Name: Hepatik Glikoz Üretimi, Ürejenez ve Lipoliz, Perfüze Fare Karaciğer Modeli Kullanılarak Ölçüldü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 21 s
Description: Öğrenin fare karaciğerinde in situ perfüzyon yöntemiyle glikoz üretimi, ürejenez ve lipolizin dakika dakika ölçümünü. Bu teknik, karaciğer metabolizmasının akut düzenlenmesini ve glukagon sinyal yollarını incelemek için translasyonel bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Çalışmalar ve Nicolai J. Wewer Albrechtsen, Novo Nordisk Vakfı Mükemmeliyet Gelişmekte Olan Araştırmacı Hibe - Endokrinoloji ve Metabolizma (Başvuru No. NNF19OC0055001), Avrupa Diyabet Araştırmaları Vakfı Geleceğin Lideri Ödülü (NNF21SA0072746) ve Danimarka Bağımsız Araştırma Fonu, Sapere Aude (1052-00003B). Novo Nordisk Vakfı Protein Araştırmaları Merkezi, Novo Nordisk Vakfı tarafından finansal olarak desteklenmektedir (Hibe sözleşmesi NNF14CC0001). Şekil 1B, biorender.com ile oluşturulmuştur. Dr. Rune E. Kuhre'ye (Novo Nordisk A/S) perfüze fare karaciğeri ile ilgili verimli görüşmeler için teşekkür ederiz.

Tüm hayvan deneyleri, Danimarka Hayvan Deneyleri Müfettişliği, Danimarka Çevre ve Gıda Bakanlığı (izin 2018-15-0201-01397) ve yerel etik komitesinin izniyle 2010/63/EU sayılı AB direktifi, Ulusal Sağlık Enstitüleri (yayın No. 85-3) ve hayvan deneylerini düzenleyen Danimarka mevzuatının yönergeleri izlenerek gerçekleştirilmiştir (1987). Bu terminal bir prosedürdür ve ölüm nedeni derin anestezi altında diyaframın kansızlaşması ve delinmesidir.
1. Deney hayvanları
<ol><li>İstenilen suş, yaş ve cinsiyete sahip fareler elde edin. Bu çalışmada 11-16 haftalık erkek C57BL / 6JRj fareleri kullanılmıştır. Kafes başına 5 adede kadar erkek veya 8 dişi fareyi, yem ve suya ad libitum erişimi ile barındırın ve sabah 6'dan akşam 6'ya kadar ışıklar açıkken 12 saat/12 saat aydınlık-karanlık döngüsünü sürdürün.</li>
</ol>2. Ameliyat öncesi hazırlıklar
<ol><li>Karaciğer perfüzyon tamponu yapın.<ol><li>Krebs-Henseleit Tamponu. 118 mmol/L NaCl, 4,7 mmol/L KCl, 1,2 mmol/LMgSO4 ve 1,2 mmol/L KH2PO4'ü dH2O içinde karıştırın ve çözün.</li>
		<li>25 mmol/L NaHCO3'ü çözün ve karıştırırken tampona yavaşça ekleyin. Tamponu 4 derecede saklayın. Tampon en az 1 ay stabildir. NOT: CaCl2 ve NaHCO3 eklenmeden önce ayrı ayrı çözülmezse çökelme meydana gelebilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Perfüzyon tamponunu 2 μm'lik bir filtreden süzün ve HCl kullanarak pH'ı 7.5'e ayarlayın. NOT: Kapalı şişelerde saklandığında bile pH zamanla arttığı için bu adım deney gününde gerçekleştirilmelidir.</li>
	<li>Test bileşiklerini istenen nihai konsantrasyondan daha yüksek bir konsantrasyonda hazırlayın (örneğin, filtrelenmiş ve pH ayarlı Krebs-Henseleit perfüzyon tamponunda bir yan kol pompası ile 20 mL / dak hızında infüze edildiğinde 0.175x konsantrasyon). Uygunsa, Krebs-Henseleit perfüzyon tamponundaki test bileşiklerini, taşıyıcı olarak %1 BSA eklenmiş (tüm peptitler için gerekli olan boru ve cam eşyalara yapışmayı önlemek için), uygun boyutta bir filtreden süzülerek seyreltin.</li>
</ol>3. Operasyon ve perfüzyon
NOT: Bu çalışmada kullanılan perfüzyon kurulumunun bir gösterimi Şekil 1'de verilmiştir.
<ol><li></li><li><li><li><li><li></li><li><li><li><li><li><li></li><li><li><li><li></ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65596/65596fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65596/65596fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65596/65596fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65596/65596fig02large.jpg" target="_blank"></a><ol><li><li><li><li></li><li> </li><li></li><li><li><li></ol><ol><li> </li></ol><ol><li> </li><li><li></ol>

Substratlara Metabolik Tepkileri İncelemek için Yerinde Fare Karaciğer Perfüzyon Modeli

<ol><li>Bale, S. S., Geerts, S., Jindal, R., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+co-culture+of+rat+parenchymal+and+non-parenchymal+liver+cells+to+evaluate+cellular+interactions+and+response%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Isolation and co-culture of rat parenchymal and non-parenchymal liver cells to evaluate cellular interactions and response.</a> Scientific Reports. 6, 25329(2016).</li>
<li>Lauschke, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massive+rearrangements+of+cellular+MicroRNA+signatures+are+key+drivers+of+hepatocyte+dedifferentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Massive rearrangements of cellular MicroRNA signatures are key drivers of hepatocyte dedifferentiation.</a> Hepatology. 64 (5), 1743-1756 (2016).</li>
<li>Seirup, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+changes+in+chromatin+structure+during+dedifferentiation+of+primary+hepatocytes+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics%22%5BJournal%5D)">Rapid changes in chromatin structure during dedifferentiation of primary hepatocytes in vitro.</a> Genomics. 114 (3), 110330(2022).</li>
<li>Gupta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+in+vitro+human+liver+models+to+in+vivo+human+liver+using+RNA-Seq%5BTitle%5D)+AND+%22Archive+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Comparing in vitro human liver models to in vivo human liver using RNA-Seq.</a> Archive of Toxicology. 95 (2), 573-589 (2021).</li>
<li>Bell, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+primary+human+hepatocyte+spheroids+as+a+model+system+for+drug-induced+liver+injury%2C+liver+function%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Characterization of primary human hepatocyte spheroids as a model system for drug-induced liver injury, liver function, and disease.</a> Scientific Reports. 6, 25187(2016).</li>
<li>Dewyse, L., Reynaert, H., van Grunsven, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Best+practices+and+progress+in+precision-cut+liver+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Best practices and progress in precision-cut liver slice cultures.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (13), 7137(2021).</li>
<li>Li, X., George, S. M., Vernetti, L., Gough, A. H., Taylor, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+glass-based%2C+continuously+zonated+and+vascularized+human+liver+acinus+microphysiological+system+%28vLAMPS%29+designed+for+experimental+modeling+of+diseases+and+ADME%2FTOX%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">A glass-based, continuously zonated and vascularized human liver acinus microphysiological system (vLAMPS) designed for experimental modeling of diseases and ADME/TOX.</a> Lab on a Chip. 18 (17), 2614-2631 (2018).</li>
<li>Broutier, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+and+establishment+of+self-renewing+human+and+mouse+adult+liver+and+pancreas+3D+organoids+and+their+genetic+manipulation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Culture and establishment of self-renewing human and mouse adult liver and pancreas 3D organoids and their genetic manipulation.</a> Nature Protocols. 11 (9), 1724-1743 (2016).</li>
<li>Bartošek, I., Guaitani, A., Miller, L. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarto%C5%A1ek%2C+I+%22Isolated+Liver+Perfusion+and+its+Applications%22">Isolated Liver Perfusion and its Applications</a>. , Raven Press. New York. (1973).</li>
<li>Gores, G. J., Kost, L. J., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolated+perfused+rat+liver%3A+conceptual+and+practical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The isolated perfused rat liver: conceptual and practical considerations.</a> Hepatology. 6 (3), 511-517 (1986).</li>
<li>Mischinger, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+technique+for+isolated+perfusion+of+rat+livers+and+an+evaluation+of+perfusates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">An improved technique for isolated perfusion of rat livers and an evaluation of perfusates.</a> Journal of Surgical Research. 53 (2), 158-165 (1992).</li>
<li>Vairetti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+the+liver+temperature+employed+during+machine+perfusion+and+reperfusion+damage%3A+role+of+Ca2%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Correlation between the liver temperature employed during machine perfusion and reperfusion damage: role of Ca2.</a> Liver Transplantation. 14 (4), 494-503 (2008).</li>
<li>Ferrigno, A., Richelmi, P., Vairetti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Troubleshooting+and+improving+the+mouse+and+rat+isolated+perfused+liver+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Troubleshooting and improving the mouse and rat isolated perfused liver preparation.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 67 (2), 107-114 (2013).</li>
<li>Zawada, R. J. X., Kwan, P., Olszewski, K. L., Llinas, M., Huang, S. -G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+determination+of+urea+concentrations+in+cell+culture+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantitative determination of urea concentrations in cell culture medium.</a> Biochemistry and Cell Biology. 87 (3), 541-544 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar bu makaleyle ilgili herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

İzole perfüze fare karaciğeri, hepatik metabolizmanın dinamikleri ve moleküler mekanizmaları üzerine yapılan çalışmalar için güçlü bir araştırma aracıdır. Dakikadan dakikaya numune toplama imkanı, bir test bileşiğinin karaciğer üzerindeki doğrudan etkisinin ayrıntılı bir değerlendirmesini sağlar. İn vivo çalışmalarla karşılaştırıldığında, perfüze karaciğer, kan tarafından taşınan karaciğer dışı faktörlerden kaçınarak ve deneysel koşullar üzerinde tam kontrol ile karaciğer metabolizmasını izole bir şekilde incele...

Karaciğer metabolizmada önemli bir organdır. Glikoz, lipid ve amino asit metabolizmasını düzenleyerek tüm vücut enerji dengesinin kontrolünde anahtar rol oynar. Dünya çapında karaciğer hastalıklarındaki artış, önemli bir küresel sağlık yükü olarak ortaya çıkmaktadır ve patofizyoloji ve karaciğer fonksiyonları üzerindeki sonuçları hakkında daha fazla bilgiye ihtiyaç vardır.
İn vivo çalışmaları tamamlamak için karaciğer araştırmaları için çeşitli in vitro modeller geliştirilmiştir. Kemirgenlerden ve insanlardan izole edilmiş ve kültürlenmiş primer hepatositler yaygın olarak kullanılmaktadır. Parankimal olmayan hücreler, diferansiyel ve gradyan santrifüjleme kullanılarak hepatositlerden ayrılabilir ve farklı hücre tiplerinin ko-kültürü, hücreler arası karışma1'i incelemek için yararlıdır. Primer insan hepatositleri, ilaç toksisitesini test etmek için altın standart olarak kabul edilse de, birkaç çalışma, hepatositlerin doku kültüründe hızla farklılaştığını ve bunun sonucunda hepatik fonksiyonların kaybına neden olduğunu göstermiştir 2,3,4. 3D sferoid sistemdeki hepatosit kültürü, farklılaşmayı iyileştirir, daha kararlıdır ve karaciğeri in vivo olarak geleneksel 2D kültür sistemlerinden daha yüksek derecede taklit ediyor gibi görünmektedir5. Hassas kesilmiş karaciğer dilimleri, doku mimarisini sağlam tutan ve karaciğerde bulunan parankimal olmayan hücreleri içeren bir başka köklü in vitro modeldir6. Daha gelişmiş in vitro modeller arasında çip üzerinde karaciğer7 ve karaciğer organoidleri8 bulunur. Bununla birlikte, tüm bu yaklaşımlarla, vektörel portal-hepatik ven akışı da dahil olmak üzere yapısal bütünlük ve akış dinamiklerinde bir kayıp vardır ve bu da genellenebilirliği büyük olasılıkla etkiler.
İzole perfüze sıçan karaciğeri ilk olarak 1855'te Claude Bernard tarafındantanımlanmıştır 9 ve hala karaciğer biyolojisi, toksikoloji ve patofizyoloji çalışmaları için çeşitli bilimsel alanlarda kullanılmaktadır. Perfüze karaciğerin yukarıda belirtilen in vitro modellere göre avantajları arasında hepatik mimarinin korunması, vasküler akış, hepatosit polaritesi ve zonlaması ve hepatositler ile parankimal olmayan hücreler arasındaki etkileşimler yer alır. İn vivo çalışmalarla karşılaştırıldığında, perfüze karaciğer, kan tarafından taşınan karaciğer dışı faktörlerden kaçınarak ve deneysel koşullar üzerinde tam kontrol ile karaciğer metabolizmasının izole bir şekilde incelenmesine izin verir. 10,11,12,13 yıllarında sıçan karaciğer perfüzyon modelini geliştirmek için çeşitli değişiklikler yapılmıştır. İzole perfüze karaciğer çalışmaları için fareler kullanılmış olsa da, daha az literatür mevcuttur. Burada, fare karaciğerinden gelen hepatik venöz atık suda gerçek zamanlı olarak ölçülen metabolik substratlara ve hormonlara akut ve doğrudan metabolik yanıtları incelemek için portal ven ve suprahepatik vena kava inferiorunun kanülasyonu ile fare karaciğerinin in situ perfüzyonu için bir yöntem sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>3 musluk</td><td>BD</td><td>394601</td><td></td></tr><tr><td>Altromin ıslah diyeti</td><td>Altromin Spezialfutter</td><td>1319</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür dihidrat (CaCl2&#183; 2H2O)</td><td>Sigma</td><td>C8106</td><td></td></tr><tr><td>Kateterler (0,7 mm)</td><td>BD</td><td>381812</td><td></td></tr><tr><td>Filtre kağıdı (gözenek boyutu 2,0 &# 181; m)</td> <td>Millipore</td><td>AP2029325</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz kiti</td><td>QuantiChromTM</td><td>DIGL-100</td><td>Düşük konsantrasyon protokolü</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>MSD Hayvan Sağlığı</td><td>511485</td><td>90 mg / kg</td></tr><tr><td>Ligatür (siyah steril ipek)</td><td>Agnthos</td><td>14739</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat (MgSO4)</td> <td>Sigma</td><td>230391</td><td></td></tr><tr><td>Esterleşmemiş yağ asit kiti</td><td>Fujifilm Wako Chemicals</td><td>NEFA-HR(2)</td><td></td></tr><tr><td>Ameliyat masası, tripod standında ısıtmalı, tip 873</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td></td><td></td>733776</tr><tr><td>Potasyum klorür (KCl)</td> <td>Sigma</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum dihidrojen fosfat (KH2 PO 4)</td> <td>Merck</td><td>1.04877</td><td></td></tr><tr><td>Makaralı Pompa, dört kanallı</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td>730100</td><td></td></tr><tr><td>Şık bant</td><td>Mediq danmark</td><td>4001910</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat (NaHCO3)</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td><td>Sigma</td><td>S1679</td><td></td></tr><tr><td>Termostatik Sirkülatör</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td>730125</td><td>Banyo hacmi 3 L, 230 V/50 Hz</td></tr><tr><td>Boru</td><td>Tygon</td><td>E3603</td><td>İç çap 1,59 mm, dış çap 3,18 mm</td></tr><tr><td>Üniversal perfüzyon sistemi</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td>732316</td><td>Temel ünite uniper UP-100, tip 834</td></tr><tr><td>Vamin</td><td>Fresenius Kabi</td><td>B05ABA01</td><td>Karışık amino asitler</td></tr><tr><td>Damar kelepçesi adaptörü</td><td>Deutsche Biomedical</td><td>DBC1002</td> Gemi kelepçeleri Deutsche Biomedical DBC1005 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Windkessel</td><td>Harvard Bioscience, Inc.</td><td></td><td></td>732068</tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Rompun Veteriner 530701</td><td></td><td>10 mg/kg</td></tr></tbody></table>

hepatik glikoz Üretimi, Ürejenez ve lipoliz, perfüze fare karaciğer modeli kullanılarak Ölçüldü

Hepatic Glucose Production, Ureagenesis, and Lipolysis Quantified using the Perfused Mouse Liver Model

Karaciğer, besin metabolizması da dahil olmak üzere çok sayıda fonksiyona sahiptir. Diğer in vitro ve in vivo karaciğer araştırma modellerinin aksine, izole edilmiş perfüze karaciğer, karaciğer biyolojisi ve metabolizmasının, karaciğer dışı faktörlerin etkisinden ayrılmış, bozulmamış bir hepatik mimari ile tüm karaciğerde incelenmesine izin verir. Karaciğer perfüzyonları başlangıçta sıçanlar için geliştirilmiştir, ancak yöntem farelere de uyarlanmıştır. Burada fare karaciğerinin in situ perfüzyonu için bir protokol tarif ediyoruz. Karaciğer, oksijenli Krebs-Henseleit bikarbonat tamponu ile portal venden antegrad olarak perfüze edilir ve çıktı, devreyi kapatmak için infrahepatik inferior vena kavanın klemplenmesi ile suprahepatik inferior vena kavadan toplanır. Bu yöntem kullanılarak, bir test bileşiğinin doğrudan hepatik etkileri, ayrıntılı bir zaman çözünürlüğü ile değerlendirilebilir. Karaciğer fonksiyonu ve canlılığı en az 3 saat boyunca stabildir ve aynı deneye iç kontrollerin dahil edilmesine izin verir. Bu modeli kullanan deneysel olasılıklar çoktur ve karaciğer fizyolojisi ve karaciğer hastalıkları hakkında fikir verebilir.

Bir uyaranın veya substratın ilgilenilen molekülün salınmasına yol açıp açmadığını belirlemek için sabit bir taban çizgisi gereklidir. Şekil 3A'da başarılı bir deney örneği gösterilmektedir. Perfüze karaciğerde üre üretimi 2 dakikalık aralıklarla ölçülür ve ortalama ± SEM olarak gösterilir. İki stimülasyon periyodunun her birinden önceki başlangıç periyotları sabittir. İki stimülasyon periyodu boyunca ortalama üre üretimi ve ilgili önceki taban çizgileri <str...

Burada, karaciğer mimarisini bozmadan, ancak karaciğer dışı faktörlerin yokluğunda karaciğer metabolizmasının akut ve doğrudan regülasyonunu incelemek için fare karaciğerinin yerinde perfüzyonu için sağlam bir yöntem sunuyoruz.

Hepatik Glikoz Üretimi, Ürejenez ve Lipoliz, Perfüze Fare Karaciğer Modeli Kullanılarak Ölçüldü

The liver has numerous functions, including nutrient metabolism. In contrast to other in vitro and in vivo models of liver research, the isolated perfused ...

Laboratuvarımızda, karaciğerin yaygın ve nadir görülen karaciğer hastalıklarına nasıl tepki verdiğini ve bu adaptasyonun diyabet öncesi bir duruma nasıl yatkın olabileceğini araştırıyoruz. Karaciğer, besin mevcudiyetindeki ve hormon konsantrasyonlarındaki değişikliklere, ilgili genlerin artan transkripsiyonuyla, ancak daha da önemlisi, akut ve transkripsiyonel olmayan düzenleme ile yanıt verir. Perfüze karaciğer ile, metabolitlerin bir dakikadan dakikaya bir çözünürlükte salınması da dahil olmak üzere metabolizmanın tüm yönlerini ölçebiliriz.Bu tekniğin diğer in vitro modellere göre avantajları, karaciğerin sağlam bir karaciğer mimarisi ile yerinde bırakılmasıdır. Ve karaciğerin en az üç saat boyunca canlı olması, her fare karaciğerinin kendi kontrolü olmasına izin verir. Son olarak, çeviri alaka düzeyini artırmak.Fare perfüze karaciğer sistemini kullanarak, glukagon hormonunun yeni sinyal kaskadını tanımlayabilir ve karakterize edebiliriz. Bu, glukagon ve diğer hormonlar, yağlı karaciğer hastalığı ve diyabetli hastalarda karaciğerin dismetabolik durumlarında hayati bir rol oynayabileceğinden önemli olabilir.

hepatic-glucose-production-ureagenesis-lipolysis-quantified-using

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, hasat edilmiş fare organlarında hücre dışı glikoz analog tükenmesini ölçmek için ex vivo bir teknik gösteriyoruz. Fare dokusunun, hücreler tarafından alınan floresan etiketli deoksiglukoz içeren bir çözelti içinde inkübe edilmesini içerir. Glikoz analog alımı, inkübe edilmiş ortamın floresansının ölçülmesiyle dolaylı olarak belirlenebilir.

Hücre Dışı Floresan Glikoz Analog Tükenmesinin Ölçümü: Ex vivo Fare Organlarında Glikoz Alımını Değerlendirmek İçin Vekil Bir Ölçüm Tekniği

De novo lipogenez ve β-yağ asidi oksidasyon hepatosit kilit metabolik, yağlı karaciğer hastalığı da dahil olmak üzere birçok metabolik bozukluklar, içinde tedirgin olan yollar oluşturmaktadır. Burada fare primer hepatositlerin izolasyonu göstermek ve β-yağ asidi oksidasyon ve lipogenez ölçümü açıklar.

Fare İlköğretim Hepatositlerde Yağ Asidi Oksidasyon ve lipogenez Belirlenmesi

Burada, hepatik steatozun in vivo ve in vitro modellerini oluşturmak ve steatotik fenotipleri ve ilgili fizyolojik parametreleri analiz etmek için optimize edilmiş yöntemler açıklanmaktadır.

Optimize Analizi<em&gt; İn Vivo</em&gt; ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Karaciğer Steatoz

Primer hepatositler, karaciğer yanıtını ve metabolizmasını in vitro olarak incelemek için değerli bir araçtır. Ticari olarak temin edilebilen reaktifler kullanılarak, fare primer hepatosit izolasyonu için geliştirilmiş bir zaman ve emek verimli protokol geliştirilmiştir.

Fare Primer Hepatosit İzolasyonu için Geliştirilmiş Zaman ve İş Gücü Verimli Protokolü

Bu çalışma, polikistik over sendromu fare modelinde hepatik glikoz üretiminin hem oruç hem de glikoz bakımından zengin durumlarda kuyruk damarı yoluyla stabil bir izotopik glikoz izleyici kullanılarak doğrudan ölçülen ölçümünü açıklar.

Polikistik Over Sendromu Fare Modelinde Hepatik Glikoz Üretiminin Değerlendirilmesi

Protokol, portal ven perfüzyonu yoluyla metabolik çalışmalar için sağlam bir fare karaciğerini rezeke etmenin basit bir yöntemini açıklar.

Eski Vivo Farede Portal Damarından Hepatik Perfüzyon

Floresan olarak etiketlenmiş glikozun hücre dışı tükenmesi, glikoz alımı ile ilişkilidir ve eksize edilmiş organlarda ve hücre kültürlerinde glikoz alımının yüksek verimli taranması için kullanılabilir.

Ex Vivo'da Hücrelerde ve Dokularda Glikoz Alımının Dolaylı Bir Ölçüsü Olarak Hücre Dışı Glikoz Tükenmesi

Hepatik insülin klerensi, glikoz homeostazını düzenlemek için kritik öneme sahiptir. Bu makale, farelerde yerinde karaciğer insülin klerens oranını doğrudan değerlendirmek için kullanıcı dostu bir hepatik perfüzyon prosedürünü açıklamaktadır.

Farelerde İnsitülin Klerensinin Yerinde Karaciğer Perfüzyonu ile Değerlendirilmesi

Burada, olası karışıklıkların azaltılması ile endokrin pankreas fonksiyonunu değerlendirmek için ek bir teknik olarak, sağlam bir pankreas ile fare damar sistemi yoluyla perfüzyon yoluyla glikoz ile uyarılan insülin sekresyonu (GSIS) gerçekleştirme hakkında ayrıntılar sunuyoruz.

Sağlam Bir Pankreas ile Farelerin Damar Sisteminden Perfüzyon Yoluyla Glikozla Uyarılan İnsülin Sekresyonu

Sıçanlarda transplantasyon'a biyomedikal araştırmalar için vazgeçilmez bir deneysel model. Burada% 50 parsiyel greft kullanılarak hepatik arter rekonstrüksiyonu ile ortotopik sıçan karaciğer nakli için cerrahi işlemler sunuyoruz.

Hepatik Arter İmar Kısmi Ortotopik Karaciğer Nakli Bir Rat Modeli Cerrahi İşlemleri

Öğrenin fare karaciğerinde in situ perfüzyon yöntemiyle glikoz üretimi, ürejenez ve lipolizin dakika dakika ölçümünü. Bu teknik, karaciğer metabolizmasının akut düzenlenmesini ve glukagon sinyal yollarını incelemek için translasyonel bir model sunar.

Hepatik Glikoz Üretimi, Ürejenez ve Lipoliz, Perfüze Fare Karaciğer Modeli Kullanılarak Ölçüldü

Daha fazla video keşfet