Name: Erken Vasküler Gelişim Sırasında Değişen Hemodinamik Yükleme için Bir Model Olarak Kuş Embriyosunda Sol Atriyal Ligasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 37 s
Description: Keşfedin kuş embriyosunda sol atriyal ligasyon modelini kullanarak erken vasküler gelişim sırasında değişen hemodinamik yüklemeyi. Bu yöntem, hipoplastik sol kalp sendromunun biyomekanik mekanizmalarını anlamak için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Tübitak 2247A Baş Araştırmacı Ödülü 120C139'a fon sağlamayı kabul ediyoruz. Yazarlar ayrıca PakTavuk Gıda'ya da teşekkür eder. ve Tic. A.Ş., İstanbul, Türkiye, döl verimi sağlamak ve kardiyovasküler araştırmaları desteklemek için.

Verimli beyaz Leghorn yumurtaları güvenilir tedarikçilerden elde edilir ve üniversite onaylı yönergelere göre kuluçkaya yatırılır. Civciv embriyoları, evre 18 (gün 3) ila 24 (gün 4) (bu yazıda sunulan aşamalar), Avrupa Birliği (AB) direktifi 2010/63/EU ve ABD'deki kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (IACUC) yönergeleri tarafından canlı omurgalı hayvanlar olarak kabul edilmemektedir. Civciv embriyoları, ABD yasalarına göre kuluçkanın 19. gününden sonra "canlı hayvan" olarak kabul edilir, ancak AB için değildir. Her yumurta, kuluçka başlangıç tarihi ile etiketlenir ve kuluçkanın en geç 10. gününden önce yumurtadan çıkması planlanır. Yumurtalar çatladıktan sonra civcivler kuluçka makinesinden çıkarılır. Protokol, özel model oluşturma aşamalarına odaklanarak iki tezgah üstü operasyon istasyonunda (İstasyon 1 ve İstasyon 2) gerçekleştirilir.
1. Mikrocerrahi öncesi hazırlık
<ol><li>Döllenmiş yumurtaları ya belirli bir patojen içermeyen (SPF) dereceye sahip bir aşı geliştirme merkezinden ya da kuru polistiren kaplarda kırılgan bir teslimat kuryesi ile güvenilir bir ticari tedarikçi çiftliğinden alın. Kuluçkadan önce, kontaminasyonu gidermek için yumurta kabuğunu %70 etanole batırılmış tüy bırakmayan mendillerle nazikçe temizleyin.</li>
	<li>Embriyo dahil etme/dışlama kriterleri<ol><li>Taşıma sırasında çatlamış veya hasar görmüş yumurtaları kuluçkaya yatırmayın.</li>
		<li>LAL prosedürü sırasında veya yeniden inkübasyondan sonra kanama görülürse, embriyoyu kullanmayın.</li>
		<li>Hemodinamik kan akışı normal oryantasyondan farklı olabileceğinden, sol taraf yukarı pozisyonda gelişen embriyoları kullanmayın.</li>
		<li>Hem cerrahi öncesi hem de cerrahi sonrası işlemlerde doğuştan kusurlarla gelişen diş implantları.</li>
		<li>HLHS'yi bir LAL modeli olarak taklit ederek, orijinal konumlarında gelişen hedeflenen aşamaya ulaşan embriyoları dahil edin.</li>
	</ol></li>
	<li>Döllenmiş beyaz Leghorn tavuk yumurtalarını (Gallus gallus domesticus L.), kör uç, tipik olarak HH20-2115'te (37.5 °C, %60 nem, 3.5 gün) istenen aşamaya kadar kuluçkaya yatırın (Şekil 1). NOT: Verimi artırmak için yumurtaları sabit bir sıcaklık ve nemde tutmak önemlidir. Kuluçka makinesi modeline bağlı olarak, damıtılmış suyla doldurulmuş bir kabın eklenmesi sabit nemi koruyacaktır. Çoğu inkübatöre uyacak ek / yardımcı bir sıcaklık ve nem kontrol sisteminin planları yazarlar tarafından geliştirilmiştir ve tavsiye edilir. Bu şirket içi yerleşik sensör/kontrol ünitesinin elektronik, donanım ve kod ayrıntıları bir veri deposundasağlanır 26. Kuluçka sırasında yumurtaların sürekli olarak hafifçe sallanması (döndürülmesi), embriyonun en uygun şekilde konumlandırılmasına izin verebilir ve böylece daha yüksek oranda "çalıştırılabilir" embriyoya yol açabilir. Çalkalama, bu kapasiteye sahip inkübatörlerle de çalışabilir ve verimliliği daha da artırabilir.</li>
	<li>İşleme başlamadan önce, 1,5 cm uzunluğunda 10-0'lık bir dikişe gevşek bir el üstü düğüm atarak gerekli sayıda düğüm hazırlayın. Ameliyat sırasında düğümün sıkı olmadığından ve kulakçıklara kolayca sığacak kadar büyük olduğundan emin olun (Şekil 2). NOT: Düğümleri önceden bağlayın ve kullanmadan önce steril bir civciv zil solüsyonunda saklayın. Düğüm atma işlemi, cımbızı eşzamanlı olarak çalıştırmak için iki elin kullanılmasını gerektirir. Bu, protokolde kritik bir aşama olduğundan, bu adımı uygulamak için macundan bir atriyum modeli yapılabilir (Şekil 3). Bu, İstasyon 2'de adım 3.2.3'ü gerçekleştirmek için gereken üç boyutlu mikrocerrahi becerilerini geliştirecektir (Şekil 4).</li>
</ol>2. İstasyon 1'deki Operasyonlar (Şekil 4A)
<ol><li>Yumurtanın kör ucundan bir pencere açın ve hem dış hem de iç zarları15 çıkarın (Şekil 5A-D).</li>
	<li>İstenmeyen çatlak yayılımını azaltmak için serbest parmaklar yumurtayı sıkıca destekleyecek şekilde cımbızın ters ucuyla hafifçe çatlatarak yumurta kabuğunu açın.</li>
	<li>LAL uzun bir prosedür olduğundan, kalp atış hızı sıcaklığa bağlı olduğundan embriyonun sıcaklığını ve nemini koruyun. Bu nedenle, ilk kabuk penceresinin mümkün olduğunca küçük, işlemleri yürütmeye yetecek kadar oluşturulduğundan emin olun. NOT: Çalışma sırasında nem veya sıcaklık kontrol sistemleri kullanılmaz, ancak bu sistemler varsa verime fayda sağlar. Mümkünse, laboratuvardaki klima sistemi kapatılır ve prosedür mümkün olan en yüksek oda sıcaklığında (RT) gerçekleştirilir. Operasyon sırasında sıcaklıkla kontrol edilebilen embriyonik kalp atış hızının optimizasyonu da önerilir. Bazı laboratuvarlar, LAL işlemi sırasında sıcaklık kontrolü yoluyla kalp atış hızını 120 bpm'den biraz daha düşük oranlarda tutar. Bu nedenle, cerrahi bölge çevresinde uygulanan nem kontrolü, verimi daha da artıracaktır. Yumurta kabuğu pencereleri mümkün olduğunca küçük, sadece cerrahi erişime izin verecek kadar büyük oluşturulur. Bu aynı zamanda, tipik olarak yumurta kabuğundan sadece embriyonun çevresi kadar daha küçük olan kalın dış zar için de geçerlidir. Bunlar embriyonun sıcaklığını ve nemini korumayı sağlar. Yumurtanın küt ucundan bir pencere açılırken, küçük kabuk parçaları temizlenir, böylece bu parçalar vitellin damar bütünlüğüne zarar vermez veya istenmeyen artefaktlara yol açmaz. Ek olarak, diğer laboratuvarlar pencere yapmak için kavisli mikro tırtıklı makaslar kullanır. Ayrıca, çatlamayı kontrol etmek için yumurta kabuğunu stabilize etmek için iki genişlikte Scotch bant kullanılabilir.</li>
	<li>Mikro makas kullanarak sadece gerekli vitellin membranını çıkarın (Ek Video 1).</li>
	<li>Normal embriyonik gelişim sağ taraf yukarıdadır. Embriyo vitellin zarından kurtulduktan sonra, cımbızı kapalı uçlu olarak embriyonun dorsal segmentinin altına yerleştirin ve sol tarafı ortaya çıkarmak için embriyoyu hafifçe çevirin (yani, sol taraf yukarı konfigürasyonu) (Şekil 6A, B; Ek Video 2).</li>
	<li>Sol atriyal tomurcuğun şimdi açıkta kaldığından, ancak yine de tipik olarak perikardın çift katmanından oluşan karmaşık bir zar sistemi ile kaplandığından emin olun.</li>
	<li>İnce olanlar da dahil olmak üzere zarları atriyal tomurcuğun hemen çevresinden çıkarın. Bu başka bir kritik aşamadır; Kaba zarlardan zar çıkarma işlemini gerçekleştirin ve sol atriyal tomurcuk çevresindeki ince zarlara ilerleyin. İnce zarın çıkarılması için en iyi cımbızları ayırın (Ek Video 3).</li>
	<li>Membran çıkarma işlemi sırasında, embriyoyu sol taraf yukarı doğru yönlendirin, böylece adım 3.2'deki düğüm yerleştirme işlemi daha fazla yeniden konumlandırma olmadan gerçekleştirilebilir. Bunu başarmak için, adım 2.6'daki zarları kullanarak embriyoyu kaldırın ve sol tarafı yukarı bakacak şekilde yumurta kabuğundan asın. NOT: Bazı embriyolar yumurta kabuğu çevresine yakın yerleştirilebilir ve çalıştırılması zor olabilir. Yine de, bu embriyolar büyük olasılıkla sağ tarafa yönlendirilecek ve normal davranış sergileyecek ve çalışmaya dahil edilebilir. Bu durumlarda, gerekirse, perikardiyal membranı #4 ince cımbızla nazikçe temizleyerek ve yumurta kabuğunu ters yönde (kabuk açıklığına doğru) çıkararak gizlenmiş atriyum daha erişilebilir hale getirilebilir. Bu embriyolar ayrıca ekstraembriyonik zarların parçaları kullanılarak kaldırılabilir ve zarın bir ucu (cımbız ucu) yumurta kabuğuna tutturularak doğal yapışkanlığı kullanılarak istenen pozisyonda sabitlenebilir. Ek olarak, embriyonun baş ve omurilik bölgesi arasındaki boşluk, gizlenmiş kulakçıkları ortaya çıkarmak için cımbız yardımıyla genişletilebilir.</li>
</ol>3. İstasyon 2'deki Operasyonlar (Şekil 4B)
<ol><li>Stereomikroskop altında, önceden hazırlanmış düğümü adım 1.4'ten embriyoya yakın erişilebilir bir yere yerleştirin (Şekil 6B). Atriyal tomurcuk artık bağlanmaya hazırdır (Ek Video 4).</li>
	<li>Önceden hazırlanmış açık düğümü alın ve sol atriyal tomurcuğun üzerine yönlendirin. LAL'in çalışması için, yumurtayı benzersiz bir şekilde eğimli üç boyutlu bir yöne yerleştirin.<ol><li>Embriyolara zarar vermeden sıkma işlemini gerçekleştirmek için düğümü doğru şekilde yönlendirin.</li>
		<li>Atan bir kalbin etkisini azaltmak için 2.7. adımda ince zarları en uygun şekilde temizleyin.</li>
		<li>Sütürü sıkın (Şekil 6C). Bu adım için macunla pratik yapmak çok faydalıdır. Sahte embriyolar için, düğümü tutacak kadar sıkın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ardından, dikişin fazla uçlarını tomurcuğa mümkün olduğunca yakın kesmek için mikro makası kullanın (Ek Video 5).</li>
	<li>Bağlanan dikişin yeni kesilen uçlarının, rotasyon sırasında veya kalp atışı nedeniyle yakındaki damarları delecek konumda olmamasına çok dikkat edin.</li>
	<li>Cımbız kullanarak, adım 3.3'te kesilen fazla dikiş parçalarını çıkarın.</li>
	<li>Son olarak, kapalı cımbız kullanarak, embriyoyu adım 2.5'teki gibi orijinal konumuna getirin (Ek Video 6).</li>
	<li>LAL işlemini tamamladıktan sonra, yumurtayı çift kat parafilm ile kaplayın ve tekrar inkübe edin. Yumurtaların sıkı ve steril bir şekilde kapatılması, özellikle 24 saatlik kuluçka döneminden sonra hayatta kalmak için çok önemlidir. Görsel erişim de isteniyorsa, cam slaytlarla parafin mumu kullanın. NOT: Erken embriyonik dönem incelendiğinde, yumurtalar tipik olarak yaklaşık HH25 veya HH27'ye ulaşana kadar 24-48 saat kuluçkaya yatırılır. Bununla birlikte, herhangi bir sınır yoktur ve diğer araştırmacılar tarafından denendiği gibi daha sonraki aşamalar incelenebilir. Yüksek çalışma hızları için en az iki kişilik bir ekip önerilir. Bir kişi yumurta açma, ilk membran temizliği, rotasyon ve sol atriyal tomurcuk etrafındaki membran temizliği için eğitilmeli ve bundan sorumludur. Diğer kişi sadece ilk düğüm hazırlığından, düğüm yerleştirmeden ve sıkmadan sorumludur. Son embriyo rotasyonu Kişi 1 tarafından yapılabilir. Tek bir embriyo için cerrahi operasyon yaklaşık 4-5 dakika sürer.</li>
	<li>Cerrahi operasyonlardan önce/sonra tezgah üstü yüzeyleri ve aletleri etanol ile temizleyin. Embriyonik dokulara dokunan metal aletlere taze civciv zil solüsyonu (NaCl, KCl, CaCl2 ve NaHCO3)16,27 uyguladığınızdan emin olun.</li>
</ol>

HLHS ve Kardiyovasküler Araştırmalar için Avian Embryonic Sol Atriyal Ligasyon Modeli

<ol><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+heart+disease+and+risk+of+cardiovascular+disease%3A+A+meta-analysis+of+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Congenital heart disease and risk of cardiovascular disease: A meta-analysis of cohort studies.</a> Journal of the American Heart Association. 8 (10), e012030(2019).</li>
<li>Chaudhry, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+left+ventricular+myocardium+in+hypoplastic+left+heart+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Development+and+Disease%22%5BJournal%5D)">The left ventricular myocardium in hypoplastic left heart syndrome.</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (8), 279(2022).</li>
<li>Lashkarinia, S. S., Çoban, G., Ermek, E., Çelik, M., Pekkan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+remodeling+of+embryonic+aortic+arch%3A+stress+distribution%2C+microstructure%2C+and+vascular+growth+in+silico%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal remodeling of embryonic aortic arch: stress distribution, microstructure, and vascular growth in silico.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 19 (5), 1897-1915 (2020).</li>
<li>Ho, S., Chan, W. X., Yap, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+mechanics+of+the+left+atrial+ligation+chick+embryonic+model+of+hypoplastic+left+heart+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Fluid mechanics of the left atrial ligation chick embryonic model of hypoplastic left heart syndrome.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 20 (4), 1337-1351 (2021).</li>
<li>Gordon, B. M., Rodriguez, S., Lee, M., Chang, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreasing+number+of+deaths+of+infants+with+hypoplastic+left+heart+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Decreasing number of deaths of infants with hypoplastic left heart syndrome.</a> The Journal of Pediatrics. 153 (3), 354-358 (2008).</li>
<li>Salman, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+left+atrial+ligation-driven+altered+inflow+hemodynamics+on+embryonic+heart+development%3A+clues+for+prenatal+progression+of+hypoplastic+left+heart+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Effect of left atrial ligation-driven altered inflow hemodynamics on embryonic heart development: clues for prenatal progression of hypoplastic left heart syndrome.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 20 (2), 733-750 (2021).</li>
<li>Fruitman, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoplastic+left+heart+syndrome%3A+Prognosis+and+management+options%5BTitle%5D)+AND+%22Paediatrics+%26+Child+Health%22%5BJournal%5D)">Hypoplastic left heart syndrome: Prognosis and management options.</a> Paediatrics & Child Health. 5 (4), 219-225 (2000).</li>
<li>Rahman, A., Chaturvedi, R. R., Sled, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-mediated+factors+in+the+pathogenesis+of+hypoplastic+left+heart+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Development+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Flow-mediated factors in the pathogenesis of hypoplastic left heart syndrome.</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (5), 154(2022).</li>
<li>Henderson, D. J., Anderson, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+and+structure+of+the+ventricles+in+the+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The development and structure of the ventricles in the human heart.</a> Pediatric Cardiology. 30 (5), 588-596 (2009).</li>
<li>Kowalski, W. J., Pekkan, K., Tinney, J. P., Keller, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+developmental+cardiovascular+biomechanics+and+the+origins+of+congenital+heart+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Investigating developmental cardiovascular biomechanics and the origins of congenital heart defects.</a> Frontiers in Physiology. 5, 408(2014).</li>
<li>Midgett, M., Rugonyi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+heart+malformations+induced+by+hemodynamic+altering+surgical+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Congenital heart malformations induced by hemodynamic altering surgical interventions.</a> Frontiers in Physiology. 5, 287(2014).</li>
<li>Kowalski, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+atrial+ligation+alters+intracardiac+flow+patterns+and+the+biomechanical+landscape+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Left atrial ligation alters intracardiac flow patterns and the biomechanical landscape in the chick embryo.</a> Developmental Dynamics. 243 (5), 652-662 (2014).</li>
<li>Bruneau, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+developmental+genetics+of+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The developmental genetics of congenital heart disease.</a> Nature. 451 (7181), 943-948 (2008).</li>
<li>Sedmera, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+changes+in+experimental+left+heart+hypoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Cellular changes in experimental left heart hypoplasia.</a> The Anatomical Record. 267 (2), 137-145 (2002).</li>
<li>Celik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructure+of+early+embryonic+aortic+arch+and+its+reversibility+following+mechanically+altered+hemodynamic+load+release%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Microstructure of early embryonic aortic arch and its reversibility following mechanically altered hemodynamic load release.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 318 (5), H1208-H1218 (2020).</li>
<li>Tobita, K., Schroder, E. A., Tinney, J. P., Garrison, J. B., Keller, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+passive+ventricular+stress-strain+relations+during+development+of+altered+loads+in+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Regional passive ventricular stress-strain relations during development of altered loads in chick embryo.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 282 (6), H2386-H2396 (2002).</li>
<li>Alser, M., Shurbaji, S., Yalcin, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+pathways+in+heart+development%3A+findings+from+chick+embryo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Development+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive pathways in heart development: findings from chick embryo studies.</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 8 (4), 32(2021).</li>
<li>Alser, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+flow+disturbance+and+morphological+alterations+following+the+right+atrial+ligation+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Blood flow disturbance and morphological alterations following the right atrial ligation in the chick embryo.</a> Frontiers in Physiology. 13, 849603(2022).</li>
<li>Sedmera, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLHS%3A+Power+of+the+chick+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Development+and+Disease%22%5BJournal%5D)">HLHS: Power of the chick model.</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (4), 113(2022).</li>
<li>Rychter, Z., Rychterová, V., Lemez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+the+heart+loop+and+proliferation+structure+of+its+wall+as+a+base+for+ventricular+septation%5BTitle%5D)+AND+%22Herz%22%5BJournal%5D)">Formation of the heart loop and proliferation structure of its wall as a base for ventricular septation.</a> Herz. 4 (2), 86-90 (1979).</li>
<li>Harh, J. Y., Paul, M. H., Gallen, W. J., Friedberg, D. Z., Kaplan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+production+of+hypoplastic+left+heart+syndrome+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Americal+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Experimental production of hypoplastic left heart syndrome in the chick embryo.</a> The Americal Journal of Cardiology. 31 (1), 51-56 (1973).</li>
<li>Sedmera, D., Pexieder, T., Rychterova, V., Hu, N., Clark, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+of+chick+embryonic+ventricular+myoarchitecture+under+experimentally+changed+loading+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Remodeling of chick embryonic ventricular myoarchitecture under experimentally changed loading conditions.</a> The Anatomical Record. 254 (2), 238-252 (1999).</li>
<li>Karakaya, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetry+in+mechanosensitive+gene+expression+during+aortic+arch+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Asymmetry in mechanosensitive gene expression during aortic arch morphogenesis.</a> Scientific Reports. 8 (1), 16948(2018).</li>
<li>Trinidad, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+blood+flow+on+cardiac+morphogenesis+and+formation+of+congenital+heart+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Development+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Effect of blood flow on cardiac morphogenesis and formation of congenital heart defects.</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (9), 303(2022).</li>
<li>Tobita, K., Keller, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Right+and+left+ventricular+wall+deformation+patterns+in+normal+and+left+heart+hypoplasia+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Right and left ventricular wall deformation patterns in normal and left heart hypoplasia chick embryos.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 279 (3), H959-H969 (2000).</li>
<li>Bortecine, S., Merve Nur, C., Faruk, K., Kerem, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+humidifier+system+design+and+construction+for+research+grade+egg+incubators%5BTitle%5D)+AND+%22Zenodo%22%5BJournal%5D)">Auxiliary humidifier system design and construction for research grade egg incubators.</a> Zenodo. , (2023).</li>
<li>Schroder, E. A., Tobita, K., Tinney, J. P., Foldes, J. K., Keller, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubule+involvement+in+the+adaptation+to+altered+mechanical+load+in+developing+chick+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Microtubule involvement in the adaptation to altered mechanical load in developing chick myocardium.</a> Circulation Research. 91 (4), 353-359 (2002).</li>
<li>Rufaihah, A. J., Chen, C. K., Yap, C. H., Mattar, C. N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mending+a+broken+heart%3A+In+vitro%2C+in+vivo+and+in+silico+models+of+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Mending a broken heart: In vitro, in vivo and in silico models of congenital heart disease.</a> Disease Models & Mechanisms. 14 (3), (2021).</li>
<li>Siddiqui, H. B., Dogru, S., Lashkarinia, S. S., Pekkan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soft-tissue+material+properties+and+mechanogenetics+during+cardiovascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Development+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Soft-tissue material properties and mechanogenetics during cardiovascular development.</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 9 (2), 64(2022).</li>
<li>Pesevski, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocardial+fibroelastosis+is+secondary+to+hemodynamic+alterations+in+the+chick+embryonic+model+of+hypoplastic+left+heart+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Endocardial fibroelastosis is secondary to hemodynamic alterations in the chick embryonic model of hypoplastic left heart syndrome.</a> Developmental Dynamics. 247 (3), 509-520 (2018).</li>
<li>Hu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dependence+of+aortic+arch+morphogenesis+on+intracardiac+blood+flow+in+the+left+atrial+ligated+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Dependence of aortic arch morphogenesis on intracardiac blood flow in the left atrial ligated chick embryo.</a> Anatomical Record. 292 (5), 652-660 (2009).</li>
<li>Lashkarinia, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+biomechanics+and+the+consequent+differentially+expressed+genes+of+the+left+atrial+ligation+chick+embryonic+model+of+hypoplastic+left+heart+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Myocardial biomechanics and the consequent differentially expressed genes of the left atrial ligation chick embryonic model of hypoplastic left heart syndrome.</a> Annals of Biomedical Engineering. 51 (5), 1063-1078 (2023).</li>
<li>Krejčí, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+analysis+of+normal+and+abnormal+chick+ventricular+myocardial+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Microarray analysis of normal and abnormal chick ventricular myocardial development.</a> Physiological Research. 61, S137-S144 (2012).</li>
<li>Rahman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+hypoplastic+left+heart+syndrome+demonstrating+left+heart+hypoplasia+and+retrograde+aortic+arch+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">A mouse model of hypoplastic left heart syndrome demonstrating left heart hypoplasia and retrograde aortic arch flow.</a> Disease Models & Mechanisms. 14 (11), (2021).</li>
<li>Fishman, N. H., Hof, R. B., Rudolph, A. M., Heymann, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+congenital+heart+disease+in+fetal+lambs%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Models of congenital heart disease in fetal lambs.</a> Circulation. 58 (2), 354-364 (1978).</li>
<li>Wong, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+left+ventricular+hypoplasia+by+occluding+the+foramen+ovale+in+the+fetal+lamb%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Induction of left ventricular hypoplasia by occluding the foramen ovale in the fetal lamb.</a> Scientific Reports. 10 (1), 880(2020).</li>
<li>Nie, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+frogs+as+a+model+to+study+the+etiology+of+HLHS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Development+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Use of frogs as a model to study the etiology of HLHS.</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 10 (2), 51(2023).</li>
<li>Vilches-Moure, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+chicken+%28Gallus+gallus+domesticus%29+as+a+model+of+cardiac+biology+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Embryonic chicken (Gallus gallus domesticus) as a model of cardiac biology and development.</a> Comparative Medicine. 69 (3), 184-203 (2019).</li>
<li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li>
<li>Sukparangsi, W., Thongphakdee, A., Intarapat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Avian+embryonic+culture%3A+A+perspective+of+in+ovo+to+ex+ovo+and+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Avian embryonic culture: A perspective of in ovo to ex ovo and in vitro studies.</a> Frontiers in Physiology. 13, 903491(2022).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

HLHS'de, yapısal kusurlar nedeniyle kan akışı değişir ve sol tarafta anormal morfolojiye yol açar 4,6. Mevcut model, HLHS'nin ilerlemesini daha iyi anlamak için pratik bir deneysel sistem sağlar ve hatta patogenezinitaklit edebilir 8. Bununla birlikte, klinik olarak tamamen eşdeğer bir HLHS hayvan modeli oluşturmak zorlu bir iştir. Burada sunulan kuş LAL modeline ek olarak, farelerde, fetal koyunlarda ve kurbağalarda yapılan son çalışmalar...

Konjenital kalp defektleri (KKH'ler), anormal embriyonik gelişime bağlı olarak ortaya çıkan yapısal bozukluklardır1. Genetik koşullara ek olarak, patogenez değişen mekanik yüklemedenetkilenir 2,3. Konjenital bir kalp hastalığı olan hipoplastik sol kalp sendromu (HLHS), doğumda az gelişmiş bir ventrikül/aort ile sonuçlanır4 ve yüksek mortaliteoranı 5,6. Klinik yönetimindeki son gelişmelere rağmen, HLHS'nin vasküler büyüme ve gelişme dinamikleri hala belirsizdir7. Normal embriyonik gelişimde, erken embriyonik kalp tüpü oluşumu ilerledikçe sol ventrikül (LV) endokard ve miyokard kardiyak progenitörlerden köken alır. Miyokardiyal trabekülasyon, kalınlaşma tabakaları ve kardiyomiyosit proliferasyonunun kademeli varlığı bildirilmiştir2. HLHS için, anormal kardiyomiyosit göçüne bağlı miyokardiyal hipoplaziye daha fazla katkıda bulunan değişmiş trabeküler yeniden şekillenme ve sol ventrikül düzleşmesi gözlenir 2,8,9,10 
Kalp gelişimini incelemek ve hemodinamik durumları anlamak için yaygın olarak kullanılan model organizmalar arasında 11, kuş embriyosu dört odacıklı olgun kalbi ve kültür kolaylığı nedeniyle tercih edilmektedir11,12,13,14. Öte yandan, zebra balığı embriyolarının ve transgenik/nakavt farelerin gelişmiş görüntüleme erişimi belirgin avantajlar sağlar11,12. Gelişmekte olan kardiyovasküler bileşenlerde intramural basıncı ve duvar kesme stresini değiştiren kuş embriyosu için çeşitli mekanik müdahaleler test edilmiştir. Bu modeller arasında sol vitellin ligasyonu, konorunkal bantlama15 ve sol atriyal ligasyon (LAL)11,12,16 bulunur. Değişen mekanik yüklemeye bağlı olarak ortaya çıkan fenotip, erken prognoza odaklanan çalışmalarda cerrahi müdahaleden yaklaşık 24-48 saat sonra gözlenebilir11,13. LAL müdahalesi, atriyoventriküler açıklığın etrafına bir dikiş halkası yerleştirerek sol atriyumun (LA) fonksiyonel hacmini daraltmak için popüler bir tekniktir. Aynı şekilde, sağ atriyal ligasyonu (RAL) hedefleyen mikrocerrahi müdahaleler de gerçekleştirilmiştir17,18. Benzer şekilde, bazı araştırmacılar LA 19,20'nin hacmini azaltmak için mikro klipsler kullanarak sol atriyal apendiksleri (LAA) hedefler. Bazı çalışmalarda, atriyoventriküler düğüme cerrahi bir naylon iplik uygulanır19,21. Kullanılan müdahalelerden biri, HLHS'yi taklit edebilen ancak aynı zamanda yapılması en zor model olan, son derece ince mikrocerrahi operasyonlar nedeniyle çok küçük numune verimleri olan LAL'dir. Laboratuvarımızda LAL, ortak atriyum 6,14,22,23 tam bölünmeden önce, Hamburger-Hamilton (HH) evre 20 ve 21 arasında ovo olarak gerçekleştirilir. LA'nın etrafına, intrakardiyak kan akış akışlarını değiştiren bir cerrahi dikiş yerleştirilir. HLHS'nin LAL modellerinde artmış ventrikül duvar sertliği, değişmiş miyofiber açıları ve azalmış LV kavite boyutu gözlenmiştir14,24.
Bu video makalesinde, in ovo LAL için ayrıntılı bir protokol ve yaklaşım sunulmaktadır. Kısaca, döllenen kuş embriyoları mikrocerrahi için inkübe edildi, yumurta kabuğu çatlatılarak açıldı ve dış ve iç zarlar temizlendi. Embriyo daha sonra LA'ya erişilebilmesi için yavaşça döndürüldü. Atriyal tomurcuğa 10-0 naylon cerrahi sütür bağlandı ve embriyo orijinal oryantasyonuna geri döndürülerek LAL prosedürü25 tamamlandı. LAL ve normal ventriküller, optik koherens tomografi ve temel histoloji ile doku sıkışması ve ventrikül hacmi açısından karşılaştırıldı.
Burada açıklandığı gibi, başarılı bir şekilde yürütülen bir LAL model boru hattı, kardiyovasküler bileşenlerin embriyonik gelişimine odaklanan temel çalışmalara katkıda bulunacaktır. Bu model aynı zamanda genetik manipülasyonlar ve ileri görüntüleme yöntemleri ile birlikte de kullanılabilir. Benzer şekilde, akut LAL modeli, doku kültürü deneyleri için hastalıklı vasküler hücrelerin stabil bir kaynağıdır.

<table><tbody><tr><td>10-0 naylon cerrahi sütür</td><td>Ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elastica van Gieson boyama kiti</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>115974</td><td>Histolojik kesitlerde bağ dokularının boyanması için</td></tr><tr><td>Etanol mutlak</td><td>Interlab</td><td>64-17-5</td><td>Sterilizasyon aşaması için, mutlak etanolün damıtılmış su ile seyreltilmesiyle %70 etanol elde edildi.</td></tr><tr><td>Kuluçka makinesi</td><td>KUHL, Flemington, New Jersey-ABD</td><td>AZYSS600-110</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Interlab</td><td>080.65.002</td><td></td></tr><tr><td>Microscissors</td><td>World Precision Instruments (WPI), Sarasota FL</td><td>555640S</td><td>Vannas STR 82 mm</td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7793-1EA</td><td>Yumurta yeniden kuluçka için sızdırmazlık aşaması</td></tr><tr><td>Paraplast Bulk</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td>39602012</td><td>Doku gömme ortamı</td></tr><tr><td>Stereo Mikroskop</td><td>Zeiss Stemi 508</td><td>&nbsp; Stemi 508</td><td>İstasyon 1'de kullanılan</td></tr><tr><td>Stereo Mikroskop</td><td>Zeiss Stemi 2000-C</td><td>Stemi 2000-C</td><td>İstasyon 2'de kullanılan</td></tr><tr><td>Cımbız (Dumont 4 INOX #F4)</td><td>Adumont & Fils, İsviçre</td><td></td><td>Embriyo Cımbızını iade etmek için kullanılır</td></tr><tr><td>(Süper İnce Dumont #5SF)&nbsp;</td><td>World Precision Instruments (WPI), Sarasota FL</td><td>501985</td><td>Embriyo üzerindeki zarları çıkarmak için kullanılır</td></tr></tbody></table>

erken vasküler gelişim sırasında değişen hemodinamik yükleme için bir model olarak kuş embriyosunda sol atriyal ligasyon

Left Atrial Ligation in the Avian Embryo as a Model for Altered Hemodynamic Loading During Early Vascular Development

Dört odacıklı olgun ventriküler konfigürasyonu, kültür kolaylığı, görüntüleme erişimi ve verimliliği nedeniyle, kuş embriyosu kardiyovasküler gelişimi incelemek için tercih edilen bir omurgalı hayvan modelidir. Normal gelişimi ve konjenital kalp defekti prognozunu anlamaya yönelik çalışmalar bu modeli yaygın olarak benimsemektedir. Belirli bir embriyonik zaman noktasında normal mekanik yükleme modellerini değiştirmek ve aşağı akış moleküler ve genetik kaskadı izlemek için mikroskobik cerrahi teknikler tanıtıldı. En sık yapılan mekanik girişimler sol vitellin ven ligasyonu, konorunkal bantlama ve sol atriyal ligasyondur (LAL), intramural vasküler basıncı ve kan akımına bağlı duvar kayma stresini modüle eder. LAL, özellikle ovo'da yapıldığında, son derece ince ardışık mikrocerrahi operasyonlar nedeniyle çok küçük numune verimleri ile en zorlu müdahaledir. Yüksek riskine rağmen in ovo LAL, hipoplastik sol kalp sendromu (HLHS) patogenezini taklit ettiği için bilimsel olarak çok değerlidir. HLHS, insan yenidoğanlarında gözlenen klinik olarak anlamlı, karmaşık bir konjenital kalp hastalığıdır. Bu yazıda in ovo LAL için ayrıntılı bir protokol belgelenmiştir. Kısaca, döllenmiş kuş embriyoları, tipik olarak Hamburger-Hamilton (HH) aşamaları 20 ila 21'e ulaşana kadar 37.5 ° C'de ve% 60 sabit nemde inkübe edildi. Yumurta kabukları kırılarak açıldı ve dış ve iç zarlar çıkarıldı. Embriyo, ortak atriyumun sol atriyal ampulünü ortaya çıkarmak için hafifçe döndürüldü. 10-0 naylon sütürlerden önceden monte edilmiş mikro düğümler nazikçe konumlandırıldı ve sol atriyal tomurcuğun etrafına bağlandı. Son olarak, embriyo orijinal konumuna geri döndürüldü ve LAL tamamlandı. Normal ve LAL aletli ventriküller doku sıkışmasında istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar gösterdi. Verimli bir LAL model üretim hattı, kardiyovasküler bileşenlerin embriyonik gelişimi sırasında senkronize mekanik ve genetik manipülasyona odaklanan çalışmalara katkıda bulunacaktır. Benzer şekilde, bu model doku kültürü araştırmaları ve vasküler biyoloji için bozulmuş bir hücre kaynağı sağlayacaktır.

LAL müdahalesine bağlı yapısal ve morfolojik değişiklikleri gözlemlemek için ileri zaman çözümlü görüntüleme teknikleri kullanılabilir10. Ayrıca, LAL numuneleri moleküler ve biyolojik yöntemlerede uygundur 19,28. Tablo 1'de, LAL modeli sonuçlarının kullanıldığı örnek çalışmalar verilmiştir. Bu kapsamda HH20-21'e ulaşan civciv embriyolarına LAL müdahalesi yapıldı. Hem kontrol (sağlıklı) hem de LAL kalpleri HH25-26'da embriy...

Burada, kuş embriyosunda sol atriyal ligasyon (LAL) modelinin yürütülmesi için ayrıntılı bir görsel protokol sunuyoruz. LAL modeli, hipoplastik sol kalp sendromunu taklit ederek duvar kesme gerilimi yükünü değiştiren intrakardiyak akışı değiştirir. Bu zor mikrocerrahi modelinin zorluklarının üstesinden gelmek için bir yaklaşım sunulmaktadır.

Erken Vasküler Gelişim Sırasında Değişen Hemodinamik Yükleme için Bir Model Olarak Kuş Embriyosunda Sol Atriyal Ligasyon

Due to its four-chambered mature ventricular configuration, ease of culture, imaging access, and efficiency, the avian embryo is a preferred vertebrate ...

Laboratuvarımız, kan akışının ve basınç yüklemesinin kuş embriyonik kalp kemerleri ve ventrikülleri üzerindeki etkisine odaklanmaktadır. LL modelinde vasküler morfolojiyi mekanik yüklemeye bağlayan karmaşık biyomekanik mekanizmalara katkıda bulunmayı amaçlıyoruz. Ayrıca güçlü bir klinik ve cerrahi biyomühendislik araştırma programı sürdürüyoruz.Imperial College'daki profesör ops grubu tarafından yürütülen yakın tarihli bir ortak çalışmada, evre 25'te sol atriyal ligasyondan sonra ventriküllerde artan üç boyutlu miyokardi suşlarını göstermek için görüntü tabanlı sonlu eleman modellemesi ve tek hücreli RNA dizilimi kullanıldı. Bu tür bilgiler insanlarda fetal kardiyovasküler etkileşime çevrilebilir. LL girişimi ile daha küçük bir sol ventrikül boşluğu ve tüm trabekül girintilerinde kompresyon gözlendi.Ayrıca, LL normal ventrikül yapısını değiştirdi ve trabekülün görünümünü yeniden yönlendirdi. Ek olarak, LL modeli sağ ventrikül boşluğu genişlemesine, trabeküler yapıda değişikliklere ve miyokardiyal hacim yükünde artışa neden oldu. LL, civciv embriyosundaki hemodinamik yüklemeyi etkileyerek hipoplastik sol kalp sendromuna yol açar.Normal gelişen miyokardın elastikiyeti özellikle HLHS fenotipinde değişikliklere uğrar. Bu bulgular, klinik araştırmalar için potansiyel tedavilerin geliştirilmesine rehberlik edebilir ve tahmine dayalı rekabet modellerine rehberlik edebilir.

left-atrial-ligation-avian-embryo-as-model-for-altered-hemodynamic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu makalede, biz uzun vadeli sağlamak için basit bir yöntem...

Bir Eski-ovo</emGörüntüleme ve Mikrocerrahi Uygulamaları için uygundur> Tavuk Embriyo Kültürü Sistemi

Bu videoda, sol ön inen koroner arteri kalıcı olarak bağlayarak miyokard enfarktüsünün bir fare modelini oluşturmak için cerrahi bir prosedürü açıklıyoruz.

Miyokard Enfarktüsünün Murin Modelinin Oluşturulması: Fare Modelinde Sol Ön İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu İçin Cerrahi Bir İşlem

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

İlk kez burada, gelişmekte olan kalpte ex ovo hemodinamiği değiştirmek için tekrarlanabilir bir bantlama prosedürü sunuyoruz. Bu, çıkış yolunun (OFT) kısmen daraltılmasıyla elde edilir.

Bir roman<em&gt; Ex Ovo</em&gt; Yapıştırma Tekniği bir Embriyonik tavuk Sistemde İntrakardiyak hemodinamiği Alter

İzole çalışan kalp modelleri, yükleme koşullarının, kalp atış hızının ve ilaçların miyokard performansı ve oksijen tüketimi üzerindeki etkisini ölçmek için kullanılabilir. Çeşitli koşullar altında sistolik ve diyastolik performans ve oksijen tüketiminin incelenmesine izin veren bir kemirgen sol kalp çalışma modelinin hazırlanması için yöntemleri açıklıyoruz.

Miyokard Performans ve Oksijen Tüketimi İnceleme Kemirgen Çalışma Kalp Modeli

Bu izole edilmiş ve iyi karakterize edilmiş bir ortamda in vivo damarlanmayı analiz etmek için bir model olarak bir arteriovenöz (AV) döngü üretilmesi için bir mikro yaklaşımı açıklar. Bu model yalnızca anjiyojenezde araştırılması için yararlıdır, ama aynı zamanda en iyi şekilde mühendislik eksenel vaskülarize ve transplante dokuların için uygundur.

Bir Küçük Hayvan Modelinde Arteriovenöz (AV) Döngü Anjiogenez ve Vaskülarize Doku Mühendisliği Eğitim için

Burada, zebra balığı 4-boyutlu (4 D) kalbimizde geliştirme görselleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut. Işık sayfalık floresans mikroskobu (LSFM), üzerinden 4-D görüntüleme gelişmekte olan kalpleri yeniden oluşturmak için zaman içinde 3 boyutlu (3-D) görüntüleri alır. Nitelik ve nicelik endocardial çentik kardiyak trabeculation teşvik odası geliştirme sırasında sinyal kesme stres etkinleştirir gösteriyoruz.

Yamultma stres gelişmekte olan zebra balığı kalp oransal etkileri 4 boyutlu görüntülerini yakalamak için ışık sayfalık floresans mikroskobu

Bu yöntemde, embriyonik kalp dokuları cerrahi olarak microdissected, ayrışmış, fluorescently etiketli ve ana bilgisayar embriyonik dokuların implante vardır. Bu kişi veya doku düzeyinde gelişimsel organizasyon ektopik hemodinamik koşullar ve/veya değiştirilmiş parakrin/juxtacrine ortamlar altında eğitimi için bir platform sağlar.

Embriyonik Cardiomyocytes kuş embriyo implantasyonu Vivo için Mikroenjeksiyon tabanlı sistem

Amaç, baklagil Medicago truncatula modelinin, baklagil olmayan Arabidopsis modelini tamamlamak için erken bitki embriyogenezinin düzenlenmesini araştırmak için kolayca kullanılabileceğini göstermektir. Pod morfolojisi, zigotik embriyogenez aşamaları ile bağlantılıdır ve doku kültürü kullanılarak embriyoların toplanması için bir protokol de sağlanır.

Model Baklagil Erken Embriyo Geliştirme Yönetmeliği incelenmesi için zigotik ve somatik embriyolar Elde protokolleri<em&gt; Medicago truncatula</em

Organellerin ve diğer hücre altı yapıların dinamik davranışlarını in vivo olarak görüntülemek, fizyolojik ve hastalık durumlarındaki işlevlerine ışık tutabilir. Burada, iki organeli, sentrozomları ve mitokondriyi genetik olarak etiketlemek ve dinamiklerini geniş alan ve konfokal mikroskopi kullanarak canlı zebra balığı embriyolarında görüntülemek için yöntemler sunuyoruz.

Yaşayan Zebra balığı Embriyo Hücre alt yapıları görüntüleme

Keşfedin kuş embriyosunda sol atriyal ligasyon modelini kullanarak erken vasküler gelişim sırasında değişen hemodinamik yüklemeyi. Bu yöntem, hipoplastik sol kalp sendromunun biyomekanik mekanizmalarını anlamak için değerlidir.

Erken Vasküler Gelişim Sırasında Değişen Hemodinamik Yükleme için Bir Model Olarak Kuş Embriyosunda Sol Atriyal Ligasyon

Daha fazla video keşfet