Name: Yumurta sarısı antikorlarına dayalı sitometrik boncuk testinin standardizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-19T12:50:00.000+00:00
Duration: 10 min 23 s
Description: Öğrenin, IgY antikorları ve lateks boncuklar kullanarak sitometrik boncuk testini standartlaştırma yöntemini. Bu protokol, antijen tespiti için yüksek duyarlılıklı ve güvenilir bir immunoassay analizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

FIOCRUZ'a ("Programa de excelência em pesquisa básica e aplicada em saúde dos laboratórios do Instituto Leônidas e Maria Deane - ILMD/Fiocruz Amazônia-PROEP-LABS/ILMD FIOCRUZ AMAZÔNIA"), Biyoteknoloji Yüksek Lisans Programı'na (Universidade Federal do Amazonas'ta PPGBIOTEC - UFAM), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível (CAPES) ve Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas'a (FAPEAM) burs sağladıkları için. Şekil 2 ve Şekil 4 biorender.com ile oluşturulmuştur.

NOT: Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, reaktifler ve aletlerle ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.
1. Yumurta sarısından IgY ekstraksiyonu
<ol><li>Yumurtaların hijyenizasyonu<ol><li>Yumurtaları (taze bırakılmış veya yumurtlamadan 4 gün sonrasına kadar, Gallus gallus Dekalb White soyundan gelene kadar) %0.2 seyreltilmiş sodyum hipoklorit çözeltisine daldırın, akan su altında hızlıca durulayın ve daha sonra veya hemen kullanmak üzere hafifçe silin. NOT: Hemen kullanılmayacaksa, 4 °C'de 15 güne kadar saklayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Sarıların ayrılması<ol><li>Yumurtayı dikkatlice kırın ve bir yumurta sarısı ayırıcı yardımıyla sarısını beyazından ayırın.</li>
		<li>Fazla beyazı filtre kağıdı yardımıyla alın. Yumurta sarısını delin ve içini 50 mL'lik konik bir tüpe toplayın. Yumurta sarısını kullanmadan önce en az 24 saat −20 °C'de saklayın. NOT: Bu deneyler sırasında (veriler gösterilmemiştir), daha önce dondurulmamış yumurta sarılarının kullanımının, sarıların lipit kısmından immünoglobulinlerin izolasyonunu engellediği gözlemlenmiştir.</li>
	</ol></li>
	<li>Yumurta sarısının asitlenmesi<ol><li>Saklanan yumurta sarısını çözdürün ve 1 mM PBS'de 1:10 oranında seyreltin. Çözeltinin pH'ını 1 N HCl ile 5'e ayarlayın ve çözeltiyi 4 °C'de 6-24 saat inkübe edin.</li>
		<li>Çözeltiyi 40 dakika boyunca 3.000 × g'da santrifüjleyin, süpernatanı geri kazanın ve 0,7 mm'lik bir selüloz filtre kullanarak süzün.</li>
	</ol></li>
	<li>Lipitlerin kaprilik asit ile çökelmesi<ol><li>Süpernatantların pH'ını 5'e yeniden ayarlayın ve kaprilik asidi (% ≥98% başlangıç konsantrasyonu) 4 ° C'de 30 dakika boyunca sürekli karıştırma altında% 8.7'lik bir nihai konsantrasyona ekleyin. NOT: Süpernatantın hacmi, adım 1.3.2'de çökeltilen lipit kütlesine bağlı olarak değişebilir. Bu nedenle, örneğin, filtrasyondan sonra elde edilen 35 mL süpernatana 3.107 mL kaprilik asit eklenmelidir.</li>
		<li>Numuneleri 18.600 × g'da 15 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı çökeltilmiş malzemeden ayırın.</li>
		<li>1 M NaOH kullanarak çözeltinin pH'ını 7.4'e yeniden ayarlayın, Bradford testi8'i kullanarak antikorları ölçün ve antikorları kullanım zamanına kadar −20 ° C'de saklayın. NOT: Antikorlar, 'lik bir SDS-PAGE jeli ile doğrulanan 1 μg/μL konsantrasyonda elde edildi.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Lateks boncuklara karşı IgY antikorlarının doygunluk eğrisi
<ol><li>Boncukların IgY antikorlarına bağlanması<ol><li>21 μL 1-etil-3- (3-dimetilaminopropil) karbodiimid (EDC, başlangıç konsantrasyonu 367 mM) ve 21 μL N-hidroksisüksinimid (NHS, başlangıç konsantrasyonu 50 mM) ila 21 μL lateks boncuk ekleyin (% 4 w / v) ve filtrelenmiş 10 mM PBS ile 2.1 mL'lik bir nihai hacme ayarlayın. NOT: PBS çözeltisinin pH aralığı 7.2 ile 7.4 arasında olmalıdır, çünkü bu çalışmada, bu aralığın dışında bir çözelti kullanıldığında kuplaj ve diğer adımlarda negatif bir değişiklik gözlenmiştir.</li>
		<li>22 °C'de hızlı çalkalayarak 3 saat inkübe edin.</li>
		<li>4 μg, 2 μg, 1 μg, 0.5 μg, 0.25 μg, 0.125 μg ve 0 μg önceden ekstrakte edilmiş yakalama antikoru IgY-PfHRP2 ekleyin (bkz. adım 1.4.3) adım 2.1.1'de açıklanan çözeltinin 100 μL'sini içeren farklı mikrotüplere (% 0.04 nihai boncuk konsantrasyonu) ve adım 2.1.2'de tarif edilenle aynı koşullar altında 16 saat inkübe edin.</li>
		<li>Numuneleri 857 × g'da 15 °C'de 5 dakika santrifüjleyin, süpernatantları atın ve santrifüjleme ve yeniden süspansiyon döngülerini kullanarak lateks boncukları 500 μL filtrelenmiş 10 mM PBS (%0.008 nihai boncuk konsantrasyonu) ile iki kez yıkayın. NOT: 857 × g'ı aşmayın, bu çalışmada olduğu gibi, bu hızın ötesinde boncukların test sonucunu olumsuz yönde değiştiren deformasyonlara uğradığı gözlemlenmiştir.</li>
	</ol></li>
	<li>Boncukların bloke edilmesi<ol><li>Numuneleri 1 mL bloke edici tampon (% 0.004 nihai boncuk konsantrasyonu) (filtrelenmiş 10 mM PBS + sığır serum albümini, BSA,% 5) içinde yeniden süspanse edin ve 2 saat boyunca adım 2.1.2'de tarif edilenle aynı koşullar altında inkübe edin.</li>
		<li>Bloke ettikten sonra, adım 2.1.4'te açıklandığı gibi yıkayın ve 10 mM PBS tamponunda yeniden süspanse edin.</li>
	</ol></li>
	<li>Alexa Fluor 488 ile etiketlenmiş anti-tavuk sekonder antikorları ile inkübasyon<ol><li>Adım 2.1.3'te açıklandığı gibi, her bir mikrotüpe 10 mM PBS +% 0.5 BSA'da 1: 2.000'e seyreltilmiş 100 μL floresan anti-tavuk antikoru (2 mg / mL) ekleyin.</li>
		<li>Numuneleri adım 2.1.2'de açıklandığı gibi, bu sefer karanlıkta 30 dakika inkübe edin.</li>
		<li>Boncukları adım 2.1.4'teki gibi yıkayın ve 250 μL (%0.016 nihai boncuk konsantrasyonu) filtrelenmiş 10 mM PBS ile yeniden süspanse edin. Akış sitometresi okumasını bölüm 5'te açıklandığı gibi gerçekleştirin. NOT: Elde edilen floresan yüzdesi verilerinden, plato oluşumunun başlangıç noktasını gözlemleyin (bu çalışmada gözlemlendiği gibi 1 μg). Sonraki adımlar için platonun ikinci noktasını (burada görüldüğü gibi 2 μg) kullanmanızı öneririz (Şekil 1).</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65123/65123fig01.jpg"> Şekil 1: Lateks boncuklara IgY-Pf HRP2 antikor bağlantısının doyma noktasını belirlemek için akış sitometrisi analizinin grafiği. X ekseni antikor konsantrasyonunu temsil eder ve Y ekseni elde edilen floresan yüzdesini temsil eder. Kruskal-Wallis testi, p &lt; 0.0033. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65123/65123fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
3. Antijen tespiti için lateks boncuklara dayalı akış sitometrisi testi
<ol><li>IgY antikorlarının lateks boncuklara doyma noktasını belirledikten sonra, adım 2.1.1'e göre boncuk aktivasyon işlemini tekrar gerçekleştirin.<ol><li>Boncukları gözlemlenen doygunluk konsantrasyonunda (adım 2.1.3'te açıklandığı gibi) birleştirin ve adım 2.1.2'ye göre inkübe edin. NOT: IgY-PfHRP2 antikoru kullanılarak yapılan testlerde, doygunluk koşulu her 1 μL lateks boncuk için 2 μg idi.</li>
	</ol></li>
	<li>Boncukları adım 2.2'ye göre bloke edin ve yıkayın.</li>
	<li>Antijen ile inkübasyon<ol><li>Tespit sınırını belirlemek için, 100 μL bloke boncuk preparatının eşdeğerini, farklı miktarlarda rekombinant protein Pf HRP2 (1 μg/mL) (r PfHRP2, 10 μg, 1 μg,0.1 μg, 0.01 μg, 0.001 μg, 0.0001 μg ve 0 μg) içeren tüplere dağıtın. NOT: Bu rekombinant protein, Sousa ve ark.9'un çalışmasında geliştirilmiştir.</li>
		<li>Boncuk çözeltilerini adım 2.1.2'de açıklandığı gibi rPfHRP2 proteini ile 1 saat inkübe edin.</li>
		<li>Yıkamaları adım 2.1.4'te açıklandığı gibi gerçekleştirin ve santrifüjlemeden sonra süpernatanı atın.</li>
	</ol></li>
	<li>Primer antikor ile inkübasyon<ol><li>Her numunede 10 μL'lik bir nihai hacme 10 mM PBS +% 0.5 BSA içinde seyreltilmiş rPfHRP2 proteinine karşı 2 μg fare IgG antikoru ekleyin. Numuneleri adım 2.1.2'de açıklandığı gibi inkübe edin ve son santrifüjlemeden sonra süpernatanı atın. NOT: Bu antikor, Sousa ve ark.9'un çalışmasında geliştirilmiştir.</li>
	</ol></li>
	<li>İkincil antikor ile inkübasyon<ol><li>Her numuneye 10 mM PBS +% 0.5 BSA'da 1: 2.000'e seyreltilmiş 100 μL floresan anti-fare antikoru (2 mg / mL) ekleyin. Adım 2.1.2'de açıklandığı gibi inkübe edin ve filtrelenmiş 10 mM PBS'nin 250 μL'sinde (% 0.016 nihai boncuk konsantrasyonu) yeniden süspanse edin. Okumayı bölüm 5'e göre gerçekleştirin.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Numunelerin akış sitometresi okuması
<ol><li>Sitometri ayarı: Bir bilgisayara bağlı sitometrenin optik parametrelerinin hizalanması<ol><li>Bilgisayarı ve akış sitometresini açın ve ekipmanın bilgisayara bağlanması için birkaç dakika bekleyin.</li>
		<li>Bilgisayarda yüklü olan sitometri yazılımına tıklayın ve oturum açın. Yazılım çalışma alanından Sitometre | Başlangıç | Temiz mod | SIT sıvıları. NOT: Numune alınmadan önce sitometre başlatma işlemi sırasında hava kabarcıkları ve tıkanıklıklar giderilmelidir.</li>
	</ol></li>
	<li>Kalite kontrol<ol><li>Fotoçoğaltıcı tüplerin voltajlarını kontrol etmek ve sitometrenin hassasiyetini değerlendirmek için kalite kontrol reaktifini kullanın.</li>
		<li>Sitometre kurulum reaktifini ve izleme boncuklarını 12 mm x 75 mm kapaklı polistiren tüpe yerleştirin.</li>
		<li>Tüpü girdap yaparak yavaşça karıştırın.</li>
	</ol></li>
	<li>Askı boncuklarının hazırlanması<ol><li>Taban çizgisini tanımlamak için, 12 mm x 75 mm kapaklı polistiren tüpe 0,5 mL seyreltici (10 mM filtrelenmiş PBS, pH 7) ve üç damla boncuk ekleyin. Kullanmadan önce tüpü hafifçe sarın.</li>
		<li>Sitometre yazılımı çalışma alanında Sitometre | CST ve sitometrenin sitometre yazılım arayüzünden ayrılmasını ve CS&amp;T arayüzüne bağlanmasını bekleyin. Ekranın altındaki sitometre yazılımı Durum Çubuğunda şu mesajı izleyin: Bağlantı Kesildi Sitometre.</li>
		<li>Kalite kontrol reaktifini içeren 12 mm x 75 mm kapaklı polistiren tüpü kullanın ve akış sitometresi probuna takın.</li>
	</ol></li>
	<li>Sitometre konfigürasyonunun doğrulanması<ol><li>Sistem Özeti penceresinde, sitometre yapılandırmasının deneme için uygun olduğunu doğrulayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Performans kontrolü için kurulum<ol><li>CS&amp;T araştırma boncuklarının lotuna karşılık gelen kurulum boncuklarının kimliğini seçin.</li>
	</ol></li>
	<li>Performans kontrolü<ol><li>Tüpü akış sitometresi probuna takın ve Kurulum Kontrolü penceresine tıklayın. Performansı Kontrol Et'i seçin ve Çalıştır'a tıklayın.</li>
		<li>Performans denetimi tamamlandıktan sonra bir iletişim kutusunun açılmasını bekleyin. Aşağıdakilerden birini yapın:<ol><li>Sitometre Performans raporunu görüntülemek için Raporu Görüntüle'ye tıklayın.</li>
			<li>Performans denetimini tamamlamak ve çalışma alanının kurulum görünümüne dönmek için Son'a tıklayın.</li>
			<li>Morfometrik ve floresan duyarlılık analizinin nihai sonucunu gözlemleyin Sistem Özeti | GEÇTİ durumuna sahip Sitometre Performans Sonucu.</li>
			<li>Tüpü sitometreden çıkarın. Sistem Özeti penceresinde görüntülenen sitometre performans sonuçlarını kontrol edin.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>5. Akış sitometrisi kullanarak numune analizi
<ol><li>Sitometre yazılımına giriş yapın.<ol><li>Sitometre yazılımı çalışma alanından Sitometre | Temiz mod | SIT sıvıları.</li>
		<li>Yazılım çalışma alanına uyum sağlayın.</li>
		<li>Negatif kontrol parçacıklarının morfometrik ve floresan özelliklerine (floresanssız boncuklar) dayalı geçit stratejisini tanımlayın.</li>
		<li>Hücre morfometrisini belirlemek için, SSC-A kullanarak FSC-A parametrelerinin analizi için Nokta Grafiği Grafiği'ni seçin (Ek Şekil 1A).</li>
		<li>Y ekseninde SSC-H ve x ekseninde SSC-W'nin analizi için Nokta Grafiği Grafiği kullanarak SSC ile tek hücreleri belirleyin (Ek Şekil 1B) ve y ekseninde FSC-H ve x ekseninde FSC-W analizi için Nokta Grafiği Grafiği kullanarak FSC ile tek hücreleri belirleyin (Ek Şekil 1C).</li>
		<li>Floresan analizleri için, FCS-A kullanan FL1 Nokta Grafiği Grafiklerini seçin. Etiketsiz sampve daha önce tek renkli Alexa Fluor 12 ile etiketlenmiş 75D ile etiketlenmiş samps içeren 488 mm x 488 mm tıpalı polistiren tüp kullanın (Ek Şekil 1D, E).</li>
	</ol></li>
	<li>Numuneyi akış sitometrisinde alın.<ol><li>Önceden etiketlenmiş numuneleri içeren 12 mm x 75 mm tıpalı polistiren tüp kullanın. Tüp içeriğini dikkatlice karıştırın, tüpü akış sitometresi probuna takın ve Al'a sol tıklayın.</li>
		<li>Lazerlerin gücünü ayarlamak için Parametreler'e tıklayın ve aşağıdaki seçeneklerde FSC'nin voltajını 182 V'a ve SSC'nin voltajını 236 V'a ayarlayın. Eşiği ayarlamak için Sitometre | Eşik ve aşağıdaki seçeneklerde FSC'yi 500 V'a ayarlayın.</li>
		<li>Parçacıkları boyut ve karmaşıklığa göre karakterize etmek ve tek hücreli analiz gerçekleştirmek için analiz kapısını ayarlayın.</li>
		<li>Otofloresansı gidermek için, yalnızca lateks boncukları içeren boyasız numuneyi analiz edin ve dedektörün voltajlarını ayarlayın: aşağıdaki seçeneklerde FL1'in (FITC) voltajını 332 V'a ayarlayın.</li>
		<li>Floresan analiz kapısını, nokta grafiğinde gösterilen negatif noktadan dörtgen biçimde ayarlayın.</li>
		<li>Morfometrik ve floresan analizler ayarlandıktan sonra, cihazı 50.000 olay için yapılandırın: Alım'ın altında Kaydet'e tıklayın.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Salzer, U., Sack, U., Fuchs, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+in+the+diagnosis+and+follow+up+of+human+primary+immunodeficiencies%5BTitle%5D)+AND+%22Electronic+Journal+of+the+International+Federation+of+Clinical+Chemistry+and+Laboratory%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry in the diagnosis and follow up of human primary immunodeficiencies.</a> Electronic Journal of the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory. 30 (4), 407(2019).</li>
<li>de Figueiredo, A. M., Glória, J. C., Chaves, Y. O., Neves, W. L. L., Mariúba, L. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+applications+of+microsphere-based+flow+cytometry%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diagnostic applications of microsphere-based flow cytometry: A review.</a> Experimental Biology and Medicine. 247 (20), 1852-1861 (2022).</li>
<li>Morgan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytometric+bead+array%3A+A+multiplexed+assay+platform+with+applications+in+various+areas+of+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cytometric bead array: A multiplexed assay platform with applications in various areas of biology.</a> Clinical Immunology. 110 (3), 252-266 (2004).</li>
<li>Graham, H., Chandler, D. J., Dunbar, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genesis+and+evolution+of+bead-based+multiplexing%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">The genesis and evolution of bead-based multiplexing.</a> Methods. 158, 2-11 (2019).</li>
<li>Kellar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+microsphere-based+flow+cytometric+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">Multiplexed microsphere-based flow cytometric assays.</a> Experimental Hematology. 30 (11), 1227-1237 (2002).</li>
<li>Schade, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chicken+egg+yolk+antibodies+%28IgY-technology%29%3A+A+review+of+progress+in+production+and+use+in+research+and+human+and+veterinary+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA+Alternatives+to+Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Chicken egg yolk antibodies (IgY-technology): A review of progress in production and use in research and human and veterinary medicine.</a> ATLA Alternatives to Laboratory Animals. 33 (2), 129-154 (2005).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+chicken+egg+yolk+immunoglobulins+in+the+control+of+terrestrial+and+aquatic+animal+diseases%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Advances%22%5BJournal%5D)">Application of chicken egg yolk immunoglobulins in the control of terrestrial and aquatic animal diseases: A review.</a> Biotechnology Advances. 29 (6), 860-868 (2011).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Analytical Biochemistry. 72 (1-2), 248-254 (1976).</li>
<li>Sousa, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+polyclonal+antibody-based+sandwich+ELISA+for+detection+of+Plasmodium+vivax+developed+from+two+lactate+dehydrogenase+protein+segments%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A novel polyclonal antibody-based sandwich ELISA for detection of Plasmodium vivax developed from two lactate dehydrogenase protein segments.</a> BMC Infectious Diseases. 14 (1), 49(2014).</li>
<li>Klimentzou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+immunochemical+evaluation+of+antibodies+Y+for+the+poorly+immunogenic+polypeptide+prothymosin+alpha%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Development and immunochemical evaluation of antibodies Y for the poorly immunogenic polypeptide prothymosin alpha.</a> Peptides. 27 (1), 183-193 (2006).</li>
<li>Redwan, E. M., Aljadawi, A. A., Uversky, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+efficient+protocol+for+immunoglobulin+Y+purification+from+chicken+egg+yolk%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Simple and efficient protocol for immunoglobulin Y purification from chicken egg yolk.</a> Poultry Science. 100 (3), 100956(2021).</li>
<li>Lee, H. Y., Abeyrathne, E. D. N. S., Choi, I., Suh, J. W., Ahn, D. U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+separation+of+immunoglobulin+Y+and+phosvitin+from+chicken+egg+yolk+without+using+organic+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Sequential separation of immunoglobulin Y and phosvitin from chicken egg yolk without using organic solvents.</a> Poultry Science. 93 (10), 2668-2677 (2014).</li>
<li>Pauly, D., Chacana, P., Calzado, E., Brembs, B., Schade, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgY+Technology%3A+Extraction+of+chicken+antibodies+from+egg+yolk+by+polyethylene+glycol+%28PEG%29+precipitation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">IgY Technology: Extraction of chicken antibodies from egg yolk by polyethylene glycol (PEG) precipitation.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e3084(2011).</li>
<li>Chang, H. M., Lu, T. C., Chen, C. C., Tu, Y. Y., Hwang, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+immunoglobulin+from+egg+yolk+by+anionic+polysaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Isolation of immunoglobulin from egg yolk by anionic polysaccharides.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 48 (4), 995-999 (2000).</li>
<li>Ko, K. Y., Ahn, D. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+immunoglobulin+Y+from+egg+yolk+using+ammonium+sulfate+precipitation+and+ion+exchange+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Preparation of immunoglobulin Y from egg yolk using ammonium sulfate precipitation and ion exchange chromatography.</a> Poultry Science. 86 (2), 400-407 (2007).</li>
<li>Polson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+IgY+from+the+yolks+of+eggs+by+a+chloroform+polyethylene+glycol+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Communications%22%5BJournal%5D)">Isolation of IgY from the yolks of eggs by a chloroform polyethylene glycol procedure.</a> Immunological Communications. 19 (3), 253-258 (1990).</li>
<li>Simonova, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((xMAP-based+analysis+of+three+most+prevalent+staphylococcal+toxins+in+Staphylococcus+aureus+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">xMAP-based analysis of three most prevalent staphylococcal toxins in Staphylococcus aureus cultures.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 406 (25), 6447-6452 (2014).</li>
<li>Sharma, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multiplex+assay+for+detection+of+staphylococcal+and+streptococcal+exotoxins%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A multiplex assay for detection of staphylococcal and streptococcal exotoxins.</a> PLoS One. 10 (8), e0135986(2015).</li>
<li>Merbah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+a+cytometric+p24-capture+bead-assay+for+the+detection+of+main+HIV-subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Standardization of a cytometric p24-capture bead-assay for the detection of main HIV-subtypes.</a> Journal of Virological Methods. 230, 45-52 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar, bu makalenin araştırılması, yazarlığı ve yayınlanması ile ilgili herhangi bir potansiyel çıkar çatışması beyan etmezler.

IgY antikorunun pH redüksiyonu ve ardından kaprilik asit kullanılarak lipid ayrımı ile çökeltilmesi yöntemi, işlevsellikte herhangi bir kayıp olmadan toplam antikorların izole edilmesinde etkilidir. Burada önerilen yöntem, asitleştirme ve kaprilik asit ile çökeltmeyi de kullanan, ancak daha karmaşık ve zahmetli bir protokole sahip olan Redwan ve ark.11 tarafından bildirilenden daha basit ve daha ucuzdur. Bu yöntem aynı zamanda, diğerlerinin yanı sıra PEG çökeltme 12,13, sodyum sülfat<sup class="xr...

Hastalıkların teşhisine yönelik immünoassay teknikleri arasında sitometrik boncuk testi, tek bir tahlilde binlerce partikülün analizine izin verdiği için oldukça hassas ve güvenilir bir yaklaşım olarak ortaya çıkmıştır1. Bu teknik, yüksek üretkenliğe sahip olmasının ve daha küçük hacimli numunelerin kullanımına izin vermesinin yanı sıra, sitokinler, adezyon molekülleri, antikor izotipleri ve proteinler gibi çeşitli moleküllerin saptanmasına izin verdiği için büyük esneklik de sunar 2,3.
Bu tahlillerin geliştirilmesi için farklı partiküller kullanılır, bunların arasında etkili ve düşük maliyetli bir girdi olan lateks boncuklar da vardır. Bunlar, belirli moleküllerin 3,4,5 kovalent veya kovalent olmayan bağlanmasına izin veren fonksiyonel grupların veya proteinlerin varlığı gibi yüzeylerinde değişiklikler sunabilir.
Bu immünolojik testler, hastalık belirteçlerinin tespitini gerçekleştirmek için antijenler ve antikorlar gibi bileşenleri kullanır ve genellikle fareler, tavşanlar ve keçiler gibi memelilerden antikorlar gerektirir. Bu, etik konularla ilgili sorunlar yaratır, çünkü memelilerin aşılanması genellikle birçok hayvanın iyi bir verim elde etmesini ve hayvanların acı çekmesine yol açan prosedürlerin sık sık uygulanmasını gerektirir 6,7. Buna bir alternatif, aşılanmış tavukların yumurta sarısından izole edilen IgY antikorlarının kullanılmasıdır, çünkü aşılanmış antijenlere karşı spesifik antikorların yüksek konsantrasyonları yumurta sarısında bulunabilir; Bir tavuğun üretimi, bir yıl boyunca 4.3 tavşan üretimineeşdeğerdir 6,7.
Bu nedenle, bu protokolün amacı, lateks boncuklu akış sitometrisi kullanılarak tavuk yumurtası sarısından elde edilen IgY antikorlarının değerlendirilmesi için bir yöntem sağlamaktır. Bunun için, lateks boncuklar kullanılarak sandviç formatında bir sitometrik boncuk immünolojik testi için bir standardizasyon yöntemi öneriyoruz. Model olarak, Plasmodium falciparum histidin açısından zengin protein II antijenine (IgY-PfHRP2) yönlendirilmiş IgY antikorları kullanıldı. Antikorların ekstraksiyonu için bir yöntem açıklıyoruz, bunların lateks boncuklara bağlanma konsantrasyonunu tanımlamak için kritik adımları tartışıyoruz ve antijenin tespit sınırının bir değerlendirmesini sunuyoruz. Akış sitometrisinin yüksek doğruluğu, lateks boncukların düşük maliyeti ile birleştiğinde, bu tekniği antikorlar ve antijenler gibi immünoassay araçlarının analizi için uygulanabilir kılar. Bu yöntem, çeşitli hedeflerin tespiti için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Anti-Tavuk IgY (H + L), yüksek oranda çapraz adsorbe edilmiş, CF&nbsp; Eşek</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SAB4600031</td><td></td></tr><tr><td>Anti-fare IgG (H+L), F(ab&prime;)2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SAB4600388</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto II</td><td>BD Biosciences</td><td>BF-FACSC2</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva CS& T araştırma boncukları (CS& T araştırma boncukları)</td><td>BD Biosciences</td><td>655050</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva yazılımı 7.0</td><td>BD Biosciences</td><td>655677</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad Protein Testi Boya Reaktif Konsantresi</td><td>Bio-Rad</td> <td># 5000006</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>Kaprilik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O3907</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj 5702 R</td><td>Eppendorf</td><td>Z606936</td><td></td></tr><tr><td>Klorür %37 asit moleküler sınıf</td><td>NEON</td><td>02618 NEON</td><td></td></tr><tr><td>CML lateks, %4 w/v</td><td>Invitrogen</td><td>C37253</td><td></td></tr><tr><td>Megafuge 8R</td><td>Thermo Scientific</td><td>TS-HM8R</td><td></td></tr><tr><td>N-(3-Dimetilaminopropil)-N&prime;-etilkarbodiimid Hidroklorür Tozu (EDC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7750-1G</td><td></td></tr><tr><td>N-Hidroksisüksinyum (NHS)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>130672-25G</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1003335620</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit</td><td>Acs Cientifica</td><td>P.10.0594.024.00.27</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hipoklorit</td><td>Acs Cientifica</td><td>R09211000</td><td></td></tr><tr><td>Termo Karıştırıcı Isı/Soğutma</td><td>KASVI</td><td>K80-120R</td><td></td></tr></tbody></table>

yumurta sarısı antikorlarına dayalı sitometrik boncuk testinin standardizasyonu

Standardization of a Cytometric Bead Assay Based on Egg-Yolk Antibodies

İmmünoanalizler, çok sayıda moleküler hedefin tespiti için önemli testlerdir. Şu anda mevcut olan yöntemler arasında, sitometrik boncuk testi son yıllarda önem kazanmıştır. Ekipman tarafından okunan her mikroküre, test edilen moleküller arasındaki etkileşim kapasitesinin bir analiz olayını temsil eder. Bu olayların binlercesi tek bir tahlilde okunur, böylece yüksek tahlil doğruluğu ve tekrarlanabilirlik sağlanır. Bu metodoloji, hastalıkların teşhisi için IgY antikorları gibi yeni girdilerin doğrulanmasında da kullanılabilir. Bu antikorlar, tavukların ilgilenilen antijen ile aşılanması ve daha sonra hayvanların yumurta sarısından immünoglobulinin çıkarılmasıyla elde edilir; Bu nedenle, bu, antikorları elde etmek için ağrısız ve oldukça verimli bir yöntemdir. Bu testin antikor tanıma kapasitesinin yüksek hassasiyetli doğrulanması için bir metodolojiye ek olarak, bu makale ayrıca bu antikorların ekstrakte edilmesi, antikorlar ve lateks boncuklar için en iyi bağlanma koşullarının belirlenmesi ve testin duyarlılığının belirlenmesi için bir yöntem sunmaktadır.

Şekil 2, asitleştirme yoluyla IgY antikorlarının ekstraksiyon işleminin grafiksel bir temsilini ve ardından kaprilik asit kullanılarak ayırmayı sağlar (Şekil 2).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65123/65123fig02.jpg"> Şekil 2: IgY antikorlarının ekstraksiyon aşamasının şematik gösterimi ve kaprilik asit kullanılarak</...

Bu protokol, antijen tespiti için IgY antikorları kullanan tahliller için lateks boncukların hazırlanması için bir metodolojiyi açıklar.

Yumurta sarısı antikorlarına dayalı sitometrik boncuk testinin standardizasyonu

Immunoassays are important tests for the detection of numerous molecular targets. Among the methods currently available, the cytometric bead assay has ...

Hastalık teşhisine yönelik immünoassay teknikleri arasında sitometrik boncuk testi, tek bir tahlilde binlerce partikülü analiz ederek oldukça hassas ve güvenilir bir yaklaşım olarak ortaya çıkmıştır. Akış sitometrisinin yüksek doğruluğu, lateks boncukların düşük maliyeti ile birleştiğinde, tekniğimizi antikorlar ve antijenler gibi immünolojik test araçlarının analizi için uygulanabilir hale getirir. IgY antikorları düşük maliyetlidir ve üretimlerinde etik avantajlara sahiptir ve nadir hastalıklar için bir tespit aracı olarak kullanılabilir.Gallus gallus deckle beyaz soyundan yeni yumurtlanmış veya dört günlük yumurtaları% 0.2 seyreltilmiş sodyum hipoklorit çözeltisine batırarak başlayın. Akan su altında hızlıca durulayın ve nazikçe silin. Yumurtayı dikkatlice kırın, sarısını bir yumurta sarısı ayırıcı yardımıyla beyazından ayırın.Ve fazla beyazı filtre kağıdı ile çıkarın. Yumurta sarısını delin ve içini 50 mililitrelik konik bir tüpe toplayın. Yumurta sarısını kullanmadan önce en az 24 saat eksi 20 santigrat derecede saklayın.Depolanan yumurta sarısı çözüldükten sonra, bir milimolar PBS'de bir ila 10 oranında seyreltin. Çözeltinin pH'ını bir normal hidroklorik asit ile beşe ayarlayın ve çözeltiyi altı ila 24 saat boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. Çözeltiyi 3000 G'de 40 dakika santrifüjleyin ve süpernatantın pH'ını beşe yeniden ayarlamadan önce geri kazanılan süpernatanı 0.7 milimetrelik bir selüloz filtre kullanarak filtreleyin.Dört santigrat derecede 30 dakika boyunca sürekli karıştırarak% 8.7'lik bir nihai konsantrasyona kaprilik asit ekleyin. Numuneleri 15 dakika santrifüjledikten sonra, süpernatanı çökeltilmiş malzemeden ayırın. Bir molar sodyum hidroksit kullanarak çözeltinin pH'ını 7.4'e yeniden ayarlayın.Ve eksi 20 santigrat derecede saklamadan önce Bradford testini kullanarak antikorları ölçün. 21 mikrolitre lateks boncuklara 21 mikrolitre EDC ve 21 mikrolitre NHS ekleyin. Ve filtrelenmiş 10 milimolar PBS ile 2,1 mililitrelik son hacme ayarlayın.Çözeltiyi 22 santigrat derecede, hızlı çalkalayarak üç saat boyunca inkübe edin. Daha önce ekstrakte edilen yakalama antikoru IgY PfHRP2'yi, bu çözeltinin 100 mikrolitresini içeren farklı mikro tüplere ekleyin. Ve tekrar 16 saat inkübe edin.Numuneleri santrifüjledikten ve süpernatantları attıktan sonra, santrifüjleme ve yeniden süspansiyon döngüleri kullanarak lateks boncukları 500 mikrolitre filtrelenmiş 10 milimolar PBS ile iki kez yıkayın. Boncukların bloke edilmesi için, numuneleri bir mililitre bloke edici tampon içinde yeniden süspanse edin ve iki saat inkübe etmek için daha önce gösterilen prosedürün aynısını izleyin. Boncukları PBS ile yıkadıktan sonra, 10 milimolar PBS tamponunda tekrar süspanse edin.Her bir mikro tüpe 10 milimolar PBS ve BSA karışımında bir ila 2000'e seyreltilmiş 100 mikrolitre floresan anti-tavuk antikoru ekleyin. Örnekleri karanlıkta 30 dakika inkübe edin. Boncukları yıkadıktan sonra, 250 mikrolitre filtrelenmiş 10 milimolar PBS ile tekrar süspanse edin.Bloke edilmiş boncuk preparatının 100 mikrolitresini, farklı miktarlarda seyreltilmiş rekombinant protein PfHRP2'yi üç kopya halinde içeren tüplere dağıtarak tespit sınırını belirleyin. Boncuk çözeltilerini protein ile 22 santigrat derecede, hızlı çalkalayarak bir saat boyunca inkübe edin. Boncukları, daha önce gösterildiği gibi santrifüjleme ile 500 mikrolitre filtrelenmiş 10 milimolar PBS ile yıkayın.Süpernatanı attıktan sonra, her numuneye 10 milimolar PBS ve BSA'da seyreltilmiş rekombinant proteine karşı iki mikrogram fare IgG antikoru ekleyin ve inkübasyon için aynı prosedürü izleyin. Daha sonra, her numuneye 100 mikrolitre seyreltilmiş floresan anti-fare antikoru ekleyin. İnkübasyondan sonra, numuneyi 250 mikrolitre filtrelenmiş 10 milimolar PBS içinde yeniden süspanse edin.Bilgisayarı ve akış sitometresini açın ve ekipmanın bilgisayara bağlanması için birkaç dakika bekleyin. Bilgisayarda yüklü olan sitometri yazılımına tıklayın ve oturum açın. Yazılım çalışma alanından Sitometre'yi, ardından Fluidics Başlatma'yı, Temizleme Modları'nı ve SIT Flush'ı seçin.Negatif kontrol parçacığının morfometrik ve floresan özelliklerine dayalı geçit stratejisini tanımlayın. Hücre morfometrisini belirlemek için, yan dağılım A'yı kullanarak ileri dağılım A parametrelerinin analizi için nokta grafiği grafiğini seçin.Y ekseninde W yan saçılımının ve X ekseninde H yan saçılımının analizi için nokta grafiği grafiğini kullanarak tek hücreleri yan dağılıma göre belirleyin. Ve Y ekseninde ileri dağılım W ve X ekseninde ileri dağılım H analizi için nokta grafiği çizim grafiğini kullanarak tek hücreleri ileri dağılıma göre belirleyin.Floresan analizi için, ileri saçılma kullanarak FL1 nokta grafiği grafiklerini seçin A.Etiketlenmemiş numuneler ve daha önce tek renkli Alexa Fluor 488 ile etiketlenmiş numuneler içeren durduruculu bir polistiren tüp kullanın ve tüpün içeriğini dikkatlice karıştırın. Tüpü akış sitometresi probuna takın ve Al'a sol tıklayın. Lazerlerin gücünü ayarlamak için Parametreler'e tıklayın ve aşağıdaki seçeneklerde ileri saçılmanın voltajını 182 volta ve yan saçılmanın voltajını 236 volta ayarlayın.Sitometrede eşiği ayarlamak için Eşik'e tıklayın ve aşağıdaki seçeneklerde FSC'yi 500 volta ayarlayın. Parçacıkları boyut ve karmaşıklığa göre karakterize etmek ve tek hücre analizi yapmak için analiz kapısını ayarlayın. Yalnızca lateks boncukları içeren boyasız numuneyi analiz ederek ve FL1 FITC dedektörünün voltajını 332 volta ayarlayarak otofloresansı giderin.Floresan analiz kapısını, nokta grafiğinde gösterilen negatif noktadan dörtgen biçimde ayarlayın. Morfometrik ve floresan analizler ayarlandıktan sonra, cihazı 50.000 olay için yapılandırın ve Kaydet'e tıklayın. Kaprilik asit kullanılarak ayrılması nedeniyle IgY PfHRP2 antikorunun elektroforetik profilleri burada gösterilmektedir.Bu şekilden, kaprilik asit ayrılmasından önceki ve sonraki antikorların, IgY'nin hafif ve ağır zincirlerine atıfta bulunan 65 kilodalton ve 27 kilodaltonluk karakteristik bantlarla benzer elektroforetik profiller gösterdiği görülebilir. Bunlara ek olarak, muhtemelen C terminal fragmanı yumurta sarısı proteini vitellogenin II öncüsü nedeniyle başka bantlar da görülebilir. Lateks boncuklar üzerindeki antikor doygunluk konsantrasyonunun değerlendirilmesi, boncuklarla bir immünolojik test geliştirmek için hayati önem taşır.Kullanılan ticari lateks boncukların her bir mikrolitresine bağlı farklı antikor konsantrasyonlarının floresan yüzdesinin bir eğrisi burada gösterilmektedir. Konsantrasyon arttıkça, yüzde değerleri de arttı ve iki mikrogram antikor konsantrasyonunda plato haline geldi ve hedef antijen immünolojik testi için optimal birleştirme konsantrasyonu olarak belirlendi. Saptama sınırı, değişen rPfHRP2 protein konsantrasyonlarına karşı lateks hız reaktivitesinin floresan yüzdesi değerlendirilerek belirlendi.Bir sandviç immünolojik testten, floresansın 0.01 mikrogram PfHRP2 proteininden arttığı ve 0.1 mikrogramda plato olduğu gözlendi. Sıfır mikrogram ve 0.01 mikrogramda floresansta anlamlı bir fark yoktu. Bununla birlikte, floresanda 0.01 mikrogram, 0.1 mikrogram ve 10 mikrogramda önemli bir fark gözlendi.Bu protokolün yıkama adımı, boncukların kaybını önlemek için kritik öneme sahiptir. Elde edilen sonuçta hata olmaması için gösterge iyi tanımlanmalıdır. Burada açıklanan adımlar, tam sitometri ile değerlendirilen lateks boncuklar kullanılarak yapılan tanı testlerinin güvenilirliğini sağlamak için gerekli olan önemli bir standardizasyonu temsil etmektedir.Bu nedenle, bu metodoloji klasik sandviç test modellerine bir alternatiftir. Bu yöntem, çeşitli tahlil türlerine uygulanabilir ve boncukların yüzeyine birkaç molekülün çıkarılmasının yanı sıra farklı analitlerin tespiti için uygun olabilir.

standardization-cytometric-bead-assay-based-on-egg-yolk

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

ViBE karmaşık matrisler daha hassas, tekrarlanabilir, otomatik sonuçlar için platform üzerinde özel testlerinin geliştirilmesi açıklanmıştır. Evrensel kartuşu testleri özel testlerin kullanım için kolayca adapte edilmelidir sağlar. Bu çok yönlülük, roman deneyleri ya da bu video örneklediği mevcut manuel testleri otomatik sürümleri, hızlı geliştirme ve doğrulama sağlar.

Akustik Membran mikropartikül Teknoloji Geliştirme Özel Çin Hamsteri Yumurtalık-host Hücre Proteini Tahliller

Bu raporda, biz büyük doğal ve adaptif lökosit popülasyonlarının numaralandırmak için taze tam kan üzerinde gerçekleştirilen bir feno testinin boyama ve analiz adımları göstermektedir. Biz çok merkezli klinik çalışma kapsamında bu işlemler gerçekleştirmek için konuları vurgulamaktadır.

Bir Tam Kan fenotipleme Testi Kullanarak Çok Merkezli Klinik Araştırmalar için Binbaşı Periferik Kan Lökosit Populasyonlarının Numaralama

Bu videoda, bir serum örneğindeki çeşitli antikor izotiplerini aynı anda tespit etmek için farklı antijenlerle birleştirilmiş floresan manyetik boncuklar veya mikroküreler kullanan bir immünolojik test tekniği açıklanmaktadır. Test, bir enfeksiyon sırasında veya aşılama sonrası serokonversiyonun anlaşılmasında yardımcı olur.

Multianalit İmmünoboncuk Testi: İnsan Serum Numunesinde Çoklu Antikor Alt Tiplerinin Eşzamanlı Tespiti için Akış Tabanlı Bir İmmünoassay Tekniği

Bu video, sentetik antijen sunan hücrelerin Boncuk Destekli Lipid Çift Katmanları aracılığıyla sulandırılmasını ve bunların aktive edilmiş T hücreleri tarafından üretilen sinaptik çıktıyı değerlendirmedeki uygulamalarını göstermektedir.

T Hücrelerinden Sinaptik Çıktıyı Araştırmak için Boncuk Destekli Lipid Çift Katmanlarının Kullanılması

Olgunlaşmamış dendritik hücreler, bağışıklık ve tolerans arasındaki dengeyi düzenlemek için seçici olarak tolerojenik veya olgun dendritik hücrelere farklılaştırılabilir. Bu çalışma, metabolik fenotiplerde farklılık gösteren olgunlaşmamış monosit türevli dendritik hücrelerden (moDC'ler), in vitro tolerojenik ve olgun moDC'lerden üretmek için bir araç sunmaktadır.

Metabolik fenotipleri farklı olarak sahip Olgunlaşmamış, Olgun ve tolerojenik Dendritik Hücrelerinin Üretimi

Burada, CD4 tanımlamak için bir akış sitometrik protokol mevcut+ ve CD8+ T hücreleri, γδ T hücreleri, B hücreler, NK hücreleri ve monosit yedi yerine sadece iki fluorochromes kullanarak insan periferik kan içinde. Bu yaklaşım ile beş ek işaretleri çoğu akışı cytometers üzerinde kaydedilir.

İki-fluorochrome tarafından yedi bağışıklık hücre alt kümeleri ayrımcılık Akış Sitometresi

Bu yöntemin amacı, eritrosit CR1 yoğunluğu bilinen üç denek ile karşılaştırarak herhangi bir deneğin eritrositlerinde CR1 yoğunluğunu belirlemektir. Yöntem, deneklerin eritrositlerinin phycoerythrin (PE) kullanılarak güçlendirilmiş bir sisteme bağlı bir anti-CR1 monoklonal antikor ile immünoboya dan sonra akış sitometrisini kullanır.

Akış Sitometrisinin Kullanılmasında Eritrosit Kompleman Reseptörü 1 Ölçümü

Burada periton, dalak ve kemik iliği dokularındaki murin immün B hücre bölmesinin akış sitometrisine göre heterojenliğinin basit bir analizinde açıklanmaktadır. Protokol diğer fare dokularına uyarlanabilir ve genişletilebilir.

Murine B Hücre Gelişiminin Akış Sitometrik Karakterizasyonu

Bu çalışmada, Japon ensefalit aşılı çocuklarda lenfositlerin tespiti için iki laboratuvarda iki akış sitometresi arasında deneysel ortamların ve analiz şablonlarının transferini kolaylaştırmak için bir yöntem geliştirilmiştir. Akış sitometresi deneyleri için standardizasyon yöntemi, araştırma projelerinin birden fazla merkezde etkili bir şekilde yürütülmesini sağlayacaktır.

Japon Ensefaliti Aşılı Çocuklarda Lenfositlerin Tespiti için Akış Sitometreleri Arasında Laboratuvarlar Arasında Transferin Standardizasyonu

Opsin ile sulandırılmış büyük unilameller lipozomlarda fosfolipid karıştırmayı ölçmek için floresan bazlı bir test tarif ediyoruz.

Fosfolipid Scramblase Aktivitesinin bir floresan bazlı analiz

Öğrenin, IgY antikorları ve lateks boncuklar kullanarak sitometrik boncuk testini standartlaştırma yöntemini. Bu protokol, antijen tespiti için yüksek duyarlılıklı ve güvenilir bir immunoassay analizi sağlar.

Yumurta sarısı antikorlarına dayalı sitometrik boncuk testinin standardizasyonu

Daha fazla video keşfet