Name: Drosophila Embriyolarında Epitelyal Gerginliğin Ölçümü ile Birlikte Rho1 Aracılı Aktomiyosin Kontraktilitesinin Optogenetik İnhibisyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T14:50:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: Keşfedin Drosophila embriyolarında optogenetik yöntemle Rho1 aracılı aktomiyosin kontraktilitesinin inhibisyonunu ve epitel gerginliği ölçümünü. Bu teknik, doku morfojenezindeki mekanik kuvvetleri anlamak için geliştirme biyolojisi araştırmalarına yeni bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, görüntüleme desteği için Ann Lavanway'e teşekkür eder. Yazarlar, reaktifleri paylaştıkları için Wieschaus laboratuvarına ve De Renzis laboratuvarına ve sinek stokları için Bloomington Drosophila Stok Merkezi'ne teşekkür ediyor. Bu çalışma NIGMS ESI-MIRA R35GM128745 ve Amerikan Kanser Derneği Kurumsal Araştırma Hibesi #IRG-82-003-33 tarafından BH'ye desteklenmektedir.

Drosophila'da Rho1 Aracılı Aktomiyosin Kontraktilitesinin Optogenetik İnhibisyonu

Yazarlar, araştırmanın potansiyel bir çıkar çatışması olarak yorumlanabilecek herhangi bir ticari veya finansal ilişkinin yokluğunda yürütüldüğünü beyan ederler.

Bu protokol, aktomiyosin kontraktilitesinin inaktivasyonundan hemen sonra doku gerginliğindeki değişiklikleri araştırmak için optogenetik ve lazer ablasyonun birlikte kullanımını tanımladı. Burada tarif edilen optogenetik araç, endojen Rho1 ve Rho1'e bağımlı aktomiyosin kontraktilitesini akut olarak inhibe etmek için baskın negatif Rho1 (Rho1DN) formundan yararlanır. Drosophila ventral karık oluşumu bağlamında Opto-Rho1DN'nin önceki karakterizasyonu, aletin eşzamanlı miyozin inaktivasyonu ve aktin demontajı yolu...

Kassız miyozin II'nin (bundan böyle 'miyozin' olarak anılacaktır) F-aktin ağına uyguladığı kasılma kuvveti olan aktomiyosin kontraktilitesi, hücre şeklini değiştirmede ve doku düzeyinde morfogeneziyönlendirmede en önemli kuvvetlerden biridir 1,2. Örneğin, epitel hücrelerinin apikal alanında aktomiyosin kontraktilitesinin aktivasyonu, epitel katlanması, hücre ekstrüzyonu, delaminasyon ve yara iyileşmesi dahil olmak üzere çeşitli morfogenetik süreçleri kolaylaştıran apikal daralma ile sonuçlanır 3,4,5,6,7 . Miyozinin aktivasyonu, düzenleyici hafif zincirinin fosforilasyonunu gerektirir. Bu modifikasyon, miyozin moleküllerinin inhibitör konformasyonunu hafifleterek, her iki uçta birden fazla baş alanına sahip bipolar miyozin filament demetleri oluşturmalarına izin verir. Bipolar miyozin filamentleri, aktin filamentlerinin anti-paralel hareketini yönlendirir ve kasılma kuvveti 1,8,9 oluşumuna neden olur.
Evrimsel olarak korunmuş Rho ailesi küçük GTPase RhoA (Drosophila'da Rho1), çeşitli hücresel bağlamlarda aktomiyosin kontraktilitesinin aktivasyonunda merkezi bir rol oynar10,11. Rho1, GTP'yi (aktif form) veya GDP'yi (aktif olmayan form) bağlayarak bimoleküler bir anahtar olarak işlev görür12. GTP'ye veya GDP'ye bağlı Rho1 arasındaki döngü, GTPaz aktive edici proteinleri (GAP'ler) ve guanin nükleotid değişim faktörleri (GEF'ler) tarafından düzenlenir13. GEF'ler, GSYİH'nın GTP ile değişimini kolaylaştırma ve böylece Rho1 aktivitesini etkinleştirme işlevi görür. Öte yandan GAP'ler, Rho1'in GTPase aktivitesini arttırır ve böylece Rho1'i devre dışı bırakır. Aktive edilmiş Rho1, aşağı akış efektörleri, Rho ile ilişkili kinaz (Rok) ve Diaphanous14 ile etkileşime girerek ve aktive ederek aktomiyosin kasılmasını teşvik eder. Rok, miyozin15'in düzenleyici hafif zincirini fosforile ederek miyozin aktivasyonunu ve aktomiyosin kasılmasını indükler. Ek olarak, Rok ayrıca miyozin düzenleyici hafif zincir fosfatazı inhibe eder ve dolayısıyla miyozin filament düzeneğini daha da teşvikeder 16. Rok ayrıca, aktive edildiğinde, aktin-depolimerizasyon faktörü kofilin17,18'i fosforile ederek ve inhibe ederek aktinin parçalanmasını önleyen LIM kinazları fosforile edebilir. Diaphanous, aktin polimerizasyonunu destekleyen ve miyozinin 19,20,21 ile etkileşime girmesi için bir temel sağlayan bir formin ailesi aktin nükleatörüdür.
Aktomiyosin kontraktilitesini aktive eden hücresel mekanizmalar iyi aydınlatılmış olsa da, dinamik doku yeniden şekillenmesini düzenlemedeki işlevine ilişkin anlayışımız eksik kalmaktadır. Bu bilgi boşluğunu doldurmak, in vivo olarak belirli doku bölgelerinde aktomiyosini hızla etkisiz hale getirebilen ve doku davranışı ve özellikleri üzerindeki ani etkiyi kaydedebilen yaklaşımlar gerektirir. Bu protokol, Drosophila mezoderm invaginasyonu sırasında aktomiyosin kontraktilitesini akut olarak inhibe etmek için optogenetik bir yaklaşımın kullanımını ve ardından lazer ablasyonu kullanılarak epitel gerginliğinin ölçülmesini açıklar. Drosophila gastrulasyonu sırasında, ventral lokalize mezoderm öncü hücreleri apikal daralmaya uğrar ve ön-arka yönelimli bir karık oluşturarak embriyonun yüzeyinden invaze olur22,23. Ventral olukların oluşumu uzun zamandır epitelyal katlanma mekanizmasını incelemek için bir model olarak kullanılmaktadır. Ventral karık oluşumu, Drosophila24,25,26,27'de dorsal-ventral modelleme sistemi ile uygulanır. Embriyonun ventral tarafında bulunan iki transkripsiyon faktörünün, Twist ve Salyangoz'un ekspresyonu, ventral karık oluşumunu kontrol eder ve mezodermal hücre kaderini belirler28. Twist ve Salyangoz, bir G-proteinine bağlı reseptör yolu ve bir RhoGEF2 adaptör proteini, T48 29,30,31,32,33 yoluyla mezoderm öncü hücrelerinin tepesine Rho1 GEF RhoGEF2'nin alımını aktive eder. Daha sonra, RhoGEF2, Rho-Rho kinaz yolu 34,35,36,37,38,39 yoluyla potansiyel mezodermin apikal yüzeyi boyunca miyozini aktive eder. Aktive miyozin, mezoderm primordiumun apikal yüzeyi boyunca bir supraselüler aktomiyosin ağı oluşturur, kasılmaları apikal daralmaya neden olur ve apikal doku gerginliğinde hızlı bir artışa neden olur 14,37,40.
Bu protokolde tarif edilen optogenetik araç, Opto-Rho1DN, baskın bir negatif Rho1 (Rho1DN) 41 formunun mavi ışığa bağlı plazma membranı alımı yoluyla aktomiyozin kontraktilitesini inhibe eder. Rho1DN'deki bir T19N mutasyonu, mutant proteinin GDP'yi GTP ile değiştirme yeteneğini ortadan kaldırır ve böylece proteini sürekli olarak inaktif hale getirir34. Rho1DN'deki müteakip bir mutasyon olan C189Y, saf membran hedefleme sinyalini42,43 ortadan kaldırır. Rho1DN plazma membranına infüze edildiğinde, Rho1 GEF'lere bağlanır ve onu tutar, böylece Rho1'in aktivasyonunun yanı sıra miyozin ve aktinin Rho1 aracılı aktivasyonunu bloke eder34,44. Rho1DN'nin plazma membranı alımı, Cryptochrome 2 ve onun bağlanma ortağı CIB1'den türetilen ışığa bağlı bir dimerizasyon modülü aracılığıyla sağlanır. Cryptochrome 2, Arabidopsis thaliana45'te mavi ışıkla aktive olan bir Cryptochrome fotoreseptörüdür. Kriptokrom 2, temel bir sarmal-döngü-sarmal proteini olan CIB1'e yalnızca foto-uyarılmış durumundabağlanır 45. Daha sonra, Kriptokrom 2'den (CRY2 PHR, bundan sonra CRY2 olarak anılacaktır) ve CIB1'in (bundan sonra CIBN olarak anılacaktır) N-terminal alanından (aa 1-170) korunmuş N-terminali, fotoliyaz homoloji bölgesinin (PHR) ışık kaynaklı dimerizasyon için önemli olduğu bulunmuştur46. Opto-Rho1DN iki bileşen içerir. İlk bileşen, proteini plazma zarına47 lokalize eden bir CAAX çapası ile kaynaşmış CIBN proteinidir. İkinci bileşen, Rho1DN41 ile kaynaşmış mCherry etiketli CRY2'dir. Mavi ışığın yokluğunda, CRY2-Rho1DN sitoplazmada kalır. Mavi ışık stimülasyonu üzerine, CRY2-Rho1DN, membrana bağlı CIBN ve uyarılmış CRY2 arasındaki etkileşim yoluyla plazma membranına hedeflenir. Opto-Rho1DN, ultraviyole A (UVA) ışığı ve mavi ışık (400-500 nm, 450-488 nm'de tepe aktivasyonu) veya iki foton stimülasyonu41,46,47,48 gerçekleştirirken 830-980 nm darbeli lazer ile aktive edilebilir. Bu nedenle, Opto-Rho1DN, normalde heyecan verici GFP için kullanılan dalga boyları tarafından uyarılır (tek foton görüntüleme için 488 nm ve iki foton görüntüleme için 920 nm). Buna karşılık, heyecan verici mCherry için yaygın olarak kullanılan dalga boyları (tek foton görüntüleme için 561 nm ve iki foton görüntüleme için 1.040 nm) optogenetik modülü uyarmaz ve bu nedenle ön stimülasyon görüntüleme için kullanılabilir. Protokol, numune manipülasyonu sırasında istenmeyen stimülasyon riskini en aza indirmek için kullanılan yaklaşımları açıklar.
Lazer ablasyon, hücrelerdeki ve dokulardaki gerilimi tespit etmek ve ölçmek için yaygın olarak kullanılmaktadır49. Önceki çalışmalar, lazer yoğunluğu uygun şekilde kontrol edildiğinde, femtosaniye yakın kızılötesi lazer kullanan iki fotonlu lazer ablasyonunun, plazma membranı yırtılmasına neden olmadan bazı hücre altı yapıları (örneğin, kortikal aktomiyosin ağları) fiziksel olarak bozabileceğini göstermiştir50,51. Doku gergin ise, doku içindeki ilgilenilen bir bölgenin lazerle ablasyonu, ablasyon bölgesine bitişik hücrelerin hemen dışa doğru geri tepmesine neden olur. Geri tepme hızı, gerilimin büyüklüğünün ve geri tepmeye maruz kalan yapıları çevreleyen ortamın (sitoplazma) viskozitesinin bir fonksiyonudur49. Yakın kızılötesi lazerlerin üstün penetrasyon derinliği ve iyi sınırlandırılmış fokal ablasyon elde etme yeteneği nedeniyle, iki fotonlu lazer ablasyonu, in vivo doku gerginliğini tespit etmek için özellikle yararlıdır. Bu protokolde gösterildiği gibi, bu yöntem, dinamik doku yeniden şekillenmesi sırasında Rho1'e bağımlı hücresel kontraktilitenin doku mekaniği üzerindeki doğrudan etkisini araştırmak için aktomiyosin kontraktilitesinin Opto-Rho1DN aracılı inaktivasyonu ile kolayca birleştirilebilir.

<table><tbody><tr><td>35 mm cam tabanlı çanak</td><td>MatTek</td><td>P35G-1.5-10-C</td><td>Numune hazırlama için kullanılır</td></tr><tr><td>60 mm ve kez; 15 mm Kapaklı petri kabı</td><td>Falcon</td><td>351007</td><td>Numune hazırlama için kullanılır</td></tr><tr><td>Mikroskobu kaplamak için siyah bez</td><td>Çevrimiçi</td><td>NA</td><td>İstenmeyen ışık stimülasyonunu önlemek için kullanılır</td></tr><tr><td>Clorox Ultra Germicadal Ağartıcı (%8,25 sodyum hipoklorit)</td><td>VWR</td><td>10028-048</td><td>Embriyo dekorinasyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>CO2 pedi</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-114</td><td>Çapraz kurulum için kullanılır</td></tr><tr><td>ddH2O</td><td>NA</td><td>NA Numune</td><td>hazırlama için kullanılır</td></tr><tr><td>Dumont Style 5 cımbız</td><td>VWR</td><td>102091-654</td><td>Numune hazırlama için kullanılır</td></tr><tr><td>Kirpik aleti (saf kırmızı samur yuvarlak fırça # 2'den yapılmıştır)</td> <td>VWR</td><td>22940-834</td><td>Numune hazırlama için kullanılır</td></tr><tr><td>FluoView (Yazılım)</td><td>Olympus</td><td>NA</td><td>Görüntü elde etme ve optogenetik stimülasyon için kullanılır</td></tr><tr><td>Halokarbon yağı 27</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H8773-100ML</td><td>Embriyo aşaması görselleştirme için kullanılır</td></tr><tr><td>ImageJ/FIJI</td><td>NIH</td><td>NA</td><td>Görüntü analizi için kullanılır</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>NA</td><td>Görüntü analizi</td></tr> <tr><td>için kullanılırNikon SMZ-745 stereoskop</td><td>Nikon</td><td>NA</td><td>Numune hazırlama için kullanılır</td></tr><tr><td>InSight DS ile Olympus FVMPE-RS çoklu foton mikroskobu Eşzamanlı çift dalga boylu çoklu foton görüntüleme için Çift Çizgili Ultra Hızlı Lazerler, 25x/NA1.05 suya daldırma objektifi (XLPLN25XWMP2) ve foto-aktivasyon/stimülasyon için bir IR/VIS stimülasyon ünitesi. Bu sistem ayrıca bir TRITC filtresi (39005-BX3; AT-TRICT-REDSHFT 540/25x, 565BS, 620/60M) ve beyaz ışık yayan bir floresan aydınlatma ünitesi.</td><td>Olympus</td><td>NA</td><td>Görüntü elde etme ve optogenetik stimülasyon için kullanılır</td></tr><tr><td>SP Bel-Art 100'lü polipropilen dondurucu saklama kutusu (Siyah, numune transferi için ışık geçirmez kutu)</td><td>VWR</td><td>30621-392</td><td>İstenmeyen ışık stimülasyonunu önlemek için kullanılır</td></tr><tr><td>FM1403 Florlar için UV Filtre Kalkanı (Turuncu-kırmızı plastik kalkan)</td><td>Bolioptik</td><td>FM14036151</td><td>İstenmeyen ışık stimülasyonunu</td></tr> <tr><td>önlemek için kullanılırVITCHELO V800 Beyaz ve Kırmızı LED Işıklı Far</td><td>Amazon</td><td>NA</td><td>İstenmeyen ışık stimülasyonunu önlemek için kullanılır</td></tr></tbody></table>

drosophila embriyolarında epitelyal gerginliğin Ölçümü ile birlikte rho1 aracılı aktomiyosin kontraktilitesinin optogenetik İnhibisyonu

Optogenetic Inhibition of Rho1-Mediated Actomyosin Contractility Coupled with Measurement of Epithelial Tension in Drosophila Embryos

Aktin ve kas dışı miyozin II ("aktomiyosin kontraktilitesi") tarafından üretilen kasılma kuvvetleri, hücre bölünmesi, hücre göçü, epitelyal katlanma ve dallanma morfogenezi gibi çoklu uzunluk ölçeklerinde hücrelerin ve dokuların morfolojik değişiklikleri için kritik öneme sahiptir. Aktomiyosin kontraktilitesinin morfogenezdeki rolünün derinlemesine anlaşılması, geleneksel genetik veya farmakolojik yaklaşımlar kullanılarak elde edilmesi zor olan aktomiyosinin hızlı inaktivasyonuna izin veren yaklaşımlar gerektirir. Sunulan protokol, hassas zamansal ve uzamsal kontrollerle Drosophila embriyolarında aktomiyosin kontraktilitesini inhibe etmek için CRY2-CIBN tabanlı bir optogenetik dimerizasyon sistemi olan Opto-Rho1DN'nin kullanımını göstermektedir. Bu sistemde, CRY2, baskın negatif Rho1 formuna (Rho1DN) kaynaştırılırken, CIBN plazma zarına bağlanır. CRY2 ve CIBN'nin mavi ışık aracılı dimerizasyonu, Rho1DN'nin sitoplazmadan plazma membranına hızlı bir şekilde translokasyonuna neden olur ve burada endojen Rho1'i inhibe ederek aktomiyosini inaktive eder. Ek olarak, bu makale, Drosophila ventral karık oluşumu sırasında aktomiyosinin epitelyal gerginlik oluşturmadaki rolünü araştırmak için Opto-Rho1DN aracılı aktomiyosin inaktivasyonunu lazer ablasyonu ile birleştirmek için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır. Bu protokol, Drosophila embriyolarında aktomiyozin kontraktilitesini içeren diğer birçok morfolojik sürece minimal modifikasyonlarla uygulanabilir. Genel olarak, bu optogenetik araç, dinamik doku yeniden şekillenmesi sırasında doku mekaniğini kontrol etmede aktomiyosin kontraktilitesinin işlevini incelemek için güçlü bir yaklaşımdır.

Apikal daralma geçiren uyarılmamış embriyolarda, Sqh-mCherry ventral mezodermal hücrelerin medioapikal bölgesinde zenginleşirken, CRY2-Rho1DN-mCherry sitozolik idi (Şekil 1A). Konstriksiyon alanı içindeki lazer ablasyonu, AP ekseni boyunca hızlı bir doku geri tepmesine yol açtı (Şekil 1B, C). Uyarılan embriyolarda, CRY2-Rho1DN-mCherry sinyali plazma membranı lokalize olurken, Sqh-mCherry'nin medioapikal sinyali tamamen kayboldu (<strong class="x...

Aktomiyosin kontraktilitesi hücre ve doku morfogenezinde önemli bir rol oynar. Bununla birlikte, aktomiyosin kontraktilitesini in vivo akut olarak manipüle etmek zordur. Bu protokol, Drosophila embriyolarında Rho1 aracılı aktomiyosin kontraktilitesini hızla inhibe eden ve aktomiyozinin in vivo inaktivasyonundan sonra epitel gerginliğinin ani kaybını ortaya çıkaran bir optogenetik sistemi tanımlar.

Drosophila Embriyolarında Epitelyal Gerginliğin Ölçümü ile Birlikte Rho1 Aracılı Aktomiyosin Kontraktilitesinin Optogenetik İnhibisyonu

Contractile forces generated by actin and non-muscle myosin II ("actomyosin contractility") are critical for morphological changes of cells and tissues at ...

Araştırmamız, doku morfogenezini, gelişim aşamasındaki karmaşık üç boyutlu doku yapılarının oluşumunu inceler. Morfogenezi düzenleyen genler ve moleküllerle ilgileniyoruz ve morfogenezin altında yatan fiziksel ilkeleri anlamaya çalışıyoruz. Örneğin, mekanik kuvvetlerin nasıl üretildiği ve doku rehabilitasyonunu nasıl yönlendirdikleri.Aktomiyosin kontraktilitesi olarak da bilinen filamentli aktin ve kas dışı miyozin II tarafından üretilen kasılma kuvvetleri, doku morfogenezini yönlendiren en önemli kuvvetlerden biridir. Mevcut araştırmamız, aktomiyosin kontraktilitesinin, gelişimde temel bir doku yapım mekanizması olan kan epitel hücre tabakalarının katlanmasına nasıl aracılık ettiğini ele almaktadır. Aktomiyosin kontraktilitesinin epitelyal katlanma ve diğer morfogenetik süreçlerdeki rolünün derinlemesine anlaşılması, belirlenen zaman ve yerde aktomiyosini hızlı bir şekilde etkisiz hale getirebilen ve doku davranışı ve özelliklerinin ani etkisini kaydedebilen yaklaşımlar gerektirir.Bununla birlikte, geleneksel genetik yaklaşımlar kullanılarak bunu başarmak zordur. Bu protokolde açıklanan yaklaşım, hücrelerin ve dokuların, normalde doku yeniden şekillenmesini sağlayan mekanik kuvvetlerdeki ani değişikliklere nasıl tepki verdiğini ele almak için tasarlanmıştır. Bu önemli bir sorudur, ancak sağlam dokulardaki mekanik kuvvetleri hızla değiştirebilen sınırlı yaklaşımlar nedeniyle ele alınması zor olmuştur.Bu çalışmada, Drosophila embriyolarında belirli doku bölgelerinde aktomiyosini hızlı bir şekilde inaktive etmek için optogenetik bir araç geliştirdik. Aktomiyosin kontraktilitesinin epitelyal katlanmada doku mekaniği üzerindeki doğrudan etkisini araştırmak için bu ikisini lazer ablasyon ile birleştirdiğimizi bulduk. Bulgularımız, apikal daralma ortamının epitelyal katlanmaya mekanik mekanizması hakkında yeni bilgiler sunmaktadır.Manuel modifikasyonlarla, protokol, çok çeşitli morfogenetik süreçlerde aktomiyosin kontraktilitesinin işlevini incelemek için kolayca uyarlanabilir.

optogenetic-inhibition-rho1-mediated-actomyosin-contractility-coupled

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Yarı sağlam motor çıkış değişiklikleri (kas kasılması) izlerken Burada motoneuronal faaliyet optogenetic manipülasyon için bir protokol...

Yarı sağlam Lazer Aydınlatma ile Sinir Faaliyet optogenetic Pertürbasyon<em&gt; Drosophila</emMotion&gt; Larva

Biz Optik cımbız hafif levha mikroskop ve hücre mekaniği Drosophila embriyo boncuklar olmadan soruşturma için uygulanması için birleştiğinde bir kurulumu mevcut.

Hücre mekanik ile boncuk-Alerjik Optik cımbız Drosophila embriyo sondalama

Burada bir contractility tahlil Drosophila S2R + hücreler kullanarak açıklar. Eksojen bir ligand katlanmış gastrulasyon (sis), uygulama yolu ve hücresel contractility sinyalizasyon sis harekete geçirmek yol açar. Bu tahlil hücresel contractility proteinler yol sinyalizasyon sis Yönetmeliği araştırmak için kullanılabilir.

Kas Myosin II Contractility üzerinden katlanmış gastrulasyon sinyal yolu Drosophila S2R + hücrelerde araştırmak için bir hücre tabanlı tahlil

Bu protokol, tek hücrelerde ve kavisli epitelyal dokularda akomyosin davranışlarını nasıl güvenilir bir şekilde analiz ettiğini açıklayan basit yönergelerle birlikte Fiji tabanlı, Kullanıcı dostu bir metodoloji sunar. Öğretici izlemek için hiçbir programlama becerileri gereklidir; tüm adımlar Fiji grafik kullanıcı arayüzü ve ilişkili eklentileri kullanarak yarı interaktif bir şekilde gerçekleştirilir.

Kültür Drosophila Egg Chambers Time-Lapse filmler kullanarak yerel hücresel ve doku ölçeklerde Actomyosin dinamikleri Analizi

Burada, non-invaziv ve detay odaklı bir şekilde Drosophila embriyolarında embriyonik kas kasılmaları kaydetmek için bir yöntem sunuyoruz.

Canlı görüntüleme ve Drosophila embryo kas kasılmaları Analizi

Bu protokolün amacı, Rhodamine konjuge globüler aksini Drosophila embriyolarına enjekte etmek ve ısı stresini takiben intranükleer aksin çubuk tertibatını görmektir.

Canlı Isı Stresli Drosophila Embriyolarında İntranükleer Akin Çubuklarının Görüntülenmesi

İndüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler), birincil kortikal nöronlardan ve astrositlerden türetilen nöronlardan oluşan bir ko-kültür sistemi oluşturmak için bir protokol tanımlanmıştır. Bu ko-kültür sistemi, yeni, iPSC'den türetilmiş nöronlar ve channelrhodopsin-2'yi eksprese eden önceden var olan kortikal nöronlar arasında sinaptik kontakların ve devrelerin oluşumunun tespit edilmesini sağlar.

Bir Co-kültür Sistemde nöronal bağlantıları Oluşumunda değerlendirilmesi için bir optogenetic Yaklaşım

Kuş embriyonik gelişiminin geç aşamalarında yolk kesesi zarlarında lipid kullanım mekanizmasını incelemek için, birincil bir Japon bıldırcın embriyonik endodermal epitel hücre kültürü sistemi kurduk.

Japon Bıldırcın Embriyolar Yolk Sac Membran Primary Endodermal Epitel Hücre Kültürü

Biz renkli çökeltilerin zıt üç farklı mRNA dağıtım desen eşzamanlı ve belirli algılama izin bozulmamış Drosophila embriyolar bir çoklu hedef kromojenik tüm montaj in situ hibridizasyon (MC-DİLERİZ) prosedürü açıklar.

Çoklu hedef Kromojenik Tüm montaj<em&gt; In Situ</em&gt; Melezleme Gen İfade Etki karşılaştırılması için<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyolar

ploid manipülasyon için değiştirilmiş bir protokol, erken embriyoda sitokinez bir tek çevrim durak uyarılması için bir ısı şoku kullanır. Bu protokol zebrabalıkları gösterilmiştir, ancak diğer türlere uygulanabilir.

Isıl Şok 2 Tedavi ile Zebra balığı Embriyolar ploidisi Manipülasyon

Keşfedin Drosophila embriyolarında optogenetik yöntemle Rho1 aracılı aktomiyosin kontraktilitesinin inhibisyonunu ve epitel gerginliği ölçümünü. Bu teknik, doku morfojenezindeki mekanik kuvvetleri anlamak için geliştirme biyolojisi araştırmalarına yeni bir yaklaşım sunar.

Drosophila Embriyolarında Epitelyal Gerginliğin Ölçümü ile Birlikte Rho1 Aracılı Aktomiyosin Kontraktilitesinin Optogenetik İnhibisyonu (Video) | JoVE Journal

Drosophila Embriyolarında Epitelyal Gerginliğin Ölçümü ile Birlikte Rho1 Aracılı Aktomiyosin Kontraktilitesinin Optogenetik İnhibisyonu

Daha fazla video keşfet