Name: Zebra Balığı Hücre Hatları ile Sitotoksisite Testleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Öğrenin, zebrafish ZEM2S ve ZFL hücre hatları ile 96-kuyucuk plakalarda sitotoksisite testleri yapmayı. Bu yöntem, kimyasalların akut toksisitesini değerlendirmek için hayvan kullanımını azaltır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmanın ortak yazarı, kozmetik alanında mükemmel bir araştırmacı olan ve Brezilya'da kozmetik araştırmalarını teşvik etmeye adanmış Dr. Márcio Lorencini'nin anısına. Yazarlar, ekipman kullanılabilirliği ve Yüksek Öğretim Personelinin İyileştirilmesi için Koordinasyon (CAPES, Brezilya) (Finans Kodu 001) ve Grupo Boticario'nun mali desteği için Fizyoloji Bölümündeki (UFPR) Çok Kullanıcılı Laboratuvara minnettardır.

NOT: Bu protokolde kullanılan malzemelerin listesi için Malzeme Tablosu'na ve bu protokolde kullanılan çözümlerin ve ortamların bileşimi için Tablo 1'e bakınız.
1. ZFL ve ZEM2S hücrelerinin hazırlanması
<ol><li></li><li><li><li></li><li></ol><ol><li><li> <img alt="Hücre sayısı formülü: Hücre numarası = (ΣQ/4) × 10^4; Kuantizasyon için matematiksel denklem." src="/files/ftp_upload/64860/64860eq01.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 1"></li><li> </li></ol><ol><li><ol><li></li><li></li></ol></li><li> </li><li> </li></ol><ol><li><li><li> </li><li> </li></ol><ol><li><ol><li><li><li><li></ol></li><li> <ol><li> </li><li><li> </li><li><li> </li></ol></li><li> <ol><li><li><li><li> </li></ol></li></ol><ol><li><li> <img alt="Biyokimyasal analizde hücre canlılığı hesaplama formülü, absorbansa dayalı yüzdeyi gösterir." src="/files/ftp_upload/64860/64860eq02.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 2"> </li></ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Sitotoksisite testleri, in vitro toksisite değerlendirmesi için yaygın olarak kullanılmaktadır ve bu protokol makalesi, zebra balığı hücre hatlarında gerçekleştirilmek üzere modifiye edilmiş dört yaygın olarak kullanılan sitotoksisite tahlilini sunmaktadır (yani, 96 kuyucuklu plaka için hücre yoğunluğu, MTT testinde kuluçka süresi, kimyasal maruz kalma koşulu sırasında FBS tükenmesi ve SC için maksimum kabul edilebilir konsantrasyon). Bu analizler sitotoksisiteyi farklı hücre canlılık bitiş noktaları (metabolik ...

Kimyasal maddelerin insan sağlığı ve çevre açısından güvenlikleri açısından test edilmeleri gerekmektedir. Moleküler ve hücresel biyobelirteçler, düzenleyici kurumlar ve/veya mevzuatlar (örneğin, REACH, OECD, US EPA)1,2 tarafından canlı organizmalar üzerindeki etkileri tahmin etmek için güvenlik değerlendirmelerinde giderek daha fazla dikkate alınmaktadır, çünkü bunlar in vivo advers sonuçtan (örneğin, endokrin bozulma, immünolojik yanıt, akut toksisite, fototoksisite)3,4,5,6,7 . Bu bağlamda, sitotoksisite, balık akut toksisitesini tahmin etmek için bir ölçüm olarak alınmıştır 5,8; Bununla birlikte, ekotoksisite çalışmalarında, balıklar üzerindeki en çeşitli etkilerini (örneğin, endokrin bozucu etkiler) incelemek için kimyasal maddelerin alt sitotoksik konsantrasyonlarını tanımlamak gibi birçok başka uygulamaya sahip olabilir.
Hücre kültürü sistemlerinde (in vitro sistemler), kimyasal maddelerin sitotoksisitesi, sonlanım noktalarının tiplerinde farklılık gösteren yöntemlerle belirlenebilir. Örneğin, bir sitotoksisite yöntemi, hücre ölümü sürecinde gözlenen spesifik morfoloji ile ilgili bir son noktaya dayanabilirken, bir diğeri hücre ölümü, canlılık ve işlevsellik, morfoloji, enerji metabolizması ve hücre bağlanma ve çoğalmasının ölçülmesiyle sitotoksisiteyi belirleyebilir. Kimyasal maddeler hücre canlılığını farklı mekanizmalarla etkileyebilir, bu nedenle kimyasal etkileri tahmin etmek için farklı hücre canlılık sonlanım noktalarını kapsayan sitotoksisite değerlendirmesi gereklidir9.
MTT ve Alamar Blue (AB), hücre metabolik aktivitesine bağlı olarak hücre canlılığı üzerindeki etkileri belirleyen testlerdir. MTT testi, mitokondriyal enzim süksinat dehidrogenaz10'un aktivitesini değerlendirir. Sarımsı 3-[4,5-dimetiltiazol-2il]-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) formazan mavisine indirgenmesi sadece canlı hücrelerde meydana gelir ve optik yoğunluğu canlı hücrelerin sayısı ile doğru orantılıdır10. AB testi, resazurinin canlı hücreler tarafından resorufin'e indirgenmesi üzerine floresan ve renk değiştiren mitokondriyal enzimlerin aracılık ettiği hassas bir oksidasyon-indirgeme göstergesidir11; Bununla birlikte, sitozolik ve mikrozomal enzimler de AB ve MTT12'nin azaltılmasına katkıda bulunur. Bu enzimler, alkol ve aldehit oksidoredüktazları, NAD (P) H gibi çeşitli redüktazları içerebilir: kinon oksidoredüktaz, flavin redüktaz, NADH dehidrogenaz ve sitokromlar11.
Nötr Kırmızı (NR) testi, bu boyanın canlı hücrelerin lizozomlarına dahil edilmesine dayanan bir hücre canlılığı testidir13. NR alımı, hücrelerin pH gradyanlarını koruma kapasitesine bağlıdır. Lizozomların içindeki proton gradyanı, sitoplazmadan daha düşük bir pH tutar. Normal fizyolojik pH'da, NR yaklaşık sıfır net yük sunar ve bu da hücre zarlarına nüfuz etmesini sağlar. Böylece, boya şarj olur ve lizozomların içinde tutulur. Sonuç olarak, tutulan NR miktarı ne kadar büyük olursa, canlı hücrelerin sayısı da o kadar fazlaolur 14. Hücre yüzeyine veya lizozomal membranlara zarar veren kimyasal maddeler bu boyanın alımını bozar.
CFDA-testi, 5-karboksifloresein diasetat asetoksimil esterin (CFDA-) 15'in tutulmasına dayanan bir florometrik hücre canlılığı testidir. Bir esteraz substratı olan 5-CFDA-, polar olan ve canlı hücrelerin zarları tarafından geçirgen olmayan floresan bir madde olan karboksifloreseine dönüştürülür15; Böylece, sağlam bir hücre zarının iç tarafında tutulur ve canlı hücreleri gösterir.
Son zamanlarda, RTgill-W1 hücre hattını (gökkuşağı alabalığından kalıcı hücre hattı [Oncorhynchus mykiss] solungaç) kullanarak balık akut toksisitesini değerlendirmek için doğrulanmış bir ISO (Uluslararası Standardizasyon Örgütü) kılavuzunda (ISO 21115: 2019) 16 ve OECD (Ekonomik İşbirliği ve Kalkınma Örgütü) test yönteminde (OECD TG 249) üç sitotoksisite testi (CFDA-, NR ve AB tahlilleri) birleştirilmiştir17 . Balıkların akut toksisitesini tahmin etmek için mevcut hücre bazlı bir yöntem olmasına rağmen, diğer balık türleriyle benzer yöntemler geliştirmek ve yöntemin verimini artırmak için çabalar harcanmıştır. Bazı örnekler arasında, spesifik toksisite yolları18,19 için muhabir genlerle transfekte edilmiş ZFL hücre hatlarının geliştirilmesi, RTgill-W1 hücre hattı20'de fototoksisite testleri ve ZFL ve ZF4 hücre hatlarının (1 günlük embriyolardan türetilen zebra balığı fibroblastik ) çeşitli sitotoksisite tahlilleri ile toksisiteyi değerlendirmek için kullanılması21.
Danio rerio (zebra balığı), sucul toksisite çalışmalarında kullanılan başlıca balık türlerinden biridir; Bu nedenle, balık toksisitesi testi için zebra balığı hücre hatları ile hücre bazlı yöntemler son derece yararlı olabilir. ZFL hücre hattı, karaciğer parankimal hücrelerinin temel özelliklerini sunan ve ksenobiyotikleri 7,22,23,24,25 metabolize edebilen bir zebra balığı epitelyal hepatosit hücre hattıdır. Bu arada, ZEM2S hücre hattı, balık26,27 üzerindeki gelişimsel etkileri araştırmak için kullanılabilecek blastula aşamasından türetilen embriyonik bir zebra balığı fibroblastik hücre hattıdır. Bu nedenle, bu protokol, 96 delikli plakalarda ZFL ve ZEM2S hücre hatları ile yapılacak modifikasyonlarla dört sitotoksisite testini (MTT, AB, NR ve CFDA-testleri) tanımlamaktadır.

<table><tbody><tr><td>5-CFDA, (5-Karboksifloresein Diasetat, Asetoksimetil Ester)</td><td>Invitrogen</td><td>C1345</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü plakası, 96 oyuklu plaka</td><td>Sarstedt</td><td>83.3924</td><td>Yüzey: Standart, düz tabanlı</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>12800-017</td><td>Toz, yüksek glikoz, piruvat</td></tr><tr><td>FBS - Fetal Sığır Serumu, nitelikli, USDA onaylı bölgeler</td><td>Gibco</td><td>12657-029</td><td></td></tr><tr><td>Jambonun F-12 Besin Karışımı, toz</td><td>Gibco</td><td>21700026</td><td>Toz</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz'in L-15 Orta</td><td>Gibco</td><td>41300021</td><td>Toz</td></tr><tr><td>Nötr kırmızı&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4638</td><td>Toz, BioReagent, hücre kültürü için uygun</td></tr><tr><td>Orbital çalkalayıcı&nbsp;</td><td>Warmnest</td><td>KLD-350-BI</td><td>22 mm dönme çapı</td></tr><tr><td>Dulbeccos PBS (10X) kalsiyum ve magnezyum</td><td>Invitrogen</td><td>14080055</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (10.000 U/mL)</td> <td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin sodyum tuzu&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7017</td><td>Toz, BioReagent, hücre kültürü için uygun</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Orta</td><td>Gibco</td><td>31800-014</td><td>Toz</td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td>Toz, &nbsp; moleküler biyoloji için biyoreaktif</td></tr><tr><td>Tiazolil Mavi Tetrazolyum Bromür ve nbsp; % 98</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>M2128</td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi leke (% 0.4)</td> <td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (% 0.5), fenol kırmızısı</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>ZEM2S hücre hattı ATCC</td><td></td><td>CRL-2147</td><td>Bu hücre hattı, Profesör Dr. Michael J. Carvan (Wisconsin Üniversitesi, Milwaukee, ABD) tarafından</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> nazikçe bağışlanmıştır.</tbody></table>

zebra balığı hücre hatları ile sitotoksisite testleri

Cytotoxicity Assays with Zebrafish Cell Lines

Balık hücre hatları ekotoksisite çalışmalarında giderek daha fazla kullanılmaya başlanmıştır ve sitotoksisite testleri balık akut toksisitesini tahmin etmek için yöntemler olarak önerilmiştir. Bu nedenle, bu protokol, zebra balığı (Danio rerio) embriyo (ZEM2S) ve karaciğer (ZFL) hücre hatlarında 96 kuyucuklu plakalarda hücre canlılığını değerlendirmek için modifiye edilmiş sitotoksisite testleri sunar. Değerlendirilen sitotoksisite sonlanım noktaları mitokondriyal bütünlük (Alamar Blue [AB] ve MTT testleri), esteraz aktivitesi yoluyla membran bütünlüğü (CFDA-testi) ve lizozomal membran bütünlüğüdür (Nötr Kırmızı [NR] testi). Test maddelerinin 96 delikli bir plakaya maruz bırakılmasından sonra, sitotoksisite testleri yapılır; Burada, AB ve CFDA-aynı anda gerçekleştirilir, ardından aynı plakada NR yapılırken, MTT testi ayrı bir plakada gerçekleştirilir. Bu tahliller için okumalar, AB ve CFDA-için floresan ve MTT ve NR için absorbans ile alınır. Bu balık hücre hatları ile yapılan sitotoksisite testleri, kimyasal maddelerin balıklar üzerindeki akut toksisitesini incelemek için kullanılabilir.

Şekil 3, AB, CFDA-, NR ve MTT tahlillerinin plakalarını göstermektedir. AB tahlili için (Şekil 3A), canlı hücre sayısı az veya hiç olmayan boş kuyular ve kuyular mavi renk ve düşük floresan gösterirken, çok sayıda canlı hücreye sahip kuyular pembemsidir ve resazurinin (AB) canlı hücreler tarafından resorufin'e (pembemsi madde) dönüştürülmesi nedeniyle yüksek floresan değerleri sunar. CFDA-testi için, plakadaki kuyucukların renginde gözle görülür bir fark yoktur;...

Bu protokol, zebra balığı embriyo (ZEM2S) ve karaciğer (ZFL) hücre hatlarında 96 kuyucuklu plakalarda sitotoksisitenin değerlendirilmesi için uyarlanmış yaygın olarak kullanılan sitotoksisite testlerini (Alamar Blue [AB], CFDA-, Nötr Kırmızı ve MTT testleri) sunar.

Zebra Balığı Hücre Hatları ile Sitotoksisite Testleri

Fish cell lines have become increasingly used in ecotoxicity studies, and cytotoxicity assays have been proposed as methods to predict fish acute ...

Zebra balığı hücre hatlarını kullanan sitotoksisite testi protokolü, balıklardaki kimyasalların akut toksisitesi ile ilgili soruları cevaplayabilir veya diğer alternatif balık tahlilleri için uygun test konsantrasyonlarını tanımlamaya yardımcı olabilir. Bu 96 kuyucuklu plaka testinin temel avantajı, ekotoksisite çalışmalarında önemli bir balık türü olan zebra balığı hücreleri için sitotoksisiteyi belirlemek için farklı canlılık uç noktalarının birleştirilmesidir. Protokol çok basittir.Açıklanan tüm adımları doğru bir şekilde izlerseniz, herhangi bir sorunla karşılaşmamanız gerekir. Bu protokol, embriyonik hücrelerdeki hepatositler gibi farklı organlardan veya yaşam evrelerinden türetilen balık hücre hatlarındaki etkileri değerlendiren hayvan bazlı ekotoksisite çalışmalarının elde edilmesine yardımcı olur. ZEM2S veya ZFL hücrelerini kaplamaya başlamak için, tahliller için istenen sayıda hücreyi elde etmek için gereken ilgili hücre süspansiyonlarının hacmini hesaplayın.Steril bir reaktif rezervuarını, karşılık gelen hücre hattı için tam kültür ortamı ile doldurun ve hücre süspansiyonunun hesaplanan hacmini toplam 20 mililitre hacim için rezervuara aktarın. Çok kanallı pipet kullanarak, herhangi bir köpük veya kabarcık oluşturmadan çözeltiyi yavaşça yukarı ve aşağı karıştırın. Daha sonra çok kanallı mikropipeti kullanarak, ZEM2S hücreleri için kuyu başına 60.000 hücre ve ZFL hücreleri için kuyu başına 40.000 hücrelik canlı bir hücre sayısı elde etmek için şeffaf bir polistiren 96 delikli plakanın her bir kuyucuğuna 200 mikrolitre hücre süspansiyonu ekleyin.Plakayı 24 saat boyunca 28 santigrat derecede inkübe edin. Her iki hücre tipini de test kimyasallarının farklı konsantrasyonlarına maruz bırakmak için, fetal sığır serumu veya FBS olmadan ilgilenilen hücre hattı için kültür ortamında istenen konsantrasyonda test kimyasal çözeltileri hazırlayın. 24 saatlik inkübasyonu sonra, çok kanallı bir mikropipet kullanarak harcanan medyayı kuyulardan dikkatlice atın.Daha sonra, teknik üçlülere kuyu başına 100 mikrolitre belirli bir test kimyasal çözeltisi ekleyin, bu da her test kimyasal konsantrasyonu için üç kuyucuk anlamına gelir. Kontrol gruplarını teknik üçlü katlardaki test kimyasallarıyla aynı plakaya yerleştirin. Boş kontrol için, üç hücresiz kuyucuğa 100 mikrolitre pozlama ortamı ekleyin.Negatif kontrol için, maruz kalma ortamının 100 mikrolitresini hücreleri içeren üç kuyucuğa ekleyin. Pozitif kontrol için, hücreleri içeren üç kuyuyu, maruz kalma ortamında hazırlanan% 1'lik bir Triton X-100 çözeltisine maruz bırakın. Kültür ortamının buharlaşmasını önlemek için plakaları parafilm veya yapışkan sızdırmazlık folyosu ile kapatın ve plakaları 24 saat boyunca 28 santigrat derecede inkübe edin.Test kimyasal maruziyetinden 24 saat sonra, içeriği bir toplama tepsisine dökerek maruz kalma ortamını kuyucuklardan dikkatlice atın ve her bir kuyucuğu 200 mikrolitre PBS ile yıkayın. Daha sonra PBS'yi hücreleri kaybetmeden çıkarmak için, dikkatlice bir toplama tepsisine dökün. Alamar Blue veya AB ve CFDA-tahlillerini yapmak için, kuyu başına 100 mikrolitre ilgili çözeltiyi ekleyin ve plakayı karanlıkta 28 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin.Daha sonra, bir floresan plaka okuyucusundaki floresanı, metinde belirtilen uygun uyarma ve emisyon dalga boylarında ölçün. Nötr kırmızı veya NR testini gerçekleştirmek için, mililitre başına 40 mikrogram konsantrasyona sahip NR çalışma çözeltisini alın ve 10 dakika boyunca 600 G'de santrifüj yapın. Ardından, içeriği bir toplama tepsisine dökerek daha önce eklenen AB ve CFDA-çözümlerini kuyulardan dikkatlice çıkarın.Çok kanallı bir mikropipet kullanarak, kuyu başına 100 mikrolitre NR çalışma çözeltisi ekleyin ve plakayı üç saat boyunca 28 santigrat derecede inkübe edin. Kuluçka bittikten sonra, NR çözeltisini plakadan dikkatlice bir toplama tepsisine dökün ve kuyu başına 150 mikrolitre PBS ekleyerek kuyuları yıkayın. Yıkadıktan sonra, kuyu başına 150 mikrolitre NR ekstraksiyon çözeltisi ekleyin ve bir plaka okuyucu kullanarak emiciliği 540 nanometrede ölçmeden önce plakayı bir plaka çalkalayıcı üzerinde 10 dakika boyunca hafifçe çalkalayarak inkübe edin.MTT testini gerçekleştirmek için, 24 saatlik test kimyasal maruziyetinden sonra, içeriği bir toplama tepsisine dökerek ve çok kanallı bir mikropipet kullanarak maruz kalma ortamını dikkatlice çıkarın, karanlıkta kuyucuk başına 100 mikrolitre MTT çalışma çözeltisi ekleyin. Plakayı karanlıkta dört saat boyunca 28 santigrat derecede inkübe edin. Ardından, içeriği bir toplama tepsisine dökerek MTT çözeltisini atın ve formazan kristallerini çıkarmak için her bir oyuğa 100 mikrolitre DMSO ekleyin.Bir plaka okuyucu kullanarak absorpsiyonu 517 nanometrede ölçmeden önce plakayı bir plaka çalkalayıcı üzerinde 10 dakika boyunca inkübe edin. AP testi için, boş, pozitif kontrol ve test kimyasallarının yüksek sitotoksik konsantrasyonlarına karşılık gelen kuyucuklar, canlı hücrelerin yokluğunu veya azalmasını gösteren mavi renk ve düşük floresan göstermiştir. Buna karşılık, düşük sitotoksik test kimyasalı konsantrasyonlarına ve çok sayıda canlı hücre içeren negatif kontrole karşılık gelen kuyular, resazurini daha yüksek floresana sahip pembe resorufin'e dönüştürdü.NR testi için, test kimyasallarının yüksek sitotoksik konsantrasyonları ve pozitif kontrol, düşük emilimli şeffaf veya soluk pembe iken, NR boyasını koruyan canlı hücreler içeren kuyucuklar koyu pembe renk ve yüksek emilim göstermiştir. Benzer şekilde, MTT testi için, canlı hücreleri olmayan kuyular şeffaftır, canlı hücreler içerenler MTT'yi menekşe renkli formazan'a dönüştürür. Hesaplanan hücre canlılık yüzdelerine dayanarak, ZFL ve ZEM2S hücre hatlarındaki farklı test kimyasalları için yarım maksimum inhibitör konsantrasyonu veya IC50 değeri tahmin edilmiştir.FBS'li ve FBS'siz kültürler için hücre canlılığında anlamlı bir fark gözlenmemiştir, bu da FBS'den yoksun kültür medyasının 24 saatlik kimyasal maruz kalma süresi için uygunluğunu göstermektedir. MTT ve NR tahlilleri, DMSO konsantrasyonlarının% 0.1 ila% 1 arasında değişen hücre canlılığı üzerinde anlamlı bir etkisi olmadığını göstermiştir, bu da bu hücre hatlarının DMSO'nun% 1'e kadar çözücü olarak kullanımını desteklediğini göstermektedirTüm prosedür sırasında kendiliğinden ayrılmayı önlemek için kaplanmış hücreleri kullanırken özel dikkat gösterin ve herhangi bir boya çökelmesini önlemek için nötr kırmızı çalışma solüsyonunu dikkatlice hazırlayın. Bu prosedür, in vitro modeller kullanılarak balıklar üzerindeki kimyasal etkilerin çeşitli yönlerini ele alan çalışmalara uygulanabilir ve hayvan bazlı ekotoksisite çalışmalarının ilerlemesine katkıda bulunabilir.

cytotoxicity-assays-with-zebrafish-cell-lines

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bu videoda, in vivo tümör oluşumunu değerlendirmek ve terapötik ajanların etkisini incelemek için zebra balığı ksenogreft testi açıklanmaktadır.

Zebra Balığı Ksenogreft Testi: Zebra Balığı İn Vivo Tedavisinde Terapötiklerin Tümörojenite Üzerine Anti-kanser Etkinliğini Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Zebra balığı embriyoları kimyasal bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için kullanılır. Onlar harici geliştirmek ve kimyasallara duyarlı, ince phenotik değişikliklerin tespitine izin. Deney sadece doğrudan embriyo içeren plaka eklenir bileşik küçük bir miktar gerektirir, test sistemi verimli ve maliyet-etkin hale.

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

Zebrabalığı ksenogreft modelleri, in vivo mikroortamda yüksek üretimli ilaç taraması ve insan kanser hücrelerinin floresan görüntülemesini sağlar. Zebra balığında hasta kaynaklı lösemi örnekleri üzerinde otomatik floresan mikroskop donanımlı görüntüleme ünitesi kullanılarak büyük ölçekli, otomatik ilaç taraması için bir iş akışı geliştirdik.

Zebrabalığında Primer Hasta Kaynaklı Tümör Xenograftların İlaç Taraması

Bu protokol, cisplatin'i nefrotoksik ajan olarak kullanarak yetişkin zebra balıklarında Akut Böbrek Yaralanmasına (AKI) neden olacak prosedürleri açıklar. Renal dokuda inflamasyon ve hücre ölümünü analiz etmek için tekniğin tekrarlanabilirliğini ve iki tekniği değerlendirme adımlarını, akış sitometrisini ve TUNEL'i ayrıntılı olarak detaylandırdık.

Yetişkin Zebra Balıklarında Cisplatin tarafından İndüklenen Akut Böbrek Yaralanması Modeli

Bu makale, nöroblastom zebra balığı modelinde, özellikle kendiliğinden metastaz geliştiren MYCN ve LMO1'in aşırı ifade edilmesiyle transgenik zebra balığı hattında tümör metastazını gerçek zamanlı olarak geliştirme, karakterize etme ve izleme yöntemini tanıtır.

Nöroblastom Metastaz Zebra Balığı Modeli

Zebra balığı son zamanlarda potansiyel radyasyon değiştiricilerini doğrulamak için bir model olarak kullanılmıştır. Mevcut protokol, radyasyona dayalı tarama deneyleri için zebra balığı embriyolarını kullanmanın ayrıntılı adımlarını ve farklı tedavilerin ve radyasyonun etkisini değerlendirmek için bazı gözlemsel yaklaşımları açıklamaktadır.

Potansiyel Radyosensitizörleri veya Koruyucuları Değerlendirmek için Bir Model Olarak Zebra Balığı Larvaları

Burada, iki zebra balığı (Danio rerio) hücre hattının sferoidlerinin oluşumu için etkili, kolay ve hızlı bir 3D kültür protokolü sunuyoruz: ZEM2S (embriyo) ve ZFL (normal hepatosit).

Embriyonik ve Karaciğer Zebra Balığı Hücre Hatlarının Sferoidlerinin 3D Kültür Yöntemi

Zebra balığı T-akut lenfoblastik lösemi modelindeki hareketsiz hücreleri tanımlamak için hücre proliferasyon boyaması kullandık. Leke, bölünmeyen hücrelerde tutulur ve hücre proliferasyonu sırasında azaltılır, bu da daha fazla sorgulama için hareketsiz hücrelerin seçilmesini sağlar. Bu protokol, hücresel sessizlik bağlamında kendini yenilemeyi incelemek için işlevsel bir araç sağlar.

Zebra Balığı T Hücreli Akut Lenfoblastik Lösemi Modelinde Hareketsiz Hücrelerin Hücre Proliferasyonu Boyama Kullanılarak Tanımlanması 

Bu protokol, zebra balığı larvalarında döllenmeden 3-7 gün sonra bir ilaç tarama prosedürünü ve ardından morfolojik değerlendirmeyi tanımlar.

Erken Evre Zebra Balığı Larvalarında Küçük Molekül Taraması ve Toksisite Testi

Mikroplaka dayalı işlemler hücre dışı enzim aktivitesi, kolorimetrik veya florometrik analizi için tarif edilmiştir. Bu işlemler yönetilebilir bir süre içinde çevre örneklerin çok sayıda bu tür aktivitenin hızlı analizi için izin verir.

Yüksek Verimli Mikroplate Tahliller kullanarak Waters, Topraklar ve tortulları Mikrobiyal Ekstrasellüler Enzim Aktivitesi Belirlenmesi

Öğrenin, zebrafish ZEM2S ve ZFL hücre hatları ile 96-kuyucuk plakalarda sitotoksisite testleri yapmayı. Bu yöntem, kimyasalların akut toksisitesini değerlendirmek için hayvan kullanımını azaltır.

Zebra Balığı Hücre Hatları ile Sitotoksisite Testleri

Daha fazla video keşfet