Yeni Bir Soğutma Hücresi İşlemci Sisteminin Adacık Hücresi İzolasyon Tesisi Üzerindeki Etkisinin Değerlendirilmesi
August 11th, 2023
Buradaki protokol, işlem sonrası hücre canlılığını artırmak için iyi üretim uygulamaları (GMP) temiz odasıyla uyumlu özel bir soğutma hücresi işlemci sistemini tanımlar.
Merhaba, ben Dr.Jihad, Center P Lab Direktörüyüm. Bu videonun bugünkü amacı, kuşgözü izolasyon tesisinde kullanılan ve hücrelerin geri kazanılmasında çevreye hiçbir etkisi olmayan uyarlanmış bir soğutulmuş hücre işlemcisini göstermektir. Hafif ve ağır yoğunluk gradyanlarını ve hücre işlemci kitini dört santigrat derecede önceden soğutarak başlayın.
Ardından, hücre işlemcisini 45 dakika önceden soğutarak hazırlayın. Standart etanol soğutmalı çift cidarlı gradyan yapıcı için ön soğutmalı hücre işlemci kitini hücre işlemcisine yerleştirin. İki cam hazneyi bağlayın ve manyetik bir karıştırma üzerine yerleştirin Clamp boruyu iki hazne arasında. Serin.
Soğuduktan sonra sıfır santigrat derecede etanol sirkülasyonlu soğutucuya sahip gradyan üreticisi. Torbanın altındaki hazneyi 130 mililitre ağır yoğunluk gradyanı ile doldurmak için pompa hızını dakikada 150 mililitreye ayarlayın. Ağır gradyan torbaya girdikten sonra, kanama durdurucuyu iki oda arasında kapatın.
Daha sonra ön behere 130 mililitre yüksek yoğunluklu ve arka behere 140 mililitre düşük yoğunluklu gradyan ekleyin. Kanama durdurucuyu iki hazne arasına sıkıştırın, ardından iki hazne arasında sürekli bir gradyan oluşturmak için dakikada 50 mililitrelik bir pompa hızı ayarlayın. Daha sonra, kan bankası tarafından sağlanan tam kan atığı ürünlerinden toplanan çok sayıda havuzlanmış anonim Buffy ceketten saflaştırma için insan mononükleer buffy ceket hücrelerini hazırlayın.
Ayrıldıktan sonra, dakikada 25 mililitreye ayarlanmış bir peristaltik pompa kullanarak bir transfer torbasında 95 mililitre yüksek yoğunluklu gradyan ortama düşük yoğunluklu mononükleer hücre süspansiyonuna benzeyen beş mililitre özgül ağırlık ekleyin. Önceden kalibre edilmiş bir termo prob kullanarak önceden oluşturulmuş gradyanı 30 mililitre mononükleer hücre süspansiyonu ile üstten yükleyin. Sürekli. Steril bir termo proba bağlı dijital bir termokupl kullanarak hücre işlemcisinin içindeki sıcaklığı ölçün.
İşlem sırasında gradyanların ve hücrelerin sıcaklığını izleyin. Gradyan yüklemesinin sonunda, rotor tarafından üretilen ısıyı en aza indirmek için hücre işlemcisini 537 G'ye ayarlayın. Hidrolik sistemin çalışma öncesi seviyelere dönmesini ve havayı serbest bırakmasını sağlamak için hücre işlemcisini kapatın.
Ardından hücre işlemcisini 537 G'de yeniden başlatın ve dakikada 50 mililitre akış hızında ve 4,3 santigrat derece akış hızında sürekli bir yoğunluk gradyanı oluşturmak için 130 mililitre ağır ve 140 mililitre düşük yoğunluklu gradyan ekleyin. Daha sonra, dakikada 25 mililitre akış hızında ve altı santigrat derece olan bir yük yoğunluğu gradyanının üzerine 30 mililitre Buffy coat cell süspansiyonu yükleyin. Hücre yüklendikten sonra, beş dakika sonra hücre işlemcisine 50 mililitre yıkama solüsyonu ekleyin.
Bükülmüş gradyanı dakikada 100 mililitre akış hızında 12 şişede ve biri 100 mililitre yıkama ortamı ve 150 mililitre hücre içeren beş santigrat derece doldurma tüpünde toplayın. Daha sonra iki ila 12 arasındaki tüpleri 225 mililitre yıkama ortamı ve 25 mililitre hücre ile doldurun. Temiz oda ortamında, C sınıfı ve B sınıfı havadaki partikül değerlendirmesi, temiz oda, GMP derece C, derece B ve BSL üç standardına göre 0,5 ve beş mikron havadaki partikül fazlalığı olmadığını göstermiştir.
İlk dört adımda gradyan sıcaklıklarında önemli bir fark gözlenmedi ve her iki işlemci de yaklaşık 4,5 santigrat dereceyi korudu. Bununla birlikte, santrifüjlemeden sonra ve toplama adımları sırasında, her iki işlemci için de toplama adımlarının başında ve sonunda sıcaklık yükseldi. Ayrıca, soğutulmuş hücre işlemcileri insan hücresinin saflaştırılması üzerinde etkilidir.
Santrifüj sonrası etkinlik ve canlılık belirlendi. Toplanan hücrelerin sıcaklığı hafifçe 8.5 santigrat dereceye yükseldi. Aktif hava örneklemesi ve sterilite taraması büyüme göstermedi.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu çalışma, GMP temiz odasında kullanılmak üzere tasarlanmış özel soğutmalı bir hücre işlemci sistemine odaklanmaktadır ve işlem sonrası hücre canlılığı sağlamak amacıyla geliştirilmiştir. Yöntem, işlemci hazırlama ve kullanma adımlarını özetlemektedir; bu adımlar kan atık ürünlerinden saflaştırılmış insan mononükleer hücrelerinin kurtarılmasını iyileştirir.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Araştırma Alanı
- Hücre canlılığı
- Temiz oda protokolleri
- İnsan hücre işleme
Arka Plan
- Hücre işlemede düşük sıcaklıkların korunmasının önemi
- İşlem sonrası canlı hücrelerin kurtarılmasındaki zorluklar
- Hücre işleme ortamlarında GMP standartlarına uygunluk
Kullanılan Yöntemler
- Gradyan yoğunluklu santrifüjleme
- İnsan mononükleer buffy coat hücreleri
- Dijital termokupl ile sıcaklık izleme
Ana Sonuçlar
- Önemli sıcaklık artışları olmadan verimli hücre kurtarma sağlandı
- Havadaki partikül artışı olmadan steril koşullar sağlandı
- Santrifüj sonrası işlenmiş insan hücrelerinin canlılığı ve saflığı sağlandı
Sonuçlar
- Protokol, insan hücre canlılığı ve işlem sonuçlarını etkili şekilde geliştirir
- Bu sistem, klinik uygulamalar açısından hücre işleme metodolojilerinin gelişimine katkıda bulunur
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Maintaining optimal temperature control during cell processing is critical for preserving cell viability and function in cell therapy manufacturing. The introduction of a cooled cell processor system directly addresses the risk of thermal stress during centrifugation, supporting higher recovery and viability of therapeutic cell populations. This capability strengthens the reliability of cell isolation workflows and aligns with GMP cleanroom requirements for advanced therapy production.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables robust assessment of cell viability and function post-processing for downstream biological studies.
- Reduces confounding thermal effects, supporting clearer interpretation of cell-based assays.
- Improves confidence in the biological relevance of isolated cell populations for target validation.
Screening & Assay Development
- Facilitates preparation of high-viability cell samples for assay development and screening platforms.
- Supports reproducible and standardized cell isolation, minimizing batch-to-batch variability.
- Ensures quantitative recovery metrics for reliable compound evaluation in cell-based assays.
Translational & Preclinical Research
- Aligns cell processing conditions with clinical manufacturing standards, supporting translational continuity.
- Enables risk-adjusted advancement of cell therapy candidates by preserving functional cell attributes.
- Provides a platform for validating process changes without compromising GMP cleanroom compliance.
Pipeline & Workflow Integration
This cooled cell processor system integrates into the cell therapy pipeline from early cell isolation through preclinical and translational research, supporting both discovery and manufacturing environments.
- Discovery Biology: Enhances hypothesis testing by ensuring cell integrity during isolation.
- Screening: Delivers reproducible, high-viability cell preparations for assay readiness.
- Analytics: Provides quantitative temperature and viability readouts for process monitoring.
- Translational Research: Maintains GMP-aligned conditions for preclinical and clinical cell therapy workflows.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable, minimally invasive cooling solution adaptable across cell processing platforms.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in cell-based assays and reduces mechanistic ambiguity from thermal artifacts.
- Operational Value: Standardizes temperature control, supporting reproducibility and scalability in cell processing.
- Strategic Value: Enables better go/no-go decisions by ensuring high-quality cell products for downstream applications.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of cell therapy candidates by improving process reliability.
Implementation Considerations
- Requires expertise in cell processing and cleanroom operations.
- Needs integration with temperature monitoring and digital thermocouple instrumentation.
- Demands adherence to GMP cleanroom standards for sterility and particulate control.
- Adaptable to various cell types and density gradient protocols with minimal modification.
- Limited by the availability of donor material for validation in certain regions.
