30 Haziran 2023
Aktinomisetler ve diğer yavaş büyüyen bakteriler için uygun olan bakteriyofajların varlığında uzun süreli bakteri büyümesini ölçmek için optik yoğunluğa dayalı bir mikroplaka yöntemi tanımlanmıştır. Bu yöntem, buharlaşmayı ve kapak yoğuşmasını azaltmak için modifikasyonlar ve eğrinin altındaki alan, büyüme maksimumu ve göreceli virülans dahil olmak üzere virüs enfeksiyonu ölçümlerini hesaplamak için R kodunu içerir.
Sonuçta, bakteriyofaj-konakçı etkileşimleriyle ilgileniyoruz. Bu protokol, yavaş büyüyen bakterilerde faj enfeksiyonunun ölçülmesini sağlar ve tanımlayıcı enfeksiyon ölçümleri oluşturur. Bu metodoloji, yavaş büyüyen Actinomycete bakteriyofaj-konakçı birlikte evriminin incelenmesinde etkilidir.
Hızlı mikroplaka yöntemleri, hızlı büyüyen bakteri konakçıları için mükemmel sonuçlar verir, ancak aktinomisetler gibi daha yavaş büyüyen bakteri konakçılarında bakteri-faj enfeksiyonu ilerlemesini göstermek için çok kısadır. Yöntemimiz yavaş büyüyen bakteriler için uyarlanmıştır ve bakteriyofaj enfeksiyon dinamiklerini karakterize etmek için gereken birkaç gün boyunca bakteri ve fajın birlikte kültürlenmesine izin verir. Protokolümüz, bakteriyofaj-konakçı etkileşimlerinin, daha büyük bir kültür şişesinden alt örnekleme gerektirmek yerine, mikroplakalarda yavaş büyüyen bakteriler için değerlendirilmesine izin verir.
Bu protokol, uzun kültür sürelerine uyum sağlamak için hazır malzemeleri kullanır ve birden fazla kopyanın tek bir mikroplakada kaplanmasına izin verir.
Bu çalışma, bakteriyofajların varlığında uzun süreli bakteri büyümesini ölçmek için yeni bir optik yoğunluk tabanlı mikroplate yöntemi sunar ve bu özellikle aktinomisesler gibi yavaş büyüyen bakteriler için uyarlanmıştır. Bu protokol, bu bakteri konaklarındaki bakteriyofaj enfeksiyon dinamiklerini ölçmenin zorluklarını ele alır, uzun süreler boyunca eşkültürlemeyi mümkün kılar ve ayrıntılı enfeksiyon metrik analizini kolaylaştırır.
Quantifying bacteriophage infection dynamics in slow-growing actinomycetes is critical for understanding host-pathogen interactions and de-risking early discovery in antimicrobial R&D. This adapted optical density-based microplate assay enables high-throughput, reproducible measurement of infection metrics over extended periods, supporting predictive confidence in target validation and mechanistic studies. The protocol's scalability and quantitative outputs position it as a reusable asset for portfolio-wide evaluation of phage-bacteria systems.
This assay integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling hypothesis testing, pathway clarification, and infection metric quantification in slow-growing bacterial models.