Name: Alkol Kullanım Bozukluğunu Modellemek İçin İki Şişe Seçimi ile Eşleştirilmiş Kronik Aralıklı Etanol Buharına Maruz Kalma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-23T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Öğrenin, farelerde alkol bağımlılığını modellemek için iki şişe seçimi ve kronik aralıklı etanol buharı yöntemini. Bu protokol, içme davranışını izlemek ve bağımlılıkla ilişkili nörobiyolojik değişiklikleri incelemek için otomatik ekipman kullanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) hibe AA027301 ve AA029985 tarafından desteklenmiştir.

Tüm prosedürler Purdue Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı. Bu çalışmada 8 haftalık C57BL/6J fareler kullanılmıştır. CIE grubunda 5 fare (3 erkek, 2 dişi) ve Air grubunda 10 fare (5 erkek ve 5 dişi) vardı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edildi (Malzeme Tablosuna bakınız) ve yiyeceğe erişimi olan 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngüsünde grup halinde barındırıldı. Farelerin vücut ağırlıkları deney boyunca haftada bir kez ölçüldü.
1. Genel deney tasarımı
NOT: İki şişe seçeneği (2BC)/kronik aralıklı etanol buharına maruz kalma (CIE), etanol bağımlılığını araştırmak için klinik öncesi bir fare modelidir51.
<ol>
	<li>M.Ö. 2 hafta boyunca, farelerin etanol içeren bir şişeye (%15 a/h) ve günde 2 saat (Pazartesi-Cuma) su içeren bir şişeye erişimi olduğundan emin olun, bu da karanlık döngünün 2 saatinden başlayarak.</li>
	<li>İlk başta, farelerin stabil bir etanol alım seviyesine ulaşılana kadar en az 2 haftalık temel 2BC içmesine izin verin. Deneysel ihtiyaçlara bağlı olarak, fareleri iki gruba (bir CIE grubu ve bir Hava grubu) veya ortalama başlangıç etanol alımına dayalı olarak ek tedaviler dahil edilirse daha fazlasına bölün.</li>
	<li>Başlangıç 2BC haftalarından sonra, CIE grubundan fareleri art arda dört gün (Pazartesi-Perşembe) boyunca 16 ardışık saat buhar açık ve 8 ardışık saat buhar kapalı olacak şekilde etanol buharına (CIE) maruz bırakın. Maruziyet süresi boyunca stabil ve sürekli kan etanol konsantrasyonları sağlamak için, pirazol bir alkol dehidrojenaz inhibitörü olarak birlikte uygulandı, böylece hızlı etanol metabolizmasını önledi ve tutarlı sistemik etanol seviyelerini teşvik etti. 
	NOT: Aydınlatma, titreşim, gürültü ve sıcaklık gibi odaya özgü potansiyel değişkenleri kontrol etmek için, Hava grubundaki fareler, CIE grubuyla aynı çevresel koşullar altında, ancak alkol buharına maruz kalmadan aynı bir odaya yerleştirildi.</li>
	<li>CIE/Air haftası boyunca, 2BC'nin oluşmadığından emin olun. 1 haftalık CIE / Air'den sonra, bir sonraki Pazartesi'den Cuma'ya kadar fareleri 2BC'de devam ettirin.</li>
	<li>CIE farelerinde alkol içme artışının artması meydana gelene kadar prosedürün geri kalanında farelere alternatif haftalar CIE / Air ve 2BC'ye izin verin. Kan etanol konsantrasyonlarını (BEC) belirlemek için farelerden haftada en az bir kez CIE kan toplayın52.</li>
</ol>
2. Deney hazırlığı
<ol>
	<li>Çalışmaya başlamadan önce aşağıdaki tüm malzemeleri edinin: fareler, kafesler/metal kafes üstleri, kafes başına iki tanesini yan yana sığdıracak içme şişeleri, yatak takımları, yiyecek, tartı, kronik aralıklı buhar odası ve bir Analox makinesi veya BEC'leri analiz etmek için başka bir yöntem (bkz.</li>
	<li>Gerekli tüm kimyasalların deney için hazır olduğundan emin olun: içme suyu, %95 etanol, pirazol, heparin ve steril tuzlu su.</li>
</ol>
3. Hayvan alışkanlığı
<ol>
	<li>Fareler halihazırda deneylerle aynı yerde barındırılmamışsa, yeni ortama alışmaları için en az 1 hafta bekleyin. 
	NOT: Bu süre zarfında, stresle ilgili karışıklıkları en aza indirmek ve hayvan refahını iyileştirmek için fareler de nazik muameleye alıştırılmalıdır. İşleme seansları, her biri hayvan başına yaklaşık 2-3 dakika süren art arda beş gün boyunca günde bir kez gerçekleştirildi. Fareler, kuyruğu kaldırılmadan deneycinin ellerine tuttu veya nazikçe yönlendirildi, bu da işleyicinin elini gönüllü olarak keşfetmelerine izin verdi. Bu teknik, rutin etkileşimi kolaylaştırır, sonraki deneysel prosedürler sırasında stresi azaltır ve daha güvenilir davranışsal veriler sağlar. Ek olarak, hayvanlar test ortamına daha fazla alışmaları için günde 30 dakika boyunca deney alanına transfer edildi.</li>
	<li>Farelere, farklı kafes kurulumuna uyum sağlamaları ve içmek için ayrı bir kafese yerleştirilmeleri için her iki şişenin de suyla doldurulduğu 1 hafta boyunca iki şişe seçeneği verildiğinden emin olun.</li>
</ol>
4. %15 w/v etanol ve su içeren iki şişe seçeneği
<ol>
	<li>İki şişe seçim alışkanlığı
	<ol>
		<li>İki şişe seçim testi paradigması, su ile iki şişe seçimi ve daha sonra su ve etanol ile test etme haftası boyunca aynıdır. Işıklar kapanmadan 30 dakika önce grup halinde barındırılan fareleri kendi içme kafeslerine taşıyın ve ardından farelerin 2 saat içmesine izin verin.</li>
		<li>2 saatlik içme periyodundan önce ve sonra her bir içme şişesinin hacimlerini kaydedin. Her grup, Pazartesi'den Cuma'ya 5 gün boyunca 2BC'ye tabi tutulur. 
		NOT: Alışkanlık haftasının amacı, tek bir şişenin doğal yan pozisyonundan kaynaklanan herhangi bir önyargıyı en aza indirmek için hayvanların kafeste bulunan iki şişeye uyum sağlamasına izin vermektir. Bu hafta boyunca her iki şişe de su ile doldurulur. Ürünle birlikte verilen metal hazne yalnızca bir şişe tutacak şekilde tasarlanmışsa, ikinci şişe için yer açmak için ilk şişeye bitişik çubukları arasındaki boşluğu dikkatlice kullanın. İçme deneyleri için kullanılan şişeler, 10 mL ve 25 mL'lik pipetler kullanılarak, farelerin içmesi için bilyeli rulmanlı düz bir yudumlayıcıya izin vermek için uçları kesilmiş olarak özel olarak üretilmiştir. Şişeleri tel kapağa klipslemek için bağlayıcı klipslerin kullanılması, içme süresi boyunca şişelerin hareket etmemesini sağlayacaktır (Ek Şekil 1 ve Ek Şekil 2).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Temel iki şişe seçimi
	<ol>
		<li>Alışkanlıktan sonra, stabil bir etanol alımı sağlamak için farelerin en az 2 haftalık temel 2BC içme işlemine tabi tutulmasına izin verin. Temel içme sırasında, fareleri günde 2 saat ve haftada 5 gün (Pazartesi-Cuma) bir su şişesi ve% 15 w / v etanol içeren ikinci bir şişe ile test edin. 2 saatlik içme periyodundan önce ve sonra her bir içme şişesinin hacmini kaydedin. 
		NOT: Etanol alımının stabil bir taban çizgisini oluşturmak için, her farenin günler arasındaki alımında yaklaşık %15'ten daha az değişiklik olana kadar 2BC haftalarını tekrarlayın.</li>
		<li>Fareler stabil bir etanol alımı taban çizgisine ulaştıktan sonra, fareleri etanol alımlarına göre etanole bağımlı olmayan (Hava işlemi) ve etanole bağımlı (CIE tedavisi) gruplara eşit olarak bölün. Temel etanol alımı belirlendikten sonra, fareler ertesi hafta CIE'ye (veya Havaya maruz kalmaya) tabi tutulur. 
		NOT: Tüm deneyler, bağımlı olmayan bir grubun dahil edilmesini gerektirmez ve bu, çalışmanın odağına göre belirlenmelidir. Örneğin, spesifik bir muamele görmüş ve edilmemiş etanol bağımlı fareler daha uygun bir karşılaştırma olabilir.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>İki şişe seçeneği (2BC)
	<ol>
		<li>İlk CIE haftasından sonra temel içme sırasında gerçekleştirilen 2BC prosedürüne devam edin. 
		NOT: İki şişe seçenekli fare içme formülü %15 w/v etanol karışımıdır (1 L): %95 etanol (195 mL) ve fare içme suyudur (805 mL).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Kronik aralıklı etanol buharı (CIE) maruziyeti
<ol>
	<li>Aşağıdaki malzemeleri düzenleyin: ısmarlama CIE buhar odaları (Ek Şekil 3), %95 etanol, bir etanol-pirazol çözeltisi (%20 etanol içinde karıştırılmış 68,1 mg/kg pirazol), bir salin-pirazol çözeltisi (68,1 mg/kg pirazol tuzlu suda karıştırılmış), şırıngalar (1 mL) ve iğneler.</li>
	<li>Kronik aralıklı etanol buharı (CIE) prosedürü
	<ol>
		<li>CIE için buhar odalarına konmadan önce, farelere intraperitoneal olarak bir etanol-pirazol çözeltisi (0.0075 mL / g) enjekte edin, bu çözelti bir başlangıç etanol zehirlenmesi oluşturmak, etanol dehidrojenazı inhibe etmek ve etanol metabolizmasını bloke etmek için kullanılır53.</li>
		<li>Tüm Hava kontrollerine ve diğer gruplara etanol yerine salin (0.0075 mL / g) ile karıştırılmış aynı pirazol dozunu enjekte edin. Her hafta CIE'nin ilk günü ve son günü yarım doz (0.00375 mL / g) pirazol çözeltisi verilmesi önerilir.</li>
		<li>Enjeksiyonlardan sonra, Hava/kontrol farelerini ev kafeslerine geri koyun ve CIE grubu kafeslerini buhar odasının içine yerleştirin. 
		NOT: Kronik etanol buharına maruz kalma ile ilişkili potansiyel sağlık riskleri göz önüne alındığında, hayvanlar refahlarını sağlamak ve herhangi bir olumsuz etkiyi tespit etmek için protokol boyunca yakından izlendi. Fareler haftada en az iki kez tartıldı ve sağlık değerlendirmeleri klinik sıkıntı belirtileri için gözlem içeriyordu. Başlangıç seviyesinden %20'yi aşan bir vücut ağırlığı kaybı sergileyen veya kambur duruş, uyuşukluk, piloereksiyon veya dağınık kürk gibi belirtiler gösteren hayvanların, insancıl uç noktalara ulaştığı kabul edildi ve onaylanmış kurumsal hayvan bakımı ve kullanım kılavuzlarına uygun olarak çalışmadan derhal çıkarıldı. CIE sırasında, fareler, etanol maruziyetinin sona ermesini takiben uzun bir geri çekilme dönemine girdiklerinde, haftanın sonuna doğru kötü sağlık sonuçlarına karşı en hassastırlar. Geri çekilmenin şiddetini en aza indirmek için, her hafta buhara maruz kalmanın son gününde yarım doz pirazol uygulanır. Ek olarak, hayvanları etanol maruziyetine geri döndürmek için her yeni CIE döngüsünün başlangıcında yarım doz verilir. Bir alkol dehidrojenaz inhibitörü olan pirazol, kan etanol konsantrasyonlarını stabilize etmek ve uzatmak için kullanılır; dozlar tipik olarak 0.00375 mL / g ila 0.0075 mL / g arasında değişir ve istenen kan etanol konsantrasyonunu elde etmek için ayarlanabilir.</li>
		<li>Fareler buhar odalarına konulduktan sonra kapıları kilitleyin ve pompayı uygun buhar seviyesine ayarlayın (örn. 1-3). Denemenin çalışma süresini ayarlayın. Bu çalışma için deney saat 17:00'de başlamış ve saat 09:00'da tamamlanmıştır ve 1-2 pompa ayarı kullanılmıştır (baştan sona kullanılmıştır).</li>
		<li>Ardından, deneyi başlatmak için CIE buhar odası kontrol ekranındaki Başlat düğmesine basın. 
		NOT: Bu adım, kullanılan hazneye ve kurulumdaki farklılıklara bağlı olarak değişebilir. Burada, tüm fareler enjekte edildikten ve etanol odasına yerleştirildikten sonra, oda %95 etanolü bir cam şişeye pompalamaya başlamalı ve sıvı etanolü buhara ısıtmalıdır. Buhar, farelerin 4 gün boyunca (Pazartesi akşamından Cuma sabahına kadar) 16 saat / gün tutulduğu odadan akar. Fareler her gün 8 saat buharın kapalı olduğunu deneyimliyor. Fareler daha sonra dördüncü günün sonunda (Cuma sabahı) odadan çıkarılır ve bir sonraki Pazartesi günü MÖ 2'ye başlar. Spesifik buhar odası sistemine ve kurulumuna bağlı olarak, farklı ayarlar/buhar seviyelerinin neden olduğu BEC'lerde farklılıklar olabilir. Sistem bileşenlerindeki küçük farklılıklar, hava akışı, egzoz vb. gibi çeşitli faktörler buna neden olabilir. Pirazol dozu yerine etanol buhar seviyesinin ayarlanması, bir BEC'yi hedef aralıkta tutmak için uygundur. Tolerans geliştikçe, BEC'ler çok düşük olabilir ve buhar seviyesinin ayarlanması gerekebilir. Buhar seviyeleri arasındaki gradyan BEC'leri artırmak için çok dikse, BEC'leri değiştirmek için pirazol dozunun buna göre ayarlanması önerilir.</li>
		<li>CIE sırasında farelerin BEC'lerini (bkz. adım 5.3) haftada en az bir kez ölçün. BEC'lerin düşmeye başlamadığından emin olmak için buhar durmadan 30 dakika önce kan alımı yapın. 
		NOT: Etanol toleransı birkaç hafta boyunca oluştuğu için deney sırasında buhar seviyesinin ayarlanması gerekebilir. BEC'ler, buhar ayarlarını yapmadan önce ve sonra test edilmelidir.</li>
		<li>Fareleri CIE'yi takip eden hafta 2BC testine geri koyun. Adım 4 ve adım 5'i tekrarlayın. Fareleri, temel içme hacimlerine kıyasla önemli etanol tüketimi artışına sahip olana kadar dört ila sekiz döngü (8-16 hafta) boyunca CIE ve 2BC arasında dönüşümlü tutun.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Kan ölçümleri
	<ol>
		<li>Aşağıdaki malzemeleri düzenleyin: Analoks sistemi, bıçak, tüp (0,2 mL), heparin/EDTA ve santrifüj gibi BEC'leri ölçmek için ekipman (bkz.</li>
		<li>BEC'yi belirlemek için kan toplamak için CIE farelerini CIE haftası boyunca bir kez, buhar sistemi kapanmadan 30 dakika önce kuyruk kesin. Kan alımı, lab54. tercihlerine bağlı olarak çeşitli yöntemler kullanılarak gerçekleştirilebilir.
		NOT: Kan, heparinize veya EDTA kaplı 0,5 mL'lik tüplere toplanır (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
		<li>Toplanan kan örneklerini işlenene kadar 4 °C'de tutun.</li>
		<li>Numuneleri işlemek için, plazmayı ayırmak için önce 208 x g'da 4 °C'de 10 dakika santrifüjleyin.</li>
		<li>Bir oksijen oranı etanol analizörü (Malzeme Tablosuna bakınız) veya BEC'leri belirleyebilen diğer sistemler kullanarak kan etanol konsantrasyonlarını belirleyin.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Modeling Alcohol Use Disorder Using Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure

Maury Cole, La Jolla Alcohol Research Inc.'in sahibi ve işletmecisidir.

Alkol kullanım bozukluğu, yüksek yaygınlığı ve topluma maliyeti olan küresel bir halk sağlığı sorununu temsil etmektedir56. Klinik öncesi hayvan modellerinde AUD'yi incelemek için farelerde yaygın bir yöntem 2BC/CIE 20,34,43,44,51,57,58,59'dur.<sup class="x...

Kronik aşırı alkol tüketimini içeren alkol kullanım bozukluğu (AUD), en sık görülen psikiyatrik bozukluklardan biridir ve küresel bir sorundur. AUD semptomları, tekrarlanan zehirlenme, yoksunluk ve aşerme döngülerini içerir ve sosyal, mesleki ve sağlık sonuçlarına bakılmaksızın sürekli alkol tüketimi ile karakterize edilir1,2,3,4,5,6,7. Alkol kullanım bozukluğu genellikle DE<HB9, anksiyete10 veya depression11 gibi diğer yaygın, kalıcı ve bozulmuş zihinsel bozukluklarla birlikte ortaya çıkar ve yalnızca Amerika Birleşik Devletleri'nde yılda yaklaşık 88< ölümden sorumludur>2. Aşırı veya sık alkol kullanımı, bir kişinin iş durumunu ve sosyal ilişkilerini etkileyebilir12 ve şiddetin artmasına neden olabilir13. Fiziksel olarak, alkolden akut çekilme anksiyete, ajitasyon, titreme, aşırı terleme, bilinç değişikliği ve halüsinasyonlar14,15 ile sonuçlanabilir. Ayrıca, insanlar içkiyi keserken veya bırakırken yoksunluk belirtileri hissedebilir ve sinirli veya huysuz hale gelebilir16. Ek olarak, kronik alkol tüketimi hafıza kaybına17 neden olabilir ve alkolün neden olduğu demansa önemli ölçüde katkıda bulunan Wernicke-Korsakoff sendromu (WKS) olarak da bilinen tiamin eksikliğine neden olabilir18.
AUD araştırmasını daha da ilerletmek için, hastalığın translasyonel olarak ilgili hayvan modellerine sahip olmak gerekir. Kemirgenlerde en yaygın AUD modeli, alkol buharının tekrar tekrar solunması yoluyla alkol bağımlılığını indüklemek için iyi bilinen bir yaklaşım olan kronik aralıklı etanol buharına maruz kalmadır (CIE)4,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30. Kemirgen CIE prosedürleri, elleçlemeye bağlı konvülsiyonlar31, aşırı uyarılabilirlik, sinirlilik benzeri davranış, anksiyete benzeri davranış ve uyku bozuklukları gibi yoksunluk semptomlarına neden olur ve alkol içmenin artmasına neden olur22,32,33,34,35. Ayrıca, CIE, insan AUD36'da gözlemlenen kompulsif alımı yansıtan gönüllü alkol tüketiminde önemli bir artışa yol açar. Zehirlenme aşamaları sırasında fareler, ataksi, sedasyon ve bozulmuş hipotermi dahil olmak üzere insanlarda alkol zehirlenmesi ile tutarlı davranışsal ve fizyolojik belirtiler gösterir37,38,39. Bu sonuçlar, CIE modelinin alkol bağımlılığının hem nörobiyolojik hem de davranışsal yönlerini yakalamadaki faydasının altını çizerek, onu AUD mekanizmalarını aydınlatmak ve potansiyel terapötik müdahaleleri test etmek için değerli bir araç haline getirmektedir. Kronik aralıklı etanol (CIE) buharına maruz kalma gibi klinik öncesi AUD modellerinde, fareler insan alkol zehirlenmesine ve bağımlılığına paralel davranışsal ve fizyolojik belirtiler sergiler. Zehirlenme aşamaları sırasında, fareler ataksi, sedasyon, azalmış keşif davranışı ve bozulmuş düzeltme refleksi gibi belirtiler gösterebilir. Bu riskler göz önüne alındığında, hayvanlar, ciddi zehirlenme veya sağlık bozulması belirtilerini belirlemek için etanol buharına maruz kalma sırasında ve sonrasında yakından izlendi.
Sıçanlarda, CIE modeli genellikle alımın artışını ölçmek için alkolün edimsel kendi kendine uygulanmasını içerir40,41,42, fare modeli ise CIE ve iki şişe seçimi (2BC) içme43,44 içerir. Alkol bağımlılığının klinik öncesi modelleri, hayvanların kronik etanol buharına maruz kaldıktan sonra etanol alımlarını artırdığını tutarlı bir şekilde göstermiştir23,45,46,47. Özellikle farelerde, tekrarlanan CIE döngülerinin gönüllü etanol alımını artırdığı gösterilmiştir3,21,48,49,50. Genel olarak, önceki çalışmalar, CIE modelinin kemirgenlerde etanol tüketimini artırmak ve AUD'yi modellemek için yeterli olduğunu göstermektedir.
Bu çalışma, AUD çalışması için CIE yöntemini vurgulamayı ve daha spesifik olarak 2BC/CIE fare modeline odaklanmayı amaçlamaktadır. 2BC/CIE'yi gerçekleştirmek için gerekli adımların ayrıntılı bir sürecinden geçiyoruz ve CIE'den sonra alkol içmenin artmasına bir örnek sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>500 Eppendorf Tüpleri</td><td>Eppendorf</td><td>L203896J</td><td></td></tr><tr><td>%95 etanol</td><td>Decon laboratuvarları</td><td>2816</td><td></td></tr><tr><td>Analoks makinesi</td><td>Analoks Aletleri</td><td>Analox-AM1</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan Tartı Kantarı</td><td>Kent Scientific</td><td>SCL-4000</td><td></td></tr><tr><td>Bağlayıcı Klipsler</td><td>Ofis Deposu</td><td>560394</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J fareler</td><td> Jackson Laboratuvarı</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5418R</td><td></td></tr><tr><td>Kronik aralıklı buhar odası</td><td>La Jolla Alkol Araştırma A.Ş.</td><td></td><td>Özel yapım malzemeler</td></tr><tr><td>Heparin/EDTA</td><td>Sagent İlaç</td><td>TS/İLAÇ/2/2015</td><td></td></tr><tr><td>Fare yatağı</td><td>Bed-o' Cobs</td><td>8B</td>, <td>1/8 "derin</td></tr><tr><td>Fare içme şişesi</td><td></td><td></td> ile doldurun <td>Özel yapım malzemeler</td></tr><tr><td>Pyrazole</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>bccc6397</td><td></td></tr><tr><td>Teklad global% 18 protein (fare maması)</td><td>Teklad global</td><td>Envigo 2018</td><td></td></tr></tbody></table>

alkol kullanım bozukluğunu modellemek İçin İki Şişe seçimi ile eşleştirilmiş kronik aralıklı etanol buharına maruz kalma

Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure Paired with Two-Bottle Choice to Model Alcohol Use Disorder

Alkol kullanım bozukluğu (AUD), tipik olarak kontrolsüz içme ve alkolle meşgul olma olarak ortaya çıkan kronik alkolle ilişkili bir bozukluktur. AUD araştırmasının önemli bir bileşeni, translasyonel olarak ilgili preklinik modellerin kullanılmasıdır. Son birkaç on yılda, AUD çalışmak için çeşitli hayvan modelleri kullanılmıştır. AUD'nin öne çıkan bir modeli, inhalasyon yoluyla tekrarlanan etanol maruziyeti döngüleri yoluyla kemirgenlerde alkol bağımlılığını indüklemek için iyi bilinen bir yaklaşım olan kronik aralıklı etanol buharına maruz kalma (CIE) modelidir. Farelerde AUD'yi modellemek için, CIE maruziyeti, alkol tüketiminin artışını ölçmek için gönüllü iki şişe alkol içme ve su seçimi (2BC) ile eşleştirilir. 2BC/CIE prosedürü, alkol içme artışının artması sağlanana kadar tekrarlanan alternatif haftalar boyunca 2BC içme ve CIE'yi içerir. Bu çalışmada, CIE buhar odasının günlük kullanımı da dahil olmak üzere 2BC/CIE gerçekleştirme prosedürlerini ana hatlarıyla açıklıyoruz ve bu yaklaşımı kullanarak C57BL/6J farelerde artan alkol içme örneği sunuyoruz.

Bu temsilci çalışmada, 2BC sırasındaki etanol alımı (g/kg), bazal içme süresince ve haftalarca süren CIE sonrası (buhar sonrası) rapor edilmiştir. Kısaca, protokolde açıklandığı üzere, 2BC sırasında farelerin iki şişeye erişimi vardı: biri su, diğeri ise %15 (w/v) etanol içeriyordu. Bazal alımlar belirlendikten sonra, denekler bölünerek eşit şekilde CIE veya Hava grubuna atanmıştır. 3 haftalık dönem boyunca başlangıç bazal etanol alımı, CIE öncesinde 2.00 g/kg ± 0.21 g/kg (n = 15) değerinde stabilize olmuştur (<strong cl...

Burada sunulan, alkol kullanım bozukluğunu incelemek için farelerde alkol bağımlılığının 2BC/CIE modeli için bir protokoldür.

Alkol Kullanım Bozukluğunu Modellemek İçin İki Şişe Seçimi ile Eşleştirilmiş Kronik Aralıklı Etanol Buharına Maruz Kalma

Alcohol use disorder (AUD) is a chronic alcohol-related disorder that typically presents as uncontrolled drinking and preoccupation with alcohol. A key ...

chronic-intermittent-ethanol-vapor-exposure-paired-with-two-bottle

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Alkol kullanım bozukluğu (AUD) büyük bir ulusal sağlık sorunu ve daha etkili tedaviler gelişimi bu hasta nüfusun ihtiyaçlarını karşılamak için gerekli. Bu amaçla, aşağıdaki protokol kurşun Anti-alkol bileşikler preklinik etkinliğini değerlendirmek için iki basit kemirgen içme modelleri kullanır.

Fare modelleri sağaltımı geliştirme alkolizm için içme: karanlık ve iki şişe seçiminde içme

Bu protokol, sıçanlarda alkol tüketimini modellemek için standart bir aralıklı erişimli iki şişe seçimli ev kafesi içme paradigmasını tanımlar. Ek olarak, içme davranışının mikroyapısal analizini sağlayan bir DIY yalama algılama sistemi ile standart protokolü güçlendirmek için adım adım talimatlar sağlar.

Kemirgenlerde Alkol Tüketiminin İki Şişe Seçenekli Ev Kafesi İçme Yöntemi Kullanılarak Modellenmesi ve Mikroyapısal Analiz

Etanol sedatif etkilerini ölçmek için basit bir...

Sinekler Etanol Hassasiyet Tedbir Basit Yolu

Bu rapor gösteriyor bağlı presinaptik BOUTONS istinat bireysel canlı nöronların mekanik izolasyon için kullanılan bir tekniktir. Vibrodissociated nöronlar, hızlı üretim, mükemmel farmakolojik kontrolü ve komşu hücrelerden etkisi olmadan gelişmiş uzay-klemp avantajlara sahip. Bu yöntem, sinaptik elemanları ve yama klemp kayıt görüntüleme için kullanılabilir.

Kemirgen Beyin Dilimleri Nöronlar Vibrodissociation Sinaptik İletim ve Görüntü Presinaptik Terminalleri Eğitim

Operant etanol sırasında sıçanların beyinlerinde etanol konsantrasyonu zaman ders belirlemek için bir yöntem olup kendi kendine uygulama tarif edilmektedir. , Oluşturulan küçük miktarlar için gerekli hassasiyete sahiptir çünkü alev iyonizasyon dedektörü ile Gaz kromatografisi, diyalizat örnekleri etanol ölçmek için kullanılır.

Gaz kromatografisi ile operant etanol kendi kendine uygulama ve etanol belirleme sırasında etanol mikrodivaliz

Dikey bir T-labirent salgılanan eklembacaklıların davranışsal tepki içlin tarif edilmektedir. Salgılanan iki potansiyel koku alanlara maruz kaldığında deneyci denekler tarafından gerçekleştirilen seçimler ölçmek için sağlar. Her ikisi için çekim ve koku maddesi arasından itme bu cihaz ile ölçülebilir.

Koku için Arthropod Tepki için Dikey T-labirent Seçim Testi

Drosophila alkole davranışsal yanıtların hücresel ve moleküler temellerini kesme için önemli bir model sistem olarak ortaya çıkmıştır. İşte biz kolayca başka deneylere uygulanabilir ve lisans araştırma için çok uygun bir sirkadiyen bağlamda alkol duyarlılık verilerinin toplanması için bir protokol mevcut.

Flybar: Sineklerin için Alkol yönetme

Çift kayıtlar, tek tek nöronlar arasındaki sinapsların hassas elektrofizyolojik ve farmakolojik karakterizasyonunu sağlayan, sinaptik olarak bağlı iki nörondan eşzamanlı tam hücre yama kelepçe kayıtlarıdır. Burada, elektrofizyoloji için donatılmış herhangi bir laboratuvarda organotipik hipokampal dilim kültürlerinde bu tekniği oluşturmak için ayrıntılı metodolojiyi ve gereksinimleri açıklıyoruz.

Organotipik Hipokampal Dilimleri eşleştirilmiş Tüm Hücre Kayıtlar

Drosophila'da etanol duyarlılığını ve hızlı toleransı ölçmek için yapılan basit tahliller, etanol ile ilgili bu önemli davranışları araştırmak için bu model organizmanın kullanımını kolaylaştırır. Burada, sineklerde etanol duyarlılığını ve hızlı toleransı ölçmek için nispeten basit, ölçeklenebilir bir test açıklanmaktadır.

Etanol sedasyon Hassasiyet ve hızlı Hoşgörü Ölçüm Ucuz bir, Ölçeklenebilir Davranış Deneyi<em&gt; Drosophila</em

C. elegans davranış üzerindeki etanol etkilerini incelemek için yararlı bir modeldir. Bu davranış analizi, sürünen solucanların lokomesyon hızındaki etanol etkilerini nicel olarak belirler; bu analiz ile hem başlangıç hassasiyeti hem de etanol için akut fonksiyonel tolerans gelişimi ölçülebilir.

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Öğrenin, farelerde alkol bağımlılığını modellemek için iki şişe seçimi ve kronik aralıklı etanol buharı yöntemini. Bu protokol, içme davranışını izlemek ve bağımlılıkla ilişkili nörobiyolojik değişiklikleri incelemek için otomatik ekipman kullanır.

Alkol Kullanım Bozukluğunu Modellemek İçin İki Şişe Seçimi ile Eşleştirilmiş Kronik Aralıklı Etanol Buharına Maruz Kalma

Daha fazla video keşfet