Name: Serebral Kan Pıhtılarının Hücre Bileşenlerini Analiz Etmek İçin Kapsamlı Bir Yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Keşfedin, serebral kan pıhtılarından sağlam hücreleri serbest bırakan yeni bir fibrinolitik enzim yöntemi. Bu teknik, trombozun moleküler mekanizmalarını anlamak için niceliksel ve niteliksel hücre analizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Xiamen Şehri Bilim ve Teknoloji Bürosu (3502Z20227197) ve Fujian Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bürosu (No. 2019J01070, No.2021Y0027) tarafından finanse edilmiştir.

Araştırma, Huaqiao Üniversitesi Tıbbi Etik Komitesi'nin kurumsal yönergelerine uygun olarak gerçekleştirildi. Serebral kan pıhtıları cerrahi olarak çıkarıldı ve Fujian Tıp Üniversitesi'ne bağlı Quanzhou Birinci Hastanesi'nde hastalardan bilgilendirilmiş onam alınarak toplandı.
1. Kan pıhtısı ön tedavisi
<ol><li>Pıhtıları temiz bir tabağa koyun, cımbızla 5 mL fizyolojik salin ekleyin, tabağı hafifçe sallayın ve salini bir pipetle çıkarın. NOT: Durulamayı üç kez tekrarlayın.</li>
	<li>Pıhtıları bir makasla daha küçük parçalar halinde (5 mm x 5 mm x 5 mm'den küçük) kesin. 5 mL fizyolojik salin ekleyin, tabağı hafifçe çalkalayın ve salini bir pipetle çıkarın. NOT: Durulamayı üç kez tekrarlayın. Durulama sırasında pıhtı parçalarının aspire edilmediğinden emin olun.</li>
	<li>Pıhtıları başka bir temiz U plakasına aktarın. NOT: Protokol burada duraklatılabilir (plakayı 2-8 °C'de saklayın) ve daha sonra yeniden başlatılabilir.</li>
</ol>2. Tromboliz
<ol><li>Fizyolojik salin ile sFE konsantrasyonunu 2000 U/mL'ye ayarlayarak sFE çalışma solüsyonunu hazırlayın. NOT: sFE, Tang Lab15'in köklü protokollerine göre hazırlanmıştır.</li>
	<li>Ön işlem görmüş pıhtılara 300 μL sFE çalışma solüsyonu ekleyin.</li>
	<li>İlk bozulma turunu gerçekleştirin.<ol><li>sFE ve pıhtı karışımını 37 °C'de 0,5 saat inkübe edin. NOT: Serum fizyolojik ile tedavi edilen leke negatif kontrol olarak ayarlandı. S'yi döndürmeyinampçalkalayıcı üzerinde.</li>
		<li>Numuneyi yavaşça karıştırın. Sıvı parçayı temiz bir pipetle başka bir temiz tüpe aktarın. NOT: Kalan pıhtılar başka bir bozunma turu için kullanıldı.</li>
		<li>Sıvı kısmı 200 × g'da 4 °C'de 5 dakika santrifüjleyin.</li>
		<li>Geri kazanılan sFE çözeltisini elde etmek için süpernatanı bir pipetle başka bir temiz tüpe aktarın.</li>
		<li>Hücre çökelmesini 50 μL fizyolojik salin ile hafifçe karıştırın. NOT: Hücre karışımı daha sonra kullanılmak üzere 2-8 °C saklanmıştır.</li>
	</ol></li>
	<li>Sonraki bozulmayı gerçekleştirin.<ol><li>Kalan pıhtıları (adım 2.3.2) geri kazanılan sFE çözeltisi (adım 2.3.4) ile 37 °C'de 0,5 saat boyunca bozun. NOT: Geri kalan adımlar ilk bozma turuyla aynıydı. Tüm pıhtılar parçalanana kadar bozunma işlemi tamamlandı.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücre toplama işlemini gerçekleştirin.<ol><li>Her bozunma turunun hücre karışımını toplayarak kan hücresi örneğini hazırlayın.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Wright'ın lekelenmesi
<ol><li>Hücre yayması yapın.<ol><li>Hücreleri 1 x 106 hücre/mL yoğunluğa ayarlayın.</li>
		<li>Poli-L lizin kaplı cam slayta 5 μL hücre ekleyin, ardından kapak fişini kullanarak bunları sürün.</li>
		<li>Sıvıyı oda sıcaklığında buharlaştırın.</li>
	</ol></li>
	<li>Boyamayı gerçekleştirin.<ol><li>Hücre yaymasına nazikçe 200 μL Wright boyası ekleyin ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve eşit şekilde karıştırmak için 600 μL Wright boyası B ekleyin.  Oda sıcaklığında 10 dakika boyayın.</li>
		<li>Boyayı temiz suyla nazikçe durulayın. NOT: Lekeli hücre yayması daha sonra kullanılmak üzere oda sıcaklığında saklanabilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Mikroskobik görüntüleme yapın.<ol><li>Lekeli hücreleri bir ışık mikroskobu kullanarak inceleyin (bkz.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Rutin kan muayenesi
<ol><li>Hücreleri 1 x 106 hücre/mL yoğunluğa ayarlayın.</li>
	<li>Trombositler, eritrositler, beyaz kan hücreleri, lenfositler, nötrofiller, monositler, eozinofiller, bazofiller ve olgunlaşmamış granülositler gibi hücre bileşenlerini üreticinin talimatlarına göre bir otohematoloji analizörü kullanarak analiz edin (bkz.</li>
</ol>

Serebral Trombüs Hücre Bileşenlerini İncelemek için Fibrinolitik Enzim Tabanlı Bir Yöntem

<ol><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR%3A+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li>
<li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought%3A+a+retrospective+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li>
<li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century%3A+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li>
<li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps%3A+villains+and+targets+in+arterial%2C+venous%2C+and+cancer-associated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis+Thrombosis+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li>
<li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity%2C+inflammation%2C+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li>
<li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation%3A+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li>
<li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li>
<li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+%28platelet+component%29+in+thromboelastometry+and+thrombelastography%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li>
<li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536(2021).</li>
<li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li>
<li>C W Francis, a, Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+clot+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li>
<li>Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).</li>
<li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers%3A+latest+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254(2015).</li>
<li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer%3A+What+we+have+vs.+what+we+need%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631(2023).</li>
<li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023(2018).</li>
<li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li>
<li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA%2C+2007-09%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li>
</ol>

Yazarların ifşa edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

sFE, fibrini doğrudan ve etkili bir şekilde parçalayabilen fibrinolitik bir ajandır12,16. Burada, serebral kan pıhtılarının çapraz bağlı fibrinini parçalamak, pıhtıların içindeki kapalı hücreleri serbest bırakmak ve pıhtıların hücre bileşenlerini kalitatif ve kantitatif olarak analiz etmek için sFE kullanıldı. Mikroskopi verileri ve rutin kan muayenesi, kapalı hücrelerin kan pıhtılarından salındığını gösterdi. Ayrıca, salınan hücrelerin hücre tipleri ve yapıları ...

Serebrovasküler hastalık, insan sağlığını tehdit edebilen üç ana hastalıktan biridir ve bunların arasında iskemik serebrovasküler hastalık% 80'den fazlasını oluşturur. Serebral tromboz ve serebral ven trombozu, günümüzde en çok endişe duyulan iskemik serebrovasküler hastalıklardırve esas olarak serebral kan pıhtılarının neden olduğu 1,2. Tedavi uygun şekilde yapılmazsa, yüksek sakatlık ve mortalite oranlarına ve taburculuk sonrası yüksek nüks oranına sahip olacaktır3.
Son zamanlarda, giderek artan sayıda çalışma, serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerinin serebral trombozun tanısı, tedavisi ve prognozu ile sıkı bir şekilde ilişkili olduğunu göstermiştir 4,5,6. Bu nedenle, trombüs bileşimi, özellikle hücre bileşenleri ile ilgili verilerin mevcudiyeti klinik tanı ve tedavi için önemlidir. Ne yazık ki, şu anda mevcut olan yöntemler, kan pıhtısı bileşenini nicel ve nitel olarak kapsamlı bir şekilde analiz edememektedir. Örneğin, Martius Scarlett Blue bazlı in-situ boyama, pıhtının yalnızca belirli dilimlerinin kırmızı/beyaz kan hücrelerini inceleyebilir7. İmmünohistokimya (IHC) tabanlı in-situ boyama, antikorlarını kullanarak pıhtının yalnızca belirli dilimlerinin sınırlı kan bileşenlerini inceleyebilir8. Mikroskobik görüntüye dayalı yöntemler sadece pıhtının spesifik yapısıyla ilgilidir9. Üstelik tüm bu yöntemler zahmetli ve zaman alıcıdır10. Bugüne kadar, serebral trombüs hücre bileşenlerini kantitatif ve kalitatif olarak incelemek için prosedürler bildirilmemiştir. Çapraz bağlı fibrinin pıhtılardaki kan hücrelerini sıkıca sardığı yaygın olarak kabul edilmektedir11. Sonuç olarak, çapraz bağlı fibrinin spesifik bozunması ve sağlam hücrelerin salınması, hücre bileşenlerinin doğru analizi için kritik öneme sahiptir.
Önceki çalışmalar, fibrini spesifik ve hızlı bir şekilde parçalayabilen Sipunculus nudus'tan (sFE) bir fibrinolitik enzimi izole etti12. Burada, sFE'nin benzersiz aktivitesine dayalı olarak serebral trombüsün hücre bileşenlerini analiz etmek için bir yöntem önerilmiştir. Bu protokol, önce pıhtıların fibrinini parçalamak için sFE'yi kullandı ve daha sonra hücre bileşenlerini Wright'ın Boyama ve rutin kan muayenesiile analiz etti 13,14. Bu yönteme göre, serebral trombüsün hücre bileşenleri kantitatif ve kalitatif olarak incelenebilir. Bu basit ve etkili protokol, diğer kan pıhtılarının hücre bileşen analizi için uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>Aglütinasyon Reaksiyon Plakası</td><td>ROTEST</td><td>RTB-4003</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik Hematoloji Analiz Cihazı</td><td>SYSMEX</td><td>XNB2</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik Dikey Basınçlı Buhar Sterilizatörü &nbsp;</td><td>SANYO</td><td>MLS-3750</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj Tüpü (1.5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M Temiz</td><td></td></tr><tr><td>tezgah</td><td>AIRTECH</td><td>BLB-1600</td><td></td></tr><tr><td>Sabit Sıcaklık İnkübatörü</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Kültür Kabı (100 mm)</td><td>NEST</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>DHG Serisi Isıtma ve Kurutma Fırını&nbsp;</td><td>SENXIN</td><td>DGG-9140AD</td><td></td></tr><tr><td>Elektronik Analitik Terazi</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Filtre Membranı (0.22 & mikro; m)</td> <td>Millex GP</td><td>SLGP033NK</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Soğutmalı Santrifüj & nbsp;</td><td>Cence</td><td>H1650-W</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Slaytları</td><td>CITOGLAS</td><td>01-30253-50</td><td></td></tr><tr><td>Mili-Q Referans</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Normal Salin</td><td>CISEN</td><td>H37022337</td><td></td></tr><tr><td>Optik Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE E100</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Ucu (1 mL )</td><td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Ucu (200 & mikro; L)</td><td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici (1 mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td> Pipetleyici (200 & <td></td></tr> mikro<tr><td>; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>Neşter</td><td>MARTOR</td><td>23111</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Boyutlu Vorteks Osilatörü</td><td>Kylin-Bell</td><td>VORTEX KB3</td><td></td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>Hipstik</td><td>HKQS-180</td><td></td></tr><tr><td>Wright Boyama Solüsyonu</td><td>Beyotime</td><td>C0135-500ml</td><td></td></tr></tbody></table>

serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerini analiz etmek İçin kapsamlı bir yaklaşım

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

Serebral arter veya damardaki bir kan pıhtısı olan serebral tromboz, en yaygın serebral enfarktüs türüdür. Serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerinin incelenmesi tanı, tedavi ve prognoz için önemlidir. Bununla birlikte, pıhtıların hücre bileşenlerini incelemeye yönelik mevcut yaklaşımlar, esas olarak, hücreler pıhtılara sıkıca sarıldığı için hücre bileşenlerinin kapsamlı çalışması için uygun olmayan in situ boyamaya dayanmaktadır. Önceki çalışmalar, çapraz bağlı fibrini doğrudan parçalayarak hücre bileşenlerini serbest bırakabilen bir fibrinolitik enzimi (sFE) Sipunculus nudus'tan başarıyla izole etmiştir. Bu çalışma, serebral trombüsün hücre bileşenlerini incelemek için sFE'ye dayalı kapsamlı bir yöntem oluşturmuştur. Bu protokol pıhtı eritme, hücre salma, hücre boyama ve rutin kan incelemesini içerir. Bu yönteme göre, hücre bileşenleri nicel ve nitel olarak incelenebilir. Bu yöntemi kullanan deneylerin temsili sonuçları gösterilmektedir.

Bozunma sürecinin ilk aşamasında, kan pıhtılarının kırmızı kompakt bir yapıya sahip olduğu ve çalışma çözeltisinin renksiz olduğu bulundu. 30 dakika inkübasyondan sonra, çalışma çözeltisi açık kırmızıya döndü, bu da çapraz kan hücrelerinin çalışma çözeltisine salındığını gösterdi. Kuluçka süresi 5 saate uzatıldığında çoğu pıhtı çözüldü ve çalışma çözeltisi açık kırmızı oldu. Aksine, 10 saatlik inkübasyondan sonra bile fizyolojik salin grubunda (NC) önemli bir değişiklik olmadı (Şekil 1). Bu ...

Bu çalışma, pıhtı eritme, hücre boyama ve rutin kan muayenesi yoluyla serebral kan pıhtılarının hücre bileşen analizi için hızlı ve etkili bir yöntemi tanımlamaktadır.

Serebral Kan Pıhtılarının Hücre Bileşenlerini Analiz Etmek İçin Kapsamlı Bir Yaklaşım

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

Araştırmalarımız ağırlıklı olarak serebral tromboz üzerine odaklanmaktadır. Serebral kan pıhtı hücresi bileşeninin serebral trombozun tanı, tedavi ve prognozu ile ilişkili olduğu birçok çalışmada gösterilmiştir. Bu çalışmada, serebral kan pıhtılarının hücre bileşeninin analizi için yeni bir yöntem oluşturduk.Serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerini analiz etmedeki bu zorluk, tüm şaftın kan pıhtılarından salınmasıdır. Bunun nedeni, pıhtıların pıhtılardaki kan hücrelerini lifleyerek sızmasıdır. Pıhtıların hücre bileşenlerini başlatmaya yönelik hedefli yaklaşımlar en iyi şekilde, hücre bileşenlerinin kapsamlı bir şekilde başlatılması için uygun olmayan C2 ayakta yapılır.Aksine, yöntemimiz serebral eğim hücresi bileşenlerinin hem nicel hem de nitel olarak aydınlatılmasını sağlar. Yöntemimiz, kan pıhtılarındaki liflenmeyi geciktirmek ve sağlam hücreleri serbest bırakmak için fibrinolitik enzim kullanır. Hücre bileşenlerinin analizinden elde edilen veriler, serebral tromboz mekanizmalarının moleküler düzeyde incelenmesini kolaylaştıracaktır.Ekibimiz fibrinoliz ve pıhtılaşma sistemi çalışmalarına odaklanmaya devam edecektir.

a-comprehensive-approach-to-analyze-cell-components-cerebral-blood

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Kaynak: Kim, D., et. al. Serebral Tromboemboliyi Doğrudan Görselleştirmek için Yakın Kızılötesi Floresan Görüntüleme ve Mikro Bilgisayarlı Tomografi. J. Vis. Uzm.  (2016)Bu video, mikro bilgisayarlı tomografi (mikro-BT) görüntüleme kullanılarak farelerde serebral trombüsün görselleştirilmesini göstermektedir. Bir serebral trombüs fare modeline, kontrast bir ajan olarak işlev gören fibrin hedefli altın nanopartiküller enjekte edilir. Fare, bir mikro-CT makinesinin yatağına yerleştirilir ve...

Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme Kullanılarak Bir Farede Serebral Trombüsün Görselleştirilmesi

Inme sonrası beyin miyeloid hücreler karakterizasyonu optik parçalama yöntemi kullanılarak stereolojinin tarafından gerçekleştirilen, ya da beynin bir akım sitometri ile süspansiyonları lökosit olabilir. Her ikisi de iskemik beyin bulundu ana miyeloid hücre alt doğru fenotipik ayrımı gerçekleştirmek için yararlı teknikler vardır.

Geçici veya kalıcı Serebral İskemi Modelinde lökosit alt popülasyonlarının Stereolojik ve Sitometrisi Karakterizasyonu

İnflamasyon, iskemik inme patogenezinde merkezi bir rol oynar. Artan kanıtlar, erken beyin hasarını şiddetlendiren iki ucu keskin bir kılıç gibi davrandığını, ancak aynı zamanda daha sonraki onarıma da katkıda bulunduğunu göstermektedir. Bu protokol, immün hücrelerin iskemik beyinden izolasyonunu ve müteakip akış sitometrik fenotiplemesini tanımlar.

İskemik Fare Beyin gelen Bağışıklık Hücreleri İzolasyon ve Akım Sitometrisi Analizi

Bu protokol serebral emboli görselleştirmek için kombine yakın kızılötesi floresan (NIRF) görüntüleme ve mikro-bilgisayarlı tomografi (mikroBT) uygulanmasını açıklar. Bu teknik trombüs yükü ve evrim ölçümü sağlar. MikroBT'lerin tekniği altın nanopartiküller kullanarak canlı hayvan içinde trombüs görüntüler ise NIRF görüntüleme tekniği floresan, eksize beyinde trombüs etiketli görselleştirir.

Doğrudan Serebral emboli görselleştirme için Kombine Yakın kızılötesi Floresan Görüntüleme ve Mikro bilgisayarlı Tomografi

Bu makalenin amacı mikro bilgisayarlı tomografi ve serebral vasospasm ölçmek için kullanılan tüm gemi parçaları hacimleri belirlenmesi sonra farelerde serebrovasküler ağaç 3 boyutlu rekonstrüksiyon sağlayan bir yöntem sunmaktır fare modelleri subaraknoid kanama.

Subaraknoid kanama, bir fare modeli serebral Vasospasm miktar hacimsel bir yöntemi

Hasta kaynaklı endotel ile tam kan etkileşimini araştırmak için in vitro vasküler hastalık modeli salıyoruz. Bu sistem çeşitli koşullar altında primer endotel hücrelerinin trombojenik özelliklerinin incelenmesini sağlar. Bu yöntem özellikle pıhtılaşmanın farklı aşamalarında situ trombojenite ve antikoagülasyon tedavisinin değerlendirilmesi için uygundur.

In Vitro Mikroakışkan Hastalık Modeli Gerçek Zamanlı Olarak Tam Kan-Endotel Etkileşimleri ve Kan Pıhtısı Dinamikleri Çalışma

Bu protokol, aynı kemirgen beyin örnekleri kümesinde iskemik beyin hasarının en önemli üç parametresini ölçmenin yeni bir tekniğini açıklar. Sadece bir beyin örneği kullanmak etik ve ekonomik maliyetler açısından oldukça avantajlıdır.

Tek Bir Kemirgen Beyin Örneklerinde İnme Sonrası Serebral Ödem, Enfarktüs Bölgesi ve Kan-Beyin Bariyeri Kırılımının Ölçülmesi

Bu protokol, hafif travmatik beyin hasarına nöroinflamatuar ve hemodinamik yanıtı karakterize etmek ve bu verileri kısmi en küçük kareler regresyonunu kullanarak çok değişkenli bir sistem analizinin bir parçası olarak entegre etmek için yöntemler sunmaktadır.

Travmatik Beyin Hasarına Nöroinflamatuar ve Hemodinamik Yanıtın Sistem Analizi

Fibrin hemostaz ve tromboz sırasında pıhtı oluşumundan sorumludur. Bulanıklık tahlilleri ve tromboelastograhy (TEG) bir pıhtı tamamlayıcı değerlendirme sağlayan sinerjik araçlar olarak kullanılabilir. Bu iki teknik birlikte pıhtılaşma koşulları fibrin pıhtı oluşumunu nasıl etkilediği hakkında daha fazla fikir verebilir.

Tamamlayıcı Pıhtı Karakterizasyonu için Bulanıklık ve Tromboelastografiden Yararlanma

Geleneksel fototrombotik inme (PTS) modelleri esas olarak doku plazminojen aktivatörü (tPA) litik tedavisine karşı yüksek dirençli yoğun trombosit agregatlarını indükler. Burada, fotoaktivasyon için trombin ve ışığa duyarlı boyanın birlikte enjekte edilmesiyle modifiye edilmiş bir murin PTS modeli tanıtıldı. Trombin ile zenginleştirilmiş PTS modeli, karışık trombosit:fibrin pıhtıları üretir ve tPA-trombolizine karşı oldukça hassastır.

Fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPA'ya duyarlı fototrombotik inme modeli

Bu çalışma, kanda trombus oluşumunu tetiklemek için kesme stresi kullanan ve trombü birden fazla boyutlu okuma ile karakterize eden bir mikrofluidik testi tanımlar. Bu test, kan örneklerinin protrombotik eğilimini ölçebilir ve bu nedenle hastalık teşhisi, ilaç keşfi ve trombozla ilgili temel mekanik çalışmalarda faydalıdır.

Trombus Profilleme Testi: Biyomekanik Trombogenezin Kapsamlı Karakterizasyonu İçin Mikrofluidik Tabanlı Bir Platform

Keşfedin, serebral kan pıhtılarından sağlam hücreleri serbest bırakan yeni bir fibrinolitik enzim yöntemi. Bu teknik, trombozun moleküler mekanizmalarını anlamak için niceliksel ve niteliksel hücre analizi sağlar.

Serebral Kan Pıhtılarının Hücre Bileşenlerini Analiz Etmek İçin Kapsamlı Bir Yaklaşım

Daha fazla video keşfet