C57BL/6J Farede Santral Kord Sendromu Modelinin Kurulması

Farelerde merkezi kord sendromunu (CCS) simüle eden mevcut protokol, tekrarlanabilirliği artırmış ve deney hayvanlarında operasyon hasarını en aza indirerek anatomik yapıyı aşırı derecede bozmaktan kaçınmıştır. Bu çalışmadaki strateji, tutarlı sonuçlar üreterek yaralanma mekanizmalarının araştırılmasına izin verdiği için avantajlıdır.

Merkezi kord sendromunun hayvan modelleri daha sonra klinik öncesi araştırmalara fayda sağlayabilir. Bu çalışmadaki strateji, tutarlı sonuçlar üreterek yaralanma mekanizmalarının araştırılmasına olanak sağladığı için avantajlıdır. Farelerde merkezi kord sendromunu simüle eden mevcut protokol, tekrarlanabilirliği artırmış ve deney hayvanlarına yönelik operasyonel hasarı en aza indirmiştir.

Anatomik yapılarının bozulmasını önlemek. Cerrahi aletleri ve omurilik yaralanması koaksiyel platformunu düzenleyerek başlayın. Fare uygun şekilde uyuşturulduktan sonra, ikinci torasik omurun veya T2'nin dikenli süreci olan hayvanın boynunun arkasındaki orta hat boyunca küçük çıkıntıyı tanımlayın. Boynun arkasındaki T2 dikenli işlemi çevreleyen saçları tıraş edin ve cildi üç alternatif Iota 4 solüsyonu ve% 75 etanol ile dezenfekte edin.

Ardından, fareyi ameliyat masasına yüzüstü pozisyonda yerleştirin. Gözleri korumak için bir göz merhemi sürün. Servikal omurga eğrisinin kavislenmesini kolaylaştırmak için hayvanın göğsünün altına 3 ila 4 milimetre kalınlığında bir ped yerleştirin, bu da interlaminar boşluğun açığa çıkmasına ve ayrıca ameliyat sırasında engelsiz bir hava geçişine izin verir.

Daha sonra, mikroskop altında çalışırken, T2 spinöz işlemine odaklanan 1 ila 1,5 santimetre uzunlamasına bir kesi yapmak için bir neşter kullanın ve fasyal tabakayı ortaya çıkarın. Mikro makas yardımıyla, T2 spinöz sürecini net bir şekilde ortaya çıkarmak için T2'nin üzerindeki yağ dokusunun bir kısmını çıkarın. Mikro makası kullanarak, orta hat boyunca bilateral trapez ve eşkenar dörtgen kasları C5'ten T2'ye ayırın.

Ardından, C5 ila T2 omurlarının laminasındaki kasları ayırın ve kas tabakasını yanlara geri çekmek için mikro ekartörler kullanın. Omurların yüzeyinde bulunan multifidus ve servikal omurga kaslarını kesin. Dikenli süreçlerin en yüksek noktasını belirleyerek T2 omurunu bulun.

Daha sonra, altıncı servikal vertebra veya C6 bulunana kadar, rostral uca doğru hareket ederek T2'den art arda dikenli süreçleri incelemeye devam edin. Forseps kullanarak, laminayı kesmeden önce omuriliği ortaya çıkarmak için C6 laminasını kaldırın. C6 ila C7 faset eklemlerini vertebral stabilizatör ile sıkıştırın ve kilitleyin.

Ağırlık ucunu açıkta kalan omurilik ile hizalayın ve ucun alt kısmının omuriliğin dorsal yüzeyine paralel olduğundan emin olun. Ağırlığın omuriliği sıkıştırmasına izin vermek için manşonu ayarlayın. Ağırlık omurilik ile sabit bir göreceli pozisyonu koruduğunda ayarlamayı bırakın.

Beş dakikalık bir sıkıştırmaya izin verdikten sonra ağırlığı ve vertebral stabilizatörü çıkarın. Mikroskop altında, sıkışmadan kaynaklanan omurilikteki renk değişikliklerini gözlemleyin. Steril fosfat tamponlu salin kullanarak operasyon bölgesini durulayın.

Bunu takiben, alanı temizlemek için emme kullanın. Polipropilen emilmeyen 6-0 sütür kullanarak kasları ve cildi katmanlar halinde dikin. Cerrahi bölgeyi dezenfekte ettikten sonra, fareyi kafesine geri döndürmeden önce tam bilincini geri kazanana kadar ılık bir ped üzerine yerleştirin.

Omurilik sagital bölümünün hematoksilen ve eozin veya H&E boyaması, gri cevherde hasar gören alanın ağır yaralanma grubunda hafif yaralanma grubundakinden daha geniş olduğunu düşündürdü. Koronal HE kesitleri, her iki grupta da lezyonun esas olarak gri cevherde bulunduğunu gösterdi. Şiddetli grupta, gri maddeyi çevreleyen beyaz maddenin yapısı daha fazla etkilenmiş olsa da, ana hatları hala korunmuştur.

İmmünofloresan boyama ayrıca, gri maddeyi çevreleyen beyaz maddenin şiddetli grupta etkilenmiş olmasına rağmen, hala nispeten sağlam olduğunu ortaya koydu. Hafif veya şiddetli grupta yaralanmadan yedi gün sonra sagital HE bölümlerinde kırmızı kan hücresi bulunmadı. Prusya mavisi boyaması sadece şiddetli grupta hemosiderozu ortaya çıkardı.

İmmünofloresan, hem hafif hem de şiddetli yaralanmada yüksek GFAP ve Iba1 ekspresyonu alanlarını ortaya çıkardı, bu da inflamatuar bir yanıt ve glial skar oluşumunu düşündürdü. Ayrıca, şiddetli grup, hafif gruba göre daha büyük bir lezyon alanı sergiledi. Manyetik rezonans görüntüleme, her iki grupta da yüksek sinyal anahattı olan lezyonda hipoitens sinyal değişikliği olduğunu düşündürdü.

Şiddetli grup, önemli ölçüde daha büyük bir hipo-yoğun sinyal alanı gösterdi. Laminanın önündeki ve arkasındaki yumuşak dokuların mümkün olduğunca çıkarılması, lamina gevşemesini ve paralel kesim sırasında açıklık kesiminde kanıtlanmış hasarı kolaylaştırır. Mevcut protokol faz hacmi, merkezi kord sendromunu modeller ve sinyalin daha iyi anlaşılmasını ve araştırılmasını sağlar.