Name: Bir sıçan modelinde ligatür ve lipopolisakkarit enjeksiyonunun bir kombinasyonu ile periodontitisin indüksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-17T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Öğrenin sıçan modelinde ligatür ve lipopolisakkarit enjeksiyonu ile periodontitis indüksiyonunu. Bu yöntem, hastalık ilerlemesini incelemek ve tedavi stratejilerini değerlendirmek için etkili bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Fundació Universitat-Empresa de les Illes Balears (Kavram kanıtı çağrısı 2020), ESF Avrupa Sosyal Fonu ve ERDF Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu (M.M.B. sözleşmesi; FI18/00104) ve Direcció General d'Investigació, Conselleria d'Investigació, Govern Balear tarafından (M.M.F.C. sözleşmesi; FPI/040/2020). Yazarlar, deneysel cerrahi ve IdISBa platformundaki yardımları için Dr. Anna Tomás ve Maria Tortosa'ya teşekkür eder. Son olarak, CBCT tarayıcısına erişim için ADEMA Diş Hekimliği Fakültesi'ne teşekkürler.

NOT: Çalışmanın deneysel protokolü Balear Adaları Sağlık Araştırma Enstitüsü Hayvan Deneyleri Etik Kurulu (CEEA-UIB; referans numarası 163/03/21) tarafından onaylanmıştır.
1. Hayvan anestezisi ve prosedür hazırlama
<ol><li>Ameliyattan önce tüm cerrahi aletleri (alüminyum ağız tıkaçları, diş kaşifi, elmas mızrak, cerrahi makas, mikrocerrahi pense, mikro iğne tutucu, hollenback oymacı, periosteal mikrocerrahi asansör ve mikrocerrahi makas) sterilize edin (135 ° C'de 5 dakika).</li>
	<li>Açıklandığı gibi steril koşullarda prosedür için gerekli tüm çözeltileri hazırlayın:<ol><li>1.6 mL Ketamin'i Fosfat Tampon Çözeltisi (PBS) / salin içinde seyreltilmiş 1 mL Ksilazin ile karıştırarak Ketamin (60 mg / mL) ve Ksilazin (8 mg / mL) karışımı hazırlayın. Stoğu 4 °C'de saklayın.</li>
		<li>Atipamezol'ü PBS / salin içinde 0.25 mg / mL'lik bir nihai konsantrasyona seyreltin. Stoğu 4 °C'de saklayın.</li>
		<li>Buprenorfin'i PBS / salin içinde 0.03 mg / mL'lik nihai bir konsantrasyona seyreltin. Stoğu 4 °C'de saklayın.</li>
		<li>Steril salin içinde 1 mL Pg-LPS (1 mg/mL) hazırlayın. Stoğu -20 °C'de saklayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Deney için, 12 haftalık ve ameliyat sırasında 210-350 g ağırlığında dişi ve erkek Wistar sıçanları kullanın. Hayvanları uygun ortam ve sabit koşullar altında (20-24 ° C, günde 12 saat aydınlık-karanlık döngüleri), yiyecek ve standart su ile ad libitum sunulan gruplar halinde barındırın.</li>
	<li>Anesteziyi indüklemek için, sıçanı tartın ve 25 G steril hipodermik iğne ve 1 mL şırınga kullanarak intraperitoneal olarak 80/10 mg / kg (IP) konsantrasyonda Ketamin / Ksilazin karışımını uygulayın.</li>
	<li>Sıçan uyuşturulduktan sonra, hayvanı ısıtılmış bir cerrahi platforma sırt üstü yerleştirin; İşlem sırasında, ısı kaybını önlemek için hayvanın vücudunu örtün. NOT: Anestezi derinliği, işlem sırasında pedal refleksinin kaybı ve vital bulguların izlenmesi ile değerlendirilir. Gerekirse,% 100 oksijende% 2 İzofluran ile anesteziyi sürdürmek için küçük bir burun konisi kullanın. Korneaları korumak ve kurumayı önlemek için anestezi indüksiyonundan sonra her iki göze steril oftalmik merhem uygulayın.</li>
	<li>İşlemler sırasında, küçük bir burun konisi kullanarak% 100 oksijen uygulayın ve nabız oksimetresi ile nabız hızını ve oksijen doygunluğunu izleyin. NOT: Oksijen doygunluğu ve nabız hızı sırasıyla% 95 ve 190 bpm'nin altına düşerse, prosedürü durdurun ve normal değerlere ulaşana kadar hayvanı lateral dekübit pozisyonuna getirin.</li>
	<li>Kesici dişlerin etrafında (üst ve alt) alüminyum bir ağız tıkaç kullanarak sıçan ağzını açın, dili onunla geri çekin ve maksilla ve mandibulayı açık, rahat bir çalışma pozisyonunda stabilize ederek mandibular azı dişlerine erişim sağlayın. NOT: Hayvanın lateral dekübitusa yerleştirilmesi gerekiyorsa, iyileşmeyi desteklemek için konumunu değiştirmeden önce ağız tıkaçlarını çıkarın. Hayvan uyuşturulduktan sonra, ameliyattan önce dişeti oluk sıvısı (GCF) toplayın (bazal koşullarda örnek) (gün 0).</li>
	<li>GCF'yi aşağıdaki adımlarda açıklandığı şekilde toplayın:<ol><li>Hayvanı cerrahi bir platforma sırt üstü yerleştirin ve maksilla ve mandibulayı alüminyum ağız tıkaçlarıyla açık bir konumda stabilize edin.</li>
		<li>GCF'yi, M1'in mesio-palatalının etrafındaki dişeti yarığına (dişeti epiteli ile bitişik emaye arasındaki boşluk) hafif bir direnç gösterene kadar yerleştirerek toplam 30 (0,03 cm çap x 3 cm uzunluk) numaralı toplam dört (her M1 için iki) emici kağıt noktası kullanarak toplayın. Hemen çıkarmadan önce kağıt noktasını toplam 30 saniye boyunca aynı konumda tutun.</li>
		<li>Toplandıktan sonra, kağıt noktasını hemen plastik bir şişeye aktarın ve tahlil performansına kadar -80 ° C'de saklayın.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Geciktirici ligatür tekniği ve intragingival Pg -LPS enjeksiyonu
NOT: Ligatür modeli, mikrocerrahi aletler kullanılarak dişeti sulkus içine çift taraflı olarak M1 etrafına steril örgülü ipek bir ligatür (5/0) yerleştirilerek ve damak yüzeyinde cerrahın düğümleri ile sabitlenerek oluşturuldu (gün 0). Kullanılan mikrocerrahi aletler mikrocerrahi pense, mikro iğne tutucu, hollenback oymacı, periosteal mikrocerrahi asansör ve mikrocerrahi makastı. LED ışık kaynağına sahip cerrahi büyüteçler de kullanıldı (3.6x büyütme).
<ol><li>Dikişin distal kuyruğunu dişlenmenin damak tarafına yerleştirin ve proksimal segmenti M1 ve ikinci maksiller azı dişlerinin (M2) teması arasına yerleştirin.</li>
	<li>Sütürü sulkus içine yerleştirmek için periosteal mikrocerrahi asansörü kullanın. Ligatürü M1'in bukkal yüzeyinin etrafına çok dikkatli bir şekilde sarın, çünkü bu seviyedeki dokular dar bir bağlı dişeti bölgesi sunar. Damak yönünde, dişeti sulkusuna sürüldüğünden emin olmak için dikişin her iki ucunda sıkıldığından emin olun. NOT: M1 ve M2 arasına dikiş yerleştirilirken direnç gözlenirse, temas bir diş kaşifi ve elmas mızrak şeklindeki bur kullanılarak hafifçe açılabilir.</li>
	<li>Dikişin uçlarını bir cerrahın düğümü ile bağlayın ve kuyrukları mümkün olduğunca kısa kesin. Düğümü sulkusa yerleştirin. NOT: Cerrahi aletlerin uçları oral travmaya ve kanamaya neden olabilir. Ağız boşluğundan kanı çıkarmak için küçük gazlı bez parçaları veya pamuklu çubuk hazırlayın ve herhangi bir kanamayı durdurmak için basınç uygulayın. Mikrocerrahi yaklaşımla dikkatli yumuşak doku yönetimi, cerrahi komplikasyonları en aza indirir ve daha az doku travmasına yol açar.</li>
	<li>Ligatür konumlandırmadan sonra, M1'in mezio-palatal tarafındaki subgingival dokuya (bir dişin kökü veya boynu ile diş eti marjı arasında) 25 G steril hipodermik iğne ve 1 mL şırınga ile steril salin içinde 40 μL Pg-LPS enjekte edin (gün 0).</li>
</ol>3. Prosedürün sonu
<ol><li>Ligasyon konumlandırma ve Pg-LPS uygulamasından sonra, sıçanı cerrahi durumdan serbest bırakın ve bir ısı lambasının altındaki temiz bir bireysel kafese yerleştirin.</li>
	<li>Antagonist Atipamezole'ye (deri altından 0.5 mg / kg (SC)) 25 G steril hipodermik iğne ve 1 mL şırınga ile enjekte edin.</li>
	<li>Ağrıyı gidermek için, 0.03 mg / kg Buprenorfin, SC enjekte edin.</li>
	<li>Operasyonun etkileri tamamen tersine dönene kadar hayvanın iyileşmesini izleyin. Her sıçanı ayrı ayrı sabit koşullar altında uygun ortamda barındırın (20-24 ° C, günde 12 saat aydınlık-karanlık döngüleri). Yiyecek ve deiyonize su ad libitum sunun.</li>
	<li>İşlemden sonraki ilk 2 gün boyunca, hayvanları tartın ve ağrıyı gidermek için günde iki kez Buprenorfin SC enjekte edin. NOT: Buprenorfin, sarma etkisini ortadan kaldırmak için prosedüre başlamadan önce uygulanabilir.</li>
	<li>Deney sırasında, hayvanları haftada bir veya iki kez ağırlık ve genel davranış değerlendirmesine göre izleyin.</li>
</ol>4. İşlem sonrası takip
NOT: PD indüksiyonu, bakteri biyofilm birikimini ve bunun sonucunda inflamasyonu teşvik etmek için 14 gün boyunca korunmuştur. Ligatürler incelenmeli ve ayarlanmalıdır ve Pg-LPS haftada üç kez enjekte edilir (gün 2, gün 4, gün 6, gün 8, gün 10 ve gün 12).
<ol><li>Ligatürü (2. gün, 4. gün, 6. gün, 8. gün, 10. gün ve 12. gün) aşağıdaki gibi inceleyin ve ayarlayın:<ol><li>Bir anestezi indüksiyon odası kullanarak% 100 oksijende% 2 izofluran ile anestezi yapın.</li>
		<li>Sıçan uyuşturulduktan sonra, hayvanı sırtına yerleştirin ve hayvan anestezisinin sürdürülmesi için% 100 oksijende% 1 izofluran ile prosedür sırasında küçük bir burun konisi kullanın.</li>
		<li>Kesici dişlerin etrafındaki (üst ve alt) alüminyum ağız tıkaçlarını kullanarak sıçan ağzını açın, dili onunla geri çekin ve maksilla ve mandibulayı açık, rahat bir çalışma pozisyonunda stabilize ederek ligatürlere erişim sağlayın.</li>
		<li>Periosteal mikrocerrahi asansör yardımıyla bağları dişetine karşı sıkın ve bağların dikişinin yerleştirildiğinden emin olun, bu da dişeti çevresinde iltihap oluşturur. NOT: Ameliyattan 7-10 gün sonra bağların kaybolması mümkündür. Bu durumda, Pg-LPS enjeksiyonu için açıklanan protokolü izleyin (adım 2.4).</li>
	</ol></li>
	<li>Ligatür ayarlamasından sonra, M1'in mesio-palatal tarafındaki subgingival dokuya 25 G steril hipodermik iğne ve 1 mL şırınga ile iki taraflı olarak 40 μL Pg-LPS enjekte edin (gün 2, gün 4, gün 6, gün 8, gün 10 ve gün 12).</li>
	<li>Anestezi için burun konisini çıkarın ve sıçanı kafesine yerleştirin. Anestezinin etkileri tamamen tersine dönene kadar hayvanın iyileşmesini izleyin.</li>
</ol>5. Hayvan kurban etme ve analiz
NOT: PD'nin ilerlemesini değerlendirmek için farklı seçenekler vardır. Burada tarif edilen analiz, dişeti oluk sıvısındaki (GCF) pro-inflamatuar sitokinlerin değerlendirilmesi ve alveoler kemik kaybının değerlendirilmesinden oluşmaktadır.
<ol><li>Çalışmanın 14. gününde (14. gün), CO2'li hayvanları bir karbondioksit odasında kurban edin. Kemirgenler için oda hacminin/dak'nın %30 ila %70'lik bir yer değiştirme oranı önerilir. NOT: Ötanazi doğrulamak için pedal refleksine hayvan tepkisi eksikliği ve hayati belirtilerin yokluğu doğrulanmalıdır.</li>
	<li>GCF'yi aşağıdaki adımlarda açıklandığı şekilde toplayın: NOT: GCF, PD indüksiyonundan önce (ameliyattan önce) (gün 0) ve PD indüksiyonundan sonra (kurbandan sonra) (gün 14) toplanır.<ol><li>Hayvanı cerrahi bir platforma sırt üstü yerleştirin ve maksilla ve mandibulayı alüminyum ağız tıkaçlarıyla açık bir konumda stabilize edin.</li>
		<li>GCF'yi 30 numaralı adsorban kağıt noktasını (0,03 cm çap x 3 cm uzunluk) kullanarak, hafif bir direnç gösterene kadar M1'in mesio-palatal etrafındaki dişeti yarığına yerleştirerek toplayın. Hemen çıkarmadan önce kağıt noktasını toplam 30 saniye boyunca aynı konumda tutun.</li>
		<li>Toplandıktan sonra, kağıt noktasını hemen plastik bir şişeye aktarın ve tahlil performansına kadar -80 ° C'de saklayın.</li>
	</ol></li>
	<li>GCF içindeki proteinleri değerlendirmek için, aşağıdaki çözeltileri hazırlayın ve açıklandığı gibi elüsyon yönteminin adımlarını izleyin: NOT: IL-1β, üreticinin protokolüne göre bir immünoassay kullanılarak GCF'de (14. gün) değerlendirilir.<ol><li>Elüsyon tamponunu taze hazırlayın ve proteaz aktivitesini inhibe etmek için tüm ekstraksiyon işlemi boyunca buz üzerinde tutun.</li>
		<li>Elüsyon tamponu için gereken tüm çözümleri açıklandığı gibi hazırlayın:<ol><li>Ultra saf suda 1 mL Aprotinin (1 mg / mL) hazırlayın.</li>
			<li>Metanol içinde 10 mL fenilmetilsülfonilflorür (PMSF) (200 mM) hazırlayın.</li>
			<li>Elüsyon tamponunu hazırlamak için 24.5 mL PBS çözeltisine (pH = 7.4) 125 μL PMSF ve 250 μL Aprotinin ekleyin.</li>
		</ol></li>
		<li>Bir ticari fosfataz inhibitörü tableti, 10 mL taze hazırlanmış elüsyon tamponu ile 4 ° C'de ajitasyon altında 10 dakika boyunca çözün. NOT: GCF elüsyonunun süresi sınırlıdır; İlk 30 dakika içinde fosfataz inhibitörü tabletinin eklenmesinden sonra santrifüjler için hemen kullanın.</li>
		<li>Fosfataz inhibitörünü ekledikten sonra, kağıt noktalarıyla doğrudan tüpün üzerine 11 μL tam elüsyon tamponu ekleyin.</li>
		<li>Tüpü 452 x g'de 4 °C'de 5 dakika boyunca santrifüjleyin.</li>
		<li>Salınan içeriği yeni bir plastik şişeye aktarın. 50 μL toplam hacim elde etmek için bu işlemi dört kez daha tekrarlayın.</li>
		<li>Son santrifüjlemeden sonra, doğrudan kağıt noktasına toplam 60 μL hacim ekleyin ve 4 ° C'de 5 dakika boyunca 452 x g'de son bir kez santrifüj yapın.</li>
		<li>Protein değerlendirmesi için salınan gerekli hacmi kullanın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ötanazi ve GCF toplanmasından sonra, cerrahi makas yardımıyla, sıçanların üstün çenesini kesin. Sıçanın maskesini soymaya çalışın ve mümkün olduğunca az yumuşak doku bırakın.</li>
	<li>Görselleştirme için çeneyi mikroskop aşamasında konumlandırın ve istenen büyütmede bir resim çekin.</li>
	<li>Çeneyi doğrudan PBS'de seyreltilmiş %4 paraformaldehit (PFA) içine yerleştirin. Tam bir sabitleme için haftada iki kez yeni PFA ile 12 gün boyunca yenileyin. DİKKAT: PFA içeren adımlar, Güvenlik Bilgi Formu tavsiyelerine uygun olarak bir duman davlumbazında gerçekleştirilmelidir.</li>
	<li>Tam çene fiksasyonundan sonra, bir koni ışınlı bilgisayarlı tomografi (CBCT) tarayıcısı kullanarak kemik kaybını aşağıdaki gibi değerlendirin:<ol><li>Bilgisayarı açın.</li>
		<li>CBCT analiz programını açın.</li>
		<li>Scan Protocol (Tarama Protokolü) > Protez Tarama Modu (Protez Tarama Modu) seçeneğini belirleyin.</li>
		<li>Görüş Alanı (FOV) > (11x8) HIRes (90 kV voltaj ve 3 mA akım) öğesini seçin.</li>
		<li>Sıçanların sabit üst maksillasını portal içine yerleştirin.</li>
		<li>İleri'ye tıklayın.</li>
		<li>X-ışını ateşleme düğmesine tıklayın (emisyonu yapmak için X-ışını uzaktan kumandasına basın ve tarama süresi boyunca basılı tutun).</li>
		<li>Gerekirse, kontrol düğmesine basarak üst maksillayı ön düzlemin ortasına yerleştirin, ardından X-ışını ateşleme düğmesine tıklayın (emisyonu yapmak ve tarama süresi boyunca basılı tutmak için X-ışını uzaktan kumandasına basın).</li>
		<li>İleri'ye tıklayın.</li>
		<li>X-ışını ateşleme düğmesine tıklayın (emisyonu yapmak için X-ışını uzaktan kumandasına basın ve tarama süresi boyunca basılı tutun).</li>
		<li>Gerekirse, kontrol düğmesine basarak protezi sagital düzlemin ortasına yerleştirin, ardından X-ışını ateşleme düğmesine tıklayın (emisyonu yapmak ve tarama süresi boyunca basılı tutmak için X-ışını uzaktan kumandasına basın).</li>
		<li>İleri'ye tıklayın.</li>
		<li>Başlat düğmesine tıklayın (emisyonu yapmak için X-ışını uzaktan kumandasına basın ve sınav süresi boyunca basılı tutun). Bir işleme iletisi alana kadar bekleyin ve ardından gösterilen yönergeleri izleyin.</li>
		<li>Bir pencere görünümü görüntülenir. Griyi %65'te düzenleyin ve Uygula'yı tıklayın.</li>
		<li>Taramayı kaydetmek için Dosya'ya tıklayın ve DICOM formatında kaydedin. Ardından, Tüm Görüntüler'i tıklatın ve DICOM dışa aktarma seçimi penceresinde, gösterilen tüm parametreleri seçin (ilk görüntü, orijinal eksenel, yeniden biçimlendirilmiş eksenel, çok düzlemli) ve önceden tanımlanmış türü seçin.</li>
	</ol></li>
	<li>Maksiller azı dişlerinin iki boyutlu ve sagital temsili görüntülerini bir analiz programı kullanarak aşağıdaki gibi işleyin:<ol><li>Yazılımı açın.</li>
		<li>Dosya ve Aç'ı tıklatın, ardından DICOM biçiminde görüntülerin bulunduğu klasörü seçip Aç'ı tıklatın.</li>
		<li>"8 bit'e dönüştür" penceresi görünene kadar bekleyin, 0 ile 6.000 arasındaki aralığı seçin ve Tamam'ı tıklayın.</li>
		<li>Raw görüntüler'i tıklayın.</li>
		<li>İlgilenilen bölgeyi sınırlamak için seçimin üst ve alt kısımlarını tanımlayın. Alveolar kemiğin göründüğü ilk ve son görüntüleri arayın ve seçimin üst ve alt kısım komutlarıyla seçin. NOT: Azı dişlerinin alveolar kemiğinin temsili iki boyutlu görüntüleri, Şekil 3A, B'de olduğu gibi dışa aktarılabilir.</li>
		<li>Sagital temsili görüntüler için, Profil çubuğunu değiştir'e tıklayın.</li>
		<li>Damak ortasına bir sagital çizgi çizin ve Modeli yeniden düzenle'yi tıklayın. İlgilenilen bölgeyi sınırlamak için parametreleri belirleyin (dilim aralığı: 1; dilim sayısı: 100) ve Tamam'ı tıklatın. Yeniden dilimleme modeli sona erene kadar bekleyin. Son olarak, Yeniden Dilimlenmiş görüntüleri kaydet'i tıklatın. NOT: Azı dişlerinin alveolar kemiğinin temsili sagital hayalleri, Şekil 3C, D'de olduğu gibi ihraç edilebilir.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Carvalho, J. D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+citrus+flavonoid+supplementation+on+inflammation+in+lipopolysaccharide-induced+periodontal+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Function%22%5BJournal%5D)">Impact of citrus flavonoid supplementation on inflammation in lipopolysaccharide-induced periodontal disease in mice.</a> Food and Function. 12 (11), 5007-5017 (2021).</li>
<li>Nazir, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+periodontal+disease%2C+its+association+with+systemic+diseases+and+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Health+Sciences%22%5BJournal%5D)">Prevalence of periodontal disease, its association with systemic diseases and prevention.</a> International Journal of Health Sciences. 1 (2), 72-80 (2017).</li>
<li>Dumitrescu, A. L., El-Aleem, S. A., Morales-Aza, B., Donaldson, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+periodontitis+in+the+rat%3A+Effect+of+lipopolysaccharide+on+bone+resorption%2C+osteoclast+activity%2C+and+local+peptidergic+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Periodontology%22%5BJournal%5D)">A model of periodontitis in the rat: Effect of lipopolysaccharide on bone resorption, osteoclast activity, and local peptidergic innervation.</a> Journal of Clinical Periodontology. 31 (8), 596-603 (2004).</li>
<li>Wang, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effects+of+the+novel+antimicrobial+peptide+Nal-P-113+in+a+rat+Periodontitis+model+by+limiting+the+growth+of+Porphyromonas+gingivalis+and+modulating+IL-1%CE%B2+and+TNF-%CE%B1+production%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Complementary+and+Alternative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Preventive effects of the novel antimicrobial peptide Nal-P-113 in a rat Periodontitis model by limiting the growth of Porphyromonas gingivalis and modulating IL-1β and TNF-α production.</a> BMC Complementary and Alternative Medicine. 17 (1), 1-10 (2017).</li>
<li>Guan, J., Zhang, D., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+periodontitis+risk+factors+through+a+retrospective+analysis+of+80+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Pakistan+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Identifying periodontitis risk factors through a retrospective analysis of 80 cases.</a> Pakistan Journal of Medical Sciences. 38 (1), 293-296 (2021).</li>
<li>Khajuria, D. K., Patil, O. N., Karasik, D., Razdan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+novel+biodegradable+chitosan+based+metformin+intrapocket+dental+film+for+the+management+of+periodontitis+and+alveolar+bone+loss+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of novel biodegradable chitosan based metformin intrapocket dental film for the management of periodontitis and alveolar bone loss in a rat model.</a> Archives of Oral Biology. 85, 120-129 (2018).</li>
<li>Nishida, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+resorption+and+local+interleukin-1alpha+and+interleukin-1beta+synthesis+induced+by+Actinobacillus+actinomycetemcomitans+and+Porphyromonas+gingivalis+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Periodontal+Research%22%5BJournal%5D)">Bone resorption and local interleukin-1alpha and interleukin-1beta synthesis induced by Actinobacillus actinomycetemcomitans and Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide.</a> Journal of Periodontal Research. 36 (1), 1-8 (2001).</li>
<li>Graves, D. T., Kang, J., Andriankaja, O., Wada, K., Rossa, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+to+study+host-bacteria+interactions+involved+in+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Animal models to study host-bacteria interactions involved in periodontitis.</a> Bone. 23 (1), 1-7 (2008).</li>
<li>Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+animal+models+in+periodontology%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Open+Dentistry+Journal%22%5BJournal%5D)">Experimental animal models in periodontology: a review.</a> The Open Dentistry Journal. 4 (1), 37-47 (2010).</li>
<li>Mustafa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+periodontal+disease+via+retentive+ligature%2C+lipopolysaccharide+injection%2C+and+their+combination+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Polish+Journal+of+Veterinary+Sciences%22%5BJournal%5D)">Induction of periodontal disease via retentive ligature, lipopolysaccharide injection, and their combination in a rat model.</a> Polish Journal of Veterinary Sciences. 24 (3), 365-373 (2021).</li>
<li>Chadwick, J. W., Glogauer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+ligature-induced+model+of+murine+periodontitis+for+the+evaluation+of+oral+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Robust ligature-induced model of murine periodontitis for the evaluation of oral neutrophils.</a> Journal of Visualized Experiments. 2020 (155), 6-13 (2019).</li>
<li>Cheng, R., Wu, Z., Li, M., Shao, M., Hu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1%CE%B2+is+a+potential+therapeutic+target+for+periodontitis%3A+a+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oral+Science%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1β is a potential therapeutic target for periodontitis: a narrative review.</a> International Journal of Oral Science. 12 (1), 1-9 (2020).</li>
<li>Abe, T., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+ligature-induced+periodontitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice.</a> Journal of Immunological Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).</li>
<li>Jeong-Hyon, K., Bon-Hyuk, G., Sang-Soo, N., Yeon-Cheol, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+rat+models+of+periodontitis+treated+with+natural+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Traditional+Chinese+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">A review of rat models of periodontitis treated with natural extracts.</a> Journal of Traditional Chinese Medical Sciences. 7 (2), 95-103 (2020).</li>
<li>Marchesan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+murine+model+to+study+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">An experimental murine model to study periodontitis.</a> Nature Protocols. 13 (10), 2247-2267 (2018).</li>
<li>Lin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+ligature-induced+periodontitis+in+mice+to+explore+the+molecular+mechanism+of+periodontal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Application of ligature-induced periodontitis in mice to explore the molecular mechanism of periodontal disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (16), 8900(2021).</li>
<li>Irie, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+micro-computed+tomography+for+bone+evaluation+in+dentistry%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Dental+Journal%22%5BJournal%5D)">Use of micro-computed tomography for bone evaluation in dentistry.</a> Brazilian Dental Journal. 29 (3), 227-238 (2018).</li>
<li>Haas, L. F., Zimmermann, G. S., De Luca Canto, G., Flores-Mir, C., Corrêa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+of+cone+beam+CT+to+assess+periodontal+bone+defects%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Dentomaxillofacial+Radiology%22%5BJournal%5D)">Precision of cone beam CT to assess periodontal bone defects: a systematic review and meta-analysis.</a> Dentomaxillofacial Radiology. 47 (2), 20170084(2018).</li>
<li>Kamburoğlu, K., Ereş, G., Akgün, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qualitative+and+quantitative+assessment+of+alveolar+bone+destruction+in+adult+rats+using+CBCT%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Dentistry%22%5BJournal%5D)">Qualitative and quantitative assessment of alveolar bone destruction in adult rats using CBCT.</a> Journal of Veterinary Dentistry. 36 (4), 245-250 (2019).</li>
<li>Sousa Melo, S. L., Rovaris, K., Javaheri, A. M., de Rezen de Barbosa, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cone-beam+computed+tomography+%28CBCT%29+imaging+for+the+assessment+of+periodontal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Oral+Health+Reports%22%5BJournal%5D)">Cone-beam computed tomography (CBCT) imaging for the assessment of periodontal disease.</a> Current Oral Health Reports. 7 (4), 376-380 (2020).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Bu yöntem, Pg-LPS enjeksiyonlarının kombine tekniğini ve M1 etrafındaki ligatür yerleşimini takiben sıçanlarda PD'nin indüksiyonunu açıklamakta ve periodontal dokularda ve alveoler kemikte önemli değişikliklerin bu yöntemi takip eden 14 gün içinde indüklenebileceğini ortaya koymaktadır.
Bu prosedür sırasında, farklı kritik adımlara dikkat edilmelidir. Hayvan anestezisi ve prosedür hazırlığı sırasında, cerrahi işlem sırasında uygun anestezinin değerlendirilmesi, hayvanın doğru konumlan...

Periodontitis (PH), dünya çapında en sık görülen altıncı halk sağlığı durumudur ve toplam popülasyonun yaklaşık %11'ini etkileyen, periodontal hastalığın gelişmiş, geri dönüşümsüz ve yıkıcı bir formudur 1,2. PD, dişeti ve periodontal dokuları etkileyen, dişeti çekilmesi, bileşke epitelinin cep gelişimi ile apikal migrasyonu ve alveoler kemik kaybı ile sonuçlanan inflamatuar bir süreçtir3. Ayrıca, PH kardiyovasküler hastalık, obezite, diyabet ve romatoid artrit gibi çevresel ve konakçıya özgü faktörlerin önemli rol oynadığı çeşitli sistemik hastalıklarla ilişkilidir 4,5.
Bu nedenle, PD esas olarak mikrobiyal plak birikimi ile başlayan multifaktöriyel bir hastalıktır - mikrobiyal toplulukların disbiyozundan kaynaklanır - ve periodontal patojenlere karşı abartılı bir konakçı immün yanıtı ile başlar ve periodontal dokunun parçalanmasına yol açar 4,6. Birkaç periodontal bakteri arasında, gram-negatif anaerobik bakteri Porphyromonas gingivalis, PD4'teki anahtar patojenlerden biridir. P. gingivalis, duvarlarında kompleks bir lipopolisakkarit (LPS), iltihaplı periodontal dokularda polimorfonükleer lökosit infiltrasyonu ve vasküler dilatasyonu indüklediği bilinen bir moleküliçerir 7. Bu, interlökin 1 (IL-1), IL-6 ve IL-8, tümör nekroz faktörü (TNF) veya prostaglandinler gibi enflamatuar mediatörlerin üretilmesiyle sonuçlanır, daha sonra osteoklast aktivasyonu ve kemik rezorpsiyonu ile doku yıkımına ve nihai diş kaybına yol açar3.
Hayvan modellerinin farklı avantajları arasında, insanlarda olduğu gibi hücresel karmaşıklıkları taklit etme veya sınırlı hücre tiplerine sahip plastik yüzeylerde gerçekleştirilen in vitro çalışmalardan daha doğru olma kapasitesibulunmaktadır 8. PD'yi deneysel olarak in vivo olarak modellemek için, insan olmayan primatlar, köpekler, domuzlar, yaban gelinciği, tavşanlar, fareler ve sıçanlar gibi farklı hayvan türleri kullanılmıştır9. Bununla birlikte, sıçanlar PD'nin patogenezi için en çok çalışılan hayvan modelidir, çünkü ucuz ve kullanımı kolaydır10. Diş eti dokusu, insan dişeti dokusuna benzer yapısal özelliklere sahiptir, sığ bir dişeti sulkusu ve diş yüzeyine bağlı bileşke epitelidir. Ayrıca, insanlarda olduğu gibi, bileşke epiteli, bakteriyel, yabancı maddelerin ve eksüdaların enflamatuar hücrelerden geçişini kolaylaştırır 9.
Sıçanlarda PD indüksiyonunun en çok bildirilen deneysel modellerinden biri, teknik olarak zor ama güvenilir olan dişlerin etrafına ligatürlerin yerleştirilmesidir10. Ligatür yerleşimi diş plağı ve bakteri birikimini kolaylaştırır, dişeti sulcisinde periodontal doku iltihabına ve yıkımına neden olan bir dysbiosis oluşturur11. Bu sıçan model8'de periodontal ataşman kaybı ve alveoler kemiğin rezorpsiyonu 7 gün içinde ortaya çıkabilir.
PD için başka bir hayvan modeli, LPS'nin dişeti dokusuna enjekte edilmesinden oluşur. Sonuç olarak, osteoklastogenez ve kemik kaybı uyarılır. Bu modelin histopatolojik özellikleri, daha yüksek proinflamatuar sitokinler, kollajen yıkımı ve alveoler kemik rezorpsiyonu 6,8 ile karakterize insan tarafından kurulan PD'ye benzer.
Bu nedenle, bu çalışmanın amacı, P. gingivalis-LPS (Pg-LPS) enjeksiyonlarının tekniklerine dayanan deneysel PD'nin basit bir sıçan modelini ve ilk maksiller azı dişlerinin (M1) etrafına ligatür yerleştirilmesini tanımlamaktır. Bu, insan PD hastalığında gözlenenlere benzer özelliklere sahip, hastalık ilerleme mekanizmalarının ve gelecekteki olası tedavilerin incelenmesinde kullanılabilecek bir modeldir.

<table><tbody><tr><td>Adsorban kağıt noktası n&ordm; 30&nbşk;</td><td>Proclinc</td><td>8187</td><td></td></tr><tr><td>Aprotinin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1153</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole</td><td>Dechra</td><td>573751.5</td><td>Revanzol 5 mg / mL</td></tr><tr><td>Örgülü ipek ligatür (5/0)&nbsp;</td><td>Laboratorio Arago Sl</td><td>613112</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin&nbsp;</td><td>Richter pharma</td><td>578816.6</td><td>Bupaq 0.3 mg/mL</td></tr><tr><td>Konik ışınlı bilgisayarlı tomografi (CBCT) Tarayıcı&nbsp;</td><td>MyRay</td><td>hyperion X9</td><td>Model Hyperion X9</td></tr><tr><td>CTAn yazılımı</td><td>SkyScan</td><td></td><td>Sürüm 1.13.4.0</td></tr><tr><td>Diş kaşifi&nbsp;</td><td>Proclinc</td><td>99743</td><td></td></tr><tr><td>Elmas mızrak şeklinde frez&nbsp;</td><td>Dentaltix</td><td>IT21517</td><td></td></tr><tr><td>Gıda bakım diyeti</td><td>Sodispain araştırması</td><td>ROD14&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Isıtmalı cerrahi platform</td><td>PetSavers</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hollenback oyma makinesi</td><td>Hu-FRIEDY&nbsp;</td><td></td><td></td>HF45234</tr><tr><td>Hipodermik iğne&nbsp; &nbsp;</td><td>BD&nbsp;</td><td>300600</td><td>25G X 5/8" - 0,5 X 16 MM</td></tr><tr><td>İzofluran&nbsp;</td><td>Karizoo</td><td></td><td>Isoflutek 1000mg/g</td></tr><tr><td>Ketamin&nbsp; &nbsp;</td><td>Dechra</td><td>581140.6</td><td>Anesetin 100 mg / mL</td></tr><tr><td>Lipopolisakkarit&nbsp; P.Gingivalis&nbsp'den türetilmiştir;</td><td>InvivoGen</td><td>TLRL-PGLPS</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>M/4000/PB08</td><td></td></tr><tr><td>Mikro iğne holter</td><td>Fehling Cerrahi Aletler</td><td>KOT-6</td><td></td></tr><tr><td>Mikrocerrahi pense</td><td>KLS Martin</td><td>12-384-06-07</td><td></td></tr><tr><td>mikrocerrahi makas ve nbsp;</td><td>S & T mikrocerrahi aletler</td><td>SDC-15 RV</td><td></td></tr><tr><td>Monitörü iMEC 8 Veteriner</td><td>Mindray&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multipleks boncuk immünoassay</td><td>Procartaplex, Thermo fisher Scientific</td><td>PPX-05</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit (PFA)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>8187151000</td><td></td></tr><tr><td>Periosteal mikrocerrahi asansörü&nbsp;</td><td>Dentaltix</td><td>CU19112468</td><td></td></tr><tr><td>Fenilmetilsülfonilflorür (PMSF)&nbsp;</td><td>Roche</td><td>10837091001</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tampon Çözeltisi (PBS)</td><td>Capricorn Scientific</td><td>PBS-1A</td><td></td></tr><tr><td>PhosSTOP&nbsp;</td><td>Roche</td><td>4906845001</td><td>Ticari fosfataz inhibitörü tablet&nbsp;</td></tr><tr><td>Plastik flakon</td><td>SPL Lifesciencies</td><td>60015</td><td>1.5mL</td></tr><tr><td>Salin</td><td>Cinfa</td><td>204024.3</td><td></td></tr><tr><td>Stereo Mikroskop ve nbsp;</td><td>Zeiss</td><td></td><td>Model SteREO Discovery.V12</td></tr><tr><td>Cerrahi luplar led ışık</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi makas&nbsp;</td><td>Zepf Cerrahi</td><td>08-1701-17</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga&nbsp;</td><td>BD plastipak</td><td>303172</td><td>1mL</td></tr><tr><td>Veteriner diş mikromotor</td><td>Eickemeyer</td><td>174028</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Kaliyer</td><td>20102-003</td><td>Ksilajik 20 mg / mL</td></tr></tbody></table>

bir sıçan modelinde ligatür ve lipopolisakkarit enjeksiyonunun bir kombinasyonu ile periodontitisin indüksiyonu

Induction of Periodontitis via a Combination of Ligature and Lipopolysaccharide Injection in a Rat Model

Periodontitis (PD), periodonsiyumun oldukça yaygın, kronik immün-inflamatuar bir hastalığı olup, dişeti yumuşak dokusu, periodontal ligament, sementum ve alveoler kemik kaybına neden olur. Bu çalışmada, sıçanlarda basit bir PD indüksiyon yöntemi tanımlanmıştır. Ligatür modelinin ilk maksiller azı dişlerinin (M1) etrafına yerleştirilmesi ve M1'in mesio-palatal tarafındaki Porphyromonas gingivalis'ten türetilen lipopolisakkarit (LPS) enjeksiyonlarının bir kombinasyonu için ayrıntılı talimatlar sunuyoruz. Periodontitisin indüksiyonu 14 gün boyunca korundu ve bakteri biyofilm ve inflamasyon birikimini teşvik etti. Hayvan modelini doğrulamak için, anahtar bir inflamatuar mediatör olan IL-1β, dişeti oluk sıvısında (GCF) bir immünoassay ile belirlendi ve koni ışınlı bilgisayarlı tomografi (CBCT) kullanılarak alveoler kemik kaybı hesaplandı. Bu teknik, 14 gün sonra deneysel prosedürün sonunda dişeti çekilmesini, alveoler kemik kaybını ve GCF'de IL-1β düzeylerinde bir artışı teşvik etmede etkiliydi. Bu yöntem PD'yi indüklemede etkiliydi, böylece hastalık ilerleme mekanizmaları ve gelecekteki olası tedaviler üzerine yapılan çalışmalarda kullanılabiliyordu.

Deneysel adımların zaman çizelgesi Şekil 1'de sunulmuştur. Şekil 2A , cerrahi müdahaleden sonra mandibulanın bir görüntüsünü, deneyin 0 zamanında M1'in sulkusunun etrafına bağ yerleştirilmesiyle göstermektedir. Şekil 2B , işlemden 14 gün sonra, M1 etrafındaki bağın dişeti sulkusuna nasıl girdiğini, dişetinin iltihaplanmasına ve birikime sızmasına neden olduğunu göstermektedir.
<p class="jove_content biglegend" fo:keep-together.w...

Bu çalışmada, periodontitis indüksiyonunun sıçan modeli, ilk maksiller azı dişlerinin etrafında 14 gün boyunca, Porphyromonas gingivalis'ten türetilen tekrarlayan lipopolisakkarit enjeksiyonları ve geciktirici ligatür kombinasyonu ile sunulmuştur. Ligasyon ve LPS enjeksiyon teknikleri peridonti indüklemede etkiliydi, bu da alveoler kemik kaybı ve inflamasyona neden oldu.

Bir sıçan modelinde ligatür ve lipopolisakkarit enjeksiyonunun bir kombinasyonu ile periodontitisin indüksiyonu

Periodontitis (PD) is a highly prevalent, chronic immune-inflammatory disease of the periodontium, that results in a loss of gingival soft tissue, ...

Bu, ligatür yerleşimi ile kombine edilmiş lipopolisakkarit enjeksiyon tekniklerine dayanan deneysel periodontitisin sıçan modelidir ve hastalığın ilerlemesini incelemek ve periodontitis tedavilerini değerlendirmek için etkili bir yöntem sunar. Her iki tekniğin bireysel yöntemlerle birleştirilmesi, hızlı bir hastalık indüksiyonu ile sonuçlanır, yıkıcı inflamatuar yanıtı arttırır ve bağ dokusu kaybını ve alveoler kemik rezorpsiyonunu arttırır. Bu yöntem, periodontitis tedavilerinin etkisini değerlendirmek için değerli bir fırsat sağlar.Prosedürü gösteren Dr.Oscar Villa, PhD. Ameliyattan önce tüm cerrahi aletleri sterilize ederek başlayın. PBS veya salin içinde seyreltilmiş bir mililitre ksilazin ile 1.6 mililitre ketamin karıştırarak ketamin ve ksilazin karışımı hazırlayın ve stoğu dört santigrat derecede saklayın.Atipamezol'ü mililitre başına 0.25 miligramlık nihai bir konsantrasyona ve buprenorfin'i PBS veya salin cinsinden mililitre başına 0.03 miligramlık bir nihai konsantrasyona seyreltin ve stokları dört santigrat derecede saklayın. Bir mililitre PG-LPS'yi steril salin içinde hazırlayın ve stoğu eksi 20 santigrat derecede saklayın. Deney için dişi ve erkek Wistar fareleri kullanın.Hayvanları gruplar halinde uygun ortamda, yiyecek ve standart su ile ad libitum olarak saklayın. Sıçan uyuşturulduktan sonra, hayvanı ısıtılmış bir cerrahi platforma sırt üstü yerleştirin. Isı kaybını önlemek için işlem sırasında hayvanın vücudunu örtün.Küçük bir burun konisi kullanarak% 100 oksijen uygulayın ve nabız oksimetresi ile nabız hızını ve oksijen doygunluğunu izleyin. Şimdi, kesici dişlerin etrafında alüminyum bir ağız tıkaç kullanarak sıçan ağzını açın. Dili onunla geri çekin ve maksilla ve mandibulayı açık, rahat bir çalışma pozisyonunda stabilize ederek mandibuler azı dişlerine erişim sağlayın.GCF'yi toplam dört emici kağıt noktası numarası 30 kullanarak, hafif bir direnç gösterene kadar M1'in meziopalatalının etrafındaki dişeti yarığına yerleştirerek toplayın. Hemen çıkarmadan önce kağıt noktasını 30 saniye boyunca aynı konumda tutun. Toplandıktan sonra, kağıt noktasını hemen plastik bir şişeye aktarın ve tahlil performansına kadar eksi 80 santigrat derecede saklayın.Dikişin distal kuyruğunu dişlenmenin damak tarafına yerleştirin ve proksimal segmenti M1 ve ikinci maksiller azı dişlerinin teması arasına yerleştirin. Sütürü sulkus içine yerleştirmek için periosteal mikrocerrahi asansörü kullanın. Ligatürü M1'in bukkal yüzeyinin etrafına çok dikkatli bir şekilde sarın, çünkü bu seviyedeki dokular dar bir bağlı dişeti bölgesi sunar.Dişeti sulkusuna sürülmek üzere dikişin her iki ucunda sıkıldığından emin olun. Daha sonra, dikişin uçlarını bir cerrahın düğümü ile bağlayın ve kuyrukları mümkün olduğunca kısa kesin. Düğümü sulkusa yerleştirin.Ligatür konumlandırmadan sonra, M1'in meziopalatal tarafındaki subgingival dokuya steril salin içinde 40 mikrolitre PG-LPS enjekte edin. Ligatürü incelemek ve ayarlamak için, anestezi uygulanan hayvanı sırtına yerleştirin ve işlem sırasında hayvan anestezisinin sürdürülmesi için% 1 izofluran ve% 100 oksijen içeren küçük bir burun konisi kullanın. Kesici dişlerin etrafındaki alüminyum ağız tıkaçlarını kullanarak sarma ağzını açın, dili onunla geri çekin ve maksilla ve mandibulayı açık, rahat bir çalışma pozisyonunda stabilize ederek ligatürlere erişim sağlayın.Periosteal mikrocerrahi asansör yardımıyla bağları dişetine karşı sıkın ve bağların dikişinin yerleştirildiğinden emin olun, bu da dişeti çevresinde iltihap oluşturur. Ligatür ayarlamasından sonra, daha önce gösterildiği gibi, M1'in meziopalatal tarafındaki subgingival dokuya iki taraflı olarak 40 mikrolitre PG-LPS enjekte edin. Hayvanı 14. günde kurban ettikten sonra, daha önce gösterildiği gibi GCF'yi toplayın.Kağıt noktasını hemen plastik bir şişeye aktarın ve tahlil performansına kadar eksi 80 santigrat derecede saklayın. Maksiller azı dişlerinin alveoler kemiğinin iki boyutlu görüntüleri, periodontitis kurulduktan sonra bazal kontrolde daha fazla kemik hacmi ve daha yüksek alveoler kemik kaybı göstermektedir. Sagital görüntülerin analizi, periodontitis kuruluşundan sonra M1 ve M2'nin interradiküler kemik bölgesinde, bazal kontrol grubuna kıyasla daha belirgin bir alveoler kemik kaybını vurgulamaktadır.Fedakarlıktan sonra, damak, M1'deki dişeti çekilmesinde farklı gruplar arasında farklılıklar gösterdi. Periodontitis grubu, bazal kontrol grubuna göre maksiller azı dişleri çevresinde daha belirgin apikal dişeti göçü ve dişeti iltihabı gösterir. Ayrıca, periodontitis grubu, GCF'den pro-inflamatuar sitokin 1L-1 beta'nın kontrol grubundan anlamlı derecede daha yüksek bir salınımı göstermiştir.Prosedürdeki önemli adımlar, sütür ve düğümün sulkusa doğru yerleştirilmesi, ligatürün uygun şekilde ayarlanması ve 14 günlük protokol sırasında doğru lipopolisakkarit enjeksiyonudur.

induction-periodontitis-via-combination-ligature-lipopolysaccharide

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Burada, yerel olarak farelerde apikal periodontitis teşvik etmek için bir protokol sunuyoruz. Biz nasıl fare diş bir delik matkap ve onun hamuru maruz göstermek, amacıyla lokal inflamasyon neden. Mikro-CT ve histoloji gibi bu inflamasyonun doğasını araştırmak için analiz yöntemleri de gösterilmiştir.

Fareler içinde Apical periodontitis İndükleme

Bu makale, birden fazla maksiller molar içeren bir ligatür kaynaklı murine periodontitis modeli nin oluşturulması için bir protokol sunmaktadır, sonraki analizler için ilgili dişeti dokusu ve kemik daha geniş alanlarda sonuçlanan yanı sıra azaltılmış hayvan kullanımı. Oral nötrofilleri insan deneklere benzer bir şekilde değerlendirme tekniği de tanımlanmıştır.

Oral Nötrofillerin Değerlendirilmesinde Mürin Periodontitin Sağlam Ligatür Kaynaklı Modeli

Bu, farelerde ligatür kaynaklı peri-implantitisin deneysel bir modeli hakkında bir rapordur. Hayvanların ameliyat öncesi ve sonrası yönetiminden, ekstraksiyonlardan, implant yerleştirmeden ve ligatüre bağlı peri-implantitisten tüm cerrahi adımları açıklıyoruz.

Farelerde Ligatür ile İndüklenen Peri-İmplantitisin Deneysel Modeli

Bu çalışma, farelerde periodontitisi indüklemek için modifiye edilmiş bir 6-0 naylon ligasyon yöntemini tanımlamaktadır, bu yöntem yüksek oranda tekrarlanabilir ve araştırmacıların periodontal hastalığı gelişiminden patolojik sonuçlarına kadar incelemeleri için bir alternatif teşkil etmektedir.

İkinci Üst Azı Dişinde Naylon Ligatür ile İndüklenen İleri Periodontitisin Murin Modeli

Otoimmün hipofizitis fare hipofiz proteinlerin bir özü enjekte farelerde çoğaltılabilir.

Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon Fare Hipofiz İmmunogen hazırlanması

Bu video otoimmün hipofizitis SJL fareler ve histopatoloji ile şiddetini değerlendirmek için nasıl ikna etmek için nasıl gösterir.

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Mürin kemik iliği nakli insanlarda graft-versus-host hastalığı yöneten immünolojik mekanizmalarla çalışmak için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. T hücre trafiğini modellerini izlemek için...

Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em&gt; In Vivo</emBir MHC-eşlemeli murin Model Kullanma&gt; T Hücre İzleme

Biz akut akciğer hasarı modeli, nebülizasyonu tarafından aerosolleşmiş lipopolisakkaride meydan tarafından nötrofilik akciğer inflamasyonu uyarılması için bir yöntem açıklanmaktadır. Buna ek olarak, akciğer izolasyonu, entübasyon ve bronkoalveoler lavaj temel cerrahi teknikler de tarif edilmiştir.

Aerosolize Lipopolisakarid kullanma Yaratma Pulmoner nötrofilisi için bir yöntem

Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli Escherichia coli Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Burada pulmoner tüberküloz lezyonlarından ve boşluklardan alınan kaseum ile ilacın bağlanmasını ölçmek için hızlı bir denge diyaliz (RED) yöntemi anlatılmaktadır. Protokol, aynı zamanda, kaseum için etkili bir vekil olan köpüklü makrofaj kaynaklı bir matriste de kullanılır.

bir<em&gt; In vitro</emTüberküloz Lezyonlarında İlaç Penetrasyonunu Öngören Caseum Bağlanma Testi

Öğrenin sıçan modelinde ligatür ve lipopolisakkarit enjeksiyonu ile periodontitis indüksiyonunu. Bu yöntem, hastalık ilerlemesini incelemek ve tedavi stratejilerini değerlendirmek için etkili bir platform sunar.

Bir sıçan modelinde ligatür ve lipopolisakkarit enjeksiyonunun bir kombinasyonu ile periodontitisin indüksiyonu

Daha fazla video keşfet