Name: In Vitro Gelişimsel Mekanobiyolojiyi İncelemek için Çip Üzerinde Fetal İnsan Gemisi Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Keşfedin, insan iPS hücrelerinden endotel hücreleri farklılaştırma ve akışkanlık çipinde mekanik stimülasyon yöntemini. Bu protokol, endotel mekanobiyolojisini kontrollü ortamda incelemek için yüksek saflıkta hücre elde edilmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Avrupa Hematoloji Derneği'nden Research Advanced Grant 2021, Amerikan Hematoloji Derneği'nden 2021 Küresel Araştırma Ödülü ve Welcome Trust ve Edinburgh Üniversitesi tarafından finanse edilen Dahili Strateji Destek Fonu ISSF3 tarafından desteklenmiştir. Flow Sitometri Tesisi'nden Fiona Rossi'ye Flow sitometri analizindeki desteği için teşekkür ederiz. Açık erişim amacıyla, yazar, bu gönderimden kaynaklanan herhangi bir Yazar Tarafından Kabul Edilen Makale sürümüne bir Creative Commons Atıf (CC BY) lisansı uygulamıştır.

hiPSC kaynaklı endotel hücrelerinin farklılaşması ve mekanik stimülasyonu

<ol><li>Copp, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Death+before+birth%3A+clues+from+gene+knockouts+and+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Death before birth: clues from gene knockouts and mutations.</a> Trends in Genetics. 11 (3), 87-93 (1995).</li>
<li>Ji, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+of+cardiac+function+during+early+mouse+embryogenesis+coincides+with+entry+of+primitive+erythroblasts+into+the+embryo+proper%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper.</a> Circulation Research. 92 (2), 133-135 (2003).</li>
<li>Peacock, H. M., Daems, M., Jones, E. A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamic+control+of+endothelial+cell+fates+in+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiac+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Hemodynamic control of endothelial cell fates in development.</a> Cardiac and Vascular Biology. 8, 127-166 (2021).</li>
<li>Chong, D. C., Koo, Y., Xu, K., Fu, S., Cleaver, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stepwise+arteriovenous+fate+acquisition+during+mammalian+vasculogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Stepwise arteriovenous fate acquisition during mammalian vasculogenesis.</a> Developmental Dynamics. 240 (9), 2153-2165 (2011).</li>
<li>Jaffredo, T., Gautier, R., Eichmann, A., Dieterlen-Lièvre, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraaortic+hemopoietic+cells+are+derived+from+endothelial+cells+during+ontogeny%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Intraaortic hemopoietic cells are derived from endothelial cells during ontogeny.</a> Development. 125 (22), 4575-4583 (1998).</li>
<li>Zovein, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+Tracing+reveals+the+endothelial+origin+of+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Fate Tracing reveals the endothelial origin of hematopoietic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3 (6), 625-636 (2008).</li>
<li>Bertrand, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cells+derive+directly+from+aortic+endothelium+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cells derive directly from aortic endothelium during development.</a> Nature. 464 (7285), 108-111 (2010).</li>
<li>Boisset, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+haematopoietic+cells+emerging+from+the+mouse+aortic+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of haematopoietic cells emerging from the mouse aortic endothelium.</a> Nature. 464 (7285), 116-120 (2010).</li>
<li>Adamo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+forces+promote+embryonic+haematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Biomechanical forces promote embryonic haematopoiesis.</a> Nature. 459 (7250), 1131-1135 (2009).</li>
<li>Diaz, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+forces+promote+blood+development+through+prostaglandin+E2+and+the+cAMP-PKA+signaling+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Biomechanical forces promote blood development through prostaglandin E2 and the cAMP-PKA signaling axis.</a> Journal of Experimental Medicine. 212 (5), 665-680 (2015).</li>
<li>North, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell+development+is+dependent+on+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell development is dependent on blood flow.</a> Cell. 137 (4), 736-748 (2009).</li>
<li>Lundin, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((YAP+regulates+hematopoietic+stem+cell+formation+in+response+to+the+biomechanical+forces+of+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">YAP regulates hematopoietic stem cell formation in response to the biomechanical forces of blood flow.</a> Developmental Cell. 52 (4), 446.e5-460.e5 (2020).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mimicry+of+embryonic+circulation+enhances+the+hoxa+hemogenic+niche+and+human+blood+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mimicry of embryonic circulation enhances the hoxa hemogenic niche and human blood development.</a> Cell Reports. 40 (11), 111339(2022).</li>
<li>Azzoni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+onset+of+circulation+triggers+a+metabolic+switch+required+for+endothelial+to+hematopoietic+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">The onset of circulation triggers a metabolic switch required for endothelial to hematopoietic transition.</a> Cell Reports. 37 (11), 110103(2021).</li>
<li>Li, Y. S. J., Haga, J. H., Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+the+effects+of+shear+stress+on+vascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of the effects of shear stress on vascular endothelial cells.</a> Journal of Biomechanics. 38 (10), 1949-1971 (2005).</li>
<li>Batsivari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+hematopoietic+stem+cell+development+through+functional+correlation+of+their+proliferative+status+with+the+intra-aortic+cluster+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Understanding hematopoietic stem cell development through functional correlation of their proliferative status with the intra-aortic cluster architecture.</a> Stem Cell Reports. 8 (6), 1549-1562 (2017).</li>
<li>Canu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+endothelial-to-haematopoietic+transition+at+the+single+cell+level+identifies+cell+cycle+regulation+as+a+driver+of+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of endothelial-to-haematopoietic transition at the single cell level identifies cell cycle regulation as a driver of differentiation.</a> Genome Biology. 21 (1), 157(2020).</li>
<li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterialization+requires+the+timely+suppression+of+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Arterialization requires the timely suppression of cell growth.</a> Nature. 589 (7842), 437-441 (2020).</li>
<li>Yang, C. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+KLF1+enhances+the+differentiation+and+maturation+of+red+blood+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Activation of KLF1 enhances the differentiation and maturation of red blood cells from human pluripotent stem cells.</a> Stem Cells. 35 (4), 886-897 (2017).</li>
<li>Lopez-Yrigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+human+iPSC+line+capable+of+differentiating+into+functional+macrophages+expressing+ZsGreen%3A+A+tool+for+the+study+and+in+vivo+tracking+of+therapeutic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">A human iPSC line capable of differentiating into functional macrophages expressing ZsGreen: A tool for the study and in vivo tracking of therapeutic cells.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 373 (1750), 20170219(2018).</li>
<li>Lopez-Yrigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+characterization+of+human+macrophages+from+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Production and characterization of human macrophages from pluripotent stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. 2020 (158), (2020).</li>
<li>Fidanza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+analyses+and+machine+learning+define+hematopoietic+progenitor+and+HSC-like+cells+derived+from+human+PSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Single cell analyses and machine learning define hematopoietic progenitor and HSC-like cells derived from human PSCs.</a> Blood. 136 (25), 2893-2904 (2020).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li>
<li>North, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell+development+is+dependent+on+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell development is dependent on blood flow.</a> Cell. 137 (4), 736-748 (2009).</li>
<li>Nguyen, J., Lin, Y. Y., Gerecht, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+next+generation+of+endothelial+differentiation%3A+Tissue-specific+ECs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">The next generation of endothelial differentiation: Tissue-specific ECs.</a> Cell Stem Cell. 28 (7), 1188-1204 (2021).</li>
<li>Petazzi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterial+cells+support+the+development+of+human+hematopoietic+progenitors+in+vitro+via+secretion+of+IGFBP2%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Arterial cells support the development of human hematopoietic progenitors in vitro via secretion of IGFBP2.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
<li>Crosse, E. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-layered+spatial+transcriptomics+identify+secretory+factors+promoting+human+hematopoietic+stem+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Multi-layered spatial transcriptomics identify secretory factors promoting human hematopoietic stem cell development.</a> Cell Stem Cell. 27 (5), 822(2020).</li>
<li>Calvanese, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+human+haematopoietic+stem+cells+from+haemogenic+endothelium+to+birth%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mapping human haematopoietic stem cells from haemogenic endothelium to birth.</a> Nature. 604 (7906), 534-540 (2022).</li>
<li>Zeng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracing+the+first+hematopoietic+stem+cell+generation+in+human+embryo+by+single-cell+RNA+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Tracing the first hematopoietic stem cell generation in human embryo by single-cell RNA sequencing.</a> Cell Research. 29 (11), 881-894 (2019).</li>
<li>Hwa, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+arterial-venous+fusions+and+fate+specification+in+mouse+embryos+lacking+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Abnormal arterial-venous fusions and fate specification in mouse embryos lacking blood flow.</a> Scientific Reports. 7 (1), 11965(2017).</li>
</ol>

Yazarların ifşa edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Burada tarif ettiğimiz protokol, insan pluripotent kök hücrelerinden mekanosensitif endotel hücrelerinin üretilmesine ve bunların kontrollü kayma gerilmesinin aracılık ettiği mekanik stimülasyona tepkilerinin incelenmesine izin verir. Bu protokol tamamen sitokin bazlıdır ve hücre tedavisi için hücre üretimine potansiyel çeviri için GMP reaktifleri ile tamamen uyumludur.
HiPSC'lerin türetilmesi, bilim insanlarına embriyonik gelişimin erken aşamaları için, aksi takdirde in vivo24 üzerinde çalışılması zor olan süreçlerin incelenmesini sağlayan araçsal bir model sağlar. Aslında, araştırma için mevcut olan insan embriyonik dokuları, dolaşımı olmayan embriyolardan toplanır ve bu, mekanik ipuçları tarafından kontrol edilen moleküler imza üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir. Burada açıklanan yaklaşım, kayma gerilimine hücre tepkisinin canlı görüntülenmesini ve gerçek zamanlı olarak incelenmesini sağlar. HiPSC'lerin akışkanlarla kombinasyonu, dolaşımın başlatılması kardiyovasküler ve kan sistemininkurulmasını yeniden şekillendirdiğinde ve kontrol ettiğinde, gelişmekte olan fetal dokuların sınırlı kullanılabilirliğinin ve erişilemezliğinin üstesinden gelen bir çalışma modeli sağlar 3,9,10,25.
Protokolün bir sınırlaması, bu protokolden türetilen endotel hücrelerinin, gelişmekte olan dokularda bulunan farklı endotel hücrelerinin çeşitli kimliklerini yansıtmayabilmesidir. Bu sınırlamanın üstesinden gelmek için, istenen kimliği veya dokuya özgü fenotip26'yı elde etmek için akışkan stimülasyondan önceki farklılaşma işlemi sırasında spesifik bir sitokin kombinasyonuna ihtiyaç duyulabilir. Endotelyal alt kümelerin izolasyonu, izolasyon adımı sırasında daha rafine bir immünofenotip kullanılarak elde edilebilir. Bu protokol, endotel hücrelerini yalnızca CD34 ekspresyonuna dayalı olarak izole eder, böylece floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması (FACS) yerine kolon izolasyonuna izin verir; Bu, hücre ölümünü ve kontaminasyon riskini azaltır. Ayrıca, bu protokol, laminer akışın aracılık ettiği kesme geriliminin rolünü incelemek için özel olarak tasarlanmıştır. Germe veya sıkıştırma gibi diğer mekanik ipuçlarının veya bozulmuş veya bozulmuş akış gibi diğer akış türlerinin etkisini incelemek için alternatif akışkan yaklaşımların kullanılması gerekecektir.
Daha önce iPSC'den türetilen endotel hücrelerinin, fetal dorsal aortta 28,29,30 gözlemlenene benzer heterojen arteriyovenöz hücresel kimlikleri 27 taklit ettiğini göstermiştik. Bu, kan dolaşımı tarafından kontrol edildiği bilinen damar gelişimi ve hücresel spesifikasyon bağlamında özellikle önemlidir. Farklı modellerde yapılan çalışmalar, dolaşım eksikliğinin arteriyovenöz spesifikasyonun değişmesine neden olduğunu göstermiştir11,14,31. Mekanik ipuçlarını hücre spesifikasyonuna bağlayan mekanizmalar hala bilinmemektedir ve burada açıklanan boru hattı, in vivo olarak test edilemeyen rafine fonksiyonel çalışmalara izin vermektedir.
Bu boru hattı, ticari olarak temin edilebilen akışkan kanallar kullanılarak hiPSC'lerden türetilen endotel hücrelerinin üretimini ve uyarılmasını açıklar ve cihazların yaygın olarak kullanılan polidimetilsiloksan (PDMS) cihazlarında olduğu gibi döküm ihtiyacını ortadan kaldırır12. Ayrıca, PDMS çiplerinin kullanılması, uyarılan hücrelerin toplanmasını özellikle zorlaştırırken, bu protokol ile hücreler kanaldan kolayca alınabilir. Bu, proteomik ve transkriptomik analizler, akış sitometrisi ve daha fazla kültüre veya in vivo tahlillere ihtiyaç duyabilecek fonksiyonel tahliller gibi sonraki analizlere izin veren analitik gücü önemli ölçüde artırır.

Embriyonik gelişim sırasında kalp, endokardiyal tüp oluşumunun en erken aşamasından itibaren saptanabilir kasılmalarla1 işlevsellik 1 kuran ilk organdır2. Dolaşım, damar içindeki kan akışının aracılık ettiği mekanik ipuçlarıyla birlikte, erken gelişimin birçok önemli yönünü kontrol eder. Fetal dolaşım kurulmadan önce, vaskülatür primer bir kapiller pleksus halinde düzenlenir; Kardiyak fonksiyon üzerine, bu pleksus venöz ve arteriyel vaskülatür3 olarak yeniden düzenlenir. Arteriyovenöz spesifikasyonda mekanik ipuçlarının rolü, kan akışı başlamadan önce arteriyel ve venöz belirteçlerin pan-endotelyal ekspresyonu ile yansıtılmaktadır4.
Hemodinamik kuvvetler sadece damar sisteminin gelişimini kontrol etmekle kalmaz, aynı zamanda kan hücresi oluşumunun kontrolünde de temel bir rol oynar. Hematopoetik kök ve progenitör hücreler (HSPC'ler), embriyoların farklı anatomik bölgelerinde sadece gelişimin erken evresinde bulunan hemojenik endotel 5,6,7,8 adı verilen özel endotel hücrelerinden ortaya çıkar. Kalp yetmezliği olan modeller, in vitro modellerle birlikte, mekanik ipuçlarının hemonojenik endoteldenHSPC üretimini yönlendirdiğini ve artırdığını göstermiştir 9,10,11,12,13,14.
Farklı akış dinamiğinin, hem hemojenik endotel 16,17 hem de arteriyel hücre spesifikasyonu18'de önemli olduğu bilinen hücre döngüsünü 15 farklı şekilde kontrol ettiği gösterilmiştir. Toplamda, mekanik ipuçları, gelişim sırasında hücre kimliğinin ve işlevinin kritik belirleyicileridir. Yeni in vitro akışkan cihazlar, in vivo insan kanı gelişimi sırasında gelişimsel mekanobiyoloji çalışmasıyla ilgili sınırlamaların üstesinden gelmemizi sağlar.
Bu makaledeki protokolün genel amacı, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (hiPSC'ler) in vitro türetilen insan endotel hücreleri üzerindeki kayma geriliminin etkisini incelemek için deneysel boru hattını adım adım tanımlamaktır. Bu protokol, hiPSC'lerin endotel hücrelerine farklılaşması ve daha sonra stimülasyon protokolü için akışkan çiplere tohumlanması hakkında ayrıntılı talimatlar içerir. Bunu kullanarak, farklı in vitro türevli endotel hücreleri, akışa yanıt olarak yönelimlerini analiz ederek kayma stresini algılama yetenekleri açısından test edilebilir. Bu, diğer laboratuvarların kayma stresine verilen yanıt ve bunun farklı endotel hücre kimlikleri üzerindeki fonksiyonel sonuçları hakkındaki soruları ele almasına izin verecektir.

<table><tbody><tr><td>0.6 Luer kaplamasız slayt</td><td>ibidi</td><td>IB-80186</td><td></td></tr><tr><td>%25 BSA</td><td>Life Technologies</td><td>A10008-01</td><td></td></tr><tr><td>6 oyuklu plakalar</td><td>Greiner Bio-one</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Life Technologies</td><td>A1110501</td><td>Ayrışma reaktifi olarak anılır</td></tr><tr><td>Askorbik asit</td><td>Merck</td><td>A4544-100G</td><td></td></tr><tr><td>Aspirasyon pipeti</td><td>Sardtedt</td><td>86.1252.011</td><td></td></tr><tr><td>B27 takviyesi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>17504044</td><td>Nöronal hücre kültürü takviyesi olarak belirtilmiştir (50x)</td></tr><tr><td>BD FACS DIVA</td><td>BD Biosciences</td><td>Sürüm 8.0.1</td><td>Akış sitometrisi yazılımı olarak belirtilmiştir</td></tr><tr><td>BD LSR Fortessa 5 Lazer</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>PHG0021</td><td></td></tr><tr><td>CD34 Mikro boncuk kiti</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>30-046-702</td><td></td></tr><tr><td>CD34 PE klonu 4H11</td><td>Invitrogen</td><td>12-0349-42</td><td></td></tr><tr><td>CD34 PerCP-eFluor 710 klonu 4H11</td><td>Invitrogen</td><td>44-0349-42</td><td></td></tr><tr><td>Cellstar hücre itici yüzey 6 oyuklu plakalar</td><td>Greiner Bio-one</td><td>657970</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Cayman Chemicals&nbsp CHIR99021</td> hücre itici plaka olarak belirtilmiştir;<td>13122-1mg-CAY</td><td></td></tr><tr><td>Cryostor CS10 ve nbsp; hücre kriyoprezervasyonu</td><td>Merck</td><td>C2874-100ML</td><td>Kriyoprezervasyon çözeltisi olarak alıntılanmıştır</td></tr><tr><td>Dimetil Sülfoksit</td><td>VWR</td><td>200-664-3</td><td>DMSO</td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>olarak belirtilmiştir Yaşam Teknolojileri</td><td>10565-018</td><td></td></tr><tr><td>DPB Ca2+ Mg2+</td><td>Life Technologies</td><td>14080055</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>14200075</td><td></td></tr><tr><td>EASY Tutucu 40 & mu; m</td><td>Greiner Bio-one</td><td>542040</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Life teknolojileri</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>FcR Engelleme Reaktifi</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-059-901</td><td></td></tr><tr><td>Fiji</td><td></td><td>Sürüm 1.53c</td><td></td></tr><tr><td>Flow Jo</td><td></td><td>Sürüm 10.7.1</td> FLT3L Peprotech 300-19-10uG <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td> akış sitometrisi analizi olarak belirtilmiştir.</tr><tr><td>Akışkan ünite</td><td>ibidi</td><td>10903</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>Life Technologies</td><td>35050038</td><td>L-glutamin takviyesi olarak belirtilmiştir</td></tr><tr><td>Ham F-12&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>11765054</td><td></td></tr><tr><td>Holo-transferrin</td><td>Merk</td><td>T0665-500MG</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Serumu Albümini</td><td>Fujifilm UK LTD</td><td>9988</td><td></td></tr><tr><td>Ibidi Pompa sistemi</td><td>ibidi</td><td>10902</td><td>Pompa sistemi olarak belirtilmiştir</td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Life Technologies</td><td>12440053</td><td></td></tr><tr><td>Ters mikroskop</td><td>ioLight / Thisle Scientific</td><td>IOL-IO-INVERT</td><td>Ters çevrilmiş inkübatör mikroskobu olarak alıntılanmıştır</td></tr><tr><td>Liyofilize BSA&nbsp;</td><td>Merck</td><td>A2153-100G</td><td></td></tr><tr><td>MiniMACS Ayırıcı</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-102</td><td>Manyetik ayırıcı olarak alıntılanmıştır</td></tr><tr><td>MS Sütunları</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-201</td><td>Manyetik sütun</td></tr><tr><td>MTG</td> olarak belirtilmiştir <td>Merck</td><td>M6145-25ML</td><td></td></tr><tr><td>N2 eki</td><td>Pompa</td><td></td> sistemi ibidi için Yaşam Teknolojileri 17502048 <td></td></tr><tr><td>Dizüstü Bilgisayar</td><td></td><td>10908</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit %37-41</td> <td>Fisher Chemicals</td><td>F/1501/PB15</td><td></td></tr><tr><td>Pastette</td><td>Greiner Bio-one</td><td>612398</td><td></td></tr><tr><td>Kalem/Strep</td><td>Gibco</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Perfüzyon Seti SARI/YEŞİL: 50 cm, ID 1,6 mm, 10 mL rezervuarlar</td><td>Ibidi</td><td>IB-10964</td><td>Perfüzyon seti olarak belirtilmiştir</td></tr><tr><td>Polistiren Yuvarlak Tabanlı Tüpler</td><td>Falcon</td><td>352008</td><td>Akış sitometri tüpleri olarak belirtilmiştir</td></tr><tr><td>Prizma 9</td><td></td><td>Verison 9.4.0</td><td></td></tr><tr><td>Pompa kontrol yazılımı</td><td>ibidi</td><td>sürüm 1.6.1</td><td>Pompa yazılımı</td></tr><tr><td>ReLeSR</td><td>olarak belirtilmiştir Kök hücre teknolojileri</td><td>5872</td><td>Ayırma çözümü</td></tr><tr><td>olarak belirtilmiştir rhBMP4</td><td>R& D</td><td>314-BP-010</td><td></td></tr><tr><td>rhEPO</td><td>Ar-Ge D</td><td>287-TC-500</td><td></td></tr><tr><td>rhIGF1</td><td>Peprotech</td><td>100-11-100uG</td><td></td></tr><tr><td>rhIL11</td><td>Peprotech</td><td>200-11-10uG</td><td></td></tr><tr><td>rhIL3</td><td>Peprotech</td><td>200-03-10uG</td><td></td></tr><tr><td>rhIL6</td><td>R& D</td><td>206-IL-010</td><td></td></tr><tr><td>rhLaminin-521</td><td>Yaşam teknolojileri</td><td>A29248</td><td>Laminin</td></tr><tr><td>rhSCF</td><td>Life Technologies</td><td>PHC2111</td><td></td></tr><tr><td>rhTPO</td><td>R& D</td><td>288-TPN-025</td><td></td></tr><tr><td>rhVEGF</td><td>Ar-Ge D</td><td>293-VE-010</td><td></td></tr><tr><td>RLT Lizis Tamponu</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td></td></tr><tr><td>&micro;-Slaytlar için Seri Konektör: Steril, Steril ibidi</td><td></td><td>IB-10830</td><td></td></tr><tr><td>StemPro-CD34 SFM ortamı</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10639011</td><td>CD34+ hücreleri için Serumsuz ortam olarak belirtilmiştir (SFM-34)</td></tr><tr><td>StemPro-CD34 Besin Takviyesi&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10641-025</td><td>34 besin takviyesi olarak alıntılanmıştır</td></tr><tr><td>StemPro hESC SFM</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>A1000701</td><td>Kültür medyası olarak alıntılanmıştır&nbsp;</td></tr><tr><td>StemPro takviyesi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>A10006-01</td><td></td></tr><tr><td>Vitronektin (VTN-N) rekombinant insan proteini, kesilmiş</td><td>Invitrogen</td><td>A31804</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 dihidroklorür</td><td>Tocris</td><td>1254</td><td>iRock</td></tr><tr><td>&beta;-Merkaptoetanol</td><td>Gibco</td><td>21985023</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro gelişimsel mekanobiyolojiyi İncelemek için Çip Üzerinde fetal İnsan gemisi modeli

In Vitro Model of Fetal Human Vessel On-chip to Study Developmental Mechanobiology

Kalp, gelişim sırasında işlevsel olarak kurulan ilk organdır, bu nedenle gebeliğin çok erken dönemlerinde kan dolaşımını başlatır. Fetal dolaşım, fetal büyümeyi sağlamak için oksijen ve besinlerin taşınmasının yanı sıra, endotel tabakasında meydana gelen birçok önemli gelişimsel olayı mekanik ipuçları aracılığıyla kontrol eder. Biyomekanik sinyaller kan damarı yapısal değişikliklerini indükler, arteriyovenöz spesifikasyonu oluşturur ve hematopoietik kök hücrelerin gelişimini kontrol eder. Gelişmekte olan dokuların erişilemezliği, dolaşımın erken insan gelişimindeki rolünün anlaşılmasını sınırlar; Bu nedenle, in vitro modeller, damar mekanobiyolojisi çalışması için çok önemli araçlardır. Bu makale, endotel hücrelerini insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden ayırt etmek ve daha sonra mekanik ipuçlarına tepkilerini incelemek için akışkan bir cihaza tohumlanmaları için bir protokolü açıklamaktadır. Bu yaklaşım, mekanik stimülasyon altında endotel hücrelerinin uzun süreli kültürüne ve ardından fenotipik ve fonksiyonel karakterizasyon için endotel hücrelerinin alınmasına izin verir. Burada oluşturulan in vitro model, insan fetal yaşamı boyunca damar gelişimini düzenleyen mekanik ipuçlarının aracılık ettiği sinyallemeyi ileten hücre içi moleküler mekanizmaları aydınlatmak için etkili olacaktır.

Burada, hiPSC'lerden türetilen endotel hücrelerinin farklılaşması ve mekano-stimülasyonu için mekanik ipuçlarına tepkilerinin incelenmesine izin veren bir protokol açıklıyoruz (Şekil 1). Bu protokol, fonksiyonel olarak mekanosensitif endotel hücrelerinin üretimi ile sonuçlanır. Burada temsili sonuçlar sunuyoruz ve hücrelerin farklılaşma sırasında sitokin stimülasyonuna nasıl tepki verdiğini değerlendirmek için beklenen fenotipi tanımlıyoruz.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65492/65492fig01v2.jpg"> Şekil 1: Diferansiyasyon ve mekanik stimülasyon protokolünün şeması. Farklı sitokin karışımlarının zamanlamasını, CD34+ hücre izolasyonunu, akışkan çip tohumlamasını ve mekanik olarak uyarılan hücrelerin son analizini gösteren farklılaşma protokolünün şeması. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65492/65492fig01largev2.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
hiPSC'lerin kültürü Protokolü, kendini yenileme koşullarında doğru şekilde büyüyen hiPSC'lerden başlatmak önemlidir. Kültürün kalitesinin iyi bir göstergesi, büyümelerinin hızıdır. Çözüldükten sonra, hücrelerin iyi bir farklılaşma sağlayacak doğru büyüme aşamasına ulaşması için 2-3 haftaya ihtiyacı olabilir. Hücreler haftada iki kez 1:6 oranında neredeyse tam birleşmeye ulaşarak geçebildiklerinde, bu, geçişleri gereken gün farklılaşmaya hazır oldukları zamandır.
HiPSC'lerin endotel hücrelerine farklılaşması Embriyoid cisimciklerinin (EB'ler) oluşumundan oluşan farklılaşmanın ilk adımı, hücre hattına bağlıdır ve kullanımdaki spesifik hücre hattı için bir miktar optimizasyona ihtiyaç duyabilir. Protokol adımları 1.3.2.2-1.3.2.4'te açıklanan ayrışma, ayrışma reaktifi ile inkübasyonun azaltılması veya uzatılması ve ardından Pasteur pipeti ile ayrışma yoluyla değiştirilebilir. Ayrıca, bu adım için kolonilerin bir kesici alet veya bir P100 pipet ucu ile fiziksel olarak ayrıştırılmasına ek olarak başka ayrışma reaktifleri de kullanılabilir. İyi kalitedeki EB'ler, farklılaşmanın 2. gününde tanımlanmış bir kenar gösterir ve mikroskop kullanılarak gözlemlendiğinde net ve parlak görünür; daha koyu alanlar EB'ler içinde hücre ölümünü gösterebilir (Şekil 2).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65492/65492fig2v3.jpg"> Şekil 2: Embriyoid cisimlerin morfolojisi. (A) İyi tanımlanmış dış kenarları ve tutarlı boyutu gösteren 2. gün embriyoid gövdeleri. (B) Yapının ayrışmasına yol açan geniş hücre ölümü gösteren düşük kaliteli 2. gün embriyoid cisimleri. Ölçek çubuğu = 500 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65492/65492fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
2. günde, EB'lere CHIR99021 eklenmesi GSK-3 proteinini inhibe eder ve bu da Wnt yolunun aktivasyonuna neden olur. Farklı hücre hatlarının CHIR tedavisine farklı yanıtları vardır ve bu, farklı konsantrasyonlar kullanılarak 8. günde elde edilen CD34+ hücrelerinin sayısını ölçerek test edilmelidir (Şekil 3).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65492/65492fig3v3.jpg"> Şekil 3: Farklı CHIR tedavileri ile endotel hücre farklılaşması. Endotel hücre bağlılığı, CD34 membran ekspresyonu ile farklılaşmanın 8. gününde akış sitometrisi ile ölçüldü, 2. günde (A) 3 μM, (B) 5 μM ve (C) 7 μM'de CHIR tedavisini takiben Akış sitometrisi verileri, beş lazerli sitometreler ve özel yazılım kullanılarak elde edildi (bkz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65492/65492fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
CD34+ hücre izolasyonu <img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65492/65492fig4v3.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65492/65492fig04large.jpg" target="_blank"></a> <img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65492/65492fig5v3.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65492/65492fig05large.jpg" target="_blank"></a><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td rowspan="2"></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td rowspan="8"></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr></tbody></table><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65492/SF1.pdf" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65492/65492_Supp%20Figure%20S2%20FINAL.pdf" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65492/65492_SF3.pdf" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65492/Ventura%20et%20al,%202023%20-%20Supplementary%20Table%201.xlsx" target="_blank"></a>

Burada açıklanan, endotel hücrelerini insan pluripotent kök hücrelerinden ayırt etmek için basit bir iş akışı ve ardından mekanik stimülasyonları için ayrıntılı bir protokoldür. Bu, endotel hücrelerinin gelişimsel mekanobiyolojisinin incelenmesine izin verir. Bu yaklaşım, mekanik stimülasyondan sonra kültür çipinden toplanan canlı hücrelerin aşağı akış testleriyle uyumludur.

In Vitro Gelişimsel Mekanobiyolojiyi İncelemek için Çip Üzerinde Fetal İnsan Gemisi Modeli

The heart is the first organ to be functionally established during development, thus initiating blood circulation very early in gestation. Besides ...

Araştırmamız, insan kaynaklı pluripotent kök hücre farklılaşmasını akışkan aracılı mekanik stimülasyonla birleştirdiğimiz gelişim sırasında mekanik ipuçlarının endotel hücrelerinin kaderini nasıl yönlendirdiğini araştırıyor. Endotel hücreleri sürekli olarak kanın hareketine maruz kalır, bu nedenle statik kültürde önemli sinyaller kaçırılır, bu da bunu geleneksel kültür sistemlerini kullanarak endotel hücre biyolojisini incelemede ana zorluk haline getirir. Mekanik ipuçları, aslında, statik koşullarda kültürlenen hücrelerde gözden kaçabilecek birçok önemli sinyal yolunu aktive eder.Protokolümüz, indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı endotel hücrelerinin nasıl ayırt edileceği ve mekanik olarak nasıl uyarılacağı konusunda kolay, adım adım bir kılavuz sağlar. Bu, birçok laboratuvarın akış altındayken endotel hücresi davranışı hakkındaki soruları kolayca ele almak için termik bir kültürü benimsemesine yardımcı olacaktır.

in-vitro-model-fetal-human-vessel-on-chip-to-study-developmental

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Burada, biz insan kordon kanı endotel koloni oluşturan hücrelerin (ECFCs -) ve kemik iliğinden elde edilen bağışık yetmezliği olan farelere subkutan kollajen / fibronektin jel gömülü mezenkimal kök hücreler (MKH), teslim etmek için bir metodoloji tarif Bu hücre / jel kombinasyonu, fare damarsal ile bağlayan bir insan bir damar ağı oluşturur.

Bağışık yetmezliği olan farelere Biyomühendislik İnsan Mikrovasküler Ağları

Bir mikro-on-a-chip platformu fotolitografik reflowable ışığa tekniği, yumuşak litografi ve Mikroakiskan kombinasyonu tarafından geliştirilmiştir. Endothelialized mikro platformu, in vivo mikrodamar içinde üç boyutlu (3D) geometrisi ile taklit eden sürekli perfüzyon kontrollü akış altında çalışan, yüksek kaliteli ve gerçek zamanlı görüntü sağlar ve mikrovasküler araştırma için uygulanabilir.

Çok derinlemesine Dairesel kesit Endothelialized mikro kanallar-on-a-chip Geliştirme Prosedürü

Birincil insan göbek damarı endotel hücreleri (HUVEC'ler), bir mikroakışkan ağ cihazı içinde birleşecek şekilde büyütüldü. Endotel hücre bağlantısı ve F-aktin dağılımları gösterildi ve adenozin trifosfata (ATP) yanıt olarak hücre içi kalsiyum konsantrasyonu ve nitrik oksit üretimindeki değişiklikler, bireysel hücre seviyelerinde gerçek zamanlı olarak ölçüldü.

Gelişim ve karakterizasyonu<em&gt; İn Vitro</em&gt; Mikrodamar Ağ ve Endotel kantitatif ölçümleri [Ca<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; I</sub&gt; Ve Nitrik Oksit Üretimi

Vivo klonal analizi ve kader eşleme, aortik explants ve izole düz kas hücreleri ayrıntılı burada kullanarak embriyonik ve perinatal fare aort eğitim için kullanılan protokol. Bu farklı yaklaşımlar normal gelişim embriyonik ve perinatal aort ve hastalık patogenezinde morfogenez incelenmesi kolaylaştırmak.

Morfogenez ve embriyonik ve Perinatal aort patogenezi okumaya vivo içinde ve doku ve hücre Explant yaklaşımları kullanma

İndüklenen pluripotent kök hücrelerinden (IPSC-EPs) elde edilen endotel progenatörler, kardiyovasküler hastalık tedavilerinin devrimleştirilmesi ve daha sadık kardiyovasküler hastalık modellerinin oluşturulmasını sağlamak için potansiyele sahiptir. Burada, üç boyutlu (3D) kollajen mikroortamlarda IPSC-EPs kapsülleme ve bu hücrelerin vasculogenik potansiyelinin nicel Analizi açıklanmıştır.

Bir In vitro 3D model ve hesaplamalı boru hattı PSC-türetilen endotel progenitors Vazculogenik potansiyelini ölçmek için

Burada, bir mikroakışkan çip ve neovaskülarizasyonun ilk mikroçevresini yeniden sağlayan, endotel hücrelerinin (VC' ler) yüksek luminal kesme stresi, fizyolojik transendotelyal akış seviyesi ve çeşitli vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) dağılımı ile aynı anda uyarılmasını sağlayan otomatik olarak kontrol edilen, yüksek verimli bir sirkülasyon mikroakışkan sistemi sağlıyoruz.

Neovaskülarizasyonun İlk Olayını Taklit Etmek için Mikroakışkan Model

Bu tahlil, filizlenen anjiyogenezi in vitro olarak kontrol eden biyolojik süreçleri analiz etmek için 3D-kollajen jel içinde kültürlenmiş embriyoid cisimlere farklılaştırılmış fare embriyonik kök hücrelerini kullanır. Bu teknik, ilaçları test etmek, hastalıkları modellemek ve embriyonik olarak ölümcül olan delesyonlar bağlamında spesifik genleri incelemek için uygulanabilir.

In Vitro Vasküler Hastalık Modellemesi ve İlaç Testi için Fare Embriyonik Kök Hücreleri Kullanılarak Anjiyogenezin Üç Boyutlu Filizlenme Testi

Burada, insan aort duvarındaki düz kas hücrelerinin in vivo biyomekanik suşunu çoğaltmak için bir insan aort düz kas hücresi organı-on-a-chip modeli geliştirdik.

Aort Duvarındaki Biyomekanik Suşu Özetlemek İçin İnsan Aort Düz Kas Hücresi Organ-On-A-Chip Modelinin Yapımı

Burada, pnömonektomiyi taklit etmek için tasarlanmış bir çip üzerinde organ (OOC) sistemi oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Bu sistem, glikokaliks bozukluğu ile pnömonektomi sonrası komplikasyonlar arasındaki potansiyel ilişkiyi araştırır.

Pnömonektomi Sonrası Endotelyal Glikokaliksin 3D Akışkan Çipte Modellenmesi - Vasküler Tabanlı Çip Üzerinde Organ Sistemi Üretmeye Yönelik Bir Yaklaşım

Bu makale, zebra balığı embriyolarında mekanik damar yaralanması oluşturmak için bir yöntemi açıklamaktadır. Bu yaralanma modeli, gerçek zamanlı mikroskopi için ideal olan bir organizmada hemostaz, yaralanmaya bağlı iltihaplanma ve yara iyileşmesini incelemek için bir platform sağlar.

Zebra balığı Embriyolar Mekanik Gemi Sakatlık

Keşfedin, insan iPS hücrelerinden endotel hücreleri farklılaştırma ve akışkanlık çipinde mekanik stimülasyon yöntemini. Bu protokol, endotel mekanobiyolojisini kontrollü ortamda incelemek için yüksek saflıkta hücre elde edilmesini sağlar.

In Vitro Gelişimsel Mekanobiyolojiyi İncelemek için Çip Üzerinde Fetal İnsan Gemisi Modeli

Daha fazla video keşfet