Epitel Doku Dinamiğinin İnverted Konfokal Mikroskopta Uzun Süreli İzlenmesi için Kolaylaştırılmış İntravital Görüntüleme Yaklaşımı
June 30th, 2023
Protokol, ters konfokal mikroskopi kullanarak intravital görüntülemeyi basitleştirmek için yeni bir araç sunar.
Ters konfokal mikroskop kullanarak canlı fareler üzerinde intravital görüntüleme yapmak için bir araç geliştirdik. Bu, homeostaz boyunca cilt hücresi dinamiklerini izlememizi ve hastalığın başlangıcı ve ilerlemesi sırasında hücre davranışlarını karşılaştırmamızı sağlar. Multifoton mikroskobu, intravital hücre takibini sağlamak için uygulanan birincil yaklaşımdır.
Bununla birlikte, bu mikroskopların dezavantajları arasında sınırlı günlük görüntüleme çok yönlülüğü, yüksek maliyet ve teknik karmaşıklık yer alır. Yeni aracımız, in vivo intravital görüntüleme için çok yönlü ters konfokal mikroskopların kullanılmasını sağlar. Tasarım dosyasını değiştirerek, sahne ekleme boyutları, herhangi bir ters mikroskop markasına uyacak şekilde özelleştirilebilir.
Objektif deliği, tercih edilen herhangi bir hayvan modeline ve dokusuna uyacak şekilde yeniden boyutlandırılabilir ve yeniden konumlandırılabilir.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu çalışma, canlı farelerde inverte konfokal mikroskopi kullanarak intravital görüntüleme yapmak için yeni bir araç sunarak, araştırmacıların homeostaz ve hastalık ilerlemesi sırasında cilt hücre dinamiğini izlemelerine olanak tanır. Yeni araç, çoklu foton mikroskopinin sınırlamalarını gidererek, intravital görüntülemeyi daha erişilebilir ve çok yönlü hale getirir.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Araştırma Alanı
- Intravital görüntüleme
- Cilt hücre dinamiği
- Mikroskop teknikleri
Arka Plan
- Çoklu foton mikroskopinin mevcut sınırlamaları arasında yüksek maliyetler ve teknik karmaşıklık bulunmaktadır.
- Inverte konfokal mikroskoplar, canlı dokular için çok yönlü görüntüleme seçenekleri sunar.
- Özelleştirilmiş tasarım, farklı hayvan modellerinde uyarlanabilirlik sağlar.
Kullanılan Yöntemler
- Özelleştirilmiş 3D baskılı eklentiler ile inverte konfokal mikroskopi
- Biyolojik sistem olarak canlı fareler
- Çeşitli dokular için özelleştirilebilir görüntüleme kurulumu
Ana Sonuçlar
- Fluoresan olarak etiketlenmiş kulak dokusunun Z-stacklarının minimal kayma ile başarılı bir şekilde elde edilmesi.
- Uzun süreler boyunca cilt hücrelerinin (mCherry ve GFP pozitif) sürekli görüntülenmesi.
- İstikrarlı görüntüleme için 3D baskılı canlı görüntüleme eklentilerinin etkinliğinin doğrulanması.
Sonuçlar
- Bu çalışma, intravital görüntüleme yeteneklerini geliştirmek için yenilikçi bir yaklaşım gösterir.
- Araç, canlı modellerde hücresel dinamikleri inceleme yetisini artırarak hücresel biyoloji araştırmasını ilerletir.
