Kuduz Antijenini Kapsülleyen Pulsatil Polimerik Mikropartiküllerin İmalatı

Bu yaklaşımın önemi, tek bir enjeksiyonda çok doz aşıların uygulanmasında kullanılabilmesi ve özellikle yeni doğanların erişim zorlukları nedeniyle aşılanmadığı düşük ve orta gelirli ülkelerde potansiyel olarak milyonlarca hayat kurtarabilmesidir. Bu üretim yöntemi, kuduz aşısının, salınımı sadece tek bir enjeksiyonla mevcut aşılama programlarını taklit eden mikropartiküllerde kapsüllendiğinde doğal bağışıklık kazandıran formunu korumasını sağlar. Kuduz, ölümü önlemek için bazı durumlarda beş adede kadar tekrarlanan aşı enjeksiyonu gerektiren ölümcül bir hastalıktır.

Bununla birlikte, tam aşı rejiminin tek bir ziyarette uygulanması, bağlılığı artırabilir ve hayat kurtarabilir. Bu teknik, çeşitli hastalıklar için çeşitli terapötikler veya profilaktikler sunabilen bir platform teknolojisini temsil eder. Başlamak için, 3D baskılı ana kalıp yüzeyini, yüzeyinde 40 mikrolitre triklorosilane içeren bir cam slayt içeren bir vakum odasına yerleştirerek tedavi edin.

Vakuma bir saat boyunca başlayın. PDMS prepolimer baz ve kürleme maddesini 9:1 kütle oranında plastik bir kaba karıştırın. Ardından, çözeltiyi 50 mililitrelik bir tüpe aktarın ve oda sıcaklığında üç dakika boyunca 300 G santrifüj yapın.

Santrifüjlemeden sonra, çözeltinin açık olduğundan emin olun. Yüzey işlemi tamamlandıktan sonra, ana kalıbı bir alüminyum folyo kabına yerleştirin ve kürlenmemiş PDMS'yi kalıba dökün, böylece özelliklerin tamamen suya batırılmasını sağlayın. Alüminyum folyo kabını bir vakum odasına yerleştirin ve hava kabarcıklarını gidermek için vakumu bir saat boyunca çekin.

Alüminyum folyo kabı çıkardıktan sonra, ana kalıbın her iki ucuna 800 mikrometrelik ara parçalar yerleştirin ve kabarcıkları önleyerek ana kalıbın üzerine temiz bir cam sürgü yerleştirin. Kalıbı 800 mikronluk ara parçaların üzerine sıkıştırmak için bağlayıcı klipsler kullanın. Prepolimeri fırında dört saat boyunca 120 santigrat derecede kürleyin.

Kürlendikten sonra, bağlayıcı klipsleri dikkatlice serbest bırakın. Ana kalıbı kürlenmiş PDMS kalıbından ayırmak için bir tıraş bıçağı kullanın. PLGA filmini hazırlamak için, 450 miligram PLGA'yı bir halka şimi içinde yapışmaz bir polimer tabaka üzerine yerleştirin.

Ardından, PLGA üzerine ikinci bir yapışmaz polimer levha yerleştirin ve yığını parmak sızdırmazlığına kadar iki alüminyum blok arasında sıkıştırmak için 101,6 milimetrelik bir C kelepçesi kullanın. C kelepçeli tertibatı vakumlu bir fırına yerleştirin. Fırında 30 dakika kaldıktan sonra, kelepçeyi sıkın ve 30 dakika daha geri yerleştirin.

Ardından, tertibatı soğuması için dört saat boyunca bir kurutucuya aktarın. Soğuduktan sonra, kelepçeyi gevşetin, PLGA filmini yapışmaz polimer tabakalardan çıkarın ve etiketli bir Petri kabına yerleştirin. Petri kabını daha sonra kullanmak üzere bir kurutucunun içinde saklayın.

PLGA parçacıkları oluşturmak için, PDMS kalıp yüzeyini daha önce gösterildiği gibi işlemden geçirin. Cımbız veya neşter kullanarak, 250 mikron PLGA filmi yaklaşık parçacık dizisinin büyüklüğünde olacak şekilde kesin ve işlenmiş PDMS kalıbına yerleştirin. PDMS kalıbının üstündeki PLGA filmi üzerine temiz bir cam mikroskop sürgüsü yerleştirin ve dizinin ve PLGA filminin üzerine bir yaylı kelepçe yerleştirerek bunları birbirine sabitleyin.

Kelepçeli kalıp tertibatını vakumlu fırında bir saat tutun, ardından oda sıcaklığında 15 dakika soğutun. Soğutulduktan sonra, PDMS kalıbını PLGA parçacık dizisinden ayırmak için bir tıraş bıçağı kullanarak basıncı yavaşça uygulayın ve PLGA parçacıklarını daha fazla kullanım için bir kurutucuda saklayın. Partikülleri konsantre kuduz aşısı antijeni ile doldurmak için, piezoelektrik dağıtıcıyı hazırlayın ve PLGA parçacıklarını içeren slaytı dağıtım alanına yerleştirin.

Konsantre antijeni plakaya yükleyin, ardından hedef kurulum parametrelerini girin ve Çalıştır'a tıklayın. Piezoelektrik robot daha sonra parçacıkları dolduracaktır. Tamamlandığında, parçacıkların doldurulduğunu doğrulamak için bir stereoskop kullanın.

Doldurulmuş parçacığı sızdırmaz hale getirmek için, bir sıcak plaka üzerine paslanmaz çelik bir blok ve paslanmaz çelik blok üzerine iki paralel mikroskop slaytı yerleştirin. Paslanmaz çelik bloğu tesviye ettikten sonra, sıcak plakayı açın ve sıcaklığı 205 santigrat dereceye ayarlayın. Paslanmaz çeliğin istenen yüzey sıcaklığına ulaşıldığında, doldurulmuş PLGA parçacıklarını iki cam slayt üzerinde askıya alın ve hemen 18 saniye boyunca bir zamanlayıcı başlatın.

Sızdırmaz parçacık dizisini sıcak plakadan çıkardıktan sonra, laboratuvar tezgahındaki iki cam slayt üzerinde askıya alın ve bir dakika soğutun. Sızdırmaz parçacıkları toplamak için, neşter bıçağını slayta 45 derecelik bir açıyla tutun ve slayttan ayırmak için parçacıkların tabanına basınç uygulayın. Bir neşter kullanarak, hasat edilen parçacıkları 0.5 mililitrelik düşük proteinli bağlayıcı bir tüpe taşıyın.

Kuduz aşısı stabilitesini korumak için sığır serum albümini ve glikoz içeren 250 mikrolitre PBS ekleyin Numuneyi stereoskop altına yerleştirin ve bir çift ince uçlu cımbız üzerinde bir çatal kullanarak parçacıkları ezin. Partikül dolumu sırasında, tam çözücü veya su buharlaşması için yeterli kuruma süresi gereklidir. Kuruduktan sonra, parçacık çekirdeğinin dibinde bir çözünen depo kalır.

Partiküllerin ideal morfolojisi, bu PLGA için 18 ila 24 saniyelik tavan süreleri arasında gözlemlenmiştir, çünkü kargo içeren parçacıklar o zamanlarda parçacık yapısını kaybetmeden tamamen kapatılmıştır. Parçacıklar, düzgün bir şekilde paketlenip kapatıldığında 19 gauge'lik bir iğneye kolayca sığacak kadar küçüktü. Ayrıca, 10 parçacık,% 2 karboksimetil selüloz gibi viskoz bir çözeltiye enjekte edilirken 19 gauge'lik bir iğneden tutarlı bir şekilde aktı.

Transmisyon elektron mikrografı, konsantre antijen örneğinde bozulmamış kuduz varyantlarını gösterdi ve bunlar başlangıç stok çözeltisinden yaklaşık 4.4 kat daha konsantreydi. Sızdırmazlıktan sonra, antijenin yaklaşık% 69'u biyoaktif formunda kapsüllenmiş olarak kalır, bu da ısı stresinin sızdırmazlık sırasında önemli kayıplara neden olduğunu, ancak viral antijenin çoğunun bozulmadan kaldığını gösterir. Mikropartikül doldurma en kritik adımlardan biridir.

Parçacıklar doğru doldurulmazsa, parçacıkların doğru şekilde kapatılması olası değildir. Stabiliteyi anlamak için, parçacık çekirdeğindeki eksipiyanlar ve diğer biyolojik olarak ilgili malzemeler de dahil olmak üzere ek formülasyon geliştirme gerekli olacaktır.