Name: Glioblastoma için İmmünoterapi Stratejisi Olarak Fungal β-Glukanın İzolasyonu ve Saflaştırılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-02T14:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Öğrenin fungal β-glukanların saflaştırma protokolünü ve glioblastoma hücrelerine karşı mikroglia aktivasyonunu artırarak immünoterapi potansiyelini değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. Vasiliki Economopoulos'a ImageJ'deki fuluorescence sinyalini ölçmek için hazırladığı kurum içi senaryosu için teşekkür ederiz. Ayrıca CITIUS'a (Sevilla Üniversitesi) ve tüm personeline gösteri sırasındaki destekleri için teşekkür ederiz. Bu çalışma İspanyol FEDER I + D + i-USE, Sevilla Üniversitesi'nden US-1264152 ve Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades PID2021-126090OA-I00 tarafından desteklenmiştir

Bu protokolde açıklanan dört farklı mantar çeşidi ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bakınız Malzeme Tablosu).
1. Mantar β-glukanların izolasyonu
<ol><li>Çözünür mantar polisakkaritlerinin ekstraksiyonu ve izolasyonu NOT: Çözünür mantar polisakkaritleri (SMP'ler) Şekil 1'de şematik olarak gösterilen prosedüre göre elde edilmiştir.<ol><li>Taze P. ostreatus, P. djamor, H. erinaceus ve G. lucidum meyve veren cisimleri (yaklaşık 2.000 g / mantar) damıtılmış suda beş kez nazikçe durulayın.</li>
		<li>Meyve gövdelerini geleneksel bir hava kurutmalı fırında sabit bir ağırlığa ulaşana kadar (~ 24 saat) 50 ± 2 ° C'de kurutun.</li>
		<li>Kurutulmuş mantarları bir bıçak değirmeninde öğütün ve her mantardan yaklaşık 200 g toz elde edin.</li>
		<li>100 g mantar tozunu (MP) (P. ostreatus, P. djamor, H. erinaceus ve G. lucidum) 1.000 mLH2O'daaskıya alın. Ardından, 15 dakika boyunca 121 ° C'de otoklavlayın ve son olarak oda sıcaklığında 30 dakika bekletin.</li>
		<li>Elde edilen süspansiyonu 6.000 x g'de 4 °C'de 10 dakika boyunca santrifüjleyin.</li>
		<li>Çözünmeyen mantar polisakkaritleri (IMP) içeren çökeltiyi 50 ± 2 °C'de hava kurutmalı fırında 24 saat kurutun.</li>
		<li>Çökeltiyi atın ve süpernatantı koruyun. Süpernatantı döner bir evaporatörde 10 kez konsantre edin.</li>
		<li>SMP içeren konsantreyi gece boyunca 4 ° C'de etanol (% 80 nihai konsantrasyon) ile çökeltin.</li>
		<li>Etanol süspansiyonunu 6.000 x g'de 4 °C'de 15 dakika boyunca santrifüj edin, peleti koruyun (çökeltin) ve süpernatantı bir pipetle atın.</li>
		<li>ÇökeltiyiH2Od(% 10 w / v) içinde çözmeden önce% 80 etanol ile üç kez yıkayın. PH'ı 6.5/7'ye ve sıcaklığı 37 ° C'ye ayarlayın ve üreticinin talimatlarını izleyerek α-glukanları çözündürmek için sırasıyla 2 U ve 4 U α-amilaz ve glukoamilaz ile muamele edin (bkz.</li>
		<li>α-amilaz / glukoamilaz ile işlemden sonra, pH ve sıcaklığı sırasıyla 8.0 ve 50 ° C'ye ayarlayın ve proteinleri çözündürmek için alkalaz (2.5 U / g protein) ile muamele edin ( Malzeme Tablosuna bakınız). NOT: Bu sıralı enzimatik işlem, etanol çökeltisinde β-glukanlarla birlikte çökelen çoğu α-glukan ve proteini uzaklaştırır.</li>
		<li>Hidrolizden sonra, hidrolizatı 4 ° C'de 15 dakika boyunca 6.000 x g'de santrifüj edin ve temiz süpernatant döner bir evaporatörde beş kez konsantre olur. % 80 etanol ile tekrar çökeltin.</li>
		<li>Elde edilen çökeltiyiH2O'daçözünür ve düşük moleküler ağırlıklı molekülleri uzaklaştırmak için selüloz boru membranları (12.000 Da kesme membranları; bakınız Malzeme Tablosu) kullanarak 24 saat boyunca damıtılmış suda diyaliz yapın. Suda çözünür kısmı geri kazanın ve çözünür β-glukanlar (SβG'ler) üretmek için dondurarak kurutun.</li>
	</ol></li>
	<li>Şeker ve protein ölçümü<ol><li>Her fraksiyonun toplam şeker içeriğini, standart8 olarak glikoz kullanarak fenol-sülfürik asit yöntemiyle ölçün. NOT: β-glukan içeriğinin kantitasyonu, enzimatik hidrolize ve oksidoredüktazların aktivitesine dayanan β-glukan tahlil kiti (mantar ve maya; bakınız Malzeme Tablosu) kullanılarak da yapılabilir: yani ekzo-1,3-β-glukanaz, glikoz oksidaz, β-glukozidaz ve peroksidaz, daha sonra kinoneimin oluşumu ile. Küçük değişikliklerle üreticinin talimatlarını izleyin.</li>
		<li>12 MH2SO 4 yerine 18 MH2SO4 kullanın.</li>
		<li>Toplam glukanların ve α-glukanların içeriğini ayrı ayrı değerlendirin.</li>
		<li>Elde edilen β-glukan değerlerini, Kjeldahl protokolünü takiben toplam glukan ve α-glukan (üçlü) değerleri arasındaki fark olarak ölçün. Bazı durumlarda, protein içeriği, kalibrasyon eğrisi11,12'yi çizmek için albümin kullanılarak Lowry yöntemiyle belirlenebilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Ultraviyole absorpsiyon spektroskopisi analizi<ol><li>200-400 nm bölgesindeki numuneleri tarayarak UV görünür bir spektrofotometre kullanarak SβG ultraviyole (UV) spektrumlarını elde edin (Malzeme Tablosuna bakınız) (Şekil 2).</li>
		<li>Her bir SβG'den 1.0 mg/mL'siniH2OD'dehazırlayın, çözeltiyi bir kuvars küvete aktarın ve oda sıcaklığında tarayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Moleküler ağırlık dağılımı analizi<ol><li>Bir kırılma indisi dedektörü ve ultra hidrojel lineer jel filtrasyon sütunu (300 mm x 7,8 mm; Şekil 3).</li>
		<li>Tahlilini 40 °C'de, 0,5 mL/dak-1 akış hızında elüent olarak deiyonize su ve standart olarak dextrans (110, 80 ve 50 kDa) kullanarak gerçekleştirin (bkz. 5 mL'lik bir fraksiyon toplayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Fourier dönüşümü kızılötesi (FTIR) analizi<ol><li>Kızılötesi spektrumları (Şekil 4) 4000-500 cm-1 aralığında bir FTIR spektrometresine kaydedin. Numuneler daha önce film oluşturmak için KBr ile karıştırılmalıdır (standart FTIR prosedürü; üreticinin talimatlarına ve Malzeme Tablosuna bakınız).</li>
	</ol></li>
	<li>Moleküler kompozisyon analizi<ol><li>SβG'lerin moleküler bileşimlerini, standart prosedürleri izleyerek yüksek performanslı ince tabaka kromatografisi (HPTLC) ve kütle spektrometresine (GC-MS) bağlı gaz kromatografisi ile tahmin edin12.</li>
	</ol></li>
</ol>2. β-glukan kaynaklı mikroglia stimülasyonunun in vitro çalışması
<ol><li>8 kuyucuklu odacıklı slaytlarda fare glioblastoma ve mikroglia hücrelerinin hücre kültürü NOT: Bu protokol GL261 (glioblastoma) ve BV2 (mikroglia) hücre hatları için spesifiktir. Bununla birlikte, küçük değişikliklerle, bu adımlar potansiyel olarak diğer kanser ve bağışıklık hücresi hatlarını incelemek için kullanılabilir.<ol><li>Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle's medium (DMEM) komple ortamını L-glutamin, 4.5 g / L D-glikoz ile modifiye edilmiş ve piruvat olmadan hazırlayın. Fetal sığır serumunun (FBS) %10'unu ve %1'ini penisilin/streptomisin ekleyin (bakınız Malzeme Tablosu). Malzemeyi 37 ° C'de bir su banyosunda 15 dakika boyunca önceden ısıtın.</li>
		<li>Dondurulmuş BV2 ve GL261 aliquotlarını 2 dakika boyunca bir su banyosuna (37 ° C) çözün ve tamamen çözülmeden hemen önce, onları laminer bir akış başlığına taşıyın ve hücreleri iki farklı steril T25 şişesine (her hücre hattı için bir tane) plakalayın.</li>
		<li>T25 şişelerini 37 ° C'de,% 5 CO2'de kültür birleşene kadar inkübe edin. NOT: Donma koşullarına ve kriyoprezervasyon altındaki süreye bağlı olarak, birleşme süresi değişebilir. Bu hücre hatları genellikle bir T75 şişesinde akıcılığa ulaşmak için 3 ila 5 gün gerektirir.</li>
		<li>BV2 hücre kültürü birleştikten sonra, 0.6 x 106 hücre / kuyucuklu 8 delikli oda slaytlarına aktarın. 8 delikli oda slaytlarını inkübatörde 24 saat boyunca saklayın.</li>
		<li>Mikroglia hücreleri 8 delikli oda slaytlarına kaplandıktan sonra, GL261 hücreleri ile aynı protokolü tekrarlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Mikroglia'nın β-glukanlarla aktivasyonu<ol><li>BV2 hücrelerini dört farklı β-glukan (P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum ve H. erinaceus) ile 72 saat boyunca 0.2 mg / mL konsantrasyonda kaplayın. Bir deneysel koşul, kontrol grubu olarak hareket ederek tedavi edilmeden (normal ortam) kalmalıdır.</li>
		<li>Süpernatantı 72 saat sonra bir pipetle toplayın ve kalan hacmi 0,20 μm'lik bir şırınga filtresinden geçirin. Ardından, süpernatantı -80 ° C'de en az 24 saat dondurun.</li>
	</ol></li>
	<li>GL261'in önceden aktive edilmiş mikroglia şartlandırılmış ortam ile tedavisi<ol><li>GL261, 8 delikli hazneli kızaklar içinde% 80 oranında birleştiğinde, 72 saat boyunca% 25'lik bir son hacim konsantrasyonunda (toplam hacim: 250 μl / kuyu) β-glukanla muamele edilmiş mikroglial ortam (adım 2.2.2) ekleyin.</li>
		<li>72 saatlik inkübasyondan sonra ortamı çıkarın ve atın.</li>
		<li>Hücreleri fosfat tampon salin (PBS; pH 7.4, 0.1 M) ile 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.</li>
		<li>15 dakika boyunca 4 ° C'de 200 μL% 4 paraformaldehit (PFA) ekleyerek hücreleri sabitleyin. NOT: İmmünofloresan için kullanılabilecek farklı antikorlara bağlı olarak, fiksasyon yöntemleri tipik% 4 PFA'dan farklı olabilir. Alkol bazlı fiksatifler, bazı epitopların korunmasında daha etkili olabilir.</li>
	</ol></li>
	<li>İmmünofloresan çalışması<ol><li>Numuneleri PBS ile triton X (PBST; %0,01) ile 10 dakika boyunca üç kez yıkayın.</li>
		<li>PBST'yi çıkarın ve oda sıcaklığında 30 dakika boyunca PBST'de (Tablo 1) sığır serum albümini (BSA) bloke edici tamponu% 10 ekleyin.</li>
		<li>Bloke edici tamponu çıkarın ve birincil antikor karışımını içeren PBS kuyucuğu başına 200 μL ekleyin (1:500 sıçan Ki-67 monoklonal antikoru ve 1:500 tavşan parçalanmış kaspaz-3 antikoru; bakınız Malzeme Tablosu). Gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin.</li>
		<li>4 ° C'de 24 saat inkübasyondan sonra, numuneleri oda sıcaklığında 30 dakika bekletin.</li>
		<li>Kuyucukları bir çalkalayıcıda PBS ile 10 dakika boyunca üç kez yıkayın (düşük hız).</li>
		<li>PBS'yi çıkarın ve karanlıkta oda sıcaklığında 45 dakika boyunca ikincil antikorların (1:200 eşek anti-sıçan IgG (H + L) yüksek oranda çapraz adsorbe edilmiş ikincil antikor, Alexa Fluor 488 ve 1:200 eşek anti-tavşan IgG (H + L) yüksek oranda çapraz adsorbe edilmiş ikincil antikor, Alexa Fluor 647; bkz.</li>
		<li>Numuneleri PBS ile çok amaçlı bir çalkalayıcıda 10 dakika yıkayın.</li>
		<li>PBS'yi çıkarın ve 1 dakika boyunca PBS'de (1:5.000) seyreltilmiş 4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) kuyucuğu başına 200 μL ekleyin.</li>
		<li>DAPI'yi çıkarın (bkz. malzemeler tablosu) ve hücreleri PBS'de 5 dakika yıkayın.</li>
		<li>Kuyu çerçevesini çıkarın ve her bir oyuğa 50 μL PBS:gliserol (1:1) ekleyin ve bir kapak kayması ile örtün.</li>
		<li>Slaytları oje ile kapatın.</li>
		<li>Konfokal mikroskop sistemi kullanarak 20x'te görüntüler elde edin (bkz.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Tümör hücresi proliferasyonu ve apoptozun nicelleştirilmesi ve analizi
NOT: Farklı β-glukanların tümör hücresi proliferasyonu ve apoptoz üzerindeki potansiyel etkisini ölçmek için, ImageJ yazılımında Ki67 (proliferasyon) ve cCasp3 (apoptoz)13'ün pozitif piksellerinin sayısını ölçmek için şirket içi bir komut dosyası kullanılmıştır.
<ol><li>ImageJ'yi açın. Eklentiler düğmesine tıklayın. Daha önce eklenti klasörüne yüklenmiş bir eklenti olan Coloc2'ye tıklayın ve son olarak analiz etmek için resmi seçin11. NOT: Bu eklenti, Dr. Vasiliki Economopoulos (veconom@uwo.ca) ile önceki temasın ardından mevcuttu. Komut dosyası yerine, hem ImageJ hem de Fiji yazılımı, benzer özelliklere sahip kolokalizasyon analizi için farklı araçlara sahiptir (bkz.</li>
	<li>Eşikleri kontrol (işlenmemiş, yalnızca DMEM) koşullarına göre ayarlayın. Tamam düğmesine tıklayın. NOT: Arka plan ve yoğunluk tutarsızlıklarını önlemek için, tüm görüntüler aynı koşullar altında çekilmelidir. Tercihen, görüntüleme seansları aynı gün yapılmalı ve mikroskop parametreleri görüntüler arasında değişmeden yapılmalıdır.</li>
	<li>Birlikte yerelleştirilmiş piksellerin elde edilen görüntülerinin ve eşiğin üzerindeki piksellerin yüzdesini veya ham sayısını sağlayan bir özet penceresinin açıldığından emin olun. Kontrol (tedavi edilmemiş) koşullarına göre sonuçları normalleştirin. NOT: Tüm veriler SEM'± ortalama olarak verilmiştir. İstatistiksel analiz grafik ve analiz yazılımı kullanılarak gerçekleştirilmiştir (bakınız Malzeme Tablosu). Tukey'in çoklu karşılaştırma testi ile tek yönlü ANOVA kullanıldı. Hatalar, ortalamanın (s.e.m.) standart hatası olarak temsil edilir (*p < 0.05, **p < 0.01).</li>
</ol>

<ol><li>Aldape, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+to+curing+primary+brain+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Challenges to curing primary brain tumours.</a> Nature Reviews. Clinical Oncology. 16 (8), 509-520 (2019).</li>
<li>Himes, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+in+glioblastoma%3A+current+understanding+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression in glioblastoma: current understanding and therapeutic implications.</a> Frontiers in Oncology. 11, 770561(2021).</li>
<li>Ma, J., Chen, C. C., Li, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%2Fmicroglia+in+the+glioblastoma+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Macrophages/microglia in the glioblastoma tumor microenvironment.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (11), 5775(2021).</li>
<li>Sevenich, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+%26%2334%3Bcold%26%2334%3B+into+%26%2334%3Bhot%26%2334%3B+tumors-opportunities+and+challenges+for+radio-immunotherapy+against+primary+and+metastatic+brain+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Turning &#34;cold&#34; into &#34;hot&#34; tumors-opportunities and challenges for radio-immunotherapy against primary and metastatic brain cancers.</a> Frontiers in Oncology. 9, 163(2019).</li>
<li>Niesel, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+suppressive+microenvironment+affects+efficacy+of+radio-immunotherapy+in+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The immune suppressive microenvironment affects efficacy of radio-immunotherapy in brain metastasis.</a> EMBO Molecular Medicine. 13 (5), e13412(2021).</li>
<li>McCann, F., Carmona, E., Puri, V., Pagano, R. E., Limper, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+internalization+of+fungal+beta-glucans+is+not+necessary+for+initiation+of+related+inflammatory+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophage internalization of fungal beta-glucans is not necessary for initiation of related inflammatory responses.</a> Infection and Immunity. 73 (10), 6340-6349 (2005).</li>
<li>Vetvicka, V., Teplyakova, T. V., Shintyapina, A. B., Korolenko, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+medicinal+fungi-derived+%CE%B2-glucan+on+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fungi%22%5BJournal%5D)">Effects of medicinal fungi-derived β-glucan on tumor progression.</a> Journal of Fungi. 7 (4), 250(2021).</li>
<li>Chan, G. C. F., Chan, W. K., Sze, D. M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+beta-glucan+on+human+immune+and+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hematology+%26+Oncology%22%5BJournal%5D)">The effects of beta-glucan on human immune and cancer cells.</a> Journal of Hematology & Oncology. 2, 25(2009).</li>
<li>Lowry, O. H., Rosebrough, N. J., Farr, A. L., Randall, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+measurement+with+the+Folin+phenol+reagent%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Protein measurement with the Folin phenol reagent.</a> The Journal of Biological Chemistry. 193 (1), 265-275 (1951).</li>
<li>Klaus, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidative+activities+and+chemical+characterization+of+polysaccharides+extracted+from+the+basidiomycete+Schizophyllum+commune%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Antioxidative activities and chemical characterization of polysaccharides extracted from the basidiomycete Schizophyllum commune.</a> Food Science and Technology. 44 (10), 2005-2011 (2011).</li>
<li>Soto, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3-mediated+astrocyte+reactivity+associated+with+brain+metastasis+contributes+to+neurovascular+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">STAT3-mediated astrocyte reactivity associated with brain metastasis contributes to neurovascular dysfunction.</a> Cancer Research. 80 (24), 5642-5655 (2020).</li>
<li>Chromý, V., Vinklárková, B., Šprongl, L., Bittová, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Kjeldahl+method+as+a+primary+reference+procedure+for+total+protein+in+certified+reference+materials+used+in+clinical+chemistry.+I.+A+review+of+Kjeldahl+methods+adopted+by+laboratory+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The Kjeldahl method as a primary reference procedure for total protein in certified reference materials used in clinical chemistry. I. A review of Kjeldahl methods adopted by laboratory medicine.</a> Critical Reviews in Analytical Chemistry. 45 (2), 106-111 (2015).</li>
<li>Waterborg, J. H., Matthews, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lowry+method+for+protein+quantitation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The Lowry method for protein quantitation.</a> Methods in Molecular Biology. 32, 1-4 (1994).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+antioxidant+activities+of+polysaccharides+from+thirteen+boletus+mushrooms%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Characterization and antioxidant activities of polysaccharides from thirteen boletus mushrooms.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 113, 1-7 (2018).</li>
<li>Barbosa, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obtaining+extracts+rich+in+antioxidant+polysaccharides+from+the+edible+mushroom+Pleurotus+ostreatus+using+binary+system+with+hot+water+and+supercritical+CO2%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Obtaining extracts rich in antioxidant polysaccharides from the edible mushroom Pleurotus ostreatus using binary system with hot water and supercritical CO2.</a> Food Chemistry. 330, 127173(2020).</li>
<li>Ma, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+polysaccharides+from+mycelia+of+genus+Ganoderma+by+mid-infrared+and+near-infrared+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Assessment of polysaccharides from mycelia of genus Ganoderma by mid-infrared and near-infrared spectroscopy.</a> Scientific Reports. 8 (1), 10(2018).</li>
<li>Nie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune-enhancing+effects+of+polysaccharides+MLN-1+from+by-product+of+Mai-luo-ning+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Agricultural+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immune-enhancing effects of polysaccharides MLN-1 from by-product of Mai-luo-ning in vivo and in vitro.</a> Food and Agricultural Immunology. 30 (1), 369-384 (2019).</li>
<li>Cerletti, C., Esposito, S., Iacoviello, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edible+mushrooms+and+beta-glucans%3A+impact+on+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Edible mushrooms and beta-glucans: impact on human health.</a> Nutrients. 13 (7), 2195(2021).</li>
<li>Klaus, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+edible+mushroom+Laetiporus+sulphureus+as+potential+source+of+natural+antioxidants%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Food+Sciences+and+Nutrition%22%5BJournal%5D)">The edible mushroom Laetiporus sulphureus as potential source of natural antioxidants.</a> International Journal of Food Sciences and Nutrition. 64 (5), 599-610 (2013).</li>
<li>Kozarski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+polysaccharide+extracts+of+Agaricus+brasiliensis+fruiting+bodies%3A+chemical+characterization+and+bioactivities+at+different+levels+of+purification%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Research+International%22%5BJournal%5D)">Dietary polysaccharide extracts of Agaricus brasiliensis fruiting bodies: chemical characterization and bioactivities at different levels of purification.</a> Food Research International. 64, 53-64 (2014).</li>
<li>Ayimbila, F., Keawsompong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+composition+and+antioxidant+property+of+crude+polysaccharides+from+the+fruiting+bodies+of+Lentinus+squarrosulus%5BTitle%5D)+AND+%223+Biotech%22%5BJournal%5D)">Functional composition and antioxidant property of crude polysaccharides from the fruiting bodies of Lentinus squarrosulus.</a> 3 Biotech. 11 (1), 7(2021).</li>
<li>de Azambuja, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ki-67+as+prognostic+marker+in+early+breast+cancer%3A+a+meta-analysis+of+published+studies+involving+12%2C155+patients%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Ki-67 as prognostic marker in early breast cancer: a meta-analysis of published studies involving 12,155 patients.</a> British Journal of Cancer. 96 (10), 1504-1513 (2007).</li>
<li>Holubec, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+apoptosis+by+immunohistochemical+markers+compared+to+cellular+morphology+in+ex+vivo-stressed+colonic+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Assessment of apoptosis by immunohistochemical markers compared to cellular morphology in ex vivo-stressed colonic mucosa.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 53 (2), 229-235 (2005).</li>
<li>Borges, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+polysaccharide+production+by+a+strain+of+Pleurotus+djamor+isolated+in+the+south+of+Brazil+and+antitumor+activity+on+Sarcoma+180%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Extracellular polysaccharide production by a strain of Pleurotus djamor isolated in the south of Brazil and antitumor activity on Sarcoma 180.</a> Brazilian Journal of Microbiology. 44 (4), 1059-1065 (2014).</li>
<li>Sohretoglu, D., Huang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganoderma+lucidum+polysaccharides+as+an+anti-cancer+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Anti-Cancer+Agents+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Ganoderma lucidum polysaccharides as an anti-cancer agent.</a> Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 18 (5), 667-674 (2018).</li>
</ol>

Beyan edilecek rakip çıkarlar yoktur.

Bu çalışma, SβG'lerin içeriğini dört farklı mantardan başarılı bir şekilde izole etmek, saflaştırmak ve karakterize etmek için köklü tekniklerin kullanımını açıklamaktadır. Sonuçlar, P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum ve H. erinaceus'tan elde edilen SMP'lerin sıcak su ekstraksiyonundan ve ardından α-amilaz, glukozidaz ve proteaz ile hidrolitik işlemden sonra, α-glukan ve protein içeriğinin nasıl azaldığını ve böylece saf SβG'lerin miktarını önemli ölçüde zenginleştirdiğini göstermiştir.</e...

Nöro-onkoloji alanında yeni başarıların ortaya çıkmasına rağmen, glioblastoma hastalarının yaşam beklentisi yetersiz kalmaktadır. Beyin tümörlerine karşı altın standart tedaviler cerrahi, radyoterapi ve kemoterapinin birleştirilmesine dayanır. Bununla birlikte, son on yılda, immünoterapi, farklı kanser türlerini tedavi etmek için güçlü bir strateji olarak ortaya çıkmıştır1. Bu nedenle, vücudun tümör hücrelerine karşı bağışıklık tepkisini kullanma olasılığı son zamanlarda onkolojinin dördüncü ayağı haline gelmiştir.
Alandaki en büyük zorluklardan birinin, tümör mikroçevre2'de bulunan güçlü immünsüpresyonun üstesinden gelmek olduğu uzun zamandır bilinmektedir. Özellikle, beyin kanserinin en yaygın ve agresif formlarından biri olan glioblastoma durumunda, bu tür pro-tümöral senaryoları düzenleyen kilit yolları çözmek ve bağışıklık sisteminin iç karartıcı tepkisine karşı koyabilecek yeni bileşikler bulmak, bu tedavi edilemez hastalığa karşı gelecekteki tedavilerin yolunu açabilir.
Beyin kendi bağışıklık sistemi hücrelerine sahiptir ve en alakalı hücre tipi mikrogliadır. Bu hücrelerin farklı merkezi hastalıklarda oldukça karmaşık bir davranışa sahip oldukları kanıtlanmıştır3. Primer beyin tümörleri (örneğin, glioblastoma) durumunda, bu hücreler beyin parankimini kolonize etmek için tümör hücrelerini destekleyen bir anti-enflamatuar fenotipe doğru kaydırılır3. Çok sayıda yayın, tümör progresyonu sırasında bu hücrelerin ana rolünü arttırmıştır. Bunun başlıca nedenlerinden biri, glioma ile ilişkili mikroglia ve infiltrasyon makrofajlarının (GAM'lar) toplam tümör kütlesinin üçte birini oluşturmasıdır, bu nedenle beyin tümörü ilerlemesi sırasında aktivasyon durumlarının kesin etkisini düşündürmektedir 4,5.
Bu bağlamda, mantar β-glukanlar, fagositoz ve pro-inflamatuar faktörlerin üretimi de dahil olmak üzere etkili immün yanıtları tetikleyen ve zararlı ajanların eliminasyonuna yol açan güçlü moleküller olarak tanımlanmıştır 6,7,8,9,10. Mantar β-glukanlar genellikle farklı mantar parçalarından elde edilen ekstraktlar kullanılarak incelenmiştir. Bununla birlikte, spesifik etkilerin atfedilmesi, belirsizliklerden kaçınmak ve immünomodülatör ajanlar gibi moleküllerin etki mekanizmasını anlayabilmek için saflaştırılmasını gerektirir8.
Bu çalışmada, çözünür β-glukanlar, düzenli olarak yenilebilir (Pleurotus ostreatus ve Pleurotus djamor) ve tıbbi (Ganoderma lucidum ve Hericium erinaceus) mantarlar olarak kullanılan dört farklı mantarın meyve veren gövdesinden saflaştırılır. Özellikle, bu dört mantar gıda ve ilaç endüstrisinde büyük kullanıma sahiptir ve ticari bir işletmede çevre dostu bir döngüsel ekonomi içinde üretilmiştir (bakınız Malzeme Tablosu).
Beyin kanseri tedavilerinde mantar β-glukanların gelecekteki kullanımının temelini atmak için, iyi tanımlanmış saflaştırma stratejileri ve bağışıklık sistemi hücreleri ile varsayılan etkileşimlerini araştıran klinik öncesi çalışmalar, anti-tümör aracıları olarak potansiyel rollerini değerlendirmek için gereklidir. Bu çalışma, seçilen mantarın meyve veren gövdelerinde bulunan çözünür β-glukanları elde etmek için gereken sayısız izolasyon ve saflaştırma adımını açıklamaktadır. Başarılı bir şekilde saflaştırıldıktan sonra, mikroglia hücreleri enflamatuar fenotiplerini arttırmak için aktive edilir. Fare glioblastoma hücreleri (GL261), daha önce bu ekstraktlarla muamele edilen farklı bir mikroglia şartlandırılmış ortam ile kaplanır ve daha sonra tümör hücrelerinin davranışları üzerindeki etkisi değerlendirilir. İlginç bir şekilde, laboratuvarımızdan yapılan pilot çalışmalar (veriler gösterilmemiştir), pro-inflamatuar mikroglia'nın sadece glioblastoma hücrelerinde değil, diğer kanser hücre hatlarında da tümör hücresi göçünü ve istila özelliklerini nasıl yavaşlatabileceğini ortaya çıkarmıştır. Bu multidisipliner çalışma, onkoloji araştırmacılarının birçok farklı tümör türünde bağışıklık tepkisini artırabilen umut verici bileşikleri test etmeleri için yararlı bir araç sağlayabilir.

<table><tbody><tr><td>8 kuyulu odacıklı kızaklar</td><td>Thermo Fisher, ABD</td><td>171080</td><td></td></tr><tr><td>Hava kurutma fırını</td><td>J.P. Selecta S.A., İspanya</td><td>2000210</td><td></td></tr><tr><td>Albümin</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>Alcalase</td><td>Novozymes, Danimarka</td><td>proteaz</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488</td><td>Thermofisher, Amerika Birleşik Devletleri</td><td>A32731</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647</td><td>Thermofisher, ABD</td><td>A32728</td><td></td></tr><tr><td>Bıçaklı değirmen</td><td>Retsch, Almanya</td><td>&nbsp; SM100</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini</td><td>MERK, Almanya</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Selüloz boru membranı</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis</td><td>D9402</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>MERK, Almanya</td><td>Eppendorf, 5810R</td><td></td></tr><tr><td>Kolokalizasyon fişleri</td><td>ImageJ</td><td></td><td>(https://imagej.net/imaging/colocalization-analysis&nbsp;)</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>MERK, Almanya</td><td>28718-90-3</td><td></td></tr><tr><td>Dextrans</td><td>Pharmacosmos, Holbalk, Danimarka</td><td>Dextran 410, 80, 50</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&akut; s modifiye Eagle ve akut; s medium, Gluta MAXTM</td><td>Gibco, Life Technologies, Carlsbad, CA, ABD</td><td>10564011</td><td></td></tr><tr><td>Extenda (&alpha;- Amilaz/Glukoamilaz)</td><td>Novozymes, Danimarka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Gibco, Life Technologies, Carlsbad, CA, ABD</td><td>A4736301</td><td></td></tr><tr><td>FT-IR spektrometresi</td><td>Bruker-Vertex, İsviçre</td><td>VERTEX 70v</td><td></td></tr><tr><td>Grafik ve analiz yazılımı</td><td>GraphPad Prizma (GraphPad Yazılımı, Inc.)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>H2SO4</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HPLC sistemi</td><td>Waters Corp, Milford, MA, ABD</td><td>Waters 2695 HPLC</td><td></td></tr><tr><td>İnkübatörü</td><td>Eppedorf</td><td>Galaxy 170S</td><td></td></tr><tr><td>Kütle Spektometresi</td><td>Q Exactive GC, Thermo Scientific</td><td>725500</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>MERK, Almanya</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / streptomisin</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis</td><td>P4458</td><td></td></tr><tr><td>pH metre</td><td>Crison, Barselona, İspanya</td><td>Temel 20</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Gibco, Life Technologies, Carlsbad, CA, ABD</td><td>1010-015</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan Parçalanmış Kaspaz-3 (Asp175) Antikoru</td><td>Abcam, İngiltere</td><td>ab243998</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan Ki-67 Monoklonal</td><td>Thermofisher, ABD</td><td>MA5-14520</td><td></td></tr><tr><td>Döner buharlaştırıcı</td><td>B&uuml; chi Ib&eacute; rica S.L.U., İspanya</td><td>El Rotavapor R-100</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-hidrojel lineer jel filtrasyon kolonu (300 mm x 7,8 mm)</td><td>Waters Corp, Milford, MA, ABD</td><td>WAT011545</td><td></td></tr><tr><td>UV-Görünür spektrofotometre</td><td>Amersham Bioscience, İngiltere</td><td>Ultrospec 2100 pro</td><td></td></tr><tr><td>VectaMount</td><td>Vektör Laboratuvarları, C.A, ABD</td><td>H-5000-60</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu</td><td>J.P. Selecta S.A., İspanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zeiss LSM 7 DUO Konfokal Mikroskop Sistemi.</td><td>Zeiss, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&beta;-glukan Test Kiti</td><td>Megazyme, Bray, Co. Wicklow, İrlanda</td><td>K-BGLU&</td><td></td></tr><tr><td>beta;-glukanlar</td><td>Setas y Hongos del Sur, S.L.</td><td></td><td>Dört çeşit mantar sağladı</td></tr></tbody></table>

glioblastoma için İmmünoterapi stratejisi olarak fungal β-glukan'ın İzolasyonu ve saflaştırılması

Isolation and Purification of Fungal &#946;-Glucan as an Immunotherapy Strategy for Glioblastoma

Glioblastoma karşı etkili tedaviler geliştirmedeki en büyük zorluklardan biri, tümör mikro ortamındaki güçlü bağışıklık baskılanmasının üstesinden gelmektir. İmmünoterapi, bağışıklık sistemi tepkisini tümör hücrelerine karşı çevirmek için etkili bir strateji olarak ortaya çıkmıştır. Glioma ile ilişkili makrofajlar ve mikroglia (GAM'lar) bu tür anti-enflamatuar senaryoların ana itici güçleridir. Bu nedenle, GAM'larda anti-kanseröz yanıtın arttırılması, glioblastoma hastalarını tedavi etmek için potansiyel bir ko-adjuvan tedaviyi temsil edebilir. Bu damarda, mantar β-glukan molekülleri uzun zamandır güçlü bağışıklık modülatörleri olarak bilinmektedir. Doğuştan gelen bağışıklık aktivitesini uyarma ve tedavi yanıtını iyileştirme yetenekleri tanımlanmıştır. Bu modüle edici özellikler kısmen, ilginç bir şekilde, GAM'larda büyük ölçüde ifade edilen örüntü tanıma reseptörlerine bağlanma yeteneklerine atfedilir. Bu nedenle, bu çalışma, glioblastoma hücrelerine karşı mikroglia'nın tümör öldürücü tepkisini arttırmak için mantar β-glukanların izolasyonu, saflaştırılması ve daha sonra kullanılmasına odaklanmıştır. Fare glioblastomu (GL261) ve mikroglia (BV-2) hücre hatları, mevcut biyofarmasötik endüstrisinde yoğun olarak kullanılan mantarlardan ekstrakte edilen dört farklı mantar β-glukanının immünomodülatör özelliklerini test etmek için kullanılır: Pleurotus ostreatus, Pleurotus djamor, Hericium erinaceus ve Ganoderma lucidum. Bu bileşikleri test etmek için, önceden aktive edilmiş mikroglia şartlandırılmış bir ortamın glioblastoma hücrelerinde proliferasyon ve apoptoz aktivasyonu üzerindeki etkisini ölçmek için ko-stimülasyon testleri yapıldı.

β-glukanların başarılı bir şekilde saflaştırılması Ekstraksiyon ve saflaştırma işlemini takiben P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum ve H. erinaceus'un meyve veren cisimciklerinden elde edilen MP, SMP ve SβG'lerin kütlesi Tablo 1'de özetlenmiştir. Mantarlardan elde edilen MP, SMP ve SβG'lerin temel bileşimi (toplam karbonhidratlar, β-glukanlar ve protein) Tablo 2'de gösterilmiştir. Bu sonuçlar, protokolün SMP'lerde büyük miktarda pro...

Bu protokol, dört farklı mantar β-glukanının saflaştırma adımlarını ve sonraki çalışmalarını, glioblastoma hücrelerine karşı mikroglia'nın anti-tümöral özelliklerini geliştiren potansiyel immünomodülatör moleküller olarak tanımlamaktadır.

Glioblastoma için İmmünoterapi Stratejisi Olarak Fungal β-Glukan'ın İzolasyonu ve Saflaştırılması

One of the biggest challenges in developing effective therapies against glioblastoma is overcoming the strong immune suppression within the tumor ...

Fungal beta-glukanlar bağışıklık sisteminin önemli modülatörleridir. Saflık ve izolasyon protokollerinin arttırılması, kanser tedavisi için ortak adjuvan olarak potansiyel rollerini ortaya koymak için gereklidir. Moleküler biyoloji ve proteomik laboratuvarlarda yaygın olarak bulunan çeşitli cihazlar kullanılarak dört farklı beta-glukandan oluşan yüksek bir dereceye ulaşıldı.Bu protokol, beta-glukanların beynin en bol bulunan yerleşik bağışıklık hücresi olan mikroglia üzerindeki etkilerini test etmeye odaklanmaktadır. Glioblastomada mikroglia fenotipini modüle etmek, önemli bilgiler sağlayabilir. Pleurotus ostreatus, Pleurotus djamor, Hericium erinaceus ve Ganoderma lucidum'un taze meyve veren gövdelerini damıtılmış suyla beş kez durulayarak çözünür mantar polisakkaritlerinin veya SMP'lerin ekstraksiyonuna başlayın.Daha sonra, yıkanmış meyve veren gövdeleri, her mantardan yaklaşık 200 gram toz elde eden bir bıçak değirmeninde öğütmeden önce yaklaşık 24 saat boyunca geleneksel bir hava kurutma fırınında 50 santigrat derecede tamamen kurutun. Daha sonra, dört mantar tozunun veya MP'nin 100 gramını 1.000 mililitre damıtılmış suda askıya alın ve süspansiyonu 15 dakika boyunca 121 santig

isolation-purification-fungal-glucan-as-an-immunotherapy-strategy-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video protokolü neurosphere tahlil kültürü yöntemi kullanılarak insan glioblastoma mutliforme cerrahi rezeksiyon (GBM) tümör dokusu hücreleri gibi izolasyon ve kök genişlemesi göstermektedir.

Neurosphere Testi İnsan Glioblastoma Multiforme Tümör Hücreleri İzolasyon ve Genişleme

Bu video, reaktif bir oksijen türü olan süperoksit radikallerinin üretimi için mikroglial hücreleri aktive etmek için β-glukanların kullanıldığı bir in vitro testi göstermektedir. Beyin kanseri hücrelerinde, üretilen reaktif oksidanlar, tümör hücresi proliferasyonunu aktif olarak baskılar ve hücre ölümünü indükler.

Beyin Kanseri Hücrelerine Karşı Bir İmmünoterapi Stratejisi Olarak Test β-Glukanı Analiz Etmek İçin Bir Test

Video, tümöre sızan periferik kan mononükleer hücrelerinin mekanik ayrışma ve enzimatik sindirim kullanılarak bir fare beyninden izolasyonunu göstermektedir. Bunu, daha fazla analiz için bağışıklık hücrelerini toplamak için yoğunluk gradyan santrifüjlemesi takip eder.

Murin Beyninden Tümör İçeren Bağışıklık Hücrelerinin İzole Edilmesi

Kanser kök hücre fenotipi olan hücreler için seçmek üzere serumsuz nörosfer ortamında ayrışmış yüksek dereceli glioma cerrahi örneklerinin yayılması için protokol. Nörosfer olarak yetişemeyen örnekler için alternatif bir protokol önerilmiştir. İmmünostokimya için 3D nörosfer mimarisini korumak için bir parafin gömme tekniği tanımlanmıştır.

Klinik Olarak İlgili Hayvan Modellerinde ve 3D İmmün entrikalarda Kullanılmak Üzere Cerrahi Örneklerden Yüksek Dereceli Glioma Hücre Kültürünün Optimizasyonu

Kemoterapi ve radyasyon bakım standardının lenfodepletiktif ve immünomodülatör etkileri, T hücresi immünoterapisinin antitümör etkinliğini artırmak için kullanılabilir. EGFRvIII'e özgü kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin üretilmesi ve bunların glioblastoma bakım standardı bağlamında uygulanması için bir yöntemin ana hatlarını çiziyoruz.

Bakım Glioblastoma Standardı Kapsamında Adoptif Tedavisi için CAR T hücrelerinin üretilmesi

Erken beyin tümörü mikro giren bağışıklık hücrelerinin sayısının ve aktivasyon durumu ile ilgili zamana bağlı nicel verileri verir glioma-infiltre periferik kan mononükleer hücrelerinin izolasyonu ve akım sitometri analizi için bir basit bir yöntem burada sunulmuştur.

İzolasyon ve Glioma-sızmakta periferik kan mononükleer hücrelerinin Akışı Sitometrik Analizi

Kanserin kötü huylu davranışını anlamak, tümör hücrelerinin makrofajlar gibi tümör mikro çevresinin bileşenleriyle nasıl etkileşime girdiğine dair doğru modeller oluşturmayı gerektirir. Burada, tümörle ilişkili makrofajlar ve mikroglia ile glioblastoma hücre etkileşimini incelemek için iki yöntem tanımlanmıştır ve burada glioblastoma invazyonu üzerindeki etki değerlendirilmektedir.

Coculture Tahliller Glioblastoma Invasion Makrofaj ve Mikroglia Stimülasyon Eğitim için

Tümör arayan tedavi mezenkimal kök hücre (MSCs) invaziv glioblastoma için bir tedavi olarak umut verici. En uygun nakli MSCs teslimini iskele Tümör rezeksiyonu den içine içerir. Burada, glioblastoma tedavisinde MSC çalışmaya preklinik teknikleri de dahil olmak üzere sağlanan: görüntü güdümlü Tümör rezeksiyonu; MSC numaralı seribaşı iskele implantasyonu; ve ameliyat sonrası terapi izleme.

Görüntü güdümlü rezeksiyon Glioblastoma ve kafa içi tedavi kök hücre numaralı seribaşı iskele implantasyonu

Burada, orthotopic insan birincil beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi farelerde hazırlık ve allojenik insan lenfosit stereotaksik yönetim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çalışmada bir kanıtı-of-concept fizibilite ve hücresel immunotherapies intrabrain teslim antitümör etkinliği için sağlar.

Orthotopic insan Glioblastoma Multiforme Xenografts fare modelleri sitotoksik bağışıklık hücrelerinin stereotaksik evlat edinen Transfer

3D kültürler yetiştirilen Neurospheres tümörü biyoloji eğitim için güçlü bir araç oluşturur. Burada parafin katıştırma üzerinden tümörü neurospheres 3D yapısını koruyarak immünhistokimya gerçekleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem, tümörü neurosphere özellikleri stemness ve sinirsel farklılaşma gibi karakterizasyonu sağlar.

Biyolojik gliyom immünhistokimya parafin gömülü 3D tümörü Neurosphere kültürü üzerinde tarafından değerlendirilmesi

Öğrenin fungal β-glukanların saflaştırma protokolünü ve glioblastoma hücrelerine karşı mikroglia aktivasyonunu artırarak immünoterapi potansiyelini değerlendirin.

Glioblastoma için İmmünoterapi Stratejisi Olarak Fungal β-Glukan'ın İzolasyonu ve Saflaştırılması

Daha fazla video keşfet