton Dickinson</td><td>309306</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Piramal Critical Care</td><td>6679401725</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum in vivo görüntüleme sistemi</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td>Nakledilen hücrelerin non-invaziv biyolüminesan görüntülerini toplamak için alet</td></tr><tr><td>Canlı Görüntü Analiz Yazılımı</td><td>Perkin Elmer</td><td>128113</td><td>Biyolüminesan sinyalin toplanması ve miktarının belirlenmesi için yazılım</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri mühür ritesi, 1.5 mL</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5510</td><td>Veya benzer steril mikrosantrifüj tüpleri kullanın</td></tr><tr><td>NIT-1</td><td>ATCC</td><td>CRL-2055</td><td>NOD / Lt farelerden türetilen pankreatik beta-celll hattı</td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid/J</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>001303</td><td>Fareler, şiddetli kombine immün yetmezlik spontan mutasyonu için homozigot&nbsp; Prkdcscid, yaygın olarak &nbsp; scid, fonksiyonel T hücreleri ve B hücrelerinin yokluğu, lenfopeni, hipogamaglobulinemi ve normal bir hematopoietik mikroçevre ile karakterizedir.</td></tr><tr><td>NOD/ShiLtJ</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>001976</td><td>Farelerin NOD/ShiLtJ suşu (yaygın olarak NOD olarak adlandırılır), otoimmün tip 1 diyabet</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td> için poligenik bir modeldir <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010031</td><td>Kalsiyum yok, magnezyum yok, fenol kırmızısı</td></tr><tr><td>pCMV-VSV-G</td><td>Addgene</td><td>8454</td><td></td></tr><tr><td>pLenti-lusiferaz-blast</td><td>Kurum içi</td><td>Plazmid istek</td> <td>üzerine kullanıma sunulmuşturEk Dosya 1'e bakın</td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>pMDLg/pRRE</td><td>Addgene</td><td>12251</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenim, Doğrusal, MW 25.000, Transfeksiyon Sınıfı (PEI 25K)</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1014320</td><td></td></tr><tr><td>pRSV-Rev</td><td>Addgene</td><td>12253</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgenler için kısıtlayıcı, Fisher</td><td>Scientific</td><td>01-288-32A'da süpürge tarzı tur 1</td><td></td></tr><tr><td>Makas, sivri uçlu</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td>Veya cerrahi sınıf paslanmaz çelikten yapılmış başka bir makas kullanın</td></tr><tr><td>Doku kültürü ile muamele edilmiş kültür kapları</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS430167-20EA</td><td>Veya diğer steril hücre kültürü ile muamele edilmiş Petri kaplarını kullanın</td></tr><tr><td>Cımbız/Forseps, ince hassasiyetli orta uçlu</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-157</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde otoimmün diyabetin evlat edinilen transfer modelinde greft sağkalımının biyolüminesan İzlenmesi

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

Tip 1 diyabet, pankreasın insülin üreten beta hücrelerinin otoimmün yıkımı ile karakterizedir. Bu hastalık için umut verici bir tedavi, kök hücre kaynaklı beta hücrelerinin transplantasyonudur. Bununla birlikte, nakledilen hücreleri kalıcı otoimmüniteden korumak için genetik modifikasyonlar gerekli olabilir. Diyabetik fare modelleri, nakledilen hücreleri otoimmün saldırılardan korumak için stratejilerin ön değerlendirmesi için yararlı bir araçtır. Burada tarif edilen, farelerde diyabetin evlat edinilmiş bir transfer modelinde hücre greftlerinin nakli ve görüntülenmesi için minimal invaziv bir yöntemdir. Bu protokolde, ateşböceği lusiferaz transgen luc2'yi eksprese eden murin pankreatik beta hücre hattı NIT-1'den hücreler, immün yetmezlikli obez olmayan diyabetik (NOD)-şiddetli kombine immün yetmezlikli (scid) farelere deri altından nakledilir. Bu fareler, otoimmüniteyi aktarmak için spontan diyabetik NOD farelerinden splenositlerle eşzamanlı olarak intravenöz olarak enjekte edilir. Greftler, hücre sağkalımını izlemek için non-invaziv biyolüminesan görüntüleme yoluyla düzenli aralıklarla görüntülenir. Mutant hücrelerin hayatta kalması, aynı fareye nakledilen kontrol hücrelerininkiyle karşılaştırılır.

Protokole genel bir bakış Şekil 1'de özetlenmiştir. Bir mutant ve hedeflenmeyen bir kontrol gibi iki hücre hattının hayatta kalması karşılaştırılabilir veya bir hücre hattının hayatta kalması, ilaçla tedavi edilen farelere karşı araçla tedavi edilen kontroller gibi birden fazla fare grubunda ölçülebilir. Şekil 3A , hedeflenmeyen bir kontrol (solda) ve bir mutant (sağ) hücre hattı ile nakledilen üç adet 8 haftalık dişi NOD scid faresini göstermektedir. Farelere a...

Bu protokol, spontan diyabetik NOD farelerinden saflaştırılmış splenositlerle mücadele eden obez olmayan diyabetik (NOD)-şiddetli kombine immün yetmezlikli farelerde NIT-1 hücrelerinin nakli ve görüntülenmesi için basit ve minimal invaziv bir yöntemi tanımlamaktadır.

Farelerde Otoimmün Diyabetin Evlat Edinilen Transfer Modelinde Greft Sağkalımının Biyolüminesan İzlenmesi

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Bu protokol, otoimmün ataklara karşı korunma mekanizmalarını anlamaya ve tip bir diyabette beta hücre replasmanı için terapötik hedefleri belirlemeye yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, nispeten düşük maliyet, hücre kültürü, nakil ve görüntüleme yöntemlerinin basitliği ve fare tekniklerinin minimal invazivliğidir. Daha önce hiç kuyruk damarı enjeksiyonu yapmamış kişiler, iğneyi damar içine sokmak için mücadele edebilir.İlk enjeksiyonunuzdan önce bir uzman tarafından bir gösteri isteyin. Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi alın ve cildin yaklaşık bir inç x iki inçini açığa çıkaran bir koruyucu ile elektrikli tıraş makinesi kullanarak saçları sırt tarafından çıkarın. Tıraş olmuş fareyi yıkma odasına geri getirin.Nakilden önce, her seferinde bir fareyi odadan izofluran burun konisi ile donatılmış temiz bir yüzeye aktarın ve farenin başını nazikçe burun konisine yönlendirin. Gevşek tüyleri gidermek ve cildi dezenfekte etmek için tıraş edilen bölgeyi izopropil alkol hazırlama pedi ile silin. Daha sonra, 26 gauge iğne ile donatılmış bir mililitre steril şırıngaya 300 mikrolitreden fazla hücre süspansiyonu çekin.Şırıngadaki kabarcıkları çıkarın ve fazlalığı dışarı iterken

bioluminescent-monitoring-graft-survival-an-adoptive-transfer-model

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Lusiferaz etiketli insan malign periferik sinir kılıfı tümör hücreleri, bağışık yetmezliği olan farelere siyatik sinir grefti için güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Biyoparlaklık görüntüleme, çalışma grupları içine hayvanların rastgele ayrımı için tümör greft ve kriterlere uygun kurulmasını göstermek için kullanımı da tartışılmıştır.

İnsan Takip edilen-Lusiferaz Malign Periferik Sinir Kılıf Tümör Hücreleri Ortotopik Xenografting In vivo</emAday Terapötik Ajanlar> Test

Engineered Kalp Doku İmplantasyonu takiben İmmün Yanıtların Değerlendirilmesi (EHT) Biyoparlaklık Görüntüleme

Mürin kemik iliği nakli insanlarda graft-versus-host hastalığı yöneten immünolojik mekanizmalarla çalışmak için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. T hücre trafiğini modellerini izlemek için...

Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em&gt; In Vivo</emBir MHC-eşlemeli murin Model Kullanma&gt; T Hücre İzleme

Bu video, lokalize hücre iletimi için Matrigel ve tümör ilerlemesinin non-invaziv izlenmesi için in vivo biyolüminesans görüntüleme kullanan ortotopik bir pankreas kanseri modelini göstermektedir. Ortotopik model hem sinjeneik hem de ksenogreft modelleri için uygundur ve yeni anti-kanser terapötiklerinin primer pankreas tümörü ve metastazı üzerindeki etkisini araştırmak için klinik öncesi çalışmalarda kullanılabilir.

Biyolüminesan Ortotopik Pankreas Kanseri Fare Modeli: Farelerde Kanser İlerlemesini İzlemek İçin İnvaziv Olmayan Bir Teknik

Bu videoda, obez olmayan diyabetik immün yetmezliği olan bir fareye nakledilen lusiferaz eksprese eden beta hücrelerini görselleştirmek için görüntüleme tabanlı bir yöntem gösterilmektedir. Diyabetik bir fareden splenositlerin eklenmesi, substrat girişinden sonra azalan lüminesans ile görsel olarak doğrulanan ilerleyici beta hücre yıkımına yol açar.

Diyabetik Splenositlerle Mücadele Edilen İmmün Yetmezliği Olan Bir Farede Transgenik Beta Hücrelerinin Görüntülenmesi

Kaynak: Clark, A.J., et al. Glioblastoma için İmmün Yetmezliği Olan Bir Hayvan Modelinin Biyolüminesans Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, tümör büyümesini non-invaziv olarak ölçmek için lusiferaz eksprese eden tümör hücreleri ve lusiferin kullanarak, immün yetmezliği olan bir fare modelinde glioblastoma ilerlemesini izlemek için biyolüminesans görüntülemeyi göstermektedir.

Glioblastoma için İmmünkompetan Bir Fare Modelinin Biyolüminesans Görüntülemesi

Pankreas kanseri biyoloji Geliştirilmiş anlayış eleştirel pankreas kanseri tedavisi için daha iyi tedavi seçeneklerinin gelişimi için gereklidir. Bu ihtiyacı karşılamak için, bizim kullandığımız kanser ilerlemesi non-invazif izleme izin pankreas kanseri ortotopik modeli...

Pankreas Kanseri İlerleme Bioluminescent Ortotopik Model

GL261 glioma hücreleri, glioblastomun yararlı bir immünokompetan hayvan modelini sağlar. Bu protokolün amaçları, in vivo biyolüminesans görüntüleme kullanarak intrakraniyal tümör büyümesini izlemek için uygun teknikleri göstermek ve glioblastom tedavisi için tümör immünolojisi ve immünoterapötik yaklaşımları incelemek için lusiferaz ile modifiye edilmiş GL261 hücrelerinin faydasını doğrulamaktır.

Glioblastoma&#39;nın için bir Immünkompetan Hayvan Modeli Biyoparlaklık Görüntüleme

Burada kollarındaki kullandığımız, x-ışını nasıl inhibe mTOR etkinlik çalışmaya ve pozitron emisyon tomografi/bilgisayarlı tomografi Imaging etkileri myeloma kemik iliği engrafted tümörler bir xenograft modeli. Bu myeloma kemik iliği engrafted tümör vivo içindehedefleme terapiler Anti-miyelom etkisini fizyolojik ilgili, non-invaziv ve multimodal analizleri için sağlar.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Greft-versus-host hastalığı allojenik kemik iliği transplantasyonu sonrası önemli bir komplikasyondur. Dendritik hücreler greft-versus-host hastalığının patogenezinde kritik bir rol oynarlar. Bu makalede, dendritik hücrelerin greft-versus-host hastalığı nın gelişimindeki rolünü ve greft-versus-lösemi etkisinin araştırılması için yeni bir kemik iliği transplantasyon platformu açıklanmaktadır.

Kemik İliği Transplantasyon Platformu Greft-versus-Host Hastalığında Dendritik Hücrelerin Rolünü Araştırmak Için

Bu protokolün amacı sürekli insan pankreas adacık engraftment sürecinin dinamikleri ve donör hücrelere karşı katkıda konak izlemektir. Bu bir NOD gözün ön odasına (ACE) insan adacıkları nakli ile gerçekleştirilir. (Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-fare alıcısı ve ardından tekrarlanan 2-foton görüntüleme.

Anterior Göz Odasında İnsan Pankreas Adacık Greftleme ve Katkıda Bulunan Konak Hücrelerinin Vivo Görüntüleme ve Nicelleştirmesinde Boylamsal

Öğrenin, farelerde otoimmün diyabetin evlat edinilen transfer modelinde NIT-1 hücrelerinin biyolüminesan görüntülenmesiyle greft sağkalımını izleme yöntemini. Bu teknik, beta hücre replasmanı için terapötik hedeflerin belirlenmesine katkı sağlar.

Farelerde Otoimmün Diyabetin Evlat Edinilen Transfer Modelinde Greft Sağkalımının Biyolüminesan İzlenmesi

Daha fazla video keşfet