Name: Omurgalı Retinasında İç Nükleer Tabaka Nöronlarını İncelemek için Geliştirilmiş Bir Düz Montaj Preparatı Olarak Bölünmüş Retina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-16T11:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Keşfedin fare retinasında iç nükleer tabaka nöronlarına erişimi hızlandıran bölünmüş retina tekniğini. Bu yöntem antikor difüzyonunu 20 kat artırarak immünohistokimya ve elektrofizyoloji deneylerini kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma aşağıdaki NIH hibeleri ile desteklenmiştir: NIH hibe R01EY031596 (CM'ye); NIH hibe R01EY029985 (CM'ye); NIH hibe P30EY010572 (CM'ye); NIH hibe R01EY032564 (BS'ye). Retina kesitlerinin hazırlanmasındaki teknik desteği için Tammie Haley'e ve bu çalışmada kullanılan mRNA FISH problarına cömertçe katkıda bulunduğu için Dr. Charles Allen'a teşekkür ederiz.

Murin bölünmüş retinada bipolar ve yatay nöronal hücrelerin incelenmesi

<ol><li>Morgans, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransmitter+release+at+ribbon+synapses+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+%26+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Neurotransmitter release at ribbon synapses in the retina.</a> Immunology & Cell Biology. 78 (4), 442-446 (2000).</li>
<li>Euler, T., Haverkamp, S., Schubert, T., Baden, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+bipolar+cells%3A+elementary+building+blocks+of+vision%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Retinal bipolar cells: elementary building blocks of vision.</a> Nature Reviews Neuroscience. 15 (8), 507-519 (2014).</li>
<li>Barnes, S., Grove, J. C. R., McHugh, C. F., Hirano, A. A., Brecha, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horizontal+Cell+Feedback+to+Cone+Photoreceptors+in+Mammalian+Retina%3A+Novel+Insights+From+the+GABA-pH+Hybrid+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Horizontal Cell Feedback to Cone Photoreceptors in Mammalian Retina: Novel Insights From the GABA-pH Hybrid Model.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, (2020).</li>
<li>Walston, S. T., Chang, Y. C., Weiland, J. D., Chow, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+to+remove+photoreceptors+from+whole+mount+retina+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Method to remove photoreceptors from whole mount retina in vitro.</a> Journal of Neurophysiology. 118 (5), 2763-2769 (2017).</li>
<li>Stefanov, A., Novelli, E., Strettoi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inner+retinal+preservation+in+the+photoinducible+I307N+rhodopsin+mutant+mouse%2C+a+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Inner retinal preservation in the photoinducible I307N rhodopsin mutant mouse, a model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> Journal of Comparative Neurology. 528 (9), 1502-1522 (2020).</li>
<li>Matsuoka, R. L., Nguyen-Ba-Charvet, K. T., Parray, A., Badea, T. C., Chédotal, A., Kolodkin, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmembrane+semaphorin+signaling+controls+laminar+stratification+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transmembrane semaphorin signaling controls laminar stratification in the mammalian retina.</a> Nature. 470 (7333), 259-263 (2011).</li>
<li>Matsuoka, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance-Cue+Control+of+Horizontal+Cell+Morphology%2C+Lamination%2C+and+Synapse+Formation+in+the+Mammalian+Outer+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Guidance-Cue Control of Horizontal Cell Morphology, Lamination, and Synapse Formation in the Mammalian Outer Retina.</a> Journal of Neuroscience. 32 (20), 6859-6868 (2012).</li>
<li>Wässle, H., Puller, C., Müller, F., Haverkamp, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cone+Contacts%2C+Mosaics%2C+and+Territories+of+Bipolar+Cells+in+the+Mouse+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Cone Contacts, Mosaics, and Territories of Bipolar Cells in the Mouse Retina.</a> Journal of Neuroscience. 29 (1), 106-117 (2009).</li>
<li>Thoreson, W. B., Dacey, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+Cell+Types%2C+Circuits%2C+and+Mechanisms+for+Color+Vision+in+the+Vertebrate+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Diverse Cell Types, Circuits, and Mechanisms for Color Vision in the Vertebrate Retina.</a> Physiological Reviews. 99 (3), 1527-1573 (2019).</li>
<li>Guido, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+to+obtain+retinal+cell+preparations+highly+enriched+in+specific+cell+types.+Suitability+for+lipid+metabolism+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Protocols%22%5BJournal%5D)">A simple method to obtain retinal cell preparations highly enriched in specific cell types. Suitability for lipid metabolism studies.</a> Brain Research Protocols. 4 (2), 147-155 (1999).</li>
<li>Rose, K., Walston, S. T., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+photoreceptor+cell+compartments+in+mouse+retina+for+protein+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurodegeneration%22%5BJournal%5D)">Separation of photoreceptor cell compartments in mouse retina for protein analysis.</a> Molecular Neurodegeneration. 12 (1), 28(2017).</li>
<li>Todorova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+Layer+Separation+%28ReLayS%29+method+enables+the+molecular+analysis+of+photoreceptor+segments+and+cell+bodies%2C+as+well+as+the+inner+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Retinal Layer Separation (ReLayS) method enables the molecular analysis of photoreceptor segments and cell bodies, as well as the inner retina.</a> Scientific Reports. 12 (1), 20195(2022).</li>
<li>Shiosaka, S., Kiyama, H., Tohyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+the+separation+of+retinal+sublayers+from+the+entire+retina+with+special+reference+to+application+for+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for the separation of retinal sublayers from the entire retina with special reference to application for cell culture.</a> Journal of Neuroscience Methods. 10 (3), 229-235 (1984).</li>
<li>Ivanova, E., Hwang, G. S., Pan, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+transgenic+mouse+lines+expressing+Cre-recombinase+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Characterization of transgenic mouse lines expressing Cre-recombinase in the retina.</a> Neuroscience. 165 (1), 233-243 (2010).</li>
<li>Sarria, I., Orlandi, C., McCall, M. A., Gregg, R. G., Martemyanov, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermolecular+Interaction+between+Anchoring+Subunits+Specify+Subcellular+Targeting+and+Function+of+RGS+Proteins+in+Retina+ON-Bipolar+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intermolecular Interaction between Anchoring Subunits Specify Subcellular Targeting and Function of RGS Proteins in Retina ON-Bipolar Neurons.</a> The Journal of Neuroscience. 36 (10), 2915-2925 (2016).</li>
<li>Orlandi, C., Cao, Y., Martemyanov, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orphan+Receptor+GPR179+Forms+Macromolecular+Complexes+With+Components+of+Metabotropic+Signaling+Cascade+in+Retina+ON-Bipolar+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Orphan Receptor GPR179 Forms Macromolecular Complexes With Components of Metabotropic Signaling Cascade in Retina ON-Bipolar Neurons.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (10), 7153-7161 (2013).</li>
<li>Dikshit, A., Zong, H., Anderson, C., Zhang, B., Ma, X. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Visualization+of+RNA+and+Protein+Expression+in+Tissue+Using+a+Combined+RNAscopeTM+In+Situ+Hybridization+and+Immunofluorescence+Protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Visualization of RNA and Protein Expression in Tissue Using a Combined RNAscopeTM In Situ Hybridization and Immunofluorescence Protocol.</a> Methods in Molecular Biology. 2148, Clifton, N.J. 301-312 (2020).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAscope%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Molecular+Diagnostics%22%5BJournal%5D)">RNAscope.</a> The Journal of Molecular Diagnostics. 14 (1), 22-29 (2012).</li>
<li>Morgans, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM1+is+required+for+the+depolarizing+light+response+in+retinal+ON-bipolar+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">TRPM1 is required for the depolarizing light response in retinal ON-bipolar cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (45), 19174-19178 (2009).</li>
<li>Alessio, E., Zhang, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunostaining+of+whole-mount+retinas+with+the+CLARITY+tissue+clearing+method%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Immunostaining of whole-mount retinas with the CLARITY tissue clearing method.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 61 (7), 5054(2020).</li>
<li>Ferguson, L. R., Dominguez, J. M., Balaiya, S., Grover, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+Thickness+Normative+Data+in+Wild-Type+Mice+Using+Customized+Miniature+SD-OCT%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Retinal Thickness Normative Data in Wild-Type Mice Using Customized Miniature SD-OCT.</a> PLoS ONE. 8 (6), e67265(2013).</li>
<li>Ivanova, E., Toychiev, A. H., Yee, C. W., Sagdullaev, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+Protocol+for+Retinal+Wholemount+Preparation+for+Imaging+and+Immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+JoVE%22%5BJournal%5D)">Optimized Protocol for Retinal Wholemount Preparation for Imaging and Immunohistochemistry.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (82), e51018(2013).</li>
<li>Kolb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransmitters+in+the+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Webvision%3A+The+Organization+of+the+Retina+and+Visual+System%22%5BJournal%5D)">Neurotransmitters in the Retina.</a> Webvision: The Organization of the Retina and Visual System. , University of Utah Health Sciences Center. (1995).</li>
<li>Chaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Versatile+functional+roles+of+horizontal+cells+in+the+retinal+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Versatile functional roles of horizontal cells in the retinal circuit.</a> Scientific Reports. 7 (1), 5540(2017).</li>
<li>Egger, V., Diamond, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A17+Amacrine+Cells+and+Olfactory+Granule+Cells%3A+Parallel+Processors+of+Early+Sensory+Information%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A17 Amacrine Cells and Olfactory Granule Cells: Parallel Processors of Early Sensory Information.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, 600537(2020).</li>
<li>Dacey, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dopaminergic+amacrine+cell%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">The dopaminergic amacrine cell.</a> The Journal of Comparative Neurology. 301 (3), 461-489 (1990).</li>
<li>Park, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connectomic+analysis+reveals+an+interneuron+with+an+integral+role+in+the+retinal+circuit+for+night+vision%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Connectomic analysis reveals an interneuron with an integral role in the retinal circuit for night vision.</a> eLife. 9, 56077(2020).</li>
<li>Janssen-Bienhold, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin57+is+expressed+in+dendro-dendritic+and+axo-axonal+gap+junctions+of+mouse+horizontal+cells+and+its+distribution+is+modulated+by+light%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Connexin57 is expressed in dendro-dendritic and axo-axonal gap junctions of mouse horizontal cells and its distribution is modulated by light.</a> The Journal of Comparative Neurology. 513 (4), 363-374 (2009).</li>
<li>Jain, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+functional+organization+of+excitation+and+inhibition+in+the+dendrites+of+mouse+direction-selective+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">The functional organization of excitation and inhibition in the dendrites of mouse direction-selective ganglion cells.</a> eLife. 9, 52949(2020).</li>
<li>Marvin, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability%2C+affinity%2C+and+chromatic+variants+of+the+glutamate+sensor+iGluSnFR%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Stability, affinity, and chromatic variants of the glutamate sensor iGluSnFR.</a> Nature Methods. 15 (11), 936-939 (2018).</li>
<li>Strauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Center-surround+interactions+underlie+bipolar+cell+motion+sensitivity+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Center-surround interactions underlie bipolar cell motion sensitivity in the mouse retina.</a> Nature Communications. 13 (1), 5574(2022).</li>
<li>Marvin, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+fluorescent+sensor+for+in+vivo+imaging+of+GABA%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded fluorescent sensor for in vivo imaging of GABA.</a> Nature Methods. 16 (8), 763-770 (2019).</li>
<li>Beckwith-Cohen, B., Holzhausen, L. C., Wang, T. M., Rajappa, R., Kramer, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localizing+Proton-Mediated+Inhibitory+Feedback+at+the+Retinal+Horizontal+Cell-Cone+Synapse+with+Genetically-Encoded+pH+Probes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Localizing Proton-Mediated Inhibitory Feedback at the Retinal Horizontal Cell-Cone Synapse with Genetically-Encoded pH Probes.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 39 (4), 651-662 (2019).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkar beyan etmemektedir.

Fotoreseptörler foton absorpsiyonunu nörotransmitter salınımına dönüştürdükten sonra, BC'ler ve HC'ler görsel sinyali işleyen ilk retinal nöronlardır23. Bu nöronların önemi iyi takdir edilmekle birlikte, işlevlerinin çoğu tam olarak anlaşılmamış veya tamamen keşfedilmemiştir. Birçok BC ve HC fizyoloji çalışması, yanal bağlantıyı korurken INL nöronlarına erişimi iyileştiren düz montajlı bir retina preparatından faydalanabilir. Bölünmüş retina yönteminin geliştirilmesi, düz montaj oryantasyonunda BC'lerden ve HC'lerden yüksek kaliteli elektrofizyolojik kayıtlar ve mikroskopi verileri elde etmek için kolay bir protokol sağlama çabasını temsil eder. Burada tarif edilen bölünmüş retina hazırlığı, özel ekipman kullanılmadan retina izolasyonunu takiben fare başına yaklaşık 20 dakika (retina başına 10 dakika) içinde gerçekleştirilebilir. Yöntem, mevcut fotoreseptör çıkarma prosedürlerinden ilham alır, ancak basitlik, hız ve çok yönlülükte önemli gelişmeler sunar 4,10,11,12,13. Retina katmanlarını ayırmak için önceki yöntemlerin aksine, retina bölme, retinaya dondurulması, liyofilizasyon veya tekrar tekrar yapıştırıcı uygulanmasını gerektirmez. Uygulamada, neredeyse tüm fotoreseptörler nitroselüloz membran ile tek bir gözyaşı ile çıkarılabilir. Bu yaklaşımın hızı ve kolaylığı, retinanın karbojene Ames'ten geçirdiği süreyi en aza indirerek uzun süreler boyunca yüksek hücre canlılığı sağlar; bölünmüş retinalar, bölünmeden sonra birkaç saat boyunca karbojene Ames ortamında tutulabilir. Bu preparattaki INL nöronlarının sağlığının bir kanıtı olarak, bir canlı/ölü hücre boyası (Şekil 4) ve yama-kelepçe elektrofizyolojisi (Şekil 6), bir bölünmeyi takiben RBC'lerin ve HC'lerin yaşayabilirliğini doğrular.
Bölünmüş retinalarda fotoreseptör tabakasının çıkarılması, antikorların INL'ye difüzyon süresini önemli ölçüde azaltarak immünoişaretleme sırasında önemli bir avantaj sağlar. Birincil ve ikincil antikor etiketlemesi 2 saat içinde tamamlanabilir, bu da hedefe bağlı olarak 72 saat veya daha uzun sürebilengeleneksel düz montajlı boyamaya göre önemli bir gelişme 5,6,7,8,20,22. Sonuç olarak, mikroskopi verileri doku hazırlığı ile aynı gün elde edilebilir ve bu da immünofloresan deneylerinin hızını büyük ölçüde hızlandırır. mRNA prob tavlamasını kolaylaştırmak için, FISH deneyleri tipik olarak immünoetiketlemeden çok daha uzun fiksasyon süreleri (~ 24 saat) önerir18. Bununla birlikte, burada sunulan deneyler, 2 saatlik bir fiksasyonun hala istisnai FISH etiketlemesi ürettiğini göstermektedir (Şekil 5). Fiksasyon süresinin 30 dakikadan 2 saate uzatılmasına rağmen, mükemmel immüno-etiketleme elde etmek için antijen alma adımlarının gerçekleştirilmesi gerekli değildi, ancak bu antikor veya antijene göre değişebilir. FISH protokolündeki proteaz tedavisi, muhtemelen hedef epitopların yok edilmesi nedeniyle antikor etiketlemesine müdahale edebilir. Bu sorun, birden fazla epitopu hedef alan poliklonal antikorlar kullanılarak aşıldı ve epitop yıkımının immüno-etiketlemeyi engelleme olasılığını azalttı. Ek olarak, yeterli doku penetrasyonu sağlarken aşırı epitop değişikliğini önlemek için orta derecede bir proteaz tedavisi (ACD proteaz III) kullanıldı.
Bazen, retina bunun yerine dış nükleer tabakadan (ONL) bölünür ve INL hücreleri görünmeyen fotoreseptör soma katmanlarını geride bırakır. Bunu önlemek için, retinanın cam üzerinde tamamen düz durduğundan ve retinanın etrafındaki kalıntı sıvının çıkarıldığından emin olunmalıdır. Boya fırçası ile nitroselülozun üzerine daha sıkı bastırmak da ONL'den ayrılmayı önlemeye yardımcı olabilir. Zar çok ıslanırsa veya retina kendi üzerine katlanırsa, başarılı bir bölünme şansı büyük ölçüde azalacaktır. Hücre çekirdeklerini boyamak için DAPI kullanmak, bölünmenin kalitesini değerlendirmek ve kalan fotoreseptörlerin kapsamını belirlemek için yararlıdır. Fotoreseptör çekirdekleri daha küçük, daha parlak ve daha yüzeyseldir (Ek Şekil 3A), BC çekirdekleri ise daha büyük, daha sönük ve daha derindir (Ek Şekil 3B). Bazı durumlarda, yırtılma düzlemi retina parçası boyunca biraz değişecek ve bu da fotoreseptör hücre gövdelerinin tamamen çıkarılmadığı yamalara neden olacaktır (Ek Şekil 3C). Mikroskopi ve elektrofizyoloji uygulamaları için bu, fotoreseptörlerin uygun şekilde çıkarıldığı bölgelerden kaliteli veri toplama yeteneğini engellemez; Açıkta kalan iç retinanın geniş alanları, bir yama pipeti ile görüntüleme veya kayıt yaparken kolayca bulunabilir. Daha tam fotoreseptör çıkarılması isteniyorsa, ek bir nitroselüloz membran parçası ile ikinci bir yırtılma gerçekleştirilebilir, ancak %100 fotoreseptör çıkarılması garanti edilmez. Bu nedenle, artık fotoreseptör materyalinin sonuçları etkileyebileceği gen ekspresyonu veya proteomik çalışmalarda bölünmüş retinalar kullanılırken dikkatli olunması önerilir. Tek hücreli uygulamalar için, fotoreseptörlerden gelen veriler analizden çıkarılabileceğinden, bu endişe yersizdir.
Bölünmüş retina preparatının avantajları belki de en çok geniş alan internöronlarının elektrofizyolojik kayıtlarında belirgindir. Geleneksel dikey dilimler, geniş alanlı hücrelerin kapsamlı süreçlerini keserken, bölünmüş retina preparatı, OPL ve IPL'yi olduğu gibi bırakır ve HCs 24, A17s25, TH ACS 26 ve NOS-1 ACS27 gibi geniş alan hücrelerinden girdi yakalamaya izin verir. Bu nedenle, sonuçların yorumlanması ve retina dilimlerinden toplanan önceki verilerle karşılaştırılması dikkatli düşünmeyi gerektirir. Bununla birlikte, ışık stimülasyonunun farmakolojik taklitlerini kullanan deneylerde, bu sonuçlar retina dilimlerinden kaydedilen verilere benzemektedir19. ChR2'yi hücreye özgü promotörler altında eksprese ederek, istenen hücrenin dikey bilgi yolu üzerindeki etkisini araştırmak için INL'deki BC'lerden kayıt yaparken istenen bir hücre popülasyonu uyarılabilir. Amakrin hücreler gibi daha derin INL nöronlarından doğrudan kayıt, bölünmüş retinada da mümkündür. Bu durumda, yama elektrodunun önce daha yüzeysel INL nöronlarından geçmesi gerekirken, geleneksel bir tam montaj preparatına kıyasla yolunu tıkayan önemli ölçüde daha az doku vardır.
Bu yöntem, geniş alan hücrelerinin diğer nöronlar üzerindeki etkisini ölçmeye ek olarak, dendritleri OPL28'de geniş bir boşluk-bağlantı bağlantılı ağ oluşturan HC'lerden doğrudan tek hücreli yama klemplemesini sağlar. Yatay hücreler, retina yoluyla dikey bilgi iletimini şekillendiren fotoreseptörlere kritik geri bildirim gönderir. Bununla birlikte, HC'lerin dendritik alanları dikey dilimler halinde kesildiğinden, tek hücreli kayıt verileri eksiktir. Bu çalışma, ChR2 ile uyarılmış akımların üçlü bir transgenik fare hattında kaydedildiği anatomik ve fizyolojik olarak bozulmamış HC'leri sunmaktadır (Şekil 6 C-E). ChR2 stimülasyonunun dışında, bölünmüş retina endojen HC akımlarını ve boşluk bağlantı bağlantısı28'i incelemek için kullanılabilir. Bölünmüş retina, kimyasal uygulama veya ChR2 stimülasyonu ile indüklenen sinaptik bağlantı ve nöronal aktiviteyi incelemek için uygun bir model sağlarken, fotoreseptörlerin eksikliği, doğal ışık tepkilerinin veya ışık adaptasyon mekanizmalarının doğrudan araştırılmasını engeller.
Retinada in situ görüntüleme son yıllarda takdire şayan bir ilerleme kaydetmiştir. Bununla birlikte, görüntüleme çalışmalarının çoğu, tüm retina preparatlarında ganglion hücre tabakası ile sınırlıdır29. Yazarlar, bölünmüş retinada fotoreseptörlerin yokluğunun, onu OPL ve INL'de canlı kalsiyum görüntüleme için ideal bir model haline getireceğini öngörmektedir. Kalsiyum görüntülemenin ötesinde, bu model iGluSnFR30,31, iGABASnFR32 ve pHluorin 33 gibi genetik olarak kodlanmış biyosensörlerle kullanım için büyük bir potansiyele sahiptir. Bölünmüş retina preparatı ile birleştiğinde, bu güçlü araçlar, retinada ışık işlemeye katkıda bulunan BC'lerin ve HC'lerin sinaptik etkileşimlerini ve biyofiziksel özelliklerini keşfetmek için etkili bir yaklaşım sunabilir.

Retina, ışığın yakalandığı ve beyin tarafından yorumlanabilen elektrokimyasal bir sinyale dönüştürüldüğü arka gözde bulunan ince bir sinir dokusudur. Retinanın arkasında, çubuk ve koni fotoreseptörleri ışıkla uyarılır, bu da nörotransmitterglutamat 1'in tonik salınım oranını azaltır. Glutamat konsantrasyonundaki bu ışığa bağlı değişikliği deneyimleyen ve buna yanıt veren ilk nöronlar, somaları iç nükleer tabakanın (INL) en dış bölgesinde bulunan bipolar hücreler (BC'ler) ve yatay hücrelerdir (HC'ler). Bu ikinci dereceden nöronlar, retinada sinyal işlemenin ilk aşamasını gerçekleştirir ve ışık adaptasyonu, kontrast duyarlılığı ve uzamsal/renk karşıtlığı gibi görüşün kritik özelliklerini şekillendirir2. Bu işlevler BC'lere ve HC'lere atfedilmiş olsa da, bu süreçlerin altında yatan devre ve biyokimyasal mekanizmalar tam olarak anlaşılmamıştır3. Bu nedenle, BC ve HC fizyolojisini keşfetmek için araç ve yöntemlerin geliştirilmesi büyük önem taşımaktadır.
Dikey (enine) retina kesitleri, BC'leri ve HC'leri incelemek için en pratik model olduğunu uzun zamandır kanıtlamıştır; bununla birlikte, BC ve HC fizyolojisinin belirli yönlerine bu model altında deneyci tarafından erişilemez. HC'lerden doğrudan kayıtlar veya BC'ler üzerindeki etkilerinin dolaylı ölçümleri, bu hücrelerin lateral süreçleri dilimleme sırasında kesildiği için retinanın endojen bağlantısını yansıtmaz. Tüm retina preparatları, bu yanal süreçleri koruyarak bu sorunu ortadan kaldırır, ancak çevredeki retina katmanları bu hücrelere erişim için bir zorluk teşkil eder4. Tüm retina yuvasındaki INL nöronlarındanimmün boyama 5,6,7,8 ve yama klemp kayıtları9 ile ilgili çok sayıda örnek olsa da, bu verilerin toplanmasını hızlandırmak ve basitleştirmek için bir fırsat vardır. Enine kesitlerin doğal sınırlamaları ve tüm montaj modelinin zorlukları, bu alternatif düz montajlı retina preparatının geliştirilmesine ilham verdi.
Aşağıdaki çalışma, basitleştirilmiş yama klempleme ve daha hızlı, daha verimli immüno-etiketleme için BC'lere ve HC'lere erişimi geliştirmek için fotoreseptör tabakasını canlı, düz montajlı retinalardan kolayca çıkarmak için bir protokolü açıklamaktadır. İzole edilmiş bir retinanın her iki tarafına bağlı iki nitroselüloz membran parçasının soyulması, dokuyu fotoreseptör aksonları yoluyla yırtarak dış pleksiform tabakayı (OPL) ve tüm iç retina tabakalarını tutan bölünmüş bir retina bırakır. Diğerleri retinanın katmanlarını mekanik olarak ayırmak için protokolleri tanımlamış olsa da, bu yöntemler ya yama klempleme ve mikroskopi uygulamaları için uygun değildir ya da dokunun sıkıcı manipülasyonunu gerektirir. Bu yöntemlerin birçoğu, tabaka ayrımı için donmuş veya liyofilize doku gerektirir, bu da onları elektrofizyoloji deneyleriyleuyumsuz hale getirir 10,11,12. Diğerleri canlı doku için tasarlanmıştır, ancak fotoreseptörleri çıkarmak için filtre kağıdı 4,11 ile 5-15 ardışık peeling veya tripsin 13 ile tedavi gerektirir. Burada açıklanan teknik, fotoreseptör çıkarma prosedürünü basitleştirerek ve aşağı akış uygulamalarının repertuarını genişleterek öncüllerini geliştirir.

<table><tbody><tr><td>#1.5 cam kapak kaymaları</td><td>Fisherbrand</td><td>12544E</td><td></td></tr><tr><td>2 çift Dumont #5 forseps</td><td>Ted Pella</td><td>38125</td><td></td></tr><tr><td>25 gauge iğne</td><td>Becton Dickenson</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>470 nm LED</td><td>THORLABS</td><td>M470L2</td><td></td></tr><tr><td>5-306 kavisli makas</td><td>Miltex</td><td>5-306</td><td></td></tr><tr><td>9" tek kullanımlık pastör pipetleri&nbsp;</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-20D</td><td>Özel transfer pipeti yapmak için</td></tr><tr><td>Ai80d faresi</td><td>Jackson Laboratuvarları</td><td>25109</td><td>RRID: IMSR_JAX:025109</td></tr><tr><td>Ames Medium (L-Glutamat ile)</td><td>ABD Biyoloji</td><td>A1372-25</td><td></td></tr><tr><td>Amplifikatör Kontrol Yazılımı</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>Clampex 10.3 yazılımı</td><td></td></tr><tr><td>anti-kalbindin D28K antikor</td><td>Invitrogen</td><td>PA-5 85669</td><td>RRID: AB_2792808, konak tür = tavşan; 1:100 seyreltme</td></tr><tr><td>anti-CtBP2 antikor</td><td>BD Biosciences</td><td>612044</td><td>RRID:&nbsp; AB_399431, konak tür = fare; 1:5000 seyreltme</td></tr><tr><td>anti-GPR179 antikor</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Kirill Martemyanov'dan hediye; Scripps Araştırma Enstitüsü, Jupiter, FL; konak türü = koyun; 1:1000 seyreltme</td></tr><tr><td>anti-PKC alfa antikor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4334</td><td>RRID: AB_477345, konak tür = tavşan; 1:5000 seyreltme</td></tr><tr><td>anti-PKC alfa antikor</td><td>Santa Cruz Biyoteknolojisi</td><td>sc8393 AF594</td><td>RRID: AB_628142, konak tür = fare; 1:1000 seyreltme</td></tr><tr><td>anti-PSD95 antikor</td><td>BD Transdüksiyon Laboratuvarları</td><td>610495</td><td>RRID:&nbsp; AB_397862, konak tür = fare; 1:1000 seyreltme</td></tr><tr><td>anti-RGS11 antikor</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Ted Wensel'den hediye; Baylor Tıp Fakültesi, Houston, TX; &nbsp; konak tür = tavşan; 1:1000 ile 1:5000 arasında seyrelme</td></tr><tr><td>anti-Synaptophysin P38 antikor</td><td>Sigma</td><td>S-S5768</td><td>RRID: AB_477523, konak tür = fare; 1:1000 seyreltme</td></tr><tr><td>Aquamount montaj ortamı</td><td>Epredia</td><td>13800</td><td>Sürgü montaj ortamı</td></tr><tr><td>C57BL/6J fare</td><td>Jackson Laboratuvarları</td><td>000664</td><td>RRID: IMSR_JAX:000664</td></tr><tr><td>karbogen tankı</td><td>Matheson</td><td>NA</td><td>%95 O2 ve %5 CO2</td></tr><tr><td>Özel transfer pipeti</td><td>Özel yapım</td><td>NA</td><td>Talimatlar: Plasitc transfer pipetinin ucu konlaşmaya başladığı noktada makasla kesilsin. Cam pasteur pipetinin son 2-3 inçini güvenle kırmak için pense kullanın. Cam pasteur pipetinin dar ucunu plastik transfer pipetinin geniş ucuna takın. İki parçanın birleşiminin etrafına parafilm sarılıp mühürü güçlendirin.</td></tr><tr><td>Dijital optik güç ölçer</td><td>THORLABS</td><td>&nbsp; PM100D</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000</td><td></td></tr><tr><td>Elektrofizyoloji amplifikatörü</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>Axopatch 200B</td><td></td></tr><tr><td>Elektrofizyoloji mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>OLYMPUS, BX50WI</td><td>Dodt gradyan kontrast mikroskopisi</td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>HC PL APO CS2 40x/1.3&nbsp;</td><td>Leica</td><td>506358</td><td></td></tr><tr><td>HC PL APO CS2 63x/1.40&nbsp;</td><td>Leica</td><td>15506350</td><td></td></tr><tr><td>Hibritizasyon fırını</td><td>Robbins Scientific</td><td>Model 1000</td><td>sadece RNAscope protokolü için</td></tr><tr><td>Immedge hidrofobik bariyer kalemi</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>izofluran</td><td>Piramal Kritik Bakım</td><td>66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe (hassas görev silme)</td><td>Kimtech Bilimi</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Leica HC PL APO CS2 40x/1.3 yağ batdırma hedefi</td><td>Leica</td><td>506358</td><td></td></tr><tr><td>Leica HC PL APO CS2 63x/1.40 yağ daldırma hedefi</td><td>Leica</td><td>15506350</td><td></td></tr><tr><td>Leica TCS SP8 X konfokal mikroskob&nbsp;</td><td>Leica</td><td>Üretimi sona erdirildi</td><td></td></tr><tr><td>Orta 15 mm Petri kabı</td><td>Corning</td><td>25060-60</td><td>Retina diseksiyon sırasında gözler burada tutulur</td></tr><tr><td>Merit 97-275 çelik makas</td><td>Başarı</td><td>97-275</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipet Çekicisi</td><td>Sutter Enstrümanı</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Mm-Gabrd-C2 mRNA probu</td><td>ACD</td><td>459481-C2</td><td></td></tr><tr><td>Fare ötenazi odası</td><td>NA</td><td>NA</td><td>özel yapım; Cam bir cam kavanozun üstünü örten cam petri kabı.</td></tr><tr><td>Nitroselüloz membran filtreleri</td><td>GE Sağlık Yaşam Bilimleri; Whatman</td><td>7184-005</td><td>0.45 & mikro; m gözenek boyutu</td></tr><tr><td>Picospritzer</td><td>General Valve Corporation</td><td>Picospritzer II&nbsp;</td><td>metinde mikrohücresel enjeksiyon birimi olarak adlandırılır</td></tr><tr><td>Plastik transfer pipetleri</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-7M</td><td>Özel transfer pipeti yapmak için</td></tr><tr><td>Plastik boru</td><td>Tygon</td><td>R-603</td><td>Karbogen tankına bağlantı için</td></tr><tr><td>Platin Arp</td><td>Özel yapım</td><td>NA</td><td>Elektrofizyoloji kayıt odasında bölünmüş retinaları sabitlemek için.&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>0 numara boya fırçası</td><td>Genel</td><td>NA</td><td>bölünme sırasında retinanın düzleşmesi için.&nbsp;</td></tr><tr><td>SlowFade Gold antiifade reaktifi</td><td>Moleküler Problar</td><td>S36937&nbsp;</td><td>metinde anti-fade montaj medyası olarak adlandırılan</td></tr><tr><td>Küçük 10 mm Petri kabı</td><td>Falcon</td><td>353001</td><td>Gözler enokleasyondan sonra buraya yerleştirilir</td></tr><tr><td>küçük cam panel (7,5 cm x 5 cm)</td><td>Genel</td><td>NA</td><td>Bölünme işlemi için bunun üzerine izole retina parçaları yerleştirilir</td></tr><tr><td>Superfrost ve mikroskop slaytları</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-15</td><td>Elektrostatik yüklü cam mikroskop slaytları</td></tr><tr><td>Kalın duvarlı borosilikat cam pipetler, filamentli ve filamentli;</td><td>Sutter Enstrümanı</td><td>BF150-86-10HP</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Scissors; düz</td><td>Titan Medical</td><td>TMS121</td><td>markaya özgü değil; Benzer herhangi bir makas işe yarar</td></tr><tr><td>vGATFLPo fare</td><td>Jackson Laboratuvarları</td><td>29591</td><td>RRID: IMSR_JAX:029591</td></tr><tr><td>vGlut2Cre fare</td><td>Jackson Laboratuvarları</td><td>28863, 016963</td><td>RRID: IMSR_JAX:028863, RRID: IMSR_JAX:016963</td></tr><tr><td>Zombie NIR Düzeltilebilir Geçerlilik Kiti</td><td>BioLegend</td><td>423105</td><td>metinde MI-NIR olarak anılır</td></tr></tbody></table>

omurgalı retinasında İç nükleer tabaka nöronlarını İncelemek için geliştirilmiş bir düz montaj preparatı olarak bölünmüş retina

Split Retina as an Improved Flatmount Preparation for Studying Inner Nuclear Layer Neurons in Vertebrate Retina

Omurgalı retinasının bipolar hücreleri ve yatay hücreleri, fotonlar fotoreseptörler tarafından tespit edildikten sonra görsel bilgiyi işleyen ilk nöronlardır. Işık adaptasyonu, kontrast duyarlılığı ve uzamsal ve renk kontrastı gibi temel işlemleri gerçekleştirirler. Davranışlarını yöneten kesin devre ve biyokimyasal mekanizmaların tam olarak anlaşılması, görsel sinirbilim araştırmalarını ve oftalmolojik tıbbı ilerletecektir. Bununla birlikte, bipolar ve yatay hücrelerin (retinal bütün bağlar ve dikey dilimler) incelenmesi için mevcut preparatlar, bu hücrelerin anatomisini ve fizyolojisini yakalama kapasitelerinde sınırlıdır. Bu çalışmada, fotoreseptör hücre gövdelerini canlı, düz montajlı fare retinalarından çıkarmak için bir yöntem sunuyoruz, verimli yama klempleme ve hızlı immüno-etiketleme için bipolar ve yatay hücrelere gelişmiş erişim sağlıyoruz. Bölünmüş retinalar, izole edilmiş bir fare retinasının iki parça nitroselüloz arasına sıkıştırılması ve ardından nazikçe soyulmasıyla hazırlanır. Ayırma, retinayı dış pleksiform tabakanın hemen üzerine böler ve biri fotoreseptör hücre gövdelerini ve diğeri kalan iç retinayı içeren iki parça nitroselüloz verir. Dikey retina dilimlerinden farklı olarak, bölünmüş retina preparatı, iç retinal nöronların dendritik süreçlerini kesmez, bu da boşluk bağlantısına bağlı ağların ve geniş alanlı amakrin hücrelerin katkılarını entegre eden bipolar ve yatay hücrelerden kayıtlara izin verir. Bu çalışma, elektrofizyoloji, immünohistokimya ve in situ hibridizasyon deneylerinde yatay ve bipolar hücrelerin incelenmesi için bu preparatın çok yönlülüğünü göstermektedir.

Bu çalışma, fotoreseptör hücre gövdelerinin çıkarılmasının daha hızlı antikor difüzyonu ve immünohistokimya, in situ hibridizasyon ve elektrofizyoloji deneyleri için iç retinal nöronlara gelişmiş yama pipet erişimi sağladığı alternatif bir düz montajlı retina preparatı sunmaktadır.

Omurgalı Retinasında İç Nükleer Tabaka Nöronlarını İncelemek için Geliştirilmiş Bir Düz Montaj Preparatı Olarak Bölünmüş Retina

Bipolar cells and horizontal cells of the vertebrate retina are the first neurons to process visual information after photons are detected by ...

Grubumuz, retinadaki görsel işlemenin altında yatan nöronal devre ve sinaptik mekanizmalarla ilgilenmektedir. Morgans Laboratuvarı, bipolar hücrelerde ışık adaptasyonunun moleküler mekanizmalarını araştırıyor ve Sivyer Laboratuvarı, iç retinal nöronların ganglion hücre fonksiyonuna nasıl katkıda bulunduğuyla ilgileniyor. Tüm retina dağındaki internükleer tabaka nöronlarına erişmek, hem anatomik hem de fizyolojik çalışmalar için bir zorluktur.Çekirdekler arası katman nöronlarına dikey bölümlerde erişilebilir, ancak görüş alanında çok az sayıda nöron bulunur. Ayrıca, dilimleme, fizyolojik çalışmaları etkileyebilecek yanal süreçleri ve bağlantıları keser. Bölünmüş retina tekniğinde fotoreseptörlerin çıkarılması, iç retinaya antikor difüzyonunu önemli ölçüde iyileştirir, bu da iç retina hedeflerinin immüno-etiketlemesini geleneksel tüm retina mount retinaya kıyasla 20 kat daha hızlı hale getirir.Bölünmüş retina ayrıca yama kelepçesi elektrofizyolojisi sırasında internükleer katman nöronlarına erişimi büyük ölçüde geliştirir. Bölünmüş retina tekniği yeni yaklaşımlara kapı açacak ve deneylerimizin hızını artıracaktır. Örneğin, bipolar hücrelerde channelrhodopsin eksprese ederek melanopsin ganglion hücrelerine bipolar hücre girdilerini incelemek için bu tekniği kullanmayı planlıyoruz.

split-retina-as-an-improved-flatmount-preparation-for-studying-inner

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Geleneksel dikey dilim ve retinanın tüm hazırlık retina devrelerin fonksiyonunu incelemek için kullanılmıştır. Burada, sağlam retina nöronların dendritik morfoloji korumak için yöntem dilimleme roman açıklar.

Retina Yatay Dilim Hazırlık

Insan dışı primat gelişimi ve yaşlanma anlamak için önemli bir translasyonel türüdür. Primat retinanın anatomik organizasyonu, insanlarda normal ve patolojik durumları önemli bilgiler verebilir.

Beyin Ağ Geçidi: Primate Göz Diseksiyon

Biz su kaplan semender (gelen ince retina dilim hazırlanması...

Bir Amfibi Retina Dilim hazırlanması Fotoreseptörler ve İkinci dereceden nöronlar eş zamanlı tam hücreli Kayıtlar

Burada açıklanan protokol, tam montajlı bir retinal preparatın yapısal değerlendirmesi içindir. Bu, doku diseksiyonunun tanımlarını, hidrofilize politetrafloroetilen (PTFE) membran ekine montajı, floresan işaretleyicilerle bolus yüklemesini ve hücresel ve sinaptik bileşenlerin immünohistokimyasal analizi için karbodiimid ve paraformaldehit ile fiksasyonun karşılaştırılmasını içerir.

Görüntüleme ve İmmünhistokimyanın için Retina Wholemount Hazırlık için optimize edilmiş Protokolü

Kemirgen retina uzun beyin için erişilebilir bir pencere olarak kabul edilmiştir. Bu teknik yazıda iskemik yaralanma sonrası, merkezi sinir sistemi içinde, vasküler rejenerasyon başarısız olmasına yol mekanizmaları incelemek için oksijen kaynaklı retinopatinin fare modeli kullanan bir protokol sağlar. Anlatılan sistem, aynı zamanda, retina ve CNS içindeki fonksiyonel kan damarlarının büyümesini teşvik etmek için stratejiler keşfetmek için dönüştüğü edilebilir.

Fare Retina kullanma CNS&#39;deki Vasküler Rejenerasyon Değerlendirilmesi

Bu protokol, düz monte hazırlık retina nöronlar üzerinde tüm hücre yama kelepçe kayıt yapmak gösterilmiştir.

Deafferentated Fare Retina bir düz montaj Hazırlık patlaması amacrine hücreleri Yama Kelepçe Kaydı

Biz retina yüzeyine paralel kesit düzlemi ile erişkin memeli retina yatay dilim hazırlık geliştirdi. nonradially odaklı retinal nöronların dendritik alanları patch-kelepçe ve görüntüleme teknikleri ile sinyal işleme çalışma izin kesilmiş değil.

Elektrofizyolojik Çalışmalar Yetişkin Fare Retina Yatay Dilimleri hazırlanması

Retina doku Imaging geleneksel biyokimyasal yöntemlerle toplanan tek hücreli bilgiler sağlar. Bu iletişim kuralı üzerinden Zebra balığı retina dilimleri hazırlanması için confocal düşsel açıklar. Floresan genetik olarak kodlanmış sensörler ve göstergesi boyalar görselleştirme çok sayıda biyolojik süreçlerin ayrı retina hücre türlerinde izin vermeyin.

Ex Vivo deneyler görüntüleme için yetişkin Zebra balığı üzerinden hazırlanması taze retina dilimleri

Diyabetik retinopati körlüğün önde gelen nedenlerinden biridir. Histoloji, kan-retinal bariyer parçalanma testi ve floresan anjiyografi, retinanın patofizyolojisini anlamak için değerli tekniklerdir ve bu da diyabetik retinopatiye karşı etkili ilaç taramasını daha da artırabilir.

Sıçan Modelinde Retinal Patofizyolojik Değerlendirme

İnsan gözünde retinal pigment epitelini (RPE) retinadan etkin bir şekilde ayırmak ve RPE'nin histolojik ve morfometrik analizleri için tüm RPE / koroid düzlüklerini üretmek için bir yöntem tanımladık.

Histolojik Analiz için İnsan Gözünden Retinal Pigment Epitel/Koroid Flatmount'larının Verimli ve Tutarlı Üretimi

Keşfedin fare retinasında iç nükleer tabaka nöronlarına erişimi hızlandıran bölünmüş retina tekniğini. Bu yöntem antikor difüzyonunu 20 kat artırarak immünohistokimya ve elektrofizyoloji deneylerini kolaylaştırır.

Omurgalı Retinasında İç Nükleer Tabaka Nöronlarını İncelemek için Geliştirilmiş Bir Düz Montaj Preparatı Olarak Bölünmüş Retina

Daha fazla video keşfet