Drosophila melanogaster kullanarak uçucu ajanların yüksek verimli araştırılması için seri anestezi dizisi

SAA, sofistike bir beyin ve geniş bir davranış repertuarına sahip omurgasız model organizmalardaki uçucu ajanların farmakolojisini araştırmak için yüksek verimli işlemeye izin verir. Drosophila melanogaster'de bulunan genetik araç kutusu ile kombinasyon halinde, bu teknik uçucu ajanların farmakogenetiğinin hızlı ve uygun maliyetli bir şekilde çalışılmasını sağlar. Birçok insan kirleticiler veya terapötik ajanlar olarak uçucu ajanlara maruz kalmaktadır.

Anesteziye ek olarak, uçucu anesteziklerin çok sayıda toksik ve faydalı yan etkisi vardır. Etki derecesi kısmen, büyük ölçüde keşfedilmemiş olan genetik tarafından belirlenir. Ahşap çerçeveyi yaptıktan sonra, her kapakta 9/32 inç matkap ucu ile iki delik açarak 50 mililitrelik kronik boru kapaklarını değiştirin.

Düzensiz plastiği temizlemek için delikleri zımparalayın. Ayrıca yüzeyi pürüzlendirmek için kapağın üstünü zımparalayın. Ardından, plastiği puanlayarak ve puanlanan çizgide temizleyerek beş mililitrelik serolojik pipeti boyuta göre kesin.

Kesilen veya kırılan pipetlerin uçlarını zımparalayın. Daha sonra, tüplere ağ yapıştırın ve yapıştırıcı kuruduktan sonra ağı tüp boyutuna kesin. Tüpleri, her iki tüp de kapağın üzerine uzanacak şekilde konik kapakların deliklerine yerleştirin.

Giriş tüpünün tüpün içine çıkıştan daha uzun süre uzandığından emin olun. Parçaları birbirine sabitlemek ve kurumasını sağlamak için tüplerin etrafındaki kapakların üst kısımlarına yapıştırıcı uygulayın. Yapışkan kablo bağlarını çerçeveye takın.

Fermuarlı bağları kullanarak kapakları çerçeveye yapıştırın ve fermuar bağı etiket uçlarını kısa kesin. Tygon borusunun uzunluğunu kesin ve her modifiye edilmiş kapaktaki giriş ve çıkış borularına bağlayın. Yukarı akış ucundan başlayarak, boruyu önce girişe, ardından çıkıştan sonraki konumun girişine takın.

Ardından, en aşağı akış girişine bir akış göstergesi ekleyin. İlk konuma 50 mililitrelik bir konik tüp koyun ve su doldurma işaretini işaretleyin. Tüpü çıkarın.

Giriş borusunun altındaki suyla doldurun ve tekrar yerine yerleştirin. Buharlaştırıcı için ara yüzeyi hazırlayın. Pistonları çıkarın, iki adet 10 mililitrelik dağıtım şırıngasından çentikleri kesin ve deliklerle hizalamak için çentikler doğrudan buharlaştırıcının önüne bakacak şekilde buharlaştırıcı girişine ve çıkışına yerleştirin.

Tüm sistemi bağlayın. Taşıyıcı gaz tankını regülatör, gaza özgü debimetre, buharlaştırıcı ve SAA ile bağlamak için tygon borusu kullanın. Dizideki boş konumları boş 50 mililitrelik kronikleşmiş tüplerle doldurun.

Şimdi benzin deposunu açın. Debimetreyi dakikada iki litreye açın ve buharlaştırıcıyı% 0'a kadar açınBuharlaştırıcının akış yönündeki akış ölçeri ve akış için SAA'nın son odasının çıkış yönündeki akış göstergesini kontrol ederek sistemdeki gaz akışını onaylayın. Alternatif olarak, aşağı akış boru ucunu suya yerleştirin ve kabarcıkları arayın.

Anestezik maruziyetten 24 saat veya daha uzun bir süre önce, tercih edilen yöntemi kullanarak sinek kohortlarını deney için gerektiği gibi sıralayın. Sinekleri yiyecek şişelerinden boş 50 mililitrelik konik tüplere aktarın. Maruz kalmadan önce ölü sinekleri sayın ve kaydedin.

50 mililitrelik konik tüplerin kapağını sökün ve sineklerle SAA'ya vidalayın. Taşıyıcı gazı açın ve istenen akış hızına ayarlayın. Anestezik buharlaştırıcıyı istenen konsantrasyona ayarlayın ve sinekleri istenen süre boyunca açığa çıkarın.

Maruz kalmanın sonunda, sistemi beş dakika boyunca dakikada 1,5 litrede taze gaz akışıyla yıkayın, bu da toplam SAA hacminin yaklaşık 10x hacmine karşılık gelir. Yüksek basınç regülatörünü tamamen açın, ardından taşıyıcı gaz akışını sağlamak için yarım tur kapatın. Her hat için boruları debimetrelere ve buharlaştırıcıya kadar takip edin ve buharlaştırıcılardaki anestezik seviyesini kontrol edin.

Gaz akarken, debimetredeki ve aşağı akış akış göstergesindeki akışı gösterdiğini onaylayın. Deneyin sonunda, anesteziyi yıkamak için dört ila beş dakika hava akışına izin verin. Tek bir popülasyondan tek çift toplantılarla izole edilen yedi çizgi, ND23 60114 sineklerinde evrimsel basınç nedeniyle izo flor toksisitesine bağlı mortalitede varyasyon göstermiştir.

Travmatik beyin hasarından önce 15 dakika% 2 izo flor içeren ön koşullandırma sinekleri, beyaz 1118 ve sarı / beyaz suşlarda 24 saatte ölüm indeksini azaltmıştır. 24 saatlik mortalite indeksi, önceden şartlandırılmış Oregon R ve Canton S hatlarında anlamlı derecede düşük değildi. Montaj sırasında, modifiye şırıngalardaki çentikler, buharlaştırıcı portlarının delikleriyle aynı hizada olmalıdır.

Maruz kalma sırasında, sistemden akış olup olmadığını periyodik olarak kontrol edin. Bu prosedür, uçucu ajanların farmakolojisi hakkında fikir sahibi olabilecek çok çeşitli davranışsal, sağkalım ve moleküler çalışmalar için takip edilebilir.