Name: Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:40:00.000+00:00
Duration: 4 min 10 s
Description: Öğrenin, farelerde noninvaziv intratrakeal LPS damlatma yöntemiyle akciğer inflamasyonunu araştırın. Bu teknik, TNF-alpha seviyelerini ölçerek pulmoner ilaç iletimi çalışmalarında etkili sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No.: 81903902), Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (No.: 2019M663457), Sichuan Bilim ve Teknoloji Programı (No.: 2020YJ0172) ve Chengdu TCM Üniversitesi Xinglin Scholar Research Premotion Projesi (No.: QJRC2022053) tarafından desteklenmiştir.

Hayvan deneyi protokolü, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Yönetim Komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır (Kayıt No. 2021-11). Bu çalışmada erkek C57/BL fareler (20-25 g, 6-8 haftalık) kullanıldı. Fareler bir hayvan odasında tutuldu ve deney sırasında içmek ve yemek yemekte özgürdüler.
1. Hazırlık
<ol><li>Entübasyon platformunun bir taban, bir yükseltici, bir ataş, iki lastik bant ve bazı iplerden oluştuğundan emin olun. Bir ip alın, ipi yükselticinin üstündeki iki delikten geçirin ve ipin iki ucunu sırasıyla yükselticinin üstündeki küçük çıkıntılara bağlayın. NOT: Fare kafasının ip ile iki delik arasından geçmesi için yer bırakın.</li>
	<li>Ataşın her iki ucuna iki lastik bant bağlayın ve ataşları lastik bantlarla yükselticinin arkasına bantlayın. Son olarak, yükselticiyi tabana 90°'de sabitleyin (Şekil 1).</li>
	<li>Uygun boyut ve uzunlukta bir kanül seçin. 20−30 g'lık bir fare için, 22 G'lik bir kateter (2,5-3,8 cm uzunluğunda) kullanılabilir11. Kanülü bir kanül kalemi üzerine monte edin ve kalemin ışığını açın (Şekil 2).</li>
	<li>Küçük cerrahi forseps ve Pasteur pipetini %70 alkolle dezenfekte ederek hazırlayın.</li>
</ol>2. Test bileşiğinin hazırlanması
<ol><li>3 mg / mL konsantrasyona sahip bir LPS çözeltisi oluşturmak için 3 mg LPS'yi 1 mL fosfat tamponlu salin (PBS, pH 7.2) içinde ağırlıklandırın ve çözün.</li>
	<li>% 1'lik bir pentobarbital sodyum çözeltisi oluşturmak için 10 mg pentobarbital sodyumu 1 mL normal salin içinde tartın ve çözün. 0,45 μm'lik bir şırınga filtresi kullanarak çözeltiyi filtreleyin-sterilize edin.</li>
</ol>3. Noninvaziv orofaringeal instilasyon
<ol><li>Fareleri, 50 mg/kg12,13 dozunda %1 pentobarbital sodyum intraperitoneal enjeksiyonu ile uyuşturun. Anestezinin derinliğini, doğru reflekse yanıt eksikliği ile belirleyin.</li>
	<li>Anestezi uygulanan fareyi entübasyon platformuna yerleştirin. Üst ön dişleri iplikle ve iki ön ayağı lastik bantlarla sabitleyin (Şekil 3).</li>
	<li>Dili cımbızla dışarı çekin ve sol elinizle tutun. Kanülü yavaşça, ağız boyunca, sağ elinizle mandibuler epiglottiste doğru itin. Trakeayı bulmak için kanül kaleminin ışığını kullanın ve yavaşça trakeaya yerleştirin (Şekil 4).</li>
	<li>Kanül trakeaya yerleştirildikten sonra, entübasyon kalemini yavaşça çekin ve kanülü içeride bırakın. Pasteur pipetini kanül eklemine yerleştirin ve kafaya bastırın (Şekil 5). NOT: Farenin göğsü şişerse, entübasyon başarılı olur (Şekil 6).</li>
	<li>Başarılı endotrakeal entübasyondan sonra, düz başlı bir mikroşırınga14,15 kullanarak farelere kanül yoluyla 3 mg / kg'da 3 mg / mL LPS aşılayın (Şekil 7).</li>
	<li>İşiniz bittiğinde, kanülü ve mikro şırıngayı çıkarın. Fareyi iskeleden çıkarın ve kurtarmak için ayrı bir kafese yerleştirin. İyileşene ve vicdanını yeniden kazanana kadar farenin solunum durumunu gözlemleyin. NOT: LPS trakeal instilasyondan 12 saat sonra, hayvan etik komitesi tarafından onaylanan prosedürü izleyerek fareleri ötenazi yapın. Serum TNF-α testleri ve kuru-ıslak akciğer ağırlığı ölçümleri standart prosedürler kullanılarak yapıldı.</li>
</ol>

<ol><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+human+amnion+epithelial+cells+through+endotracheal+instillation+against+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Xi+Bao+Yu+Fen+Zi+Mian+Yi+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Protective effect of human amnion epithelial cells through endotracheal instillation against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice.</a> Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 33 (1), 7-11 (2017).</li>
<li>Butt, Y., Kurdowska, A., Allen, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lung+injury%3A+A+clinical+and+molecular+review%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology+and+Lab+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute lung injury: A clinical and molecular review.</a> Archives of Pathology and Lab Medicine. 140 (4), 345-350 (2016).</li>
<li>Ware, L. B., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> The New England Journal of Medicine. 342 (18), 1334-1349 (2000).</li>
<li>Fan, E., Brodie, D., Slutsky, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%3A+Advances+in+diagnosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome: Advances in diagnosis and treatment.</a> JAMA. 319 (7), 698-710 (2018).</li>
<li>Meyer, N. J., Gattinoni, L., Calfee, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome.</a> Lancet. 398 (10300), 622-637 (2021).</li>
<li>An, N., Yang, T., Zhang, X. X., Xu, M. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bergamottin+alleviates+LPS-induced+acute+lung+injury+by+inducing+SIRT1+and+suppressing+NF-%CE%BAB%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immunity%22%5BJournal%5D)">Bergamottin alleviates LPS-induced acute lung injury by inducing SIRT1 and suppressing NF-κB.</a> Innate Immunity. 27 (7-8), 543-552 (2021).</li>
<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+trans-oral+and+trans-tracheal+intratracheal+instillations+in+a+murine+model+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Comparative study of trans-oral and trans-tracheal intratracheal instillations in a murine model of acute lung injury.</a> The Anatomical Record. 295 (9), 1513-1519 (2012).</li>
<li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (52), e2581(2011).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Panaxydol+attenuates+ferroptosis+against+LPS-induced+acute+lung+injury+in+mice+by+Keap1-Nrf2%2FHO-1+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Panaxydol attenuates ferroptosis against LPS-induced acute lung injury in mice by Keap1-Nrf2/HO-1 pathway.</a> Journal of Translational Medicine. 19 (1), 96(2021).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+epoxide+hydrolase+inhibitor+attenuates+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+and+improves+survival+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Soluble epoxide hydrolase inhibitor attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury and improves survival in mice.</a> Shock. 47 (5), 638-645 (2017).</li>
<li>Nosaka, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+tube+length+of+orotracheal+intubation+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Optimal tube length of orotracheal intubation for mice.</a> Laboratory Animals. 53 (1), 79-83 (2019).</li>
<li>Cicero, L., Fazzotta, S., Palumbo, V. D., Cassata, G., Lo Monte, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthesia+protocols+in+laboratory+animals+used+for+scientific+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Bio-Medica%3A+Atenei+Parmensis%22%5BJournal%5D)">Anaesthesia protocols in laboratory animals used for scientific purposes.</a> Acta Bio-Medica: Atenei Parmensis. 89 (3), 337-342 (2018).</li>
<li>Ehrentraut, H., Weisheit, C. K., Frede, S., Hilbert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+acute+lung+injury+in+mice+by+direct+intratracheal+lipopolysaccharide+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Inducing acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation.</a> Journal of Visualized Experiments. (149), e59999(2019).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT6+inhibits+ferroptosis+and+alleviates+acute+lung+injury+by+regulating+P53%2FSLC7A11+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">STAT6 inhibits ferroptosis and alleviates acute lung injury by regulating P53/SLC7A11 pathway.</a> Cell Death & Disease. 13 (6), 530(2022).</li>
<li>Aramaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+operational+tolerance+and+generation+of+regulatory+cells+after+intratracheal+delivery+of+alloantigen+combined+with+nondepleting+anti-CD4+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Induction of operational tolerance and generation of regulatory cells after intratracheal delivery of alloantigen combined with nondepleting anti-CD4 monoclonal antibody.</a> Transplantation. 76 (9), 1305-1314 (2003).</li>
<li>Lan, W. Activation of mammalian target of rapamycin (mTOR) in a murine model of lipopolysaccharide (LPS) -induced acute lung injury (ALI). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Peking+Union+Medical+College%22">Peking Union Medical College</a>. , PhD Thesis (2010).</li>
<li>Lv, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tenuigenin+ameliorates+acute+lung+injury+by+inhibiting+NF-%CE%BAB+and+MAPK+signalling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Physiology+%26+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Tenuigenin ameliorates acute lung injury by inhibiting NF-κB and MAPK signalling pathways.</a> Respiratory Physiology & Neurobiology. 216, 43-51 (2015).</li>
<li>Yang, H., Lv, H., Li, H., Ci, X., Peng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oridonin+protects+LPS-induced+acute+lung+injury+by+modulating+Nrf2-mediated+oxidative+stress+and+Nrf2-independent+NLRP3+and+NF-%CE%BAB+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">Oridonin protects LPS-induced acute lung injury by modulating Nrf2-mediated oxidative stress and Nrf2-independent NLRP3 and NF-κB pathways.</a> Cell Communication and Signaling. 17 (1), 62(2019).</li>
<li>Im, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+orthotopic+lung+cancer+mouse+model+via+thoracotomy+and+orotracheal+intubation+enabling+in+vivo+imaging+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Improvement of orthotopic lung cancer mouse model via thoracotomy and orotracheal intubation enabling in vivo imaging studies.</a> Laboratory Animals. 48 (2), 124-131 (2014).</li>
<li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation%3A+description%2C+evaluation+and+comparison+with+transillumination%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Laboratory Animals. 42 (2), 222-230 (2008).</li>
<li>Nelson, A. M., Nolan, K. E., Davis, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+orotracheal+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Repeated orotracheal intubation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (157), e60844(2020).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvesicles+packaging+IL-1%CE%B2+and+TNF-%CE%B1+enhance+lung+inflammatory+response+to+mechanical+ventilation+in+part+by+induction+of+cofilin+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Microvesicles packaging IL-1β and TNF-α enhance lung inflammatory response to mechanical ventilation in part by induction of cofilin signaling.</a> International Immunopharmacology. 63, 74-83 (2018).</li>
<li>Feng, Z. Comparative study of different intratracheal instillation in acute lung injury model of mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Jilin+University%22">Jilin University</a>. , Master's Thesis (2010).</li>
<li>Chen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+acute+lung+injury+mice+model+established+by+intranasal+and+intratracheal+instillation+of+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Clinics+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Comparison of acute lung injury mice model established by intranasal and intratracheal instillation of lipopolysaccharide.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 38 (02), 222-227 (2022).</li>
<li>Luckow, B., Lehmann, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+bronchoalveolar+lavage+in+mice+by+orotracheal+intubation+avoiding+tracheotomy%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">A simplified method for bronchoalveolar lavage in mice by orotracheal intubation avoiding tracheotomy.</a> BioTechniques. 71 (4), 534-537 (2021).</li>
<li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601(2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Başlangıçta, trakea19'un yerini bulmak için ağız boşluğunun içine baktık. Bununla birlikte, bu işlem sırasında, C57 / BL farelerinin trakeasının dar olduğunu keşfettik, bu da endoskop20 gibi ekipmanların yardımı olmadan bu yöntemle doğru yeri bulmayı zorlaştırıyor. Daha fazla araştırma üzerine, entübatör lambasından gelen ışığın vücudun yüzeyine nüfuz edebileceğini ve operatörün kanül21'in konumunu belirlemesine izin verdiğini bulduk.
<p class="j...

Akut akciğer hasarı (ALI) sık görülen bir klinik sendromdur. Çeşitli patojenik faktörler altında, akciğer epitel hücrelerinin ve vasküler endotel hücrelerinin fizyolojik bariyerinin bozulması, alveoler geçirgenliğin artmasına neden olur, böylece akciğer kompliyasının azalmasına, pulmoner ödem ve ciddi hipoksemiye neden olur1. Akut solunum sıkıntısı sendromu (ARDS) ALI'nin en şiddetli formudur. Kontrolsüz inflamasyon ve oksidatif stres hasarı, ALI'nin ve daha şiddetli ARDS2'nin ana nedenleri olarak kabul edilir. Alveoler epitel hücreleri travma nedeniyle doğrudan yaralandığında, alveoler makrofajların enflamatuar yanıt zinciri aktive olur ve akciğerde iltihaplanmaya yol açar3. Küresel olarak, yılda 3 milyondan fazla akut ARDS'li hasta vardır ve yoğun bakım ünitesi başvurularının yaklaşık% 10'unu oluşturmaktadır; Ek olarak, ağır vakalarda ölüm oranı% 46 kadar yüksektir4,5,6. Bu nedenle, patogenezini incelemek için uygun bir ALI hayvan modeli oluşturmaya ihtiyaç vardır. Fare, ALI çalışmasında en yaygın kullanılan deney hayvanıdır, çünkü solunum yolu ALI çalışmaları için insan solunum yolunu iyi simüle edebilir. Ayrıca, ALI masif inflamatuar hücre infiltrasyonu, artmış pulmoner vasküler geçirgenlik ve pulmoner ödem olarak kendini gösterir. Serumdaki inflamatuar sitokinlerdeki değişiklikler ve akciğer kuru-ıslak ağırlık oranı ALI7 derecesini yansıtır.
Şu anda, farelerde LPS'ye bağlı ALI'yi modellemek için ana yöntemler arasında intranazal ve cerrahi trakeal entübasyon 8,9 bulunmaktadır. Burada, noninvaziv orofaringeal entübasyon yoluyla trakeaya LPS vermek için yeni bir yöntem öneriyoruz. Bu yöntem, farenin trakeasını bulmak için ışıklı bir entübatör kullanır ve daha sonra LPS'yi trakea ve akciğere iletir. Bu yöntem, LPS'yi akciğerlere intranazal doğum yönteminden daha doğru bir şekilde iletir. Cerrahi trakeal entübasyon ile karşılaştırıldığında, bu yöntem ameliyat gerektirmez, yaralara neden olmaktan kaçınır ve farelerde ağrıyı azaltır10. Bu nedenle, bu yöntem ALI'nin daha ikna edici bir fare modelini oluşturmak için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Lipopolisakkarit</td><td>MERK</td><td>L4130</td><td>LPS</td></tr><tr><td>Mikrolitre Şırıngalar</td><td>SHANGHAI GAOGE SANAYİ VE TİCARET CO., LTD</td><td></td> 10028505008124 <td>LPS</td></tr><tr><td>Fare kanülü</td><td>RWD Life Science</td><td>803-03008-00</td><td>Fare kanülü</td></tr><tr><td>Fare entübasyon kiti</td><td>RWD Life Science</td><td>903-03027-00</td><td>Bir taban, bir yükseltici, bir entübatör, bir cerrahi forseps ve bazıları dahil dizeler</td></tr><tr><td>Pasteur pipet</td><td>Biosharp yaşam bilimleri</td><td>BS-XG-03</td><td>Entübasyonun başarısını doğrulamak için</td></tr><tr><td>Pentobarbital sodyum</td><td>Beijing Chemical Co., Çin</td><td>20220918</td><td>Fareleri uyuşturmak için</td></tr></tbody></table>

farelerde noninvaziv İntratrakeal lipopolisakkarit damlatma

Noninvasive Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation in Mice

Lipopolisakkarit (LPS) veya endotoksin tarafından indüklenen akut akciğer hasarı (ALI) fare modeli, akut akciğer hasarı veya akut inflamasyon ile ilgili hayvan çalışmalarında hala en sık kullanılan modeller arasındadır. Akut akciğer hasarlı fare modellerinde en sık kullanılan yöntemler, LPS'nin intraperitoneal enjeksiyonu ve LPS'nin trakeal infüzyonu için trakeostomidir. Bununla birlikte, ilk yöntem akciğer hedeflemesinden yoksundur ve diğer organlara zarar verir ve ikinci yöntem operatif travmaya, enfeksiyon riskine ve düşük sağkalım oranına neden olur. Burada, farelerde LPS instilasyonu için noninvaziv bir orofaringeal endotrakeal entübasyon yöntemi öneriyoruz. Bu yöntemde LPS, endotrakeal entübasyon için bir aparat yardımıyla akciğere aşılanmak üzere orofaringeal boşluktan trakeaya noninvaziv olarak sokulur. Bu yöntem sadece akciğer hedeflemesini sağlamakla kalmaz, aynı zamanda hayvanlarda hasarı ve ölüm riskini de önler. Bu yaklaşımın akut akciğer hasarı alanında yaygın olarak kullanılmasını bekliyoruz.

Farelerde LPS instilasyonu için önerilen yöntem, LPS damlatılmasından 12 saat sonra inflamatuar sitokin TNF-α ekspresyonu ve akciğer kuru-ıslak ağırlık oranı değerlendirilerek doğrulanmıştır. Deneyde dört grup vardı: boş kontrol (herhangi bir tedavi olmadan), cerrahi entübasyon16, intranazal17,18 ve noninvaziv orofaringeal entübasyon (n = 6). Boş kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, noninvaziv orofaringea...

Burada, noninvaziv orofaringeal endotrakeal entübasyon yoluyla intratrakeal lipopolisakkarit (LPS) doğumu için bir protokol öneriyoruz. Bu yöntem, hayvan için cerrahi prosedürün travmasını en aza indirir ve LPS'yi trakeaya ve daha sonra akciğerlere doğru bir şekilde iletir.

Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma

The acute lung injury (ALI) mouse model induced by lipopolysaccharide (LPS) or endotoxin is still among the most commonly used models in animal studies of ...

Protokolümüz, trakeadan akciğere yeni bir noninvaziv LPS dağıtım yöntemi önermektedir. Bu yöntemi ilk kez deneyen kişiler, trakeanın pozisyonunu bulmak için çok çaba sarf etmelidir. Entübasyon platformunu hazırlamak için, ipi iki delikten geçirin ve uçlarını yükselticinin üstündeki küçük çıkıntılara bağlayın.Ardından, ataşın her iki ucuna iki lastik bant takın ve bunları yükselticinin arkasına bantlayın. Son olarak, yükselticiyi tabana 90 derecelik bir açıyla sabitleyin. Kanülü bir kanül kalemi üzerine monte edin ve kalemin ışığını açın.Ardından, küçük cerrahi forseps ve Pasteur pipetini% 70 alkol kullanarak dezenfekte edin. Test bileşiği çözeltisini hazırlamak için, bir mililitre pH 7.2 PBS'ye üç miligram lipopolisakkarit veya LPS ekleyin. Daha sonra, 10 miligram pentobarbital sodyumu bir mililitre normal salin içinde çözün ve çözeltiyi 0.45 mikrometrelik bir şırınga filtresi kullanarak filtreleyin.Anestezi uygulanan fareyi entübasyon platformuna yerleştirin. Ardından üst ön dişleri iple ve iki ön ayağı lastik bantlarla sabitleyin. Cımbız kullanarak dili dışarı çekin ve tutun.Kanülü ağız boyunca yavaşça mandibuler epiglottiste doğru itin. Trakeayı kanül kaleminin ışığıyla bulun ve kanülü yavaşça içine yerleştirin. Daha sonra entübasyon kalemini çekin ve kanülü içeride bırakın.Pasteur pipetini kanül eklemine yerleştirin ve kafaya bastırın. Başarılı endotrakeal entübasyondan sonra, düz başlı bir mikroşırınga kullanarak, hazırlanan LPS çözeltisini kanül yoluyla kilogram dozu başına üç miligramda aşılayın. İşiniz bittiğinde, mikroşırınga ve kanülü çıkarın.Fareyi entübasyon platformundan çıkarın ve kurtarmak için ayrı bir kafese yerleştirin. İyileşene ve bilincini yeniden kazanana kadar farenin solunum durumunu gözlemleyin. LPS trakea instilasyonundan 12 saat sonra, inflamatuar sitokin, TNF-alfa ekspresyonu ve akciğer kuru-ıslak ağırlık oranı değerlendirildi ve diğer instilasyon yöntemleriyle karşılaştırıldı.Noninvaziv orofaringeal entübasyon grubunda serum TNF-alfa düzeyleri boş kontrol grubuna göre anlamlı olarak artmıştır. Akciğer kuru-ıslak ağırlık oranı da artarak cerrahi trakeal entübasyon grubunda olduğu gibi aynı seviyeye ulaştı. Trakeanın yerini bulma sürecinde trakeayı çizmemek önemlidir.Bu teknik, akciğere invaziv olmayan bir şekilde ulaşması gereken diğer ilaçları vermek için de kullanılabilir.

noninvasive-intratracheal-lipopolysaccharide-instillation-in-mice

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Intratrakeal instilasyonlar doğrudan ciğerlerine çözünenlerin sağlar. Bu prosedür, akciğer distal bölgeye instillate teslim hedefler ve bu nedenle sık sık alveoller okuyan yönelik çalışmalar dahil edilmiştir. Biz farelerde intratrakeal instilasyonlar gerçekleştirmek için ayrıntılı bir yaşam protokolü sağlar.

Fare Akciğer içine çözünenlerin Doğrudan Trakeal damlatma

Biz anestezi farelerin trakea yoluyla ciğerlerine test malzemelerin cerrahi olmayan teslimat göstermektedir. Bu yöntem, bakteriyel ve viral patojenler, sitokinler, antikorlar, boncuk, kimyasallar, ya da boyalar akciğer maruz izin verir. Daha hasat ve flow sitometri akciğer ve akciğer drenaj lenf düğümleri (LDLNs) işlenmesi açıklanmaktadır.

Akış Sitometri Akciğerler ve Akciğer Boşaltma lenf düğümleri Analizi fareler cerrahi olmayan intratrakeal damlatma

Kaynak: Radulovic, K. ve diğerleri. Bağırsak bariyerinin aşılması sonrası mikrobiyal türevli ürünlerin girişini taklit etmek için farelere lipopolisakkarit enjeksiyonları. J. Vis. Exp. (2018)Bu video, sistemik iltihabı indüklemek için farelere intraperitoneal olarak lipopolisakkarit (LPS) enjekte edilmesinin adım adım bir prosedürünü göstermektedir.

Sistemik Bağışıklık Yanıtlarını İncelemek İçin Farelerde Bakteriyel Lipopolisakkarit Enjeksiyonu

Insanlarda akciğer hastalıklarının durumunu taklit eden bir modelinin kullanılması, belirli bir hastalığın patofizyolojisi ve / veya etyolojisinin araştırılması için ve terapötik müdahale geliştirmek için çok önemlidir. Burada doğrudan fare akciğerlere eksojen malzemeleri teslim noninvazif bir entübasyon yöntemi sunulmuştur.

Noninvaziv Entübasyon Fare Akciğer Patolojisi ve Fizyolojisi Eğitim için

Patojen enfeksiyonuna karşı konak bağışıklık tepkisi sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir süreçtir. Farelerde bir lipopolisakarit akciğer maruz modeli kullanarak, bu hastalığın patojenezi ile ilgili kompleks mekanizmalar yüksek çözünürlüklü değerlendirme yapmak mümkündür.

Farelerde Host immün yanıtı değerlendirmek için Orofarengeal intratrakeal PAMP İdaresi ve Bronchoalveolar Lavage Kullanımı

Reaktiflerin Entübasyon aracılı intratrakeal (IMIT) instilasyon solunum yolu hastalıkları, hem de akciğer içine doğrudan tedavi reaktifler aşılamak için bir yöntem incelenmesi için mükemmel, invazif olmayan bir yöntemdir. Bu klinik öncesi test için uygun bir hızlı ve yüksek oranda çoğaltılabilir bir yöntemdir.

Entübasyon-aracılı intratrakeal (IMIT) damlatma: A Noninvaziv, Lung-özel Dağıtım Sistemi

Bu makalede, entübasyon yoluyla fare trakea içine doğrudan bleomisin yönetmek için hızlı ve basit bir yöntem sunar. Bu yöntemin en önemli avantajları usta son derece tekrarlanabilir kolay ve özel ekipman ya da uzun iyileşme süreleri gerektirmez vardır.

Farelerde Trakea hızlı intübasyon için geliştirilmiş bir yöntem

Haemophilus influenzae'nin farelerin alt solunum yollarına intra-trakeal inokülasyon prosedürünü gösteriyoruz. Bu, fare modellerinde hava yolu iltihabını düzenleyen sinyal yollarını incelemek için çok kullanışlı bir araçtır.

intra-trakeal İdaresi<em&gt; Haemophilus influenza</em&gt; Fare Modelleri Havayolu inflamasyonu Eğitim için

Burada sunulan bir adım-adım prosedür doğrudan intratrakeal lipopolisakkarid instilasyon tarafından fareler akut akciğer hasarı neden ve kan örnekleri, Bronkoalveoler Lavaj sıvısı ve akciğer dokusu FACS analizi gerçekleştirmek için. Minimal invasiveness, basit kullanım, iyi reproducibility, ve hastalık şiddeti titrasyon bu yaklaşımın avantajlarıdır.

Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

Soluma için kuru toz formülasyonları solunum yolu hastalıklarının tedavisinde büyük potansiyele sahiptir. İnsan çalışmalarına girmeden önce, preklinik çalışmalarda kuru toz formülasyonunun etkinliğini değerlendirmek gerekir. Farelerde intratrakiel yoldan kuru tozun yönetiminin basit ve invaziv bir yöntemi sunulmuştur.

Farelerde Kuru Toz Formülasyonunun Intratrakial Yönetimi

Bu çalışmada, invaziv olmayan endotrakeal instillasyon tekniğinin, akciğerlere hassas LPS iletimi sağlamak için temel bir laringoskop kullanılarak sıçanlarda ALI geliştirdiği gösterilmiştir. LPS, laringoskop kullanılarak endotrakeal tüp aracılığıyla yerleştirilir. Akciğer yaralanmasının büyüklüğü birden fazla zaman noktasında değerlendirilir.

Kemirgenlerde akut akciğer hasarını indüklemek için lipopolisakkaridin invaziv olmayan endotrakeal uygulaması

Öğrenin, farelerde noninvaziv intratrakeal LPS damlatma yöntemiyle akciğer inflamasyonunu araştırın. Bu teknik, TNF-alpha seviyelerini ölçerek pulmoner ilaç iletimi çalışmalarında etkili sonuçlar sağlar.

Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma

Daha fazla video keşfet