Tip 1 Diyabetin Sıçan Yara Modelini Oluşturmak İçin Bir Protokol

Tip 1 diyabet yara modelleme sürecinin birçok detayı hataya eğilimlidir. Deneyimli araştırmacılar için zor bir zorluktur. Sonuç olarak, bu protokolü kullanmak gerekir.

Mümkün olan en basit şekilde, bu teknik, yara iyileşmesi olmaması, gecikmiş yeniden epitelizasyon ve azalmış anjiyogenez gibi kronik diyabetik yaraların bazı özelliklerini etkili bir şekilde çoğaltabilir. Streptozotosin çözeltisi hazırlandıktan hemen sonra kullanılmalıdır. Yarayı oluştururken, yaranın boyutunun ve yerinin düzenlenmesi gerektiğine bakın.

Streptozotosin tozunu,% 1'lik bir konsantrasyon elde etmek için litre sodyum sitrat tamponu başına uygun miktarda 0.1 mol içinde çözerek başlayın ve güzel bir kutuya yerleştirmeden önce bir ilaç osilatör kullanarak 30 saniye boyunca çalkalayın. % 1 streptozotosin çözeltisinin intraperitoneal enjeksiyonu için, sıçanı kavrayın ve karın derisini enjeksiyon bölgesinde açığa çıkarın. % 75 alkole batırılmış bir pamuk topu kullanarak enjeksiyon bölgesini iki kez dezenfekte edin ve sıçanın kafasını karnın altına yerleştirin.

İğneyi karın orta hattına paralel olarak 45 derecede yerleştirin. Ardından iğne açısını 30 dereceye düşürün ve iki ila üç milimetre yerleştirin. İğne tapasını yavaşça çekin, streptozotosin çözeltisini enjekte edin ve pamuklu çubukla uygulamadan önce iğneyi çekin.

3. ve 7. günlerde saat 9: 00'da nedensel kan şekeri seviyelerini ölçmek için, kaudal venin yerini bulun. Kanamayı indüklemek ve bir glukometre kullanarak kan şekerini ölçmek için kaudal veni delmeden önce% 75 alkol kullanarak sıçan kuyruğunu iki kez dezenfekte edin. İşiniz bittiğinde, kanamayı pamuklu çubukla durdurun.

Yara modellemeden bir gün önce sıçanın dorsum tarafındaki 5 x 5 santimetrelik alanı elektrikli bir tıraş bıçağı ile tıraş edin. Tıraş edilen bölgeyi ılık normal tuzlu pamuk topu ile silin ve tüy dökücü krem uygulamak için beş dakika boyunca kurumasını bekleyin. Alanı gazlı bezle temizleyin ve kalan tüy dökücü kremleri ılık normal tuzlu suyla yıkayın.

Daha sonra iyotla ıslatılmış pamuk topları ve alternatif turlarda% 75 alkol kullanarak sırt derisini iki kez dezenfekte edin. Kuruduktan sonra, cildi 20 milimetre çapında dairesel biyopsi zımbasıyla kesin. Cildi forseps ile destekleyin ve daha sonra zımba kesim izleri boyunca cildin tam kalınlığını çıkarmak için cerrahi makas kullanın.

Tamamlandığında, kanamayı normal bir tuzlu pamuk topu ile durdurun. Vazelin gazlı bezi kullanarak yarayı örtün. Üç günlük streptozotosin enjeksiyonundan sonra tüm sıçanlarda diyabet indüklendi ve kan şekeri seviyesi litre başına 16.7 milimolden daha yüksekti.

Glikoz seviyesi indüksiyondan beş hafta sonra stabilize edildi. Diyabetik grubun ağırlığı, streptozotosin enjeksiyonundan sonra kademeli olarak artmıştır. Kilo 3. haftada azaldı ve 4. haftadan itibaren yavaşça tekrar arttı.

Buna karşılık, normal grup sıçanının ağırlığı istikrarlı bir şekilde artmıştır. Üç günlük diyabet indüksiyonundan sonra ortalama ağırlıkları diyabetik gruptan daha yüksekti. Yaralanmadan sonraki 7. ve 14. günlerde yapılan makroskopik analiz, yeniden epitelizasyonun normal gruptaki sıçanlarda diyabetik gruba göre daha belirgin olduğunu ortaya koymuştur.

7. ve 14. günün kantitatif sonuçları, diyabetik grupta yara iyileşme hızının normal gruba göre anlamlı derecede düşük olduğunu ortaya koymuştur. Ancak 14. günde diyabetik grupta yara iyileşme oranı %90'ın üzerindeydi. Diyabetik yaralar, kıl köklerinin ve yağ bezlerinin daha az görünür kılcal damarlarla kısmi kaybını gösterdi.

CD31 immün boyama ile analiz edilen yara anjiyogenezinde, CD31 ekspresyonunun ortalama optik yoğunluğu, yara bölgesindeki anjiyogenezin normalde, diyabetik gruba göre anlamlı derecede yüksek olduğunu göstermiştir. Yarayı modellerken, epidermis, dermis ve deri altı dokusu dahil olmak üzere ön kalınlıktaki derinin çıkarıldığından emin olun.