DNA-Protein Çapraz Bağlarının Kantitatif Tespiti ve Translasyon Sonrası Modifikasyonları

Mevcut protokol, topoizomeraz inhibitörleri ve formaldehit tarafından indüklenen ubikitilasyon, SUMOylation ve ADP-ribozilasyon dahil olmak üzere DNA-protein çapraz bağlarını (DPC'ler) ve bunların translasyon sonrası modifikasyonlarını (PTM'ler) tespit etmek ve ölçmek için değiştirilmiş bir yöntemi vurgulamaktadır, böylece DPC'lerin ve PTM'lerinin oluşumu ve onarımının incelenmesine izin verir.

Araştırmam DNA hasarının onarımına odaklanıyor. Özellikle, topoizomeraz inhibitörleri, PARP inhibitörleri ve aldehitler tarafından indüklenen DNA hasarının onarımı. Hücrelerin bu ilaçlar tarafından indüklenen DNA protein çapraz bağlarını onardığı moleküler mekanizmaları göstermeye çalışıyorum.

DNA protein çapraz bağlarının onarımındaki son gelişmeler, DNA protein çapraz bağları için yeni onarım yollarının tanımlanmasını ve bu onarım yollarını düzenleyen nakil sonrası modifikasyon mekanizmalarını içerir. İn Vivo Enzim Testi Kompleksi ve DNA Adduct Geri Kazanım testine Hızlı Yaklaşım, DNA protein çapraz bağlarını ölçmek için en çok kullanılan yöntemlerdir ve topoizomeraz bir DNA protein çapraz bağları gibi belirli DNA protein çapraz bağları, spesifik bir antikor kullanılarak immünofloresan ile tespit edilebilir. En büyük zorluklardan biri, DNA protein çapraz bağlarının onarımında translasyon sonrası modifikasyonların rolünün incelenmesidir.

Çok düşük bollukları nedeniyle translasyon sonrası değiştirici konjuge DNA protein çapraz bağlarını zenginleştirmek ve tespit etmek çok zor olmuştur. Bu protokol, araştırmacıların farklı kaynaklardan DNA protein çapraz bağlarının onarımında bu modifikasyonların kinetiğini ve oluşumunu incelemelerine olanak tanıyan, deubikitile edilmiş, SUMOile ve ADP-ribosillenmiş DNA protein çapraz bağlarının bir miktar tespitinin ayrıntılarını sağlar. DNA protein çapraz bağlarının saptanması için diğer protokoller, translasyon sonrası modifikasyonlarının saptanmasını açıklayan adımları içermez.

Bu protokol, modifikasyonları indüklemek için ilaç konsantrasyonları ve süreleri ve modifikasyonları ayırmak ve tespit etmek için yöntemler ve ayrıca modifikasyonları stabilize etmek için yöntemler gibi ayrıntılar sağlar. Bu nedenle, DNA protein çapraz bağlarının onarımında nakil sonrası birkaç modifikasyon tanımlanmıştır. Onarımı nasıl koordine ettikleri büyük ölçüde bilinmemektedir.

Sonuç olarak, bu değişiklikler arasındaki etkileşim daha fazla araştırmayı garanti eder.