Name: Çamur Yengeçlerinde Yumurtalık Olgunlaşmasını Artırmak için Göz Sapı Ablasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Öğrenin, çamur yengeçlerinde göz sapı ablasyonu ile yumurtalık olgunlaşmasını artırma yöntemini. Koterizasyon ve cerrahi teknikler kullanılarak üreme biyolojisi araştırmaları için etkili bir protokol sunulmaktadır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Malezya Eğitim Bakanlığı tarafından, Malezya Terengganu Üniversitesi Tropikal Su Ürünleri Yetiştiriciliği ve Balıkçılık Enstitüsü'ne akredite edilmiş Yüksek Kurum Mükemmeliyet Merkezi (HICoE) programı kapsamında Malezya Eğitim Bakanlığı tarafından desteklenmiştir (Vot No. 63933 & Vot No. 56048). Universiti Malaysia Terengganu ve Sayap Jaya Sdn. Bhd.'nin Özel Ortaklık Araştırma Bursu (Vot. No. 55377) aracılığıyla desteğini kabul ediyoruz. Universiti Sains Malaysia'dan Khor Waiho ve Hanafiah Fazhan'a kadar ek bir Akademik Araştırmacı pozisyonu da kabul edilmektedir.

Bu protokol, Malezya Laboratuvar Hayvanları Bilimi Derneği tarafından özetlenen Bilimsel Amaçlar için Hayvanların Bakımı ve Kullanımı için Malezya Uygulama Kurallarına uygundur. Deneysel örneklerin kurban edilmesi, Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na göre yapılmıştır (NIH Yayınları No. 8023, gözden geçirilmiş 1978). Cinsel olarak olgunlaşmamış dişi çamur yengeçleri (turuncu çamur yengeci S. olivacea), Malezya'daki Setiu Sulak Alanları'ndaki yerel pazardan (5 ° 66 ′ 62 ′ ′ N, 102 ° 72 ′ 33 ′ ′ E) toplandı. Çamur yengeç türleri morfolojik özelliklere göre tanımlanmıştır1.
1. Numune toplama ve dezenfeksiyon
<ol><li>Sağlıklı, aktif ve olgunlaşmamış dişi çamur yengeçlerini toplayın (Şekil 1). NOT: Prematüre dişi yengeçler, 80-85 mm'lik bir CW aralığı ile birlikte üçgen ve açık renkli karın fleplerine sahiptir.</li>
	<li>Kalıntıları ve ozmofilik parazitleri gidermek için yengeçleri klorlu musluk suyuyla (tatlı su) yıkayın.</li>
	<li>Yengeçleri 30 dakika boyunca 20 ppt tuzluluk ile 150 ppm formaldehit içinde bekletin.</li>
	<li>Formaldehit tedavisi sırasında hava taşlarıyla sürekli ve nazik havalandırma sağlayın. Havalandırma kaynağı, merkezi bir havalandırma hattından veya bir akvaryum havalandırma pompasından olabilir.</li>
	<li>Artık formaldehitleri gidermek için yengeçleri akan deniz suyuyla yıkayın.</li>
</ol><img alt="Prematüre ve olgun dişi yengeç morfolojisi karşılaştırması; boyut ölçeği referansı dahildir; Deniz biyolojisi." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65039/65039fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Şekil 1: Cinsel olgunlaşma aşamalarını tanımlamak için kullanılan dişi çamur yengeçlerinin karın morfolojisi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65039/65039fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
2. İklimlendirme
<ol><li>Dezenfekte edilen her dişi ayrı bir 32 L dairesel tanka aktarın.</li>
	<li>Dişileri 20 ppt tuzlulukta 3 gün boyunca destekleyin ve yengeç vücut ağırlığının yaklaşık% 4 -% 5'inde doğranmış deniz balıklarıyla günde iki kez (sabah 09: 00 ve akşam 20: 00 pm) beslenmeye devam edin.</li>
	<li>Sabah beslenmeden önce sifonlayarak fazla ve yenmemiş yemleri çıkarın.</li>
	<li>Yengeç yetiştiriciliği deniz suyunun% 10'unu (20 ppt) günlük olarak değiştirin.</li>
</ol>3. Cinsel olgunluk için indüklenmiş kalıplama
<ol><li>Sterilize edilmiş makas kullanarak yüzme bacakları hariç tüm bacakları kesin.<ol><li>Yengeci bir kepçe ağı ile yakalayın ve yengeci dikkatlice tutun. Önce her iki şelayeti ve ardından ikinci eklemdeki yürüme bacaklarını makas kullanarak kesin. Yengeç, hasarlı uzantıları otomatik olarak otonize edecektir. Ekstremite ototomisi için anestezi gerekli değildir.</li>
	</ol></li>
	<li>Ekstremite ototomisinden hemen sonra yengeci tatlı suda yıkayın.</li>
	<li>Ekstremite ototomize yengeçleri ayrı ayrı delikli plastik sepetlere (28 cm L x 22 cm G x 7 cm Y) aktarın ve bir fiberglas tanka (305 cm L x 120 cm G x 60 cm Y) yerleştirin. NOT: İki sepet birbirine bağlanabilir ve kırpılabilir. Üst sepet kapak olarak kullanılır, böylece yengeç sepetten kaçamaz.</li>
	<li>Tüm plastik sepetin suya batırıldığından emin olmak için 20 ppt tuzluluğa ve en az 10 cm su derinliğine sahip bir devridaim su ürünleri yetiştiriciliği sistemi (RAS) kullanın.</li>
	<li>Ekstremite ototomize dişi yengeci, yengeç vücut ağırlığının% 5-7'sinde günde iki kez doğranmış deniz balıklarıyla beslemeye devam edin.</li>
	<li>Yengeçleri kalıplama yoluyla cinsel olarak olgunlaşana kadar destekleyin (35 gün). NOT: Ticari yumurtalık olgunlaşması ve yabani olgun dişi çamur yengeçleri ile tohum üretimi için indüklenmiş küflenme atlanabilir. Vahşi doğadan hasat edilen olgun dişiler iklimlendirilmeli ve doğrudan soğuk şok anestezisine ve ardından göz konuşması ablasyonuna tabi tutulmalıdır.</li>
</ol>4. Anestezi
<ol><li>CW &gt;86 mm ile koyu renkli oval şekilli karın flebi olan cinsel olarak olgun kadınları seçin (Şekil 1).</li>
	<li>Yengeçleri bir kepçe ağı ile yakalayın ve anestezi için ayrı ayrı küçük akvaryumlarda saklayın.</li>
	<li>5 dakikalık iklimlendirme süresinden sonra, her akvaryuma 2 mL / L'de 2-fenoksietanol (2-PE) ekleyin ve 15 dakikalık anestezi tedavisine izin verin.</li>
	<li>Yengeçlerin kendiliğinden hareket eksikliği ile tamamen uyuşturulduğundan emin olun.</li>
</ol>5. Göz konuşması ablasyonu
<ol><li>Koterizasyon tekniği<ol><li>Tüm yordamları bir masanın üstünde ve açık bir alanda gerçekleştirin.</li>
		<li>Ahşap veya plastik saplı düz başlı nikel-çelik metal bir çubuk (örneğin bir tornavida) alın ve sapı ıslak pamuklu bir havluyla örtün.</li>
		<li>İki paslanmaz cerrahi forseps'i bir otoklavda sterilize edin.</li>
		<li>Bir sprey şişesinde% 70 etanol hazırlayın ve üfleme meşalesi ve kırmızı sıcak tornavida gibi yangınla ilgili kaynaklardan uzak tutun. Kağıt mendili kullanıma hazır bulundurun. NOT: Etanol oldukça yanıcıdır. Yangın kaynaklarından güvenli bir mesafeyi koruyun.</li>
		<li>Bir üfleme fenerini bir gaz tüpüne (bütan) güvenli bir şekilde bağlayın. DİKKAT: Üfleme feneri ve gaz tüpü üzerindeki talimatları izleyin. Gaz tüpüne bağlanırken üfleme fenerinin kapalı olduğundan emin olun. Gaz tüpünde belirtilen tüm yangın güvenliği önlemlerini okuyun ve takip edin.</li>
		<li>Sıcak nesnelerden yaralanmayı önlemek için kalın pamuklu eldivenler giyin.</li>
		<li>Metal çubuğun ucunu, metal çubuk parlak kırmızı olana kadar üfleme fenerinin ateşine maruz bırakın.</li>
		<li>Anestezi uygulanan yengeci ıslak pamuklu bir havluyla örtün. NOT: Gereksiz hasarları önlemek için yengeç antenlerini örtün.</li>
		<li>Yengecin bir gözünü sterilize forseps ile tutun. NOT: Forsepsleri ilk kez kullanım için bir otoklavda sterilize edin ve daha sonra diğer yengeçlerde kullanmak için% 70 etanol kullanarak dezenfekte edin.</li>
		<li>Kırmızı-sıcak metal düz ucu yengeç gözünün üzerine tutun ve göz konuşması turuncu veya kırmızımsı-turuncu bir renge dönene kadar yaklaşık 10-15 s hafifçe bastırın. Bitişik yapılara zarar vermemek için bu adımı uygularken dikkatli olun. NOT: Koterizasyon yöntemini takiben göz konuşması ablasyonunu uygulamak için iki kişiye ihtiyaç vardır: biri yengeci tutmak için, diğeri ablasyon prosedürünü gerçekleştirmek için.</li>
		<li>Yengeçler arasında çapraz kontaminasyon olmadığından emin olmak için forsepsleri% 70 etanol spreyi ile dezenfekte edin. NOT: Potansiyel yangın tehlikelerini önlemek için% 70 etanol kullanılarak dezenfeksiyondan önce forsepslerin soğutulmasını sağlamak için göz sapı ablasyon prosedüründen sonra bu adımı sadece en az 5 dakika bekleyerek gerçekleştirin.</li>
		<li>Tüm yengeçlerde göz sapı ablasyonunu gerçekleştirdikten sonra, sıcak nikel çelik metal çubuğu (tornavida) musluk suyuna batırın.</li>
		<li>Tekrar kullanmadan önce havluyu dezenfekte edin. Zamandan tasarruf etmek için birden fazla havlu kullanılabilir. NOT: Havluyu musluk suyuyla yıkayın ve 5 dakika boyunca 30 ppm klorlu suya batırın. Ardından, havluyu tekrar musluk suyuyla yıkayın ve 1 g / L sodyum tiyosülfat çözeltisine batırın.</li>
		<li>Blowtorch'u kapattıktan sonra güvenli bir yerde tutun ve bağlantıyı kesmeden önce ortam sıcaklığına (yaklaşık 30 dakika) dönene kadar bekleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Cerrahi teknik<ol><li>Prosedürü iyi havalandırılan bir alanda gerçekleştirin.</li>
		<li>İki cerrahi makas ve forsepsleri bir otoklavda sterilize edin.</li>
		<li>100 mL'lik bir cam beherin içine 50 mL% 70 etanol dökün.</li>
		<li>Kalın pamuklu eldivenler giyin.</li>
		<li>Anestezi uygulanmış yengeci tutun ve ıslak pamuklu bir havluyla örtün.</li>
		<li>Yengecin bir gözünü sterilize forseps ile tutun.</li>
		<li>Sterilize cerrahi makas kullanarak göz konuşmasını hızla kesin. NOT: Hemolenf, yengecin yaralı kısmından kaybolabilir.</li>
		<li>Makas ve forsepsleri her kullanımdan sonra p etanol içine batırın ve tekrar kullanmadan önce kağıt mendil kullanarak kurulayın.</li>
	</ol></li>
</ol>6. Anestezi sonrası bakım
<ol><li>20 ppt filtrelenmiş deniz suyu hazırlayın ve sürekli havalandırmalı bir baş üstü tankında tutun.</li>
	<li>Yerçekimi suyu akışı için havai tanka esnek bir boru bağlayın.</li>
	<li>Göz konuşması ablasyonundan hemen sonra, yengeci sepete yerleştirin ve yengeci baş üstü tanktan akan deniz suyuna (ortam suyu sıcaklığı: 28 ° C) maruz bırakın.</li>
	<li>Deniz suyunun akmasını sağlayın ve yengeci kendiliğinden hareket edene kadar izleyin, bu da anesteziden iyileşmeyi gösterir. NOT: Deniz suyu bir toprak tankında hazırlanabilir ve su akışı için bir dalgıç su pompası kullanılabilir.</li>
	<li>Daha fazla gözlem için yengeçleri ayrı ayrı 20 ppt deniz suyunda 30 dakika boyunca bir akvaryumda havalandırma ile saklayın. NOT: Geri kazanılan yengeçler, sonraki yavru kültür sürecinde ayrı ayrı kültürlenecektir.</li>
</ol>7. Yumurtalık olgunlaşmasının gözlenmesi
<ol><li>Damızlık yetiştiriciliği<ol><li>Olgun yengeçleri bireysel 32 L dairesel tanklara aktarın.</li>
		<li>Günde iki kez doğranmış deniz balıklarıyla (-20 ° C'de dondurulmuş) beslenmeye devam edin (sabah 09:00 ve akşam 20:00) ve sabah beslenmeden önce yenmemiş yemleri çıkarın.</li>
		<li>Yavruları 20 ppt tuzlulukta 30 gün boyunca ayrı ayrı destekleyin.</li>
		<li>Dışkıyı çıkarın ve günlük deniz suyunun% 10'unu (20 ppt) değiştirin.</li>
	</ol></li>
	<li>Diseksiyonu<ol><li>Diseksiyon tepsisini, makası ve forsepsleri p etanol ile temizleyin.</li>
		<li>2-PE daldırma anestezi yöntemi ile kadınları ayrı ayrı uyuşturun.</li>
		<li>Gonadal aşamalarını doğrulamak için göz konuşması ablasyonundan geçmemiş yeni olgun kadınları (pre-matür dişilerin erimesinden sonra) rastgele seçin.</li>
		<li>Tüm göz ağrısı ablatlı deney kadınlarını ayrı ayrı feda edin ve gonad olgunlaşma aşamalarını tanımlayın. Keskin bir steril baykuş kullanarak yengeç torasik ganglionlarını yok edin. Yumurtalıkları görünür kılmak için önce üst kabuğu ve ardından hepatopankreası çıkarın. Yumurtalık rengini gözlemleyin ve yumurtalık olgunlaşma aşamasını tanımlayın (Şekil 2).</li>
	</ol></li>
	<li>Yumurtalık olgunlaşma aşamalarının tanımlanması<ol><li>Yumurtalık rengini çıplak gözle veya stereomikroskop altında gözlemleyin.</li>
		<li>Yumurtalık olgunlaşma aşamalarını renklendirme30'a göre tanımlayın: olgunlaşmamış (aşama-1) yarı saydam veya kremsi beyaz bir renk gösterir; erken olgunlaşma (aşama-2) soluk ila açık sarımsı bir renk gösterir; (iii) ön olgunlaşma (aşama-3) sarı ila açık turuncu renk gösterir; ve (iv) tamamen olgunlaşmış (aşama-4) koyu turuncu ila kırmızımsı bir renk gösterir.</li>
	</ol></li>
</ol>

Yazarların hiçbirinde çıkar çatışması yoktur.

Bu protokol, çamur yengeci Scylla spp.'nin göz konuşması ablasyonu için geliştirilmiştir ve gonad olgunlaşmasını indüklemek için etkili bir yöntem olarak uygulanabilir. Bu protokol, çamur yengeçlerinin ticari yumurtalık olgunlaşması için kolayca çoğaltılabilir ve çamur yengeç tohumu üretiminde gizli süreyi (bir yumurtlamadan diğerine geçen süre) azaltmak için uygulanabilir.
Kabukluların (yani, tatlı su karidesi, deniz karidesi) göz konuşması ablasyonu tipik olarak gonad olgunlaşmasını...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Scylla cinsine ait dört çamur yengeç türünün tümü, su ürünleri yetiştiriciliğinde ticari açıdan önemli kabuklu türleridir 1,2. Çamur yengeçleri de dahil olmak üzere kabukluların büyümesi ve bunların pre-olgun (alt yetişkin veya ergen) fazdan cinsel olarak olgun (yetişkin) faza dönüşümü, yaşlı ve daha küçük dış iskeletlerin periyodik olarak dökülmesini içeren bir kalıplama işlemi ile gerçekleşir. Carapace genişliği (CW), şelayedler ve abdominal flep morfolojileri, Scylla spp'nin cinsel olgunluğunu belirlemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. 3,4,5. Kalıplama işlemi çeşitli hormonların etkisiyle düzenlenir ve çok miktarda enerji gerektirir6. Normal kalıplama işlemine ek olarak, gönüllü olarak veya dış faktörler tarafından indüklenen uzuvların kaybı, hayatta kalma oranlarını etkilemeden yengeçlerin erimesini hızlandırır 7,8,9. Bu nedenle, uzuv ototomisi, yumuşak kabuklu çamur yengeç yetiştiriciliği endüstrisinde erime indüksiyonu için yaygın olarak kullanılmaktadır 7,9.
Tek taraflı veya iki taraflı göz konuşması ablasyonu çoğunlukla gonad olgunlaşması ve tohum üretimi için tatlı su karidesi ve deniz karidesinde popülerdir10,11,12,13. Kabuklularda yaygın göz konuşması ablasyon teknikleri şunları içerir: (i)14,15 ipi kullanarak göz konuşmasının tabanında ligasyon; (ii) sıcak forseps veya elektrokoter cihazları kullanılarak göz konuşmasının koterizasyonu16; (iii) açık bir yara bırakmak için göz konuşmasının çıkarılması veya doğrudan sıkıştırılması12; ve (iv) gözün distal kısmını jiletle kestikten sonra kesi yoluyla göz konuşması içeriğinin çıkarılması17. Göz sapı X-organları, kabukluların hiperglisemik hormonlarını (CHH), molt inhibe edici hormonları (MIH) ve vitellogenezi inhibe eden hormonları (VIH) düzenledikleri için kabuklularda önemli endokrin organlardır 6,18,19,20,21,22. Göz konuşması X-organları (veya sinüs bezi kompleksi), nöropeptit hormon ailesi6'ya ait vitellogenezi inhibe eden hormonlar (VIH) olarak da bilinen gonad inhibe edici hormonları (GIH) sentezler ve serbest bırakır. Tek taraflı veya iki taraflı göz konuşması ablasyonu, GIH sentezini azaltır, bu da uyarıcı hormonların (yani, gonad uyarıcı hormonlar, GSH) baskınlığına ve kabuklularda yumurtalık olgunlaşma sürecinin hızlanmasına neden olur23,24,25,26. Göz konuşması ablasyonundan sonra GYH'nin etkisi olmadan, dişi kabuklular enerjilerini yumurtalık gelişimine adamışlardır27. Tek taraflı göz konuşması ablasyonunun, kabuklularda yumurtalık olgunlaşmasının indüksiyonu için yeterli olduğu bulunmuştur11 ve karides ve yengeçlerin ablatlı göz konuşmasının birkaç kalıplamadan sonra yenilenebileceği bulunmuştur28. Scylla spp.'de kaydedilen dört yumurtalık gelişim aşaması vardır: i) olgunlaşmamış (evre-1), ii) erken olgunlaşma (evre-2), iii) olgunlaşma öncesi (evre-3) ve iv) tamamen olgun (evre-4)29,30. Olgunlaşmamış yumurtalık evresi olgunlaşmamış kadınlarda bulunur. Pubertal erime ve çiftleşmeden sonra, olgunlaşmamış yumurtalık gelişmeye başlar ve nihayet yumurtlamadan önce olgunlaşır (aşama-4)31.
Bir göz sapı ablasyon protokolü, çamur yengeç yavrularının gelişimi ve tohum üretimi için gereklidir. Küresel gıda pazarında, daha yüksek kas içeriğine sahip yengeçler yerine tam olgun yumurtalıklara (evre-4) sahip olgun çamur yengeçleri tüketiciler tarafından tercih edilmektedir ve bu nedenle büyük erkeklerden bile daha yüksek bir ticari değere sahiptir. Çamur yengeçlerinin göz konuşması ablasyonu için tam bir protokol yoktur. Bu çalışmadaki göz konuşması ablasyon protokolü, tamamen anestezi uygulanmış yengeçler kullanarak stresi en aza indirir ve yengeç ısırıklarından personelin fiziksel yaralanmasını en aza indirir. Bu protokol kolay ve uygun maliyetlidir. Burada, gonadın olgunlaşmasını tetikleyebilecek Scylla spp.'nin göz konuşması ablasyonu için bir protokol sunuyoruz. İki göz konuşması ablasyon tekniği (koterizasyon ve cerrahi) test edildi ve dişi çamur yengeçlerinin gonadal gelişim hızına göre etkinlikleri karşılaştırıldı.

<table><tbody><tr><td>Havalandırma tüpü & nbsp;</td><td>Ming Yu Üç</td><td>N / A</td><td>akvaryum ve evcil hayvan dükkanı</td></tr><tr><td>Airstone</td><td>Ming Yu Üç</td><td>N / A</td><td>akvaryum ve evcil hayvan dükkanı</td></tr><tr><td>Otoklav makinesi</td><td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td><td>N/A</td><td>JAPONYA'DA ÜRETILMIŞTIR</td></tr><tr><td>Ağartma tozu (Hi-Chlon% 70)</td> <td>Nippon Soda Co.Ltd, Japonya</td><td>N / A</td><td>N / A</td></tr><tr><td>Üfleme meşalesi&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Dairesel tank (32L)</td><td>EN İYİ PLASTİK ENDÜSTRİSİ SDN. BHD.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Pamuklu el eldivenleri (kalın)&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Pamuklu havlu</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Dijital termometre</td><td>Hanna Instrument</td><td>HI9814</td><td>Hanna&nbsp; Enstrümanlar&nbsp; GroLine Hidroponik Su Geçirmez pH / EC / TDS / Sıcaklık Taşınabilir Metre HI9814</td></tr><tr><td>Dijital Sürmeli Kumpas</td><td>INSIZE Co., Ltd.</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon tepsisi</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N / A</td><td>Universiti Malaysia Terengganu Araştırma Merkezi</td></tr><tr><td>Damlalıklı şişe / Plastik Pipetler Damlalıklı Shopee</td><td>Malezya</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Etanol% 70</td> <td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>033361.M1</td><td>Çift damıtılmış su kullanılarak% 70 oranında seyreltilmiş</td></tr><tr><td>Fiberglas tankı (1 ton)</td> <td>Hatcheri AKUATROP ve nbsp;</td><td>N / A</td><td>Universiti Malaysia Terengganu Araştırma Merkezi Universiti Malaysia Terengganu'nun</td></tr><tr><td>Deniz plajından toplanan</td><td>ince kum</td><td>N/</td><td>A N/A</td></tr><tr><td>İlk Yardım Çantaları</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Düz başlı nikel çelik metal çubuk (Tornavida)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Formaldehit</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>119690010</td><td></td></tr><tr><td>Üfleme ve meşale için gaz tüpü (bütan gazı)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Gaz çakmak tabancası (uzun kafa)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Cam beher (100 mL))</td><td>Corning Life Sciences</td><td>1000-100</td><td></td></tr><tr><td>Buz torbası&nbsp;</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Delikli plastik sepetler&nbsp;</td><td>Eko-Mağaza Pazarlama Sdn. Bhd.</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>PVC boru 15mm</td><td>Bina Plastik Sanayi Sdn Bhd (HQ)</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Refraktometre</td><td>ATAGO CO.,LTD.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buzdolabı</td><td>Sharp Corporation Japonya</td><td>N/A</td><td>Göğüs Dondurucu SHARP 110L - SJC 118</td></tr><tr><td>Kepçe ağı</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td></td><td>N/A</td></tr><tr><td>Deniz Suyu</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N / A</td><td>Malezya Üniversitesi Araştırma Merkezi Terengganu</td></tr><tr><td>Sifonlama borusu</td><td>BAY D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Sprey şişesi</td><td>Bay DIY Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Paslanmaz cerrahi forseps&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Paslanmaz cerrahi makas&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Dalgıç su pompası&nbsp;</td><td>AS</td><td>N/A</td><td>modeli: Astro 4000</td></tr><tr><td>İyot çözeltisi tentürü&nbsp; (Povidon İyot)</td><td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Kağıt Mendil&nbsp;</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Şeffaf plastik akvaryum</td><td>Ming Yu Three</td><td>N / A</td><td>akvaryum ve evcil hayvan dükkanı</td></tr><tr><td>Su geçirmez masa</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N / A</td><td>Universiti Malaysia Terengganu Araştırma Merkezi</td></tr></tbody></table>

Çamur yengeçlerinde yumurtalık olgunlaşmasını artırmak için göz sapı ablasyonu

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Çamur yengeçleri (Scylla spp.), Hint-Batı Pasifik bölgesinde bulunabilen ticari olarak önemli kabuklu türleridir. Kültür sırasında, yumurtalık olgunlaşmasının indüksiyonu, olgun çamur yengeçlerine olan tüketici talebini karşılamak ve tohum üretimini hızlandırmak için önemlidir. Göz konuşması ablasyonu, çamur yengeçlerinde yumurtalık olgunlaşmasını arttırmak için etkili bir araçtır. Bununla birlikte, çamur yengeçlerinin göz konuşması ablasyonu için standart bir protokol yoktur. Bu çalışmada, iki göz konuşması ablasyon tekniği tanımlanmıştır: koterizasyon (anestezi uygulanmış bir yengecin göz konuşmasını ablate etmek için sıcak metal kullanımı) ve cerrahi (cerrahi makas kullanılarak göz konuşmasının çıkarılması). Göz konuşması ablasyonundan önce, cinsel olarak olgun dişiler (CW > 86 mm), deniz suyu ile bir buz torbası (-20 ° C) kullanılarak uyuşturuldu. Su sıcaklığı 4 ° C'ye ulaştığında, buz torbası sudan çıkarıldı. Akan deniz suyu (ortam sıcaklığı: 28 °C), göz sapı ablasyonundan hemen sonra anesteziden kurtulmak için kullanıldı. Mortalite, göz konuşması ablasyonu işlemi sırasında veya sonrasında ortaya çıkmadı. Burada sunulan göz konuşması ablasyon protokolü, çamur yengeçlerinin yumurtalık olgunlaşmasını hızlandırdı.

Gonad olgunlaşması Diseke edilen dişilerin 0'ünde (n=6) göz konuşması ablasyonu yapılmadan önce kremsi beyaz over dokuları (olgunlaşmamış yumurtalıklar, evre-1) bulundu (Şekil 2). Göz sapı ablatlı dişi yengeçlerin gonad olgunlaşma oranı (n = 63; koterizasyon tekniği ile 31 dişi ve cerrahi teknik ile 32 dişi), 30 günlük bireysel yetiştirmeden sonra göz sapı ablasyonuna (n = 31) tabi tutulmayan dişi yengeçlere göre daha yüksekti (Şekil 3). Olgu...

Anestezi uygulanan dişi yengeçler üzerinde iki göz konuşması ablasyon protokolü (yani koterizasyon ve cerrahi yaklaşımlar) uygulandı. Çamur yengeçlerinin göz konuşması ablasyonu, hayatta kalma oranını düşürmeden yumurtalıkların olgunlaşmasını hızlandırdı.

Çamur Yengeçlerinde Yumurtalık Olgunlaşmasını Artırmak için Göz Sapı Ablasyonu

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

Tarif edilen protokol, çamur yengeçlerinin göz konuşması ablasyonu sırasında stresi en aza indirir, böylece göz konuşması ablasyonuna bağlı ölüm oluşumunu azaltır. Zaman verimliliği, hayvanlar üzerindeki stresi en aza indirmenin anahtarıdır. İşlemi gerçekleştirmeden önce her şeyin hazırlandığından emin olun.Herhangi bir enkaz ve paraziti gidermek için sağlıklı, aktif ve prematüre dişi çamur yengeçlerini klorlu musluk suyuyla yıkayarak başlayın. Yengeçleri formaldehitte 30 dakika bekletin. Formaldehit işlemi sırasında hava taşlarıyla sürekli ve nazik havalandırma sağlayın.Daha sonra, kalan formaldehitleri gidermek için yengeçleri yıkamak için akan deniz suyunu kullanın. Yengeç gözlerinin koterizasyonunu gerçekleştirmek için, çubuk parlak kırmızı olana kadar metal bir çubuğun ucunu bir üfleme meşalesi ile ısıtarak başlayın. Anestezi uygulanmış bir yengeci ıslak pamuklu bir havluyla örtün ve yengecin bir gözünü sterilize forsepsle tutun.Kırmızı sıcak metal ucu, göz konuşması turuncu veya kırmızımsı turuncu bir renge dönene kadar yengeç gözüne yaklaşık 10 ila 15 saniye boyunca bastırın. Forsepsleri %70 etanol ile dezenfekte edin ve yengeçler arasında çapraz kontaminasyon olmaması için steril doku kağıdı ile temizleyin. Tüm yengeçlerde ablasyon yaptıktan sonra, metal çubuğu musluk suyuna batırın.Cerrahi ablasyon yapmak için, anestezi uygulanan yengeci kalın pamuklu eldivenler kullanarak tutun ve ıslak pamuklu bir havluyla örtün. Yengecin bir gözünü tutmak için steril forseps kullanın ve göz konuşmasını cerrahi makasla hızla kesin. Ameliyat sonrası, sürekli havalandırma ile binde 20 parça filtrelenmiş deniz suyu içeren bir havai tank hazırlayın.Yerçekimi suyu akışı için tanka esnek bir boru bağlayın. Yengeci bir sepete yerleştirin ve baş üstü tanktan akan deniz suyuna maruz bırakın. Yengeci akan deniz suyu altında kendiliğinden hareket edene kadar izleyin.Daha fazla gözlem için yengeçleri ayrı ayrı 30 dakika boyunca deniz suyuyla başka bir akvaryuma yerleştirin. Göz konuşması ablasyonu geçirmemiş yeni olgun kadınları rastgele seçin. Üst kabuk ve hepatopankreası çıkardıktan sonra, yengeç yumurtalıklarının olgunlaşma aşamasını gözlemleyin ve tanımlayın.Yumurtalık olgunlaşma aşamaları, olgunlaşmamış aşama birincisi yarı saydam veya kremsi beyaz, erken olgunlaşma aşaması iki soluk ila açık sarı, olgunlaşma öncesi aşama üç sarıdan açık turuncuya ve tamamen olgun aşama dördüncüsü koyu turuncu ila kırmızımsı renkte olmak üzere renklenmelerine göre tanımlanabilir. Gonad olgunlaşma oranı, göz sapı ablatlı kadınlarda, ablat olmayanlara göre daha yüksekti. Üçüncü aşama yumurtalıkların en yüksek yüzdesi göz sapı ablatlı dişi yengeçlerde bulundu.Varyansın tek yönlü analizi, deneysel dişi yengeçlerin yumurtalık olgunlaşma aşamaları arasında önemli farklılıklar göstermiştir. Kontrol grubu, ablated gruplara göre olgunlaşmamış dişi yengeç prevalansına sahipti. Sadece ablated gruplar, tedaviden 30 gün sonra olgunlaşmamış bir aşamadan dördüncü aşama dişi yengeçler üretebildiler.Çamur yengecinin göz konuşmasının koterizasyon veya cerrahi tekniği takiben tamamen ablatlandığından emin olmak önemlidir. Göz sapı ablasyonu, kabuklu çiftçilerin yumurtalık olgunlaşmasını ve kolayca erimesini sağlar. Ayrıca, araştırmacıların çamur yengeç üremesini düzenlemede göz konuşmasının rolünü daha fazla araştırmalarına olanak tanır.

eyestalk-ablation-to-increase-ovarian-maturation-in-mud-crabs

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Gübrelenmesi Xenopus oositleri Host Transfer Yöntemi kullanılarak

Amphipod Parhyale hawaiensis kabuklu embriyoloji ve karşılaştırmalı eklembacaklı gelişim ve evrim çalışmaları için umut verici bir model organizmadır. Bu protokol Parhyale erken bölünme evresindeki embriyolar, tek blastomerlerin elle çıkarılması için bir yöntem tarif eder.

Amphipod Crustacean Sekiz hücreli embriyolardan Tek Hücre Ablasyon<em&gt; Parhyale hawaiensis</em

Xenopus laevis immatür oositlerini manipüle etme, oositlerin yumurtalara in vitro olgunlaşması ve intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu yöntemlerini açıklıyoruz. Bu protokol, bazı maternal proteinlerin bozulmasına ve döllenmede ilgilenilen genlerin aşırı ekspresyonuna izin verir ve bu nedenle erken embriyonik gelişimde spesifik faktörlerin rollerini incelemek için değerlidir.

Manipülasyon ve<em&gt; İn Vitro</emVe&gt; Olgunlaşma<em&gt; Xenopus laevis</emIntrasitoplazmik sperm enjeksiyonu izledi&gt; oositler, Embriyonik Geliştirme Çalışması

Yetkin ektodermde bir yanıtı indükleyebilen genlerin ekspresyon klonlaması için bir Xenopus oosit ve hayvan başlığı sistemini tanımlıyoruz ve bu tür genlerin sonraki analizi için teknikleri tartışıyoruz. Bu sistem, çok çeşitli gen ürünlerinin fonksiyonel olarak tanımlanmasında faydalıdır.

Bir kullanılması Fonksiyonel Klonlama<em&gt; Xenopus</em&gt; Oosit ekspresyon sistemi

Amfitiyoloji biyolojisinin incelenmesi, birçok taksononomik grubun organizmalarını kullanan üreme, fizyolojik, embriyolojik ve gelişimsel süreçler hakkında değerli bilgiler sağlar. Burada, biz ayı kontrol ve amfitezya izleme incelemek için kullanılabilecek farklı metodolojiler üzerinde kapsamlı bir rehber sunuyoruz.

Anbürlerde Ovaryalı Izleme ve kontrol için üreme teknikleri

Bu protokol, C. elegans hücreleri tarafından membrana bağlı ekophers şeklinde üretilen büyük agrega ve/veya organel ekstrüzyonların (~4 μm) tespiti ve niceliği için yaklaşımları açıklamaktadır. Bu enkaz kovma mekanizmasının diseksiyonunu kolaylaştırmak için gerekli suşları, büyüme koşullarını, puanlama kriterlerini, zamanlamayı ve mikroskopi hususlarını tanımlıyoruz.

C. elegans'ta Büyük Ekofher Veziküllerde İnvivo Nöronal Agrega ve Organel Ekstrüzyon Puanlama da Kantitatif Yaklaşımlar

Bu protokol, düşük maliyetli bir mikroenjeksiyon sisteminin inşasını, derin beyin yapılarına stereotaksik implantasyonunu ve uyanık ve sınırsız sıçanlarda tetrodotoksin zamanlanmış mikroenjeksiyon prosedürünü açıklar. Amaç, hipotalamik yapıların nöral aktivitelerini engelleyerek yumurtlamanın düzenlenmesine katılımını ortaya çıkarmaktır.

Tetrodotoksin Mikroenjeksiyonları ile Ters İnaktivasyon Yoluyla Yumurtlamanın Düzenlenmesinde Sıçan Beyninin Ayrık Alanlarının Rolünün Çözülmesi

Yakın kızılötesi femtosaniye lazer kullanılarak metafaz I sırasında fare oositlerinde sitoplazmik mikrotübül düzenleme merkezlerinin tükenmesini sağlayan optimize edilmiş bir protokol sunulmaktadır.

Fare Oositlerinde Sitoplazmik Mikrotübül Düzenleme Merkezlerinin Multi-Foton Lazer Ablasyonu

Protokol, projektör tuzakları ile yakalanan vahşi tip göçmen dişi böcekler için uygun, basit ve kolay bir diseksiyon yöntemi göstermektedir. Bu teknik, hem üreme dokularını, yani çiftleşme kesesini hem de vahşi tip dişi böceklerin yumurtalık gelişimini karşılaştırarak aynı türü önemli ölçüde netleştirebilir.

Yabani tip dişi böceklerde yumurtalık gelişiminin diseksiyonu ve derecelendirilmesi

Bu protokol, C. elegans'taki uçucu seks feromonuna verilen yanıtların çıkarılması ve ölçülmesi için yöntemler oluşturur ve kimyasal iletişim ve navigasyon yörüngesini incelemek için araçlar sağlar.

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Burada, model nematod C. elegans'ın germ hattında eksprese edilen genetik olarak kodlanmış bir kalsiyum raportörü kullanarak döllenme ve erken embriyogenez sırasında kalsiyumu görselleştirmek için protokoller ve araçlar sunuyoruz.

C. elegans'ta Döllenme ve Erken Gelişim Sırasında Kalsiyum Geçişlerinin İn Vivo Olarak Görüntülenmesi

Öğrenin, çamur yengeçlerinde göz sapı ablasyonu ile yumurtalık olgunlaşmasını artırma yöntemini. Koterizasyon ve cerrahi teknikler kullanılarak üreme biyolojisi araştırmaları için etkili bir protokol sunulmaktadır.

Çamur Yengeçlerinde Yumurtalık Olgunlaşmasını Artırmak için Göz Sapı Ablasyonu

Daha fazla video keşfet