Name: Farelerde uyku yoksunluğu için bir cihaz kurulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-22T14:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 5 s
Description: Öğrenin, farelerde uyku yoksunluğu için maliyet etkin bir sallanır platform cihazı kurulumunu. Bu yöntem EEG değişiklikleri ve metabolik yanıtlarla güvenilir uyku yoksunluğu modelleri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82230014, 81930007, 82270342), Şanghay Üstün Akademik Liderler Programı (18XD1402400), Şanghay Belediyesi Bilim ve Teknoloji Komisyonu (22QA1405400, 201409005200, 20YF1426100), Şanghay Pujiang Yetenek Programı (2020PJD030), SHWSRS(2023-62), Şanghay Yaşlanma ve Tıp Klinik Araştırma Merkezi (19MC1910500) ve Bengbu Tıp Fakültesi Lisansüstü İnovasyon Programı (Byycxz21075).

Bu çalışmadaki tüm hayvan deney protokolleri, Şanghay Jiao Tong Üniversitesi Tıp Fakültesi Renji Hastanesi Laboratuvar Hayvanları Refahı Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. Çalışmada 8 ila 10 haftalık erkek C57BL / 6J fareleri kullanıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz. Cihazı kurmak için gerekli ana parçalar Şekil 1A'da listelenmiştir.
1. Uyku yoksunluğu cihazının hazırlanması
<ol><li>T şeklinde bir yapı oluşturmak için 50 cm'lik oluklu çelik kanalın bir ucunu 40 cm'lik oluklu çelik kanalın ortasına vidalarla sabitleyin (Malzeme Tablosuna bakın); işlemi tekrarlayın ve bu tür iki T şeklinde yapı yapın (Şekil 1B-a).</li>
	<li>T şeklindeki iki yapının 30 cm aralıklarla paralel olarak yukarı doğru durmasını sağlayın ve iki T şeklindeki yapının tabanlarını vidalar kullanarak 30 cm vida uyumlu bir çelik silindirle (bkz. Malzeme Tablosu) birleştirin (Şekil 1B-b).</li>
	<li>İki T şeklindeki yapı arasına çelik bir dikdörtgen platform (20 × 25 cm) (Malzeme Tablosuna bakın) yerleştirin (Şekil 1B-c). NOT: Belirtilen boyutta kullanıma hazır çelik dikdörtgen platformlar mevcut değilse, 2 mm kalınlığındaki yassı çelikler kaynaklanarak yapılabilir.</li>
	<li>Platforma tutturulmuş 30 cm'lik vida uyumlu çelik silindirin her iki ucunu, üstten 10 cm aşağıda T şeklindeki yapıların her birine sabitlenmiş iki yatağa sabitleyin (Şekil 1B-d).</li>
	<li>Vidaları kullanarak üstten 25 cm aşağıda T şeklindeki yapılardan birine bir motor montajını (bkz. Malzeme Tablosu) sabitleyin (Şekil 1B-e). NOT: Alternatif olarak, motor montajını mürettebat yerine T şeklindeki yapıya sabitlemek için inşaat yapıştırıcısı kullanılabilir.</li>
	<li>Motor yuvasına vidalarla bir motor takın (bkz. Malzeme Tablosu) (Şekil 1B-f).</li>
	<li>Motorun altındaki T şeklindeki yapıya kendinden kilitli bantlarla bir soğutma fanı (bkz. Malzeme Tablosu) sabitleyin (Şekil 1B-g).</li>
	<li>Bir biyel kolunun yatak ucunu vidaları kullanarak motora bakan bir platform köşesine sabitleyin (Şekil 1B-h).</li>
	<li>Biyel kolunun diğer ucunu vidaları kullanarak motor miline sabitleyin (Şekil 1B-i).</li>
	<li>Bir elektrikli matkap kullanarak plastik bir kabın veya standart hayvan kafesinin dört köşesinin her birine 4 mm'lik iki adet 4 mm'lik delik açın (Malzeme Tablosuna bakın) ve kafesin sol tarafında iki adet 4 mm'lik delik ve 6 mm'lik bir alt delik açın (Şekil 1B-j).</li>
	<li>Kafesi köşe deliklerinden kendinden kilitli bantlarla dikdörtgen platform üzerine sabitleyin (Şekil 1B-k).</li>
	<li>Elektrikli matkapla 50 mL'lik bir santrifüj tüpünün kapağına 5 mm'lik bir delik açın ve su sızıntısını önlemek için deliği küresel vana ile donatılmış uzun bir nozulla kapatın. NOT: Su şişelerini özelleştirmek zorsa, hidrojel su temini için alternatif bir seçenek olacaktır.</li>
	<li>Özelleştirilmiş su şişesini, nozul 4 mm'lik delikten geçecek şekilde iki 6 mm'lik delikten kendinden kilitli bantlar kullanarak kafesin sol tarafına sabitleyin (Şekil 1B-l).</li>
	<li>Güç tuğlası adaptörünün çıkış elektrik kablolarını motorun iki terminaline bağlayın (Şekil 1B-l). NOT: Kabloları motor terminallerine bağlamak için belirli bir polarite gereksinimi yoktur.</li>
	<li>Güç tuğlası adaptörünün giriş elektrik kablolarını zaman kontaktörüne bağlayın (Şekil 1B-m).</li>
</ol>2. Uyku yoksunluğunun indüksiyonu
<ol><li>Zaman kontaktörünün sol ve sağ yarısındaki en sağdaki artı işareti düğmelerine basın (Malzeme Tablosuna bakın), her iki taraftaki mekanik sayaçlarda "M" görünene kadar sırasıyla (Şekil 1C-a).</li>
	<li>Zaman kontaktörünün sol ve sağ yarısındaki orta artı işareti düğmelerine, her iki taraftaki mekanik sayaçlarda "5M" görünene kadar basın (Şekil 1C-b).</li>
	<li>Sol mekanik sayaçta "15M" görünene kadar zaman kontaktörünün sol yarısındaki en soldaki artı işareti düğmesine basın (Şekil 1C-c). NOT: Zaman kontaktörü daha sonra döngüsel modda 15 dakika açık ve 5 dakika kapalı olacaktır.</li>
	<li>Fareleri su ve yiyecek ad libitum ile kafese koyun.</li>
	<li>Zaman kontaktörüne ve soğutma fanına güç sağlayın. NOT: Platform şimdi 10 rpm'de sallanacak.</li>
	<li>Her fareyi her gün Zeitgeber saati 0'da (ZT0) tartın. NOT: Işık sabah 8'den (ZT0) akşam 8'e (ZT12) kadar açıktır.</li>
</ol>3. Oral glukoz tolerans testi
<ol><li>Kuyruk damarlarından kan örneklemesi yaparak açlık farelerinde açlık glikoz seviyelerini ölçün.</li>
	<li>1 mL şırınga kullanarak intraperitoneal olarak her fareye (2 g / kg vücut ağırlığı) glikoz çözeltisi enjekte edin.</li>
	<li>Kuyruk damarından kan örnekleri toplayın ve kan şekerini glikoz enjeksiyonundan sırasıyla 15 dakika, 30 dakika, 60 dakika ve 120 dakika sonra test edin.</li>
	<li>Testten sonra fareleri yiyecek ve su ad libitum ile kafese geri koyun.</li>
</ol>4. Beyin dokularının toplanması
<ol><li>Yeterli anesteziden sonra fareleri 3-5 dakika boyunca izoflurana (% 2) maruz bırakarak dekapite edin.</li>
	<li>Kafatasını ortaya çıkarın ve cerrahi makas kullanarak kafatasında 1 cm dikey bir kesim yapın.</li>
	<li>Beyin dokusunu ortaya çıkarmak için sivrisinek kanama durdurucuları kullanarak kafatasını çıkarın (Malzeme Tablosuna bakınız).</li>
	<li>Kavisli cımbız kullanarak tüm beyni yavaşça kraniyal boşluktan çıkarın. NOT: Beyin dokusu yerel politikalara göre çıkarılmalıdır.</li>
	<li>Beyin dokusunu soğuk fosfat tamponlu salin (1x PBS, 4 °C) kullanarak yıkayın.</li>
	<li>Sağlam beyin dokusunu sıvı nitrojen içinde dondurun ve uzun süreli depolama için dokuyu -80 ° C'ye aktarın. NOT: -80 ° C'de saklandığında, flaş donmuş beyin dokusu en az 6 ay boyunca stabildir.</li>
</ol>5. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile gen ekspresyonunun saptanması
<ol><li>Beyin dokularını 4 °C'de veya buz üzerinde çözdürün.</li>
	<li>Dokuyu 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve TRIzol bazlı yöntemi kullanarak toplam RNA'yı çıkarın13.</li>
	<li>RNA ekstraksiyonundan sonra bir spektrofotometre kullanarak RNA konsantrasyonunu ölçün (Malzeme Tablosuna bakınız).</li>
	<li>Ticari bir kit14 kullanarak toplam RNA'nın (1 μg) tamamlayıcı DNA'ya (cDNA) ters transkripsiyonunu gerçekleştirin.</li>
	<li>Gerçek zamanlı ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu ile gen ekspresyon seviyelerini ölçün15.</li>
</ol>

<ol><li>Yang, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+sleep+deprivation+exacerbates+systemic+inflammation+and+psychiatry+disorders+through+gut+microbiota+dysbiosis+and+disruption+of+circadian+rhythms%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiological+Research%22%5BJournal%5D)">Acute sleep deprivation exacerbates systemic inflammation and psychiatry disorders through gut microbiota dysbiosis and disruption of circadian rhythms.</a> Microbiological Research. 268, 127292(2023).</li>
<li>Alanazi, M. T., Alanazi, N. T., Alfadeel, M. A., Bugis, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+deprivation+and+quality+of+life+among+uterine+cancer+survivors%3A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Supportive+Care+In+Cancer+%3A+Official+Journal+of+the+Multinational+Association+of+Supportive+Care+In+Cancer%22%5BJournal%5D)">Sleep deprivation and quality of life among uterine cancer survivors: systematic review.</a> Supportive Care In Cancer : Official Journal of the Multinational Association of Supportive Care In Cancer. 30 (3), 2891-2900 (2022).</li>
<li>Tobaldini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep%2C+sleep+deprivation%2C+autonomic+nervous+system+and+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Sleep, sleep deprivation, autonomic nervous system and cardiovascular diseases.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 74, 321-329 (2017).</li>
<li>Arthaud, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paradoxical+%28REM%29+sleep+deprivation+in+mice+using+the+small-platforms-over-water+method%3A+polysomnographic+analyses+and+melanin-concentrating+hormone+and+hypocretin%2Forexin+neuronal+activation+before%2C+during+and+after+deprivation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sleep+Research%22%5BJournal%5D)">Paradoxical (REM) sleep deprivation in mice using the small-platforms-over-water method: polysomnographic analyses and melanin-concentrating hormone and hypocretin/orexin neuronal activation before, during and after deprivation.</a> Journal of Sleep Research. 24 (3), 309-319 (2015).</li>
<li>Saré, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+sleep+restriction+in+developing+male+mice+results+in+long+lasting+behavior+impairments%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+In+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Chronic sleep restriction in developing male mice results in long lasting behavior impairments.</a> Frontiers In Behavioral Neuroscience. 13, 90(2019).</li>
<li>Roman, V., Vander Borght, K., Leemburg, S. A., Vander Zee, E. A., Meerlo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+restriction+by+forced+activity+reduces+hippocampal+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Sleep restriction by forced activity reduces hippocampal cell proliferation.</a> Brain Research. 1065 (1-2), 53-59 (2005).</li>
<li>Zhao, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+sleep+restriction+induces+cognitive+deficits+and+cortical+beta-amyloid+deposition+in+mice+via+BACE1-antisense+activation%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neuroscience+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Chronic sleep restriction induces cognitive deficits and cortical beta-amyloid deposition in mice via BACE1-antisense activation.</a> CNS Neuroscience & Therapeutics. 23 (3), 233-240 (2017).</li>
<li>Lord, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+life+sleep+disruption+potentiates+lasting+sex-specific+changes+in+behavior+in+genetically+vulnerable+Shank3+heterozygous+autism+model+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Autism%22%5BJournal%5D)">Early life sleep disruption potentiates lasting sex-specific changes in behavior in genetically vulnerable Shank3 heterozygous autism model mice.</a> Molecular Autism. 13 (1), 35(2022).</li>
<li>Sinton, C. M., Kovakkattu, D., Friese, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+a+novel+method+to+interrupt+sleep+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Validation of a novel method to interrupt sleep in the mouse.</a> Journal of Neuroscience Methods. 184 (1), 71-78 (2009).</li>
<li>Rotenberg, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+after+immobilization+stress+and+sleep+deprivation%3A+common+features+and+theoretical+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Sleep after immobilization stress and sleep deprivation: common features and theoretical integration.</a> Critical Reviews in Neurobiology. 14 (3-4), 225-231 (2000).</li>
<li>Kim, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+modulates+adiponectin+expression+on+murine+colitis+with+sleep+deprivation%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Melatonin modulates adiponectin expression on murine colitis with sleep deprivation.</a> World Journal of Gastroenterology. 22 (33), 7559(2016).</li>
<li>Barf, R. P., Scheurink, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disturbances+and+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Sleep disturbances and glucose homeostasis.</a> European Endocrinology. 7, 14-18 (2011).</li>
<li>Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+RNA+using+TRIzol+%28TRI+reagent%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Purification of RNA using TRIzol (TRI reagent).</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2010 (6), (2010).</li>
<li>Libus, J., Štorchová, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+cDNA+generated+by+reverse+transcription+of+total+RNA+provides+a+simple+alternative+tool+for+quantitative+RT-PCR+normalization%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Quantification of cDNA generated by reverse transcription of total RNA provides a simple alternative tool for quantitative RT-PCR normalization.</a> Biotechniques. 41 (2), 156-164 (2006).</li>
<li>Nolan, T., Hands, R. E., Bustin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+mRNA+using+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Quantification of mRNA using real-time RT-PCR.</a> Nature Protocols. 1 (3), 1559-1582 (2006).</li>
<li>Mang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+piezoelectric+system+as+an+alternative+to+electroencephalogram%2Felectromyogram+recordings+in+mouse+sleep+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a piezoelectric system as an alternative to electroencephalogram/electromyogram recordings in mouse sleep studies.</a> Sleep. 37 (8), 1383-1392 (2014).</li>
<li>Maret, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homer1a+is+a+core+brain+molecular+correlate+of+sleep+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Homer1a is a core brain molecular correlate of sleep loss.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (50), 20090-20095 (2007).</li>
<li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+deprivation+hastens+Alzheimer-like+pathologies+in+a+human+tau-overexpressed+mouse+model+via+activation+of+cdk5%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Olfactory deprivation hastens Alzheimer-like pathologies in a human tau-overexpressed mouse model via activation of cdk5.</a> Molecular neurobiology. 53, 391-401 (2016).</li>
<li>Sousa, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+Natural+Killer+T+cells+resilience+to+paradoxical+sleep+deprivation-associated+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%2C+Behavior%2C+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Invariant Natural Killer T cells resilience to paradoxical sleep deprivation-associated stress.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 90, 208-215 (2020).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+circadian+rhythms+by+shift+work+exacerbates+reperfusion+injury+in+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Disruption of circadian rhythms by shift work exacerbates reperfusion injury in myocardial infarction.</a> Journal of the American College of Cardiology. 79 (21), 2097-2115 (2022).</li>
<li>Miller, M. A., Cappuccio, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation%2C+sleep%2C+obesity+and+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Vascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inflammation, sleep, obesity and cardiovascular disease.</a> Current Vascular Pharmacology. 5 (2), 93-102 (2007).</li>
<li>Minkel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+deprivation+potentiates+HPA+axis+stress+reactivity+in+healthy+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Psychology%22%5BJournal%5D)">Sleep deprivation potentiates HPA axis stress reactivity in healthy adults.</a> Health Psychology. 33 (11), 1430(2014).</li>
<li>Bishir, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+deprivation+and+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Sleep deprivation and neurological disorders.</a> BioMed Research International. 2020, 5764017(2020).</li>
<li>Franken, P., Tobler, I., Borbély, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+temperature+and+EEG+slow-wave+activity+in+the+rat%3A+analysis+of+vigilance+state+related+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv+%3A+European+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Cortical temperature and EEG slow-wave activity in the rat: analysis of vigilance state related changes.</a> Pflugers Archiv : European Journal of Physiology. 420 (5-6), 500-507 (1992).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+chronic+sleep+fragmentation+on+wake-active+neurons+and+the+hypercapnic+arousal+response%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Effects of chronic sleep fragmentation on wake-active neurons and the hypercapnic arousal response.</a> Sleep. 37 (1), 51-64 (2014).</li>
<li>Jones, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early-life+sleep+disruption+increases+parvalbumin+in+primary+somatosensory+cortex+and+impairs+social+bonding+in+prairie+voles%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Early-life sleep disruption increases parvalbumin in primary somatosensory cortex and impairs social bonding in prairie voles.</a> Science Advances. 5 (1), (2019).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Uyku yoksunluğunun fare modelleri, uyku bozukluğunun kardiyovasküler hastalık21, psikiyatrik durumlar22 ve nörolojik bozukluklar23 dahil olmak üzere çeşitli hastalıklar üzerindeki etkilerini incelemek için gereklidir. Farelerde mevcut uyku yoksunluğu stratejileri arasında, tekrarlayan kısa süreli uyku kesintisini içeren fiziksel yaklaşımlar en sık kullanılanlardır 5,7,12<sup class=...

Sirkadiyen ritim bozulması, dış çevre veya davranış ile endojen biyolojik saat arasındaki senkronizasyonun bozulmasını ifade eder. Sirkadiyen ritim bozukluğunun en yaygın nedenlerinden biri uyku yoksunluğudur1. Uyku yoksunluğu sadece insan sağlığını olumsuz etkilemekle kalmaz, aynı zamanda kanser2 ve kardiyovasküler hastalıklar3 dahil olmak üzere birçok hastalığın riskini önemli ölçüde artırır. Bununla birlikte, uyku yoksunluğunun zararlı etkilerinin altında yatan mekanizmalar büyük ölçüde bilinmemektedir ve bu konudaki anlayışımızı geliştirmek için uyku yoksunluğu modelleri oluşturmak esastır.
Farelerde uyku yoksunluğu için su platformlarının4, nazik kullanım5, kayar çubuk odalarının6, dönen tamburların7 ve kafes ajitasyon protokollerinin5,8,9 kullanımı gibi çeşitli yöntemler bildirilmiştir. Kayar çubuk odaları, çubukları kafesin alt kısmı boyunca otomatik olarak süpürür ve fareleri üzerlerinden geçmeye ve uyanık kalmaya zorlar. Kafes ajitasyon protokolleri, kafeslerin laboratuvar orbital çalkalayıcılarına yerleştirilmesini içerir ve bu da verimli uyku bozukluğuna neden olur. Bu yöntemler otomatik ve etkili olsa da, özellikle sirkadiyen gen profillemesi için gerekli olan çok sayıda uykudan mahrum fareyi içeren özel çalışma tasarımları için, birden fazla cihazın paralel olarak çalışması gerektiğinde pahalı olabilirler. Öte yandan, su platformları ve nazik kullanım protokolleri, uyku yoksunluğunu indüklemek için yaygın olarak kullanılan daha ucuz ve daha basit yöntemlerdir. Bununla birlikte, su platformu, önceden belirlenmiş yoksunluk-dinlenme döngülerinin10,11 otomatik kontrolüne izin vermez ve nazik kullanım, araştırmacıların uykuyu bozmak için sürekli uyanık olmasını gerektirir. Ek olarak, dönen tamburlar gibi diğer yöntemler, sosyal izolasyon veya stres12 ile karıştırılabilir.
Orbital çalkalayıcı tabanlı yöntemden esinlenerek, farelerde uyku yoksunluğu için rocker platform tabanlı bir cihaz oluşturmak için bir protokol sunmayı amaçlıyoruz. Bu yöntem ucuz, etkili, minimum stresli, kontrol edilebilir ve otomatiktir. Mevcut protokol, erişilebilirliğimize bağlı olarak, yörünge çalkalayıcılardan yaklaşık on kat daha ucuz bir maliyetle rocker platform tabanlı bir cihaz oluşturmamıza izin veriyor. Bu cihaz, grup halinde barındırılan farelerde uykuyu etkili bir şekilde bozdu ve minimum stres tepkisi ile uyku yoksunluğunun karakteristik değişikliklerine neden oldu. Uyku yoksunluğunun çoklu hastalıkların patogenezi üzerindeki etkilerini ve altta yatan mekanizmalarını araştırmakla ilgilenen araştırmacılar için, özellikle de çalışma paralel olarak çok gruplu uyku yoksunluğunu içerdiğinde, özellikle yararlı olacaktır.

<table><tbody><tr><td>1.5 mL mikrosantrifüj tüpü</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C-S</td><td></td></tr><tr><td>50 mL santrifüj tüpü</td><td>NEST</td><td>602002</td><td></td></tr><tr><td>Adenozin ELISA kiti</td><td>Ruifan teknolojisi</td><td>RF8885</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan kafesi</td><td>ZeYa tech</td><td>MJ2</td><td></td></tr><tr><td>Kan şekeri ölçüm cihazı</td><td>YuYue</td><td>580</td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6J Fareler</td><td>JieSiJie Laboratuvar Hayvanı</td><td>N / A</td><td>Yaş: 8-10 hafta</td></tr><tr><td>Biyel</td><td>ShengXiang Tech</td><td>N / A</td><td>Uzunluk: &nbsp; 20 cm</td></tr><tr><td>Soğutma fanı</td><td>LiMing</td><td>EFB0805VH</td><td>Besleme gerilimi: 5 V; Güç tüketimi: 1,2 W; Hava akışı: 26,92 cfm; Boyutlar: 40 mm * 40 mm * 56 mm</td></tr><tr><td>Kortikosteron ELISA kiti</td><td>Elabscience</td><td>E-OSEL-M0001</td><td></td></tr><tr><td>EEG/EMG kayıt ve analiz sistemi</td><td>Pinnacle Technology</td><td>8200-K1-iSE3</td><td></td></tr><tr><td>Sivrisinek kanama durdurucular</td><td></td><td></td>20071302 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td>izofluran <td>RWD</td></tr> FST 13011-12 Cerrahi alet <tr><td>Motor ve motor montajı</td><td>MingYang</td><td>MY36GP-555</td><td>Besleme gerilimi: 24 V dc; Mil çapı: 8 mm; Maksimum çıkış torku: 100 Kgf.cm; Maksimum çıkış hızı: 10 rpm</td></tr><tr><td>NanoDrop 2000c</td><td>Thermo Scientific</td><td>NanoDrop 2000c</td><td></td></tr><tr><td>Güç tuğla adaptörü</td><td>MingYang</td><td>QiYe-0243</td><td>Giriş voltajı: 110-220V ac; Çıkış voltajı: 24 V dc; Çıkış akımı: 2 A; Kablo uzunluğu: 2 m</td></tr><tr><td>qPCR ticari kiti</td><td>Vazyme</td><td>Q711-02</td><td></td></tr><tr><td>qPCR ölçüm cihazları</td><td>Roche</td><td>480</td><td></td></tr><tr><td>Vida uyumlu çelik silindir ile tutturulmuş dikdörtgen platform</td><td>Özelleştirilmiş</td><td>N/A</td><td>Genişlik: 20 cm; uzunluk: 25 cm; silindirin uzunluğu: 30 cm, kalınlık: 2 mm</td></tr><tr><td>RNA'yı cDNA ticari kitine ters çevirin</td><td>Vazyme</td><td>R323-01</td><td></td></tr><tr><td>Vida ve somun</td><td>Guwanji</td><td>N/A</td><td>İç çap: 6 mm, 12 mm</td></tr><tr><td>Vida uyumlu çelik silindir</td><td>Özelleştirilmiş</td><td>N/A</td><td>Uzunluk: 300 mm</td></tr><tr><td>Oluklu çelik kanallar</td><td>Özelleştirilmiş</td><td>N/A</td><td>Uzunluk: 400 mm veya 500 mm, kalınlık: 2 mm</td></tr><tr><td>Zaman kontaktörü</td><td>LiXiang</td><td>DH48S-S</td><td>Besleme gerilimi: 110-220 V ac; Ölçülen birimler: saat, dakika, saniye; İletişim yapılandırması: DPDT</td></tr><tr><td>TRIzol</td><td>Vazyme</td><td>R401-01</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde uyku yoksunluğu için bir cihaz kurulması

Establishing a Device for Sleep Deprivation in Mice

Sirkadiyen ritim bozulması, dış çevre veya davranış ile sağlığı önemli ölçüde bozan endojen moleküler saat arasındaki senkronizasyonun bozulmasını ifade eder. Uyku yoksunluğu, sirkadiyen ritim bozulmasının en yaygın nedenlerinden biridir. Sağlık üzerindeki etkilerini araştırmak için farelerde uyku yoksunluğuna neden olmak için çeşitli yöntemler (örneğin, su üzerindeki platformlar, nazik kullanım, kayar çubuk odaları, dönen tamburlar, yörünge çalkalayıcılar, vb.) bildirilmiştir. Bu çalışma, farelerde uyku yoksunluğu için alternatif bir yöntem sunmaktadır. Ayarlanabilir zaman aralıklarında grup halinde barındırılan farelerde uygun maliyetli ve uykuyu verimli bir şekilde bozan otomatik bir rocker platformu tabanlı cihaz tasarlanmıştır. Bu cihaz, minimum stres tepkisi ile uyku yoksunluğunun karakteristik değişikliklerine neden olur. Sonuç olarak, bu yöntem, uyku yoksunluğunun çoklu hastalıkların patogenezi üzerindeki etkilerini ve altta yatan mekanizmaları incelemekle ilgilenen araştırmacılar için yararlı olabilir. Ayrıca, özellikle birden fazla uyku yoksunluğu cihazının paralel olarak çalışması gerektiğinde uygun maliyetli bir çözüm sunar.

Farelerde uyku yoksunluğu için kurulan cihaz Şekil 1D'de gösterilmektedir. Uyku yoksunluğunun başlamasından sonraki 7. günde, elektroensefalogram (EEG) ve elektromiyografi (EMG) izleme16, cihazın farelerde uyku süresini önemli ölçüde azalttığını ve uyanıklık süresini artırdığını göstermiştir (Şekil 2A-D). Bu arada, mevcut protokol, başarılı uyku yoksunluğunun belirteçleri olan beyindeki Homer1a'nın</e...

Mevcut protokol, farelerde uyku yoksunluğunu indüklemek için kullanılan uygun maliyetli bir rocker platform tabanlı cihaz kurmak için bir yöntemi özetlemektedir. Bu cihazın, elektroensefalogram (EEG) ile kanıtlanmış uyku düzenlerinde bozulmalara neden olmanın yanı sıra uyku yoksunluğu ile ilişkili metabolik ve moleküler değişiklikleri indüklemede etkili olduğu kanıtlanmıştır.

Farelerde uyku yoksunluğu için bir cihaz kurulması

Circadian rhythm disruption refers to the desynchronization between the external environment or behavior and the endogenous molecular clock, which ...

Uyku yoksunluğunun zararlı etkilerinin altında yatan mekanizmalar büyük ölçüde bilinmemektedir ve uyku yoksunluğu modellerinin oluşturulması bu konudaki anlayışımızı geliştirmek için çok önemlidir. Bu yöntem, ucuz, etkili, minimum stresli, kontrol edilebilir ve otomatiktir. Mevcut protokol, erişilebilirliğimize bağlı olarak orbital çalkalayıcılardan yaklaşık 10 kat daha ucuz bir maliyetle rocker platform tabanlı bir cihaz oluşturmamıza izin veriyor.50 santimetrelik oluklu çelik kanalın bir ucunu 40 santimetrelik oluklu çelik kanalın ortasına vidalarla sabitleyerek başlayın. Bu, T şeklinde bir yapı oluşturacaktır. T şeklindeki iki yapıyı 30 santimetre aralıklarla dik olarak konumlandırın.Yapıların tabanlarını vidaları kullanarak 30 santimetre vida uyumlu çelik silindir ile bağlayın. Ardından iki T şeklindeki yapı arasına çelik bir dikdörtgen platform yerleştirin. 30 santimetrelik vida uyumlu çelik silindirin her iki ucunu iki yatakla sabitleyin.Vidaları kullanarak, T şeklindeki yapılardan birine üstten 25 santimetre aşağıya bir motor montajı sabitleyin. Şimdi bu motor yuvasına vidalarla bir motor takın. Motorun altındaki T şeklindeki yapıya kendinden kilitli bantlara sahip bir soğutma fanı sabitleyin.Vidaları kullanarak, bir biyel kolunun yatak ucunu motora bakan bir platform köşesine ve diğer ucunu motor miline sabitleyin. Ardından, plastik bir kabın her köşesinde iki adet dört milimetre delik açmak için bir elektrikli matkap kullanın. Kabın sol tarafında, bir alt altı milimetre delikle birlikte iki ek dört milimetre delik açın.Plastik kabı, delinmiş köşe deliklerinden kendinden kilitli bantlar kullanarak dikdörtgen platform üzerinde kilitleyin. Su şişesini, nozul altı milimetrelik delikten geçecek şekilde, iki dört milimetrelik delikten kendinden kilitli bantlar kullanarak plastik kabın sol tarafına sabitleyin. Şimdi güç tuğlası adaptörünün çıkış elektrik kablolarını motorun iki terminaline bağlayın.Ardından giriş kablolarını zaman kontaktörüne bağlayın. Her iki taraftaki mekanik sayaçlarda M görünene kadar zaman kontaktörünün sırasıyla sol ve sağ yarısındaki en sağdaki işaret düğmelerine basın. Mekanik sayaçlarda 5M görünene kadar zaman kontaktörünün her iki yarısındaki orta işaret düğmelerine basarak bu işlemi izleyin.Sol mekanik sayaçta 15M görünene kadar zaman kontaktörünün sol yarısındaki en soldaki işaret düğmesine basarak bu kurulumu tamamlayın. Ardından, fareyi kafese yerleştirin. Ardından zaman kontaktörüne ve soğutma fanına güç verin.Uyku yoksunluğunun başlamasından sonraki yedinci günde, EEG ve EMG izleme, uyku yoksunluğu cihazının farelerde uyku süresini önemli ölçüde azalttığını ve uyanıklık süresini artırdığını gösterdi. Kontrol ile karşılaştırıldığında, beyinde adenosin birikimi ve Homer1a mRNA seviyeleri gibi başarılı uyku yoksunluğu belirteçlerinin arttığı gözlendi. Bununla birlikte, serum kortikosteron düzeylerinde önemli bir değişiklik gözlenmedi.Yedi günlük uyku yoksunluğundan sonra, farelerin boyutunda, vücudunda ve timus ağırlığında önemli bir azalma gözlendi. Ek olarak, uyku yoksunluğundan sonra farelerde glikoz toleransı önemli ölçüde bozulmuştur. Uyku yoksunluğu ayrıca beyindeki saat genlerinin ekspresyon modellerinde önemli bir değişiklik olduğunu ortaya çıkardı ve bu da moleküler saatin bozulmasına işaret etti.Biyel kolunun dengesi ve biyel kolunun çelik dikdörtgen platform ile motor arasındaki göreceli konumu en önemli şeylerdir. Araştırmacı, uyku yoksunluğunun çeşitli sağlık koşulları üzerindeki etkilerini ve altta yatan mekanizmaları araştırmak için bu tekniği kullanabilir.

establishing-a-device-for-sleep-deprivation-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kaynak: Kodani, S., et.al. Farelerde Uyku / Uyanıklık Durumlarının İzlenmesi Sırasında Nöral Devrelerin Optogenetik Manipülasyonu. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, farelerde uykudan uyanıklığa geçişte yer alan nöral devrelerin optogenetik manipülasyonunu göstermektedir. Prosedür, ışık stimülasyonunu ve elektrofizyolojik kaydı mümkün kılmak için beyne ve kaslara bir optik fiber ve elektrotların cerrahi olarak implante edilmesini içerir. Stria terminalisin (BNST) yatak çekirdeğindeki ışığa duyarlı...

Farelerde Uykudan Uutanlığa Geçiş için Nöral Devrelerin Optogenetik Manipülasyonu

Bu videoda, anestezi uygulanmış bir fareye elektroensefalogram (EEG) ve elektromiyogram (EMG) elektrot düzeneğinin implante edilmesi için bir protokol gösterilmektedir. İşlem, fareyi stereotaksik bir çerçeve üzerine sabitlemeyi, kafatasında orta hat kesisi yapmayı, elektrotlar için delikler açmayı ve sinyal kaydı için elektrot ünitesini sabitlemeyi içerir. Kurtarma işleminden sonra, farenin uyku-uyanıklık davranışı kaydedilen sinyaller kullanılarak analiz edilir.

Elektroensefalogram ve Elektromiyogram Kayıtları ile Farelerde Uyku Davranışının Analiz Edilmesi

Serbest davranan farelerde elektroensefalogram (EEG) ve elektromiyogram (EMG) kaydı, davranış ve fizyolojiyi uyku ve uyanıklık ile ilişkilendirmek için kritik bir adımdır. Burada açıklanan deneysel protokol, farelerde EEG ve EMG kayıtlarını elde etmek için kablo tabanlı bir sistem sağlar.

Farelerde Uyku Ölçüm Basım Kayıt Prosedürü

Biz refah farelerde genel anestezi kullanılarak işlemler sırasında değerlendirmek için bir iletişim kuralı geliştirilmiştir. Davranış parametreleri glukokortikoid metabolitleri analiz edildi yanı sıra refah düzeyini gösteren bir dizi. Protokol bilimsel, hayvan-merkezci bir şekilde önem derecesini tahmin etmek için genel bir yardım olarak hizmet verebilir.

Esenlik farelerde sistematik değerlendirilmesi için genel anestezi yordamları

Etkinlik tabanlı ev-kafes izleme aracılığıyla uyku ölçme bir yüksek-den geçerek yöntemi açıklamak. Bu yöntem geleneksel EEG tabanlı yöntemleri avantaj sunar. Toplam uyku süresi belirlenmesi için de doğrulanır ve uyku insan hastalık kemirgen modellerinde izlemek için güçlü bir araç olabilir.

Uyku süresi Rodents noninvaziv, yüksek üretilen iş belirlenmesi

Biz nerede müfettişler yavaşça fare uyku davranış gözlenen her zaman eşya nazik işleme olarak bilinen bir uyku yoksunluğu tekniği tarif. Bu yöntem araştırmacılar Kronik uyku kısıtlama geliştirme boyunca gelecek beyin fizyolojisi ve davranış olabilir etkileri çalışmaya olanak sağlayan güçlü bir araçtır.

Kronik uykusuzluk Mouse aracılığıyla yumuşak kauçuk sersemler

Burada, biz farelerde uyku/uyanıklık devletlerin izlenmesi sırasında nöronların belirli türlerinin optogenetik manipülasyon yöntemlerini açıklamak, bir örnek olarak stria terminalis yatak çekirdeği üzerinde son çalışma sunma.

Farelerde uyku/uyanıklık durumları Izleme sırasında nöral devrelerin optogenetik manipülasyon

Bu makalede, bir kısıtlamacı kullanarak kronik immobilize fareler depresif benzeri davranış indüksiyon için Basitleştirilmiş ve standartlaştırılmış bir protokol sağlar. Buna ek olarak, depresyon indüksiyonu doğrulamak için davranış ve fizyolojik teknikler açıklanmıştır.

Farelerde depresyon benzeri davranışlar Inducing için kronik Immobilizasyon Stres Protokolü

Burada sunulan, genç vahşi tip farelerde doğrulanmış bilişsel açık ve anksiyete benzeri davranışlara neden olabilecek, elektrik kontrollü bir yörünge rotorunun elde ettiği kronik uyku parçalanması (CSF) modeli için bir protokoldür. Bu model kronik uyku bozukluğu ve ilgili bozuklukların patogenezini keşfetmek için uygulanabilir.

Genç Vahşi Tip Farelerde Bilişsel Açık ve Anksiyete Benzeri Davranışlara Neden Olmak İçin Titreşimli Orbital Rotor Kullanan Kronik Uyku Parçalanma Modeli

Iki organizmanın Parabiyotik birleştiren ortak bir dolaşım sisteminin gelişmesine yol açar. Bu protokol, bir vahşi tip fare ve bir kurucu GFP-ifade eden fare arasında bir Parabiyotik bir bağlantı oluşturmak üzere cerrahi adımları açıklar.

Farelerde parabiyoz: Detaylı Bir Protokol

Öğrenin, farelerde uyku yoksunluğu için maliyet etkin bir sallanır platform cihazı kurulumunu. Bu yöntem EEG değişiklikleri ve metabolik yanıtlarla güvenilir uyku yoksunluğu modelleri sağlar.

Farelerde uyku yoksunluğu için bir cihaz kurulması

Daha fazla video keşfet