Domuz Normomik İzole Karaciğer Perfüzyonu

Araştırmamızın kapsamı, greftin yenilenmesine, transplantasyondan önce değerlendirmeye izin veren ve rejeneratif tedavi için bir platform sağlayan normotermik makine perfüzyonu veya NMP hakkındaki anlayışımızı artırarak yüksek riskli karaciğer greftlerinin korunmasını iyileştirmektir. Son klinik çalışmalar, normotermik makine perfüzyonunun hepatosellüler hasarı azalttığını, greft değerlendirmesinin ise organ kullanım oranlarını artırabileceğini düşündürmektedir. Ancak NMP sırasında karaciğer hücrelerinin biyolojisi hakkında çok az şey bilinmektedir.

Hayvan modelleri karaciğer naklinin evriminde çok önemli olmuştur. Laboratuvarımızda, NMP'yi bir koruma stratejisi olarak incelemek ve transplantasyonu taklit etmek için uygulanabilecek, domuz izole karaciğer perfüzyonunun doğrulayıcı bir modelini oluşturduk. Modelimizin en büyük avantajı kemirgen modellerine göre öteleme değerinin yüksek olmasıdır.

Ek olarak, kurulumumuz araştırmacıların perfüzyon üzerinde tam kontrole sahip olmak için tüm bireysel ayarları yapmalarına olanak tanır. Kendi araştırmamız, normotermik makine perfüzyonu sırasında perfüzyon bileşiminin ve yaralanmanın derecesinin karaciğer greftlerinin doğuştan gelen bağışıklık tepkisi üzerindeki etkisine odaklanmıştır. Gelecekte, örneğin kök hücrelerin parakrin faktörlerinin uygulanması yoluyla rejeneratif tedavi için bir platform olarak NMP'yi keşfetmek istiyoruz.

Sakinleştirilmiş bir domuzun kulak damarına 22 gauge kateter yerleştirerek başlayın. Kateteri üç bir valfe bağlayın ve saatte 40 mililitre intravenöz Plasma-Lyte damlatmaya başlayarak anesteziyi indükleyin. Sternumun üst kısmının sol yan tarafından sternokleidomastoid kasa kadar yedi santimetre uzunluğunda bir kesi yapın.

Ortostatik bir ekartör yerleştirdikten sonra, ekstrajuguler veni bulun ve herhangi bir yan dalı bağlayarak serbest bırakın. Dış şah damarının etrafına iki adet 2-0 ligatür yerleştirin ve kraniyal ligatürü bağlayın. Bağlı bağa giden kaudal damarı kesin ve 12 Fransız venöz kateteri yerleştirin.

Karotis arter üzerindeki ligatürü açığa çıkardıktan ve tekrarladıktan sonra, arter hattını karotis artere kaudal olarak yerleştirin ve 2-0 ligatür ile sabitleyin. Ksifoidden kasık kemiğine kadar orta hat boyunca bir kesi yapın. Göbek bağını kes ve bir karın ekartörü yerleştir.

Aort ve vena kavayı görselleştirmek için bağırsakları yanal ve kraniyal olarak sola doğru çekin. Şimdi aort kraniyalinin serbest üç santimetresini iliak çatallanmaya ayırın ve aortun etrafına iki ligatür yerleştirin. Vena kavayı aort ile aynı seviyede serbest olarak inceleyin ve etrafına iki ligatür yerleştirin.

Gastroduodenal ligamanın lateral tarafından başlayarak, ana safra kanalını serbest olarak inceleyin ve bir damar halkası ile çevreleyin. Portal venin yan tarafındaki büyük bir lenf düğümünü çıkarın ve damarı serbest bırakmak için mideden pankreasa bir dal kesin. Portal veni karaciğer tarafında bir damar halkası ve pankreas tarafında bir bağ ile çevreleyin.

Portal veni yanal olarak geri çekin ve kapanmadığından emin olun. Ortak hepatik arteri bulun ve bir damar halkası ile çevreleyin. Tüm hiler yapılar artık tanımlanmıştır.

Yemek borusunu sağ tarafa doğru çekin ve torasik aortu açığa çıkarın. Domuza kilogram başına 500 ünite heparin verdikten sonra, aortun etrafına bir kaudal bağ bağlayın ve ardından aorta 20 Fransız kanülü yerleştirin ve sabitleyin. Sıcak iskemiyi indüklemek için torasik aortu yaklaşık 60 dakika klempleyerek DCD'yi taklit edin.

Aort kanülünü buz gibi soğuk koruma sıvısı ile yıkadıktan sonra, soğutmak için karın üzerine topikal olarak sulu buz yerleştirin. Yıkama tamamlandıktan sonra, aort kanülünü çıkarın, bağı portal venin etrafına bağlayın, kanüle edin ve kanülü portal vene bir damar halkası ile sabitleyin. Karaciğeri portal ven yoluyla iki litre buz gibi soğuk koruma sıvısı ile yıkayın.

Ardından, bağırsakları sola doğru çekerek infrahepatik vena kavayı ortaya çıkarın. Vena kavayı retroperitondan arındırın ve böbrek damarlarından kraniyal olarak bölün. Şimdi ortak hepatik arteri çölyak artere ve aorta kadar inceleyin.

Ardından, gastroduodenal arteri bölün ve çölyak arteri bir aort yaması ile kesin. Suprahepatik vena kava ve kalan diğer ekleri kestikten sonra, serbest kalan karaciğeri çıkarın ve tartın. Tartılan karaciğerin portal damarını 25 Fransız kanülü ile kanüle edin ve ligatürlerle sabitleyin.

Ardından, hepatik arteri 14 Fransız takviyeli kanül ile kanüle edin ve sabitleyin. İnfrahepatik vena kavayı kanüle edin ve sabitleyin. Safra kanalını kanüle edin ve bir çanta ipi ile sabitleyin.

Portal kanülün havasını alın ve portal veni 250 mililitre soğuk plazma genişletici ile geri yıkayarak sızıntı olup olmadığını test edin. Eksize edilen domuz karaciğerini hazneye yerleştirin. Daha sonra kanülleri bir T-konektörü kullanarak ilgili giriş ve çıkış tüplerine bağlayın.

T konektörüne üç musluklar takın ve bunları basınç hatlarına bağlayın. Safra kanalı kanülünü mineral yağ altındaki bir kaba koyun ve perfüzyonu başlatın. Portal ven, toplam hepatik kan akışının yaklaşık% 75'ine katkıda bulunurken, hepatik arter toplam hepatik akımın% 25'ine katkıda bulunur.

Stabil intrahepatik vasküler direnç görüldü ve portal ven hepatik artere göre daha düşük direnç gösterdi. Stabil ve tutarlı perfüzyon, altı ila 12 saat içinde sabit seviyelerde aspartat transaminaz salınımına yol açtı. Perfüzyon pH'ı kendi kendini düzenledi ve karaciğer tarafından normal aralıklarda tutuldu.

Perfüzyon başlangıcından bir saat sonra perfüzyon laktatının temizlendiği ve safra sekresyonunun 24 saat korunduğu gözlendi. Kanülün sol vena kavaya yanlış yerleştirilmesi, çıkışın bozulmasına neden olarak portal ven direncinin iki katına çıkmasına neden olarak portal ven kan akışının azalmasına ve hepatik arter akışında telafi edici bir artışa yol açtı. Çıkış obstrüksiyonu, perfüzyonda artan aspartat transaminaz konsantrasyonunun gösterdiği gibi, intrahepatik kanama ve hepatoselüler nekroz ile de ilişkiliydi.