Name: Bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) Enfeksiyonuna Karşı İmmün Yanıtının Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-01T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Öğrenin, MRSA enfeksiyonuna karşı nanoemülsiyon adjuvan aşısının immün yanıtını değerlendirmeyi. Bu yöntem, düşük enerji emülsifikasyonu kullanarak aşı hazırlama ve koruyucu etkileri in vivo analiz etme imkanı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı'nın No. 2021YFC2302603, NSFC'nin No. 32070924 ve 32000651 ve Chongqing Doğa Bilimleri Vakfı Proje Programı'nın No. 2019jcyjA-msxmx0159 tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Cheung, G. Y. C., Bae, J. S., Otto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenicity+and+virulence+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Pathogenicity and virulence of Staphylococcus aureus.</a> Virulence. 12 (1), 547-569 (2021).</li>
<li>Lakhundi, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%3A+molecular+characterization%2C+evolution%2C+and+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: molecular characterization, evolution, and epidemiology.</a> Clinical Microbiology Reviews. 31 (4), e00020(2018).</li>
<li>Mancuso, G., Midiri, A., Gerace, E., Biondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+antibiotic+resistance%3A+the+most+critical+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Bacterial antibiotic resistance: the most critical pathogens.</a> Pathogens. 10 (10), 1310(2021).</li>
<li>Goullé, J. P., Grangeot-Keros, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aluminum+and+vaccines%3A+Current+state+of+knowledge%5BTitle%5D)+AND+%22Medecine+et+Maladies+Infectieuses%22%5BJournal%5D)">Aluminum and vaccines: Current state of knowledge.</a> Medecine et Maladies Infectieuses. 50 (1), 16-21 (2020).</li>
<li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+adjuvants%3A+Understanding+the+structure+and+mechanism+of+adjuvanticity%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Vaccine adjuvants: Understanding the structure and mechanism of adjuvanticity.</a> Vaccine. 37 (24), 3167-3178 (2019).</li>
<li>Geoghegan, S., O'Callaghan, K. P., Offit, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+safety%3A+myths+and+misinformation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Vaccine safety: myths and misinformation.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 372(2020).</li>
<li>Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+a+novel+drug+delivery+approach+for+enhancement+of+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+Patents+on+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: a novel drug delivery approach for enhancement of bioavailability.</a> Recent Patents on Nanotechnology. 14 (4), 276-293 (2020).</li>
<li>Ko, E. J., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+and+efficacy+of+MF59-adjuvanted+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+%26+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Immunology and efficacy of MF59-adjuvanted vaccines.</a> Human Vaccines & Immunotherapeutics. 14 (12), 3041-3045 (2018).</li>
<li>Chen, B. H., Inbaraj, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion+and+nanoliposome+based+strategies+for+improving+anthocyanin+stability+and+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion and nanoliposome based strategies for improving anthocyanin stability and bioavailability.</a> Nutrients. 11 (5), 1052(2019).</li>
<li>Zuo, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+protective+immunity+of+a+novel+subunit+fusion+vaccine+in+a+murine+model+of+systemic+MRSA+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the protective immunity of a novel subunit fusion vaccine in a murine model of systemic MRSA infection.</a> PLoS One. 8 (12), e81212(2013).</li>
<li>Sun, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li>
<li>National Pharmacopoeia Committee. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Chinese+Pharmacopoeia%22">Chinese Pharmacopoeia</a>. , China Medical Science and Technology Press. Beijing. 1088(2020).</li>
<li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Materials%22%5BJournal%5D)">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477(2022).</li>
<li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immunodominant+epitope-specific+monoclonal+antibody+cocktail+improves+survival+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">An immunodominant epitope-specific monoclonal antibody cocktail improves survival in a mouse model of Staphylococcus aureus bacteremia.</a> The Journal of Infectious Diseases. 223 (10), 1743-1752 (2021).</li>
<li>Roy, U., Kornitzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme-iron+acquisition+in+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Heme-iron acquisition in fungi.</a> Current Opinion in Microbiology. 52, 77-83 (2019).</li>
<li>Saeed, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+toxins+in+musculoskeletal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Bacterial toxins in musculoskeletal infections.</a> Journal of Orthopaedic Research. 39 (2), 240-250 (2021).</li>
<li>Xu, Q., Zhou, A., Wu, H., Bi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+in+vivo+evaluation+of+baicalin-loaded+W%2FO+nanoemulsion+for+lymphatic+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Development+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Development and in vivo evaluation of baicalin-loaded W/O nanoemulsion for lymphatic absorption.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 24 (9), 1155-1163 (2019).</li>
<li>Singh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+Concepts%2C+development+and+applications+in+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery.</a> Journal of Controlled Release. 252, 28-49 (2017).</li>
<li>Kadakia, E., Shah, L., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mathematical+modeling+and+experimental+validation+of+nanoemulsion-based+drug+transport+across+cellular+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Mathematical modeling and experimental validation of nanoemulsion-based drug transport across cellular barriers.</a> Pharmaceutical Research. 34 (7), 1416-1427 (2017).</li>
<li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DLS+and+zeta+potential-What+they+are+and+what+they+are+not%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">DLS and zeta potential-What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li>
<li>Francis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+vaccine+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Veterinary+Clinics+of+North+America.+Small+Animal+Practice%22%5BJournal%5D)">Recent advances in vaccine technologies.</a> The Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice. 48 (2), 231-241 (2018).</li>
<li>Tripathi, N. K., Shrivastava, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+recombinant+protein-based+dengue+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Recent developments in recombinant protein-based dengue vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1919(2018).</li>
<li>Wilder-Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+vaccine+development%3A+status+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Bundesgesundheitsblatt+Gesundheitsforschung+Gesundheitsschutz%22%5BJournal%5D)">Dengue vaccine development: status and future.</a> Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheitsschutz. 63 (1), 40-44 (2020).</li>
<li>Korneev, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+sepsis+and+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of sepsis and septic shock.</a> Molecular Biology. 53 (5), 799-814 (2019).</li>
</ol>

Yazarlar bu çalışmada çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Bakteriyel hücre duvarına bağlı ve demir regüle edilmiş bir yüzey proteini olan IsdB, heme demir15'in elde edilmesi sürecinde önemli bir rol oynar. Hla, alfa toksini, MRSA'da bilinen en etkili bakteriyel toksinler arasındadır ve ökaryotik hücrelerde gözenekler oluşturabilir ve yapışma ve epitel hücrelerine müdahale edebilir16. Çalışmamızda, IsdB ve Hla'nın antijen genlerine dayanan gen mühendisliği teknolojisi ile yeni bir rekombinasyon M...

Metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA), yoğun bakım ünitesi (YBÜ) koğuş1, kardiyoloji bölümleri ve yanık bölümlerinde dünya çapında en yüksek enfeksiyon oranlarından birine sahip fırsatçı bir patojendir. MRSA, yüksek enfeksiyon, mortalite oranları ve geniş ilaç direnci göstermekte ve klinik tedavide büyük zorluklar ortaya koymaktadır2. Dünya Sağlık Örgütü (WHO) tarafından 2017 yılında yayınlanan Antibiyotiğe Dirençli Bakterilerin Küresel Öncelik Listesi'nde MRSA, en kritik kategori3'te yer aldı. Bu nedenle MRSA enfeksiyonuna karşı bir aşıya acilen ihtiyaç vardır.
Alüminyum adjuvan uzun süredir kullanılmaktadır ve adjuvan yardımcı mekanizma nispeten açık, güvenli, etkili ve iyi tolere edilir4. Alüminyum adjuvanlar şu anda yaygın olarak kullanılan bir adjuvan türüdür. Genel olarak, alüminyum tuzu parçacıkları üzerinde adsorbe edilen antijenlerin stabiliteyi artırabileceğine ve enjeksiyon bölgesinin antijenleri alma yeteneğini artırabileceğine, iyi emilim ve yavaş salınım sağlayabileceğine inanılmaktadır5. Şu anda, alüminyum adjuvanların ana dezavantajı, adjuvan bir etkiye sahip olmamaları veya bazı aşı adayıantijenler 6 üzerinde sadece zayıf bir adjuvan etki göstermeleridir. Ek olarak, alüminyum adjuvanlar IgE aracılı aşırı duyarlılık reaksiyonlarını indükler5. Bu nedenle, daha güçlü bir bağışıklık tepkisini uyarmak için yeni adjuvanlar geliştirmek gerekir.
Nanoemülsiyon adjuvanları, yağ, su, yüzey aktif maddeler ve kosürfaktan oluşan kolloidal dispersiyon sistemleridir7. Ek olarak, adjuvanlar termodinamik olarak stabil ve izotropiktir, yüksek hızlı santrifüjleme ile otoklavlanabilir veya stabilize edilebilir ve hafif hazırlık koşulları altında kendiliğinden oluşturulabilir. Birkaç emülsiyon adjuvanı (MF59, NB001-002 serisi, AS01-04 serisi, vb. gibi) şu anda piyasada veya klinik araştırma aşamasındadır, ancak partikül boyutları 160 nm8'den büyüktür. Bu nedenle, nano ölçekli (1-100 nm) tıbbi preparatların avantajları (yani, büyük spesifik yüzey alanı, küçük parçacık boyutu, yüzey etkisi, yüksek yüzey enerjisi, küçük boyut etkisi ve makro kuantum tünelleme etkisi) tam olarak kullanılamaz. Bu protokolde, 1-100 nm çap büyüklüğünde nanoemülsiyon teknolojisine dayanan yeni bir adjuvanın iyi bir adjuvan aktivitesi sergilediği bildirilmiştir9. Rekombinasyon alt birim aşı antijen proteini HI (α-hemolizin mutantı [Hla] ve Fe iyon yüzeyini belirleyen faktör B [IsdB] alt birimi N2 aktif fragman füzyon proteini) test ettik; Fiziksel özellikleri ve stabiliteyi incelemek, intramüsküler uygulamadan sonra spesifik antikor yanıtını değerlendirmek ve bir fare sistemik enfeksiyon modeli kullanarak aşının koruyucu etkisini test etmek için bir dizi prosedür oluşturulmuştur.

<table><tbody><tr><td>5424-Küçük yüksek hızlı santrifüjFA-45-24-11</td><td>Eppendorf, Almanya&nbsp;</td><td></td><td></td>5424000495</tr><tr><td>96 kuyulu plakalar</td><td>Corning Incorporated, ABD</td><td>CLS3922</td><td></td></tr><tr><td>AFM Dimension FastScan</td><td>BRUKER, Almanya&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>boş Alkol lambası</td><td>Shenzhen Yibaxun Technology Co., Çin</td><td>YBS-AA-11408</td><td></td></tr><tr><td>Balb / c fareler ve nbsp;</td><td>Pekin HFK Biyobilim Co., Ltd.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BCIP / NBT</td><td>Fuzhou Maixin Biyoteknoloji Geliştirme Şirketi, Çin</td><td>BCIP / NBT</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad 6.0 mikroplaka okuyucu</td><td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, ABD</td><td>boş</td><td></td></tr><tr><td>BL21 Yetkili Hücre</td><td>Merck kırlangıç, Almanya</td><td>70232-3CN</td><td></td></tr><tr><td>BSA-100G</td><td>Sigma-Aldrich, ABD</td><td>B2064-100G</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj 5810 R</td><td>Eppendorf, Almanya&nbsp;</td><td></td><td></td>5811000398</tr><tr><td>Coomassie parlak mavi G-250 boyama çözeltisi</td><td>MIKX, Çin</td><td>DB236</td><td></td></tr><tr><td>Renk giderme çözümü</td><td>BOSTER, Çin</td><td>AR0163-2</td><td></td></tr><tr><td>Elektro ısıtma duran sıcaklık kültivatörü HH-B11-420</td><td>Şangay Yuejin Tıbbi Cihaz Fabrikası, Çin</td><td>boş</td><td></td></tr><tr><td>Elektroforez cihazı</td><td>Pekin Liuyi Enstrüman Fabrikası, Çin</td><td>DYCZ-25D</td><td></td></tr><tr><td>Jel görüntüsü</td><td>Tanon, ABD</td><td>boş</td><td></td></tr><tr><td>Glutatyon-Sefaroz Reçine GST</td><td>Mei5bio, Çin</td><td>afinite kromatografi reçinesi</td><td></td></tr><tr><td>H2SO4</td><td>Chengdu KESHI Chemical Co., LTD, Çin</td><td>7664-93-9</td><td></td></tr><tr><td>HI rekombinant protein</td><td>Üçüncü Askeri Tıp Üniversitesi, Çin</td><td>110-27-0</td><td></td></tr><tr><td>HRP -Keçi Anti-Fare IgG</td><td>Biodragon, Çin</td><td>BF03001</td><td></td></tr><tr><td>HRP- Keçi anti-fare IgG1</td><td>Biodragon, Çin</td><td>BF03002R</td><td></td></tr><tr><td>HRP- Keçi anti-fare IgG2a</td><td>Biodragon, Çin</td><td>BF03003R</td><td></td></tr><tr><td>HRP- Keçi anti-fare IgG2b</td><td>Biodragon, Çin</td><td>BF03004R</td><td></td></tr><tr><td>Aşılama döngüsü</td><td>Haimen Feiyue Co., LTD, Çin</td><td>YR-JZH-1UL</td><td></td></tr><tr><td>IsdB ve Hla klonları</td><td>Şangay Jereh Biyoteknoloji A.Ş., Çin</td><td>boş</td><td></td></tr><tr><td>İzopropil hindistan cevizi (farmasötik adjuvan)</td> <td>SEPPIC, Fransa</td><td>boş</td><td></td></tr><tr><td>izopropil- ve beta;-D-1-merkaptogalaktopiranosid</td><td>fdbio, Çin</td><td>FD3278-1</td><td></td></tr><tr><td>LB bulyon kültür ortamı</td><td>Pekin AOBOX Biotechnology Co., LTD, Çin</td><td>02-136</td><td></td></tr><tr><td>Kızılötesi fizyoterapi lambası</td><td>Guangzhou Runman Medical Equipment Co., Çin</td><td>7600</td><td></td></tr><tr><td>Düşük sıcaklıkta soğutmalı santrifüj</td><td>Eppendorf, Almanya & nbsp;</td><td></td><td></td>null</tr><tr><td>Malvern NANO ZS</td><td>Malvern Instruments Ltd., İngiltere</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>MH(A) orta</td><td>Pekin AOBOX Biotechnology Co., LTD,Çin</td><td>02-051</td><td></td></tr><tr><td>MH(B) orta</td><td>Pekin AOBOX Biotechnology Co., LTD,Çin</td><td>02-052</td><td></td></tr><tr><td>Mikro plaka yıkama makinesi 405 LSRS</td><td>Bio Tek Instruments,Inc Highland&nbsp; Park, ABD</td><td>boş</td><td></td></tr><tr><td>Mini-TBC Kompakt Film Transfer Aleti</td><td>BeiJingDongFangRuiLi Co., LTD, Çin</td><td>1658030</td><td></td></tr><tr><td>MMC ambalaj</td><td>TOSOH (SHANGHAI) CO., LTD</td><td></td><td></td></tr> 0022818 <tr><td>MRSA252</td><td>ABD, ATCC</td><td>boş</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop ultraviyole spektrofotometre</td><td>Thermo Scientific, ABD</td><td>boş</td><td></td></tr><tr><td>Yeni FlashTM Protein herhangi bir KD SAYFASI Protein elektroforez jel kiti</td><td>DAKEWE, Çin</td><td>8012011</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>biosharp, Çin</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>PCR, Amplifikatör</td><td>Termal Döngüleyici, ABD</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>pGEX-hedef gen rekombinant plazmid</td><td>Shanghai Jereh Biotechnology Co, Çin</td><td>B3528G</td><td></td></tr><tr><td>Fosfotungstik asit</td><td>G-CLONE, Çin</td><td>CS1231-25g</td><td></td></tr><tr><td>pipet</td><td>Eppendorf, Almanya&nbsp;</td><td></td><td></td>3120000844</tr><tr><td>polioksietillenmiş hint yağı (farmasötik adjuvan)</td><td>Aladdin, Çin</td><td>K400327-1kg</td><td></td></tr><tr><td>Birincil antikor</td><td>Laboratuvarı Ev yapımı: pozitif serumlu aşılanmış farelerden</td><td>NULL</td><td>Ayrıntılar için Referans 11'e bakın</td></tr><tr><td>propilen glikol (farmasötik adjuvan)</td><td>Sigma-Aldrich, ABD</td><td>P4347-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Protein Marker</td><td>Thermo Scientufuc, ABD</td><td>26616</td><td></td></tr><tr><td>PVDF TRANSFER MEMBRANI</td><td>Invitrogen, ABD</td><td>88518</td><td></td></tr><tr><td>Taramalı Elektron Mikroskobu</td><td>JEOL, Japonya</td><td>JSM-IT800</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum pentobarbital</td><td>Merck, Almanya</td><td>Tc-P8411</td><td></td></tr><tr><td>Talos L120C TEM</td><td>Thermo Fisher, ABD</td><td>boş</td><td></td></tr><tr><td>TMB renk çözümü</td><td>TIAN GEN, Çin</td><td>PA107-01</td><td></td></tr><tr><td>Kaplumbağa kitleri</td><td>Xiamen Bioendo Technology Co., LTD</td><td>ES80545</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Macklin, Çin</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr></tbody></table>

bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının metisiline dirençli staphylococcus aureus (mrsa) enfeksiyonuna karşı İmmün yanıtının değerlendirilmesi

Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Infection

Nanoemülsiyon adjuvan aşıları, küçük partikül boyutları, yüksek termal stabiliteleri ve geçerli bağışıklık tepkilerini indükleme yetenekleri nedeniyle büyük ilgi görmüştür. Bununla birlikte, yeni bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının bağışıklık tepkisini değerlendirmek için bir dizi kapsamlı protokol oluşturmak hayati önem taşımaktadır. Bu nedenle, bu makale bir aşının fizikokimyasal özelliklerini (iletim elektron mikroskobu [TEM], atomik kuvvet mikroskobu [AFM] ve dinamik ışık saçılması [DLS]), aşı antijeninin ve sisteminin stabilitesini (yüksek hızlı santrifüj testi, termodinamik stabilite testi, SDS-PAGE ve batı lekesi ile) ve spesifik bağışıklık tepkisini (IgG1, IgG2a ve IgG2b). Bu yaklaşımı kullanarak, araştırmacılar ölümcül bir MRSA252 fare modelinde yeni bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının koruyucu etkisini doğru bir şekilde değerlendirebilirler. Bu protokollerle, etkili adjuvan potansiyeli açısından en umut verici nanoemülsiyon aşısı adjuvanı belirlenebilir. Ek olarak, yöntemler gelecekteki gelişmeler için yeni aşıların optimize edilmesine yardımcı olabilir.

Nanoemülsiyon adjuvan aşısının hazırlanmasına yönelik protokol ve bu aşının in vitro ve in vivo testleri değerlendirildi. Bu numunenin yüzeyindeki zeta potansiyelinin ve partikül boyutunun önemli özelliklerini belirlemek için TEM, AFM ve DLS kullanılmıştır (Şekil 1). SDS-PAGE ve western blotting, çökelti ve süpernatanttaki antijen miktarının santrifüjlemeden sonra önemli ölçüde bozulmadığını gösterdi, bu da aşının yapısal olarak sağlam, spesifik ve immünojenik olduğunu göst...

Bu protokol, yeni bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının fiziksel özelliklerini, immün yanıtını ve in vivo koruyucu etkisini hazırlar ve değerlendirir.

Bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) Enfeksiyonuna Karşı İmmün Yanıtının Değerlendirilmesi

Nanoemulsion adjuvant vaccines have attracted extensive attention because of their small particle size, high thermal stability, and ability to induce ...

Gösterilen protokol, doğrudan ve etkili deneysel yaklaşımın ve yeni viral adjuvanların immün yanıt etkilerine yönelik ayrıntılı adımların altını çizdi. Bu protokol, araştırmaya sadece adjuvan aşı için temel bir immün değerlendirme yöntemi sağlamakla kalmaz, aynı zamanda kütle stabilitesini de belirleyebilir. Başlamak için, MRSA HI antijen proteininin mililitre çalışma çözeltisi başına 10 miligramını alın ve buna sırayla üç yardımcı maddeyi, izopropil miristanı, polioksietilen hint yağını ve propilen glikolü ekleyin, bir kütle oranını koruyarak altıya üçe kadardır.Karışımı iyice karıştırın, ardından 10 mililitrelik bir sistem hacmine ulaşmak için yavaş yavaş sterilize saf su ekleyin. Nanoemülsiyon aşısını düşük enerjili emülsifikasyon yöntemiyle hazırlamak için, dakikada 500 rotasyonda ve yaklaşık 20 dakika boyunca 25 santigrat derecede karıştırın. Daha sonra, mililitre protein başına bir miligram içeren nanoemülsiyon aşısı, berrak şeffaf bir sıvı olarak elde edilir.Enzime bağlı immünosorbent testinin veya ELISA plakasının antijen kaplaması için, HI protein antijenini kaplama çözeltisi ile mililitre başına 10 mikrograma seyreltin ve ELISA plakasındaki kuyucuk başına 100 mikrolitre seyreltilmiş antijen ekleyin. Plakayı gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. Kuluçkadan sonra, plakayı kuyucuk başına 300 mikrolitre PBST ile yıkayın.Kuyucukları, 37 santigrat derecede iki saat boyunca kuyu başına 300 mikrolitre sızdırmazlık çözeltisi ile kapatın, daha sonra 297 mikrolitre PBST ekleyerek her deney grubundan üç mikrolitre fare serumunu 100 kez seyreltin ve seyreltilmiş serumu vorteks. Her serum numunesi için kaplanmış ELISA plakasına kuyucuk başına 100 mikrolitre seyreltilmiş serum ekleyin. Benzer şekilde, 396 mikrolitre PBST'ye dört mikrolitre pozitif veya negatif kontrol serumu ekleyerek pozitif ve negatif kontrol serumlarını PBST ile 100 kez seyreltin, ardından vorteks karıştırma yapın.Çift oranlı seyreltme yapmak için, kaplanmış ELISA plakasının ilk sırasına daha önce seyreltilmiş deneysel serumun 200 mikrolitresini ekleyin, ardından birinci ve 12. sıradakiler hariç tüm kuyucuklara 100 mikrolitre PBST ekleyin. Ardından, pipet tabancasını 100 mikrolitreye ayarlayın ve 100 mikrolitre serumu ilk sıradan PBST içeren ikinci sıraya aktarın. Pipet tabancasını kullanarak ikinci sıradaki içeriği 10 kez karıştırın.Benzer şekilde, 11. sıraya kadar serumun iki ardışık seyreltmesinden birini gerçekleştirin. İşiniz bittiğinde, 11. satırdan 100 mikrolitre sıvı atın. Örnek şablonu izleyerek satır 12'deki her bir karşılık gelen kuyucuğa 100 mikrolitre seyreltilmiş negatif ve pozitif serum ekleyin.ELISA plakasını plastik ambalajla kapatın ve bir saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Bu arada, ikincil antikor anti-fare IgG HRP'yi PBST ekleyerek 10.000 kez seyreltin. Bir saatlik inkübasyondan sonra, bağlanmamış antikorları temizlemek için ELISA plakasını kuyucuk başına 300 mikrolitre PBST ile yıkayın, ardından her bir oyuğa seyreltilmiş ikincil antikorun 100 mikrolitresini ekleyin ve plakayı 40 dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin.Plakayı kuyucuk başına 300 mikrolitre PBST ile yıkayın, ardından her bir kuyucuğa 100 mikrolitre TMB renk geliştirme çözeltisi ekleyin. Plakaları 37 santigrat dereceye ve 10 dakika boyunca ışıktan uzağa yerleştirin. Bundan sonra, reaksiyonu derhal 50 mikrolitre iki molar sülfürik asit ile sonlandırın.Sonlandırmadan sonraki 15 dakika içinde bir enzim işaretleyici kullanarak 415 nanometrede optik yoğunluğu veya OD değerlerini tespit edin. Yeni nanoemülsiyon aşısının fiziksel özellikleri, transmisyon elektron mikroskobu ve atomik kuvvet mikroskobu kullanılarak analiz edildi. Numunenin partikül boyutu dağılımını ve zeta potansiyelini belirlemek için dinamik ışık saçılması kullanıldı.SDS-PAGE ve batı lekelenmesi, çökelti ve süpernatanttaki antijen miktarının santrifüjlemeden sonra önemli ölçüde ertelenmediğini, aşının yapısal olarak sağlam, spesifik ve immünojenik olduğunu gösterdi. Nanoemülsiyon adjuvan aşısı, farelerin toplam IgG, IgG1 ve IgG2a antikor titrelerini önemli ölçüde arttırdı. Protein aşısının immünojenitesi önemli ölçüde iyileşti.450 nanometredeki serum IgG2b OD değerleri, PBS bir tanesinde 5.000 seyreltmede kullanıldığında en yüksekti. MRSA 252 farelerinin ölümcül modeli, nanoemülsiyon aşısının iyi bir koruyucu etki gösterdiğini ve MRS A 252 ile bakteriyel enfeksiyonu etkili bir şekilde inhibe ettiğini ve enfekte olmuş farelerin hayatta kalma oranını artırdığını yansıttı. Nanoemülsiyonun hazırlanması ve bitkiye serum eklenmesi en önemlisidir.Ayrıca, antikor titresinin tespit edildiği yerlerde, daha geniş ve sıvı bazlı bir çıkışa doğru düzeltmeye dikkat edilmelidir. Adjuvanların yanı sıra, bu yöntem plastikler veya dağıtım sistemleri gibi diğer matematik dizilerinin bağışıklık evrimi için de kullanılabilir.

evaluating-immune-response-nanoemulsion-adjuvant-vaccine-against

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, bir murin modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyeliti (EAE) indüklemek için bir antijen adjuvan emülsiyonu oluşturmak için etkili bir homojenizasyon tekniğini göstermektedir. Emülsiyon, inaktive edilmiş bir patojenik bakteri içeren sürekli bir yağ fazı ile çevrili su fazında bir otoantijen - miyelin oligodendrosit glikoproteini (MOG) içerir. Emülsiyon, uzun süreli bir bağışıklık tepkisi için sürekli bir antijen salınımı sağlar.

Otoimmün ensefalomiyeliti indüklemek için bir antijen adjuvan emülsiyonunun hazırlanması

Bu video, önceden aşılanmış farelerde yeni bir nanoemülsiyon adjuvan aşısına karşı antikor bağışıklık tepkisini değerlendirmek için bir yöntemi göstermektedir. Bağışıklama, IgG antikor titrelerinin belirlenmesiyle doğrulandığı gibi antikor yanıtını arttırır.

Bir fare serumunda bir test aşısına karşı immünoglobulin G seviyelerinin ölçülmesi

Bu video, nanoemülsiyon tümör aşılarının üretimini göstermektedir. Sentetik peptitler ve adjuvanlar taşıyan stabil yağ rezervuar depoları, düşük enerjili nanoemülsiyon ile üretilir ve tümör immünoterapisi için önemli bir umut vaat eder.

Nanoemülsiyon Adjuvan Aşısının Hazırlanması

Bir murin aşılama modelinde nanopartiküllerle bağışıklamaya yanıt olarak antijene özgü CD8+ T hücrelerinin genişlemesini izlemek için tüm hayvan görüntüleme ve akış sitometrisi tabanlı teknikleri açıklıyoruz.

Nanopartikül Aşılama sonrası analizi antijene özgü CD8 + T hücresi tepkileri için tüm hayvan Görüntüleme ve Akış Sitometrisi Teknikleri

Protokol, nanoemülsiyon ofiyopogonin D adjuvanının etkili hücresel immün yanıtları destekleyip desteklemediğini değerlendirmek için ayrıntılı yöntemler sunar.

İn Vitro Nanoemülsiyon Aşısı Adjuvan Ophiopogonin D'nin Hücresel Aktivitesinin Değerlendirilmesi

Burada, nazal kendiliğinden monte edilmiş nanoemülsiyon tümör aşısının in vitro ve in vivo olarak hazırlanması ve değerlendirilmesi için ayrıntılı yöntemler sunuyoruz.

Nazal Kendi Kendine Toplanan Nanoemülsiyon Tümör Aşısının İn Vitro ve İn Vivo Hazırlanması, Özellikleri, Toksisitesi ve Etkinliğinin Değerlendirilmesi

Multipl sklerozun bir hayvan modeli olan deneysel otoimmün ensefalomiyeliti indüklemek için, fareler bir otoantijen ve Freund'un adjuvanını tamamlayan bir yağda su emülsiyonu ile bağışıklanır. Bu emülsiyonların hazırlanması için çeşitli protokoller mevcut olsa da, emülsiyon hazırlığı için hızlı, basit ve standartlaştırılmış bir homojenizasyon protokolü burada sunulmaktadır.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyeliti İndüklemek için Antijen/Adjuvan Emülsiyonlar Hazırlamak için Hızlı, Basit ve Standartlaştırılmış Bir Homojenizasyon Yöntemi

İn vitro teknikleri kullanarak nanopartiküllerin ve nanoyapılı yüzeylerin antimikrobiyal aktivitelerini değerlendirmek için dört yöntem sunuyoruz. Bu yöntemler, farklı nanopartiküllerin ve nanoyapılı yüzeylerin çok çeşitli mikrobiyal türlerle etkileşimlerini incelemek için uyarlanabilir.

Nanopartiküllerin ve Nanoyapılı Yüzeylerin Antimikrobiyal Aktivitelerinin İn Vitro Olarak Değerlendirilmesi

Bu protokolde, antijene özgü sistemik ve mukozal yanıtları desteklemek için adjuvan olarak kullanılmak üzere katyonik nanoemülsiyon kapsüllü retinoik asit (RA) geliştirdik. FDA onaylı RA'yı nanoemülsiyona ekleyerek, nanoemülsiyonun intramüsküler enjeksiyonundan sonra vajina ve ince bağırsakta antijene özgü sIgA teşvik edildi.

OVA'ya özgü sistemik ve mukozal yanıtları teşvik etmek için bir adjuvan olarak katyonik nanoemülsiyon kapsüllenmiş retinoik asit

Damla akış reaktörleri, açık sistem akış biyofilm kullanan ve diski reaktörler dönen için Protokoller ayrıntılı olarak sunulmuştur.

Damla Akış ve Döner Disk Reaktörler kullanın Staphylococcus aureus Biyofilm Analizi

Öğrenin, MRSA enfeksiyonuna karşı nanoemülsiyon adjuvan aşısının immün yanıtını değerlendirmeyi. Bu yöntem, düşük enerji emülsifikasyonu kullanarak aşı hazırlama ve koruyucu etkileri in vivo analiz etme imkanı sunar.

Bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) Enfeksiyonuna Karşı İmmün Yanıtının Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal

Bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) Enfeksiyonuna Karşı İmmün Yanıtının Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet