Name: Alerjik Kontakt Dermatit Değerlendirmesi için Fare Kulak Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T14:55:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Keşfedin, fare kulak modelinde DNFB kullanarak alerjik kontakt dermatit oluşturma ve değerlendirme yöntemlerini. Bu protokol, patogenez araştırmaları ve yeni tedavi yöntemlerinin ön klinik geliştirilmesi için güvenilir bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC) tarafından N.-N.'ye desteklenmiştir. Y. (81904212); Jiangsu Geleneksel Çin Tıbbı Bilim ve Teknoloji Projesi (YB201995); ve Çin'deki Doktora Sonrası Araştırmacılar için Özel Finansman Projesi (2020T130562).

Farelerin tüm bakım ve tedavisi, Yangzhou Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından belirlenen yönergelere uygun olarak yapıldı ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından SYXK (SU) 2022-0044 proje lisansı kapsamında onaylandı. Bu çalışmada 6-8 haftalık BALB/c erkek ve dişi fareler kullanıldı. Her grup altı fareden oluşuyordu (bakınız Malzeme Tablosu). Kafesler, yiyecek ve suya serbest erişimi olan sıcaklık kontrollü bir odaya (22 ± 2 ° C, 12 saat ışık / karanlık döngüsü) yerleştirildi. Deneysel bir akış diyagramı Şekil 1'de gösterilmiştir.
1. Hayvan hazırlama
<ol><li>Çevreye 1 haftalık alışmadan sonra modellemeye başlayın.</li>
	<li>Fareleri manipüle etmeden önce çevreyi ve tezgahları temizlemek ve dezenfekte etmek için ultraviyole lamba ve% 75 alkol dezenfektanı kullanın. NOT: Dış etkenlerin etkisinden kaçınmak için, fareleri tanımlama için işaretlemek fare kulağında gerçekleştirilemez; Arkada veya kuyrukta lekelenme alternatif olarak kullanılabilir.</li>
	<li>Farelerin karnına sabunlu su uygulamak için küçük bir pamuklu çubuk kullanın (yaklaşık 1-2cm2 büyüklüğünde). Modellemenin başında (gün 0; Şekil 2A). NOT: Epilasyon için düz tıraş bıçağı kullanımı yetenekli bir operatör gerektirir. Doğru şekilde yapılmazsa, cilt tahrişine neden olabilir. Epilasyon için tüy dökücü krem, kesme makineleri veya güvenli bir tıraş bıçağı kullanmayı düşünün.</li>
	<li>Fareyi tartın ve her grup arasındaki ağırlık değişikliklerini karşılaştırın.</li>
</ol>2. Abdominal sensitizasyon stimülasyonu
<ol><li>Tıraştan kaynaklanan karın derisindeki herhangi bir küçük yaralanmanın tam olarak iyileşmesini sağlayın. Karın hassasiyetini tıraştan 2 gün sonra uygulayın (2. gün).</li>
	<li>% 0.5 DNFB çözeltisini hazırlayın: DNFB'yi bir asetonla seyreltin: zeytinyağı karışımı 4: 1 oranında (örneğin, 400 μL zeytinyağı ile karıştırılmış 100 μL aseton ; bkz. DNFB çözeltisini iyice karıştırmak için üflemek ve 20 kez karıştırmak için bir pipet tabancası kullanın. DNFB çözeltisinin fareye her uygulanmasından önce, üç ila beş kez üfleyin ve karıştırın. NOT: Kullanmadan önce çözeltiyi hazırlayın ve doğrudan güneş ışığından korumak için alüminyum folyoya sarın.</li>
	<li>% 0.5 DNFB çözeltisinin 25 μL'sini, farelerin karnındaki tıraş edilmiş bölgenin cildine bir pipetleyici ile uygulayın (Şekil 2B).</li>
	<li>DNFB solüsyonunu karın tıraş alanının ortasına sürün ve pipetleyici ucunun pürüzsüz tarafı ile hafifçe yayınlayarak düzgün bir şekilde dağıtın.</li>
	<li>DNFB stimülasyonundan 30 sn sonra, DNFB çözeltisini ovalamalarını önlemek için fareleri yataksız boş kafeslere yerleştirin. DNFB çözeltisi tamamen kuruduğunda (yaklaşık 2 dakika), fareleri orijinal kafeslerine geri döndürün.</li>
	<li>DNFB solüsyonunu kullanırken eldiven giyin, çünkü insan cildini ciddi şekilde tahriş eder.</li>
</ol>3. Kulak hassaslaştırma stimülasyonu
<ol><li>Yukarıdaki gibi% 0.2'lik bir DNFB çözeltisi, araç çözeltisi (4: 1 aseton ve zeytinyağı karışımı) ve saf su hazırlayın.</li>
	<li>DNFB stimülasyonu sırasında çözeltinin kulak kanalına girmesini önlemek için fare gövdesini yönlendirin ve tüm operasyon boyunca kulak kepçesinin dış kenarlığını aşağı bakacak şekilde yapın.</li>
	<li>4, 6, 8 ve 10. günlerde, farelerin sol kulak kepçelerinin iç yüzeyine yavaş ve düzgün bir şekilde% 0.2 DNFB çözeltisinin veya araç çözeltisinin 20 μL'sini uygulamak için bir pipetleyici kullanın. DNFB çözeltisinin kulak kanalına girmesini önlemek için, uygulama sırasında DNFB çözeltisini nazikçe dağıtmak üzere pipetleyici ucunun pürüzsüz tarafını kullanın. Sağ kulakları tedavi edilmeden bırakın (Şekil 2C).</li>
	<li>DNFB çözeltisi kuruyana kadar bekleyin ve fareleri tekrar kafese yerleştirin (yaklaşık 30 s).</li>
	<li>DNFB çözümünü kullanırken eldiven giyin.</li>
</ol>4. Fare ağırlığını ve ACD semptomlarını kaydetme
<ol><li>Fareyi her gün tartın, 1. günde başlayın ve 0. günde karşılık gelen ağırlığıyla karşılaştırın; ACD'nin farelerin vücut ağırlığı üzerindeki etkisini, ağırlık değişimi (g) ortalamanın standart hatası (SEM) ± olarak değerlendirmek.</li>
	<li>1. günden başlayarak her 2 günde bir ACD klinik semptomlarını kaydetmek için fare kulaklarının yüksek çözünürlüklü fotoğraflarını çekin.</li>
</ol>5. Kulak kepçesi kalınlığının ölçülmesi
<ol><li>Kulak kepçesi kalınlığını 1. günden başlayarak her 2 günde bir ölçün. Her iki kulağı da ayrıntılı olarak ölçün ve kaydedin.</li>
	<li>Doğru sonuçlar için kulak kepçesi kalınlığını her gün aynı saatte ölçmek için vernier kaliperleri kullanın (Malzeme Tablosuna bakınız) (Şekil 3A). Fare kulağında doku hasarını önlemek için hafif bir tıkanıklık olduğunda vernier kaliperlerinin içe doğru sıkıştırmaya devam etmesini durdurun. Konumu sabit tutun ve verileri kaydedin.</li>
	<li>Her kulak kepçesi üzerindeki üç farklı konumdan kalınlığı toplayın (Şekil 3B). Üç verinin ortalamasını geçerli bir değer olarak kaydedin. Kulak şişmesini mikrometre (μm) cinsinden ortalamanın standart hatası (SEM) ± değerlendirin.</li>
</ol>6. Enflamatuar şişlik derecesinin değerlendirilmesi
<ol><li>% 0.5 Evans mavi boyası hazırlayın ( Malzeme Tablosuna bakınız): Evans mavi boyasını 11. günde fosfat tamponlu salin (PBS) ile seyreltin. Evans mavi boyası insanlar için biraz toksik olduğu için her zaman bir laboratuvar önlüğü ve eldiven giyin.</li>
	<li>Fareleri bir fiksatör ile hareketsiz hale getirin: fiksatörün kapağını açın (bakınız Malzeme Tablosu), fare kuyruğunu tutun, farenin kafasını fiksatöre bakacak şekilde yapın ve farenin içgüdüsel olarak fiksatöre tırmanmasını sağlayın. Kapağı kapatın, fare kuyruğunun kapaktaki delikten çıkmasını sağlayın ve tüm fare kuyruğunu ortaya çıkarmak için fiksatörün uzunluğunu ayarlayın.</li>
	<li>Kuyruğu alkollü bir pamuk topu ile tekrar tekrar silin veya 30 saat boyunca ılık suya batırın ve her iki taraftaki damarları doldurmak ve genişletmek için kuyruğun kökünü hafifçe sıkıştırın. Enjeksiyonu soğuk bir ışık kaynağının ışınlaması altında gerçekleştirin.</li>
	<li>Evans mavi boya çözeltisini 1 mm'lik bir insülin iğnesi kullanarak fare kuyruğu damarına yavaşça enjekte edin. 15 dakika bekleyin ve ardından fare kulaklarının fotoğraflarını çekin. NOT: Fareyi masanın üzerine koyun ve görüntü alma için kulak bölgesini ortaya çıkarmak üzere hafifçe tutun. Evans mavi boya çözeltisi ile enjeksiyondan kısa bir süre sonra ve ilgili endikasyonları gözlemleyerek, fareyi ötenazi yapmak için servikal çıkık kullanın.</li>
</ol>

<ol><li>Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+allergic+contact+dermatitis.+Part+I%3A+Clinical+features+and+common+contact+allergens+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).</li>
<li>Koppes, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+knowledge+on+biomarkers+for+contact+sensitization+and+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Current knowledge on biomarkers for contact sensitization and allergic contact dermatitis.</a> Contact Dermatitis. 77 (1), 1-16 (2017).</li>
<li>Martin, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+chemical-induced+innate+immunity+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of chemical-induced innate immunity in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 66 (9), 1152-1163 (2011).</li>
<li>Kimber, I., Basketter, D. A., Gerberick, G. F., Dearman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Allergic contact dermatitis.</a> International Immunopharmacology. 2 (2-3), 201-211 (2002).</li>
<li>Vocanson, M., Hennino, A., Rozieres, A., Poyet, G., Nicolas, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector+and+regulatory+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Effector and regulatory mechanisms in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 64 (12), 1699-1714 (2009).</li>
<li>Gamradt, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+checkpoint+receptors+control+CD8%2B+resident+memory+T+cells+to+prevent+skin+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Inhibitory checkpoint receptors control CD8+ resident memory T cells to prevent skin allergy.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (6), 2147.e9-2157.e9 (2019).</li>
<li>Fraginals, R., Blasi, N. A., Lepoittevin, J. P., Benezra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+successful+murine+model+for+contact+sensitization+to+a+sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone%3A+sensitization+to+alantolactone+in+four+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">A successful murine model for contact sensitization to a sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone: sensitization to alantolactone in four strains of mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 97 (3), 473-477 (1991).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Neumann, C., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%3A+5.+Evidence+that+inhibition+of+suppressor+T+lymphocytes+by+Corynebacterium+parvum+is+mediated+by+interferon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanisms in allergic contact dermatitis: 5. Evidence that inhibition of suppressor T lymphocytes by Corynebacterium parvum is mediated by interferon.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (6), 385-388 (1982).</li>
<li>Polak, L., Scheper, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-specific+T-cell+lines+in+DNCB-contact+sensitivity+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Antigen-specific T-cell lines in DNCB-contact sensitivity in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 80 (5), 398-402 (1983).</li>
<li>Witten, V. H., March, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+mechanism+of+allergic+eczematous+contact+dermatitis.+II.+Use+of+C14+labelled+2%3A4-dinitrochlorobenzene+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Studies of the mechanism of allergic eczematous contact dermatitis. II. Use of C14 labelled 2:4-dinitrochlorobenzene in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 31 (2), 97-102 (1958).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanism+in+allergic+contact+dermatitis.+IV.+Selective+inhibition+of+suppressor+T-lymphocytes+by+serum+obtained+from+Corynebacterium+parvum+treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanism in allergic contact dermatitis. IV. Selective inhibition of suppressor T-lymphocytes by serum obtained from Corynebacterium parvum treated mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 77 (6), 469-473 (1981).</li>
<li>Rubic-Schneider, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPR91+deficiency+exacerbates+allergic+contact+dermatitis+while+reducing+arthritic+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">GPR91 deficiency exacerbates allergic contact dermatitis while reducing arthritic disease in mice.</a> Allergy. 72 (3), 444-452 (2017).</li>
<li>Stampf, J. L., Benezra, C., Byers, V., Castagnoli Jr, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+to+poison+ivy+urushiol+in+the+guinea+pig+by+epicutaneous+application+of+the+structural+analog+5-methyl-3-n-pentadecylcatechol%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance to poison ivy urushiol in the guinea pig by epicutaneous application of the structural analog 5-methyl-3-n-pentadecylcatechol.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 86 (5), 535-538 (1986).</li>
<li>Dhingra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+profiling+of+contact+dermatitis+skin+identifies+allergen-dependent+differences+in+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular profiling of contact dermatitis skin identifies allergen-dependent differences in immune response.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (2), 362-372 (2014).</li>
<li>Maguire Jr, H. C., Kaidbey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+photoallergic+contact+dermatitis%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Experimental photoallergic contact dermatitis: a mouse model.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (3), 147-152 (1982).</li>
<li>Qiu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dysregulated+sebum-microbial+metabolite-IL-33+axis+initiates+skin+inflammation+in+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">A dysregulated sebum-microbial metabolite-IL-33 axis initiates skin inflammation in atopic dermatitis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 219 (10), e2021397(2022).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+activities+of+Dictamnus+dasycarpus+Turcz.%2C+root+bark+on+allergic+contact+dermatitis+induced+by+dinitrofluorobenzene+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory activities of Dictamnus dasycarpus Turcz., root bark on allergic contact dermatitis induced by dinitrofluorobenzene in mice.</a> Journal of Ethnopharmacology. 149 (2), 471-477 (2013).</li>
<li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+6%27-acetylpaeoniflorin+on+dinitrochlorobenzene-induced+allergic+contact+dermatitis+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunologic+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of 6'-acetylpaeoniflorin on dinitrochlorobenzene-induced allergic contact dermatitis in BALB/c mice.</a> Immunologic Research. 64 (4), 857-868 (2016).</li>
<li>Donglang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+different+skin+pruritus+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative study on different skin pruritus mouse models.</a> Frontiers in Medicine. 8, 630237(2021).</li>
<li>Yang, N., Shao, H., Deng, J., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+pharmacology-based+analysis+to+explore+the+therapeutic+mechanism+of+Cortex+Dictamni+on+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Network pharmacology-based analysis to explore the therapeutic mechanism of Cortex Dictamni on atopic dermatitis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 304, 116023(2023).</li>
</ol>

Yazarlar bu çalışmada çıkar çatışması olmadığını bildirmektedir.

Farelerin kulaklarında ACD benzeri semptomları indüklemek için burada açıklanan protokol, ACD'nin patofizyolojisini incelemek ve yeni ilaçların geliştirilmesi için bir tarama aracı olarak kullanılabilir.
Bir ACD modeli oluşturmak için iki önemli adım vardır: ilk duyarlılaşma ve sonraki stimülasyon. Karın genellikle ilk duyarlılaşma bölgesidir, ancak sonraki stimülasyon bölgesi biraz farklı seçilmiştir. Önceki çalışmalar, çoğu bilim insanının farelerin arkasında veya boynunda ACD modelleri oluş...

Allerjik kontakt dermatit (AKB), temas bölgesinde egzama benzeri semptomlar, orta derecede vakalarda ödem ve eritem ve ağır vakalarda papüller, erozyon, eksüdasyon ve hatta masif yara izleri ile karakterize yaygın bir deri hastalığıdır1. Nüfusun% 20'sine kadar etkiler ve2 yaştaki her insanı etkileyebilir. ACD genellikle tekrar tekrar alerjenlere maruz kalan bireylerde görülür ve bireyin evlerinde veya işyerlerinde bir veya daha fazla alerjene karşı bağışıklık tepkisinden kaynaklanabilir3. Tip IV gecikmiş aşırı duyarlılık, ACD4'te ana immün yanıt tipi olarak kabul edilir. Cildin tekrar tekrar alerjenlere maruz kalan bölgelerinde, dolaşımdaki hafıza T hücreleri çok sayıda birikir ve immün ve enflamatuar yanıtları indükler 3,5,6. Bu çalışmanın amacı, AKB gelişiminde immünolojik ve inflamatuar yanıtların daha fazla araştırılması için güvenilir bir laboratuvar tekniği önermektir.
ACD'nin başlangıcı genellikle kimyasallara tekrar tekrar maruz kalmanın neden olduğu temas aşırı duyarlılığından kaynaklanmaktadır. Çok sayıda araştırmacı, hastalığın başlangıcını simüle etmek için son birkaç on yılda ev fareleri7,8, kobaylar 9,10 ve diğer hayvanlarda çeşitli ACD hayvan modelleri geliştirmiştir. Deneysel yöntemlerin çoğu iki aşamadan oluşur: abdominal sensitizasyon (indüksiyon) ve sırtta veya kulak memesinde uyaran sağlama (stimülasyon). Yaygın olarak kullanılan kimyasal maddeler arasında esas olarak 1-floro-2,4-dinitrobenzen (DNFB) / 1-kloro-2,4-dinitrobenzen (DNCB)8,9,11, oksazolon 12, urushiol 13, vb. Bulunur. Bunlar arasında, DNFB ve DNCB en yaygın kullanılanlardır, ilk olarak Ekim 1958'de bildirilmiştir10. Nikel sensitizasyon modeli14 ve fotoalerjik kontakt dermatit modeli15 de sıklıkla kullanılmaktadır.
ACD modelini oluşturmak için deneysel bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, önceki çalışmalara dayanarak ve çoklu deneylerle karşılaştırılarak özetlenmiş ve optimize edilmiştir. Diğer ACD modelleriyle karşılaştırıldığında, bu modelin küçük bireysel farklılıklar, kısa deney süreleri, az miktarda kimyasal stimülasyon vb. gibi bazı avantajları vardır. Ek olarak, bu çalışma sadece ekonomik değil, aynı zamanda gen nakavtı veya transgenik farelerin hazırlanması için daha fazla seçeneğe sahip olan fareler için de geçerlidir16. Ayrıca, deneyde ACD ilerlemesini izlemek için kullanılan kulak kalınlığını ölçmek, enflamatuar eksüdasyonu ölçmek için Evans mavi boyası kullanmak gibi çeşitli yöntemleri de açıklıyoruz. Bu model sadece AKB'nin patogenezini araştırmak için fare kulaklarını, kanını, dalağı ve diğer örnekleri laboratuvar araçlarıyla analiz etmekle kalmaz, aynı zamanda belirli bir tanıtım önemi olan yeni terapötik yöntemlerin klinik öncesi değerlendirmesi için de geçerlidir.

<table><tbody><tr><td>1-Floro-2,4-dinitrobenzen (DNFB)</td><td>Merck</td><td>200-734-3</td><td>1-Floro-2,4-dinitrobenzen, &ge; % 99</td></tr> <tr><td>Aseton</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif Ltd</td><td>10000418</td> <td>ve ge; % 99,5</td></tr> <tr><td>Alüminyum folyo ve nbsp;</td><td>Cleanwrap</td><td>CF-2</td><td></td></tr><tr><td>Evans mavi boya</td><td>Solarbio</td><td>314-13-6</td><td>Boya içeriği yaklaşık %80</td></tr> <tr><td>Fare sabitleyici</td><td>ZHUYANBANG</td><td>GEGD-SM1830</td><td></td></tr><tr><td>Zeytinyağı</td><td>Solarbio</td><td>8001-25-0</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Pipet ucu</td><td>Biofount</td><td>FT-200</td><td>10 - 200 &mu; l</td></tr><tr><td>Pipetleyici</td><td>Eppendorf AG</td><td>3123000250</td><td>20 - 200 &mu; l</td></tr><tr><td>Jiletli bıçak</td><td>Shanghai Gillette Co., LTD</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>Sürmeli kaliperler</td><td>Delixi Elektrikli</td><td>DECHOTVCS1200</td><td></td></tr></tbody></table>

alerjik kontakt dermatit değerlendirmesi için fare kulak modeli

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

Deri, insan vücudunun ilk savunma hattıdır ve çevresel kimyasallara en çok maruz kalan organlardan biridir. Allerjik kontakt dermatit (AKB), lokal döküntü, kızarıklık ve deri lezyonları şeklinde kendini gösteren yaygın bir deri hastalığıdır. AKB'nin oluşumu ve gelişimi hem genetik hem de çevresel faktörlerden etkilenir. Son yıllarda birçok bilim adamı bir dizi ACD modeli oluşturmuş olsa da, bu modellerin deneysel protokollerinin hepsi farklıdır, bu da okuyucuların bunları iyi bir şekilde kurmasını zorlaştırmaktadır. Bu nedenle, atopik dermatitin patogenezini daha fazla incelemek için istikrarlı ve etkili bir hayvan modeli büyük önem taşımaktadır. Bu çalışmada, farelerin kulaklarında ACD benzeri semptomları indüklemek için 1-floro-2,4-dinitrobenzen (DNFB) kullanan bir modelleme yöntemini detaylandırdık ve modelleme sırasında dermatitin şiddetini değerlendirmek için çeşitli yöntemleri tanımladık. Bu deneysel protokol bazı deneylerde başarıyla uygulanmıştır ve ACD araştırması alanında belirli bir tanıtım rolüne sahiptir.

Tekrarlanan DNFB stimülasyonu altında, DNFB grubunun fare kulakları, ACD ile karşılaştırılabilir belirgin klinik semptomlar gösterdi ve hassas bölgeler tipik kızarıklık, kuruluk ve hatta erozyon ve eksüdasyon belirtileri gösterdi. Bununla birlikte, saf suyun (kontrol grubu) veya çözücü kontrolünün (araç grubu) kulağa uygulanması benzer semptomlar üretmemiştir (Şekil 4).
Bu arada, DNFB grubunda, tedavi edilmeyen sağ kulağa kıyasla, DNFB stimülasyonundan sonra sol k...

Burada, fare kulaklarında alerjik kontakt dermatiti 1-floro-2,4-dinitrobenzen (DNFB) ile indükleme yöntemlerini ve alerjik kontakt dermatitin ciddiyetinin nasıl değerlendirileceğini açıklıyoruz.

Alerjik Kontakt Dermatit Değerlendirmesi için Fare Kulak Modeli

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...

Bu model sadece AKB'nin patogenezini araştırmak için değil, aynı zamanda önemli bir anlamı olan yeni terapötik yöntemlerin klinik öncesi evrimi için de uygulanabilir. Bu, kısa bir deney süresi, kolay kullanım, belirgin semptomlar ve yüksek başarı oranı gibi birçok avantajı olan istikrarlı ve verimli bir hayvan modelidir. Deneysel protokolümüz çok ayrıntılı ve kullanımı kolaydır.Protokolün her adımını doğru bir şekilde takip ettiğinizden emin olun. Modellemeye başlamadan önce, fareleri yiyecek ve suya serbest erişim ile bir hafta boyunca çevreye alıştırın. Modelleme gününde, ultraviyole lamba ve% 75 alkol kullanarak, çevreyi ve tezgahları temizleyin ve dezenfekte edin.Bir pamuklu çubuk kullanarak farelerin karnına sabunlu su uygulayın ve bölgeyi bir bıçak veya tıraş makinesi ile saç büyümesi yönünde tıraş edin. Fareyi tartın ve her grup arasındaki ağırlık değişikliklerini karşılaştırın. Karın hassasiyeti stimülasyonu yapmadan önce, tıraştan kaynaklanan fare karın derisindeki herhangi bir küçük yaralanmanın tamamen iyileşmesini sağlayın.% 0.5 DNFB çözeltisi hazırlayın ve 4 ila 1 oranında aseton-zeytinyağı karışımı ile seyreltin. Bir pipet tabancası kullanarak, DNFB çözeltisini iyice karıştırmak için 20 kez üfleyin ve karıştırın. 25 mikrolitre %0,5 DNFB çözeltisini karın tıraş alanının ortasına bir pipetter ile uygulayın ve pipetter ucunun pürüzsüz tarafıyla hafifçe yayınlayarak eşit şekilde dağıtın.30 saniyelik DNFB stimülasyonundan sonra, farenin DNFB çözeltisini ovalamasını önlemek için fareyi yataksız boş bir kafese yerleştirin. Çözelti tamamen kuruduğunda, fareyi yiyecek ve suya serbest erişim ile orijinal kafesine geri getirin. Kulak hassaslaştırma stimülasyonu için, fare gövdesini yönlendirin ve DNFB stimülasyonu sırasında çözeltinin kulak kanalına girmesini önlemek için kulak kepçesinin dış kenarlığını aşağı bakacak şekilde yapın.4. ve 10. günlerde, bir pipetleyici kullanarak, aracın 20 mikrolitresini veya %0,2 DNFB çözeltisini sol kulak kepçesinin iç yüzeyine yavaşça ve eşit bir şekilde uygulayın ve pipetleyicinin pürüzsüz tarafını kullanarak çözeltiyi yavaşça dağıtın. Sağ kulağı tedavi edilmeden bırakın. DNFB çözeltisi kuruyana kadar bekleyin ve fareyi tekrar kafese yerleştirin.Karın ve kulak hassasiyeti stimülasyonundan sonra, fareleri ilk günden başlayarak her iki günde bir tartın. Her farenin ağırlığını sıfır günüyle karşılaştırın ve ağırlık değiştikçe ACD'nin farelerin vücut ağırlığı üzerindeki etkisini değerlendirin. İlk günden başlayarak her iki günde bir ACD klinik semptomlarını kaydetmek için fare kulaklarının yüksek çözünürlüklü fotoğraflarını çekin.Vernier kaliperlerini kullanarak, doğru sonuçlar için kulak kepçesi kalınlığını her gün aynı saatte ölçün. Fare kulağında doku hasarını önlemek için hafif bir tıkanıklık olduğunda vernier kaliperlerinin içe doğru sıkıştırmaya devam etmesini durdurun. Konumu sabit tutun ve her iki kulak için verileri kaydedin.Üç verinin ortalamasını kaydedin ve kulak şişmesini mikrometre cinsinden değerlendirin. 11. günde enflamatuar şişlik derecesini değerlendirmek için,% 0.5 Evans Blue boya çözeltisi hazırlayın ve PBS ile seyreltin. Fareyi bir fiksatörle hareketsiz hale getirmek için kapağı açın, fare kuyruğunu tutun, farenin kafasını fiksatöre bakacak şekilde yapın ve farenin içgüdüsel olarak fiksatöre tırmanmasına izin verin.Kapağı kapatın. Fare kuyruğunun kapaktaki delikten çıkmasını sağlayın ve tüm fare kuyruğunu ortaya çıkarmak için fiksatörün uzunluğunu ayarlayın. Kuyruğu alkollü bir pamuk topu ile tekrar tekrar silin veya 30 saniye boyunca ılık suya batırın ve doldurmak için kuyruğun kökünü hafifçe sıkıştırın ve her iki taraftaki damarları genişletin.Evans Blue Boya çözeltisini, soğuk bir ışık kaynağının ışınlaması altında 1 mm'lik bir insülin iğnesi kullanarak fare kuyruğu damarına yavaşça enjekte edin. Fare kulaklarının fotoğraflarını çekmek için 15 dakika bekleyin. DNFB grubunun fare kulakları, ACD ile karşılaştırılabilir belirgin klinik semptomlar gösterdi ve hassas bölgeler tipik kızarıklık, kuruluk, erozyon ve eksüdasyon belirtileri gösterdi.Bununla birlikte, saf suyun veya çözücü kontrolünün kulağa uygulanması, DNFB grubuna benzer herhangi bir semptom üretmedi. DNFB grubunda, tedavi edilmeyen sağ kulağa kıyasla, DNFB stimülasyonundan sonra sol kulağın kalınlığı önemli ölçüde artmıştır. Kontrol ve araç gruplarında anlamlı fark saptanmadı.DNFB grubu farelerin sol kulağı, sağ kulaktan görsel olarak farklı olan Evans Blue boyasının enjeksiyonundan sonra koyu maviye döndü. Kontrol ve araç gruplarındaki farelerin sol ve sağ kulakları yaklaşık olarak aynı renkteydi. Fare ağırlık artışı, DNFB veya basit araç stimülasyonu ile hafifçe yavaşlatıldı, ancak önemli kilo kaybına neden olmadı.Fare kulağında tekrarlanan DNFB stimülasyonu, dalak büyümesine ve dalak indeksinde artışa neden oldu. Buna karşılık, araç grubundaki farelerin dalak indeksi önemli ölçüde değişmedi. DINFB çözeltisinin tamamen karıştırıldığından ve kulak kanalına akmadan fare kulağına eşit şekilde uygulandığından emin olun.Bu, modellemenin başarısının anahtarıdır.

a-mouse-ear-model-for-allergic-contact-dermatitis-evaluation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Alerjik astım Deneysel fare modelleri hastalığı patogenezinde okuyan ve yeni ilaçlar geliştirmek için yeni olanaklar sunar. Bu modeller de alerjik immün yanıt, hava yolu inflamasyonu ve pulmoner patofizyolojisi yöneten ölçüm faktörleri için uygundur.

Alerjen Bağlı Astım murin Modeli

Bu videoda, insan derisini taklit eden bir fare modeli olan insanlaştırılmış bir fare modelinde UV duyarlılığını ölçmeye yönelik bir yöntem açıklanmaktadır. Ciltte kızarıklık veya ödem oluşturabilecek UV radyasyonunun minimum eritematöz dozunu (MED) belirliyoruz. Yöntem, UV duyarlılığını azaltmak için kullanılan ilaçların etkinliğini bulmaya yardımcı olabilir.

Minimum Eritematöz Doz Deneyi: Fare Modellerinde UV Duyarlılığını Ölçmek İçin Bir Yöntem

Bu video, bir fare modelinde cilt iltihabını indükleyerek bir test antijenini değerlendirmek için in vivo bir tekniği göstermektedir. Test antijeni - bir yağ / aseton çözeltisi içinde bir hapten - fare kulağının derisine topikal olarak uygulanır ve cildin iltihabı yeterli bir süre sonra değerlendirilir.

Cilt İltihabını İndükleyerek Bir Antijene Karşı Bağışıklık Tepkisini Değerlendirme Tekniği

Bu video, farelerde Malassezia'nın neden olduğu deri enfeksiyonunu göstermektedir. Malassezia yağ süspansiyonu yaralı kulağın üzerine uygulanarak kulak dokusunun iltihaplanmasını ve şişmesini tetikler. Daha sonra kulaklar disseke edilir, homojenize edilir ve büyüme için bir agar plakasına yayılır. Koloni sayısı, cilt iltihabından kaynaklanan mantar yükünü gösterir.

Bir Murin Modelinde Malassezia Kaynaklı Deri İltihabı ve Mantar Yükü Analizi

Mast hücreleri ve bazofillerin aktivasyonuyla karakterize alerjik tepkiler, IgE çapraz bağlanması ve proenflamatuar aracıların salınması ile tahrik edilmektedir. Alerjik tepkilerin bir kantitatif olarak değerlendirilmesi allerjen vasküler geçirgenlikte değişiklikleri izlemek için Evans mavisinin kullanılması sureti ile elde edilebilir.

Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme

Burada, dallanma morfogenez ve periferik sinirler ve kan damarları yanı sıra bağışıklık hücre dağıtım desenlendirme görselleştirmek sağlayan tüm yetişkin fare kulak deride bir yüksek çözünürlüklü bütün Dağı görüntüleme yöntemi açıklanmaktadır.

Bütün-Confocal mikroskobu yetişkin kulak cilt için mount: nöro-vasküler dallanma morfogenez ve bağışıklık hücre dağıtım modeli sistemi

Bir yaklaşım Kutanöz yaralama için doğuştan gelen bağışıklık yanıtının gerçek zamanlı algılama ve Staphylococcus aureus enfeksiyon farelerin için tanımlanır. Karşılaştırma LysM-EGFP tarafından (floresan nötrofil sahip) fareler LysM EGFP ile immünyetmezligi fare zorlanma olacak, biz anlayışımız enfeksiyon ve enfeksiyon mücadele için yaklaşımlar gelişimi önceden.

Bir fare modeli için değerlendirmek doğuştan gelen bağışıklık yanıtı Staphylococcus aureus enfeksiyon

Kontakt aşırı duyarlılık (CHS), alerjik kontakt dermatitin (AKB) murin deneysel bir modelidir. CHS, göğüs ve karın bölgesinin traş edilmiş cildini boyayarak reaktif hapten ile hassaslaşmaya dayanır, daha sonra seyreltilmiş bir hapten ile kulak derisi meydan okuması ile çeşitli şekillerde değerlendirilen bir şişlik reaksiyonuna neden olur.

Alerjik Kontakt Dermatitin Murin Modeli Olarak Kontakt Aşırı Duyarlılık

Bu protokol, oleik asit ve Cutibacterium acnes ile sıçan derisinde akne iltihabını indükleme prosedürünü özetlemektedir.

Bileşik Akne Bir Sıçan Modeli

Çalışma, epikütan (EC) bağışıklama yoluyla farelerde bağışıklık tepkilerini modüle etmede cildin rolünü göstermektedir. Bir protein antijeni ile EC bağışıklaması, patojenle ilişkili moleküler paternlerle birleştirildiğinde temas aşırı duyarlılığında veya ters cilt kaynaklı baskılamada bağışıklık tepkilerini baskılayabilir. EC bağışıklaması, immünoterapiye etkili, iğnesiz bir yaklaşım olarak umut vaat etmektedir.

Epikütan İndüklenen İmmünomodülasyonun Murin Modeli

Keşfedin, fare kulak modelinde DNFB kullanarak alerjik kontakt dermatit oluşturma ve değerlendirme yöntemlerini. Bu protokol, patogenez araştırmaları ve yeni tedavi yöntemlerinin ön klinik geliştirilmesi için güvenilir bir araç sunar.

Alerjik Kontakt Dermatit Değerlendirmesi için Fare Kulak Modeli

Daha fazla video keşfet