Name: Kombine skleraksi aşırı ekspresyonu ve 2D tek eksenli gerilim yoluyla indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı iTenositlerin üretilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T13:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 48 s
Description: Öğrenin iPSC kaynaklı mezenkimal stromal hücrelerden skleraksi aşırı ekspresyonu ve 2D tek eksenli gerilim ile iTenosit üretimini. Bu yöntem tendon doku mühendisliği için umut vadeden bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen NIH/NIAMS K01AR071512 ve CIRM DISC0-14350 tarafından Dmitriy Sheyn'e desteklenmiştir. İki lentivirüs ambalaj plazmidi, Simon Knott laboratuvarından (Biyomedikal Bilimler Bölümü, Cedars-Sinai Tıp Merkezi) bir hediyeydi.

Etkili Hücre Bazlı Tedavi için iPSC'den Türetilmiş iTenositlerin Kullanılması

<ol><li>Lim, W. L., Liau, L. L., Ng, M. H., Chowdhury, S. R., Law, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+in+tendon+and+ligament+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative%22%5BJournal%5D)">Current progress in tendon and ligament tissue engineering.</a> Tissue Engineering and Regenerative. 16 (6), 549-571 (2019).</li>
<li>Sheyn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+induced+pluripotent+stem+cells+differentiate+into+functional+mesenchymal+stem+cells+and+repair+bone+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human induced pluripotent stem cells differentiate into functional mesenchymal stem cells and repair bone defects.</a> Stem Cells Translational Medicine. 5 (11), 1447-1460 (2016).</li>
<li>Czaplewski, S. K., Tsai, T. L., Duenwald-Kuehl, S. E., Vanderby, R., Li, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tenogenic+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+mesenchymal+stem+cells+dictated+by+properties+of+braided+submicron+fibrous+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tenogenic differentiation of human induced pluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells dictated by properties of braided submicron fibrous scaffolds.</a> Biomaterials. 35 (25), 6907-6917 (2014).</li>
<li>Jo, C. H., Lim, H. J., Yoon, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+tendon-specific+markers+in+various+human+tissues%2C+tenocytes+and+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative%22%5BJournal%5D)">Characterization of tendon-specific markers in various human tissues, tenocytes and mesenchymal stem cells.</a> Tissue Engineering and Regenerative. 16 (2), 151-159 (2019).</li>
<li>Shukunami, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scleraxis+is+a+transcriptional+activator+that+regulates+the+expression+of+Tenomodulin%2C+a+marker+of+mature+tenocytes+and+ligamentocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Scleraxis is a transcriptional activator that regulates the expression of Tenomodulin, a marker of mature tenocytes and ligamentocytes.</a> Scientific Reports. 8 (1), 3155(2018).</li>
<li>Huang, A. H., Lu, H. H., Schweitzer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+tendon+cell+fate+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of tendon cell fate during development.</a> Journal of Orthopaedic Research. 33 (6), 800-812 (2015).</li>
<li>Harvey, T., Flamenco, S., Fan, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Tppp3%28%2B%29Pdgfra%28%2B%29+tendon+stem+cell+population+contributes+to+regeneration+and+reveals+a+shared+role+for+PDGF+signalling+in+regeneration+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">A Tppp3(+)Pdgfra(+) tendon stem cell population contributes to regeneration and reveals a shared role for PDGF signalling in regeneration and fibrosis.</a> Nature Cell Biology. 21 (12), 1490-1503 (2019).</li>
<li>Yang, G., Rothrauff, B. B., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tendon+and+ligament+regeneration+and+repair%3A+clinical+relevance+and+developmental+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research+Part+C%3A+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Tendon and ligament regeneration and repair: clinical relevance and developmental paradigm.</a> Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 99 (3), 203-222 (2013).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+loading+models+for+tendon+mechanobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">In vitro loading models for tendon mechanobiology.</a> Journal of Orthopaedic Research. 36 (2), 566-575 (2018).</li>
<li>Wu, S. Y., Kim, W., Kremen, T. J. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cellular+strain+models+of+tendon+biology+and+tenogenic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">In vitro cellular strain models of tendon biology and tenogenic differentiation.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 10, 826748(2022).</li>
<li>Screen, H. R., Lee, D. A., Bader, D. L., Shelton, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+into+the+effects+of+the+hierarchical+structure+of+tendon+fascicles+on+micromechanical+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Institution+of+Mechanical+Engineers%2C+Part+H%22%5BJournal%5D)">An investigation into the effects of the hierarchical structure of tendon fascicles on micromechanical properties.</a> Proceedings of the Institution of Mechanical Engineers, Part H. 218 (2), 109-119 (2004).</li>
<li>Tatullo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+influence+of+tissue+culture+plates+and+extracellular+matrix+on+mesenchymal+stem+cell+behavior%3A+A+topical+review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Immunopathology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Mechanical influence of tissue culture plates and extracellular matrix on mesenchymal stem cell behavior: A topical review.</a> International Journal of Immunopathology and Pharmacology. 29 (1), 3-8 (2016).</li>
<li>Ding, S., Kingshott, P., Thissen, H., Pera, M., Wang, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+human+mesenchymal+and+pluripotent+stem+cell+behavior+using+biophysical+and+biochemical+cues%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Modulation of human mesenchymal and pluripotent stem cell behavior using biophysical and biochemical cues: A review.</a> Biotechnology and Bioengineering. 114 (2), 260-280 (2017).</li>
<li>Papalamprou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directing+iPSC+differentiation+into+iTenocytes+using+combined+scleraxis+overexpression+and+cyclic+loading%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Directing iPSC differentiation into iTenocytes using combined scleraxis overexpression and cyclic loading.</a> Journal of Orthopaedic Research. 41 (6), 1148-1161 (2023).</li>
<li>Pryce, B. A., Brent, A. E., Murchison, N. D., Tabin, C. J., Schweitzer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+transgenic+tendon+reporters%2C+ScxGFP+and+ScxAP%2C+using+regulatory+elements+of+the+scleraxis+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Generation of transgenic tendon reporters, ScxGFP and ScxAP, using regulatory elements of the scleraxis gene.</a> Developmental Dynamics. 236 (6), 1677-1682 (2007).</li>
<li>Stewart, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus-delivered+stable+gene+silencing+by+RNAi+in+primary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells.</a> RNA. 9 (4), 493-501 (2003).</li>
<li>Mendicino, M., Bailey, A. M., Wonnacott, K., Puri, R. K., Bauer, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MSC-based+product+characterization+for+clinical+trials%3A+an+FDA+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">MSC-based product characterization for clinical trials: an FDA perspective.</a> Cell Stem Cell. 14 (2), 141-145 (2014).</li>
<li>Bourin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cells+from+the+adipose+tissue-derived+stromal+vascular+fraction+and+culture+expanded+adipose+tissue-derived+stromal%2Fstem+cells%3A+a+joint+statement+of+the+International+Federation+for+Adipose+Therapeutics+and+Science+%28IFATS%29+and+the+International+Society+for+Cellular+Therapy+%28ISCT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and culture expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells: a joint statement of the International Federation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) and the International Society for Cellular Therapy (ISCT).</a> Cytotherapy. 15 (6), 641-648 (2013).</li>
<li>Dunkman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tendon+injury+response+is+influenced+by+decorin+and+biglycan%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">The tendon injury response is influenced by decorin and biglycan.</a> Annals of Biomedical Engineering. 42 (3), 619-630 (2014).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+transcription+factors+in+tendon+development+and+differentiation%3A+their+potential+for+tendon+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Crucial transcription factors in tendon development and differentiation: their potential for tendon regeneration.</a> Cell and Tissue Research. 356 (2), 287-298 (2014).</li>
<li>Bloor, A. J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+safety+and+efficacy+of+iPSC-derived+mesenchymal+stromal+cells+in+acute+steroid-resistant+graft+versus+host+disease%3A+a+phase+I%2C+multicenter%2C+open-label%2C+dose-escalation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Production, safety and efficacy of iPSC-derived mesenchymal stromal cells in acute steroid-resistant graft versus host disease: a phase I, multicenter, open-label, dose-escalation study.</a> Nature Medicine. 26 (11), 1720-1725 (2020).</li>
<li>McGrath, M., Tam, E., Sladkova, M., AlManaie, A., Zimmer, M., de Peppo, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GMP-compatible+and+xeno-free+cultivation+of+mesenchymal+progenitors+derived+from+human-induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">GMP-compatible and xeno-free cultivation of mesenchymal progenitors derived from human-induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Research and Therapy. 10 (1), 11(2019).</li>
<li>Lian, Q., Zhang, Y., Liang, X., Gao, F., Tse, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human-induced+pluripotent+stem+cells+to+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human-induced pluripotent stem cells to mesenchymal stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1416, 289-298 (2016).</li>
<li>Gaspar, D., Ryan, C. N. M., Zeugolis, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifactorial+bottom-up+bioengineering+approaches+for+the+development+of+living+tissue+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Multifactorial bottom-up bioengineering approaches for the development of living tissue substitutes.</a> FASEB Journal. 33 (4), 5741-5754 (2019).</li>
<li>Mao, A. S., Shin, J. W., Mooney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+substrate+stiffness+and+cell-cell+contact+on+mesenchymal+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Effects of substrate stiffness and cell-cell contact on mesenchymal stem cell differentiation.</a> Biomaterials. 98, 184-191 (2016).</li>
<li>Tilghman, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+rigidity+regulates+cancer+cell+growth+and+cellular+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Matrix rigidity regulates cancer cell growth and cellular phenotype.</a> PLoS One. 5 (9), e12905(2010).</li>
<li>Chagnon-Lessard, S., Jean-Ruel, H., Godin, M., Pelling, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+orientation+is+guided+by+strain+gradients%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology+%28United+Kingdom%29%22%5BJournal%5D)">Cellular orientation is guided by strain gradients.</a> Integrative Biology (United Kingdom). 9 (7), 607-618 (2017).</li>
<li>Nichols, A. E. C., Werre, S. R., Dahlgren, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+scleraxis+overexpression+combined+with+cyclic+strain+enhances+ligament+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Transient scleraxis overexpression combined with cyclic strain enhances ligament cell differentiation.</a> Tissue Engineering Part A. 24 (19-20), 1444-1455 (2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+and+scleraxis+synergistically+promote+the+commitment+of+human+ES+cells+derived+MSCs+to+tenocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Force and scleraxis synergistically promote the commitment of human ES cells derived MSCs to tenocytes.</a> Scientific Reports. 2, 977(2012).</li>
<li>Kataoka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+neo-genesis+of+tendon%2Fligament-like+tissue+by+combination+of+mohawk+and+a+three-dimensional+cyclic+mechanical+stretch+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">In vitro neo-genesis of tendon/ligament-like tissue by combination of mohawk and a three-dimensional cyclic mechanical stretch culture system.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 307(2020).</li>
</ol>

Tüm yazarların ifşa etmesi gereken herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu protokolde, iTenositler üç ana adımla üretilir: (1) iPSC'lerin iMSC'lere indüksiyonu, (2) bir lentiviral vektör kullanılarak SCX'in aşırı ekspresyonu ve (3) hücrelerin 2D tek eksenli gerilim yoluyla olgunlaşması.
iPSC'leri iMSC'lere ayırmak için sunulan protokol daha öncegrubumuz 2 tarafından tanımlanmıştır. Bu yayından bu yana, iMSC'lerin klinik araştırmalarda 21,22,23 kullanılması için yerleşik bir protokol ve ticari olarak temin edilebilen farklılaşma kitleri de dahil olmak üzere çok sayıda protokol geliştirilmiştir. Daha önce iMSC'lerin üç soyluluk potansiyelinin gözden geçirilmesi de araştırılmıştır2. Metodolojiler farklılık gösterse de, tüm protokoller, MSC yüzey işaretleyicilerinin kararlı bir şekilde ifade edilmesini sağlamak için birkaç geçiş için iMSC'lerin farklılaşma sonrası genişlemesine duyulan ihtiyacı vurgulamaktadır. Bu aşamada, yaklaşık% 70 birleşmede 1: 3 bölünmüş bir oranın kullanılması, geçişten sonraki 4-6 gün içinde nispeten birleşik bir plaka ile sonuçlanacaktır.
Transdüksiyon için en uygun titreyi seçerken, hücre canlılığı ve verimliliği arasında bir denge kurmak çok önemlidir. % 100 titre ile transdüksiyona tabi tutulan iMSC'ler en yüksek seviyede SCX-GFP pozitif hücreler gösterebilse de, bu hücrelerin transdüksiyondan sonra üç pasajı bölmeyi bıraktığını belirtmekte fayda var (Şekil 3C), muhtemelen DNA kaynaklı toksisite nedeniyle. Bu nedenle,% 100'den daha az bir titre kullanılması tavsiye edilir. Silikon plakaları tohumlamadan önce, akış sitometrisi kullanılarak SCX-GFP seviyelerinin yeniden değerlendirilmesi önerilir. Veriler, verimliliğin istenen eşiğin altında olduğunu gösteriyorsa, özellikle in vivo uygulamalar için tohumlamadan önce iMSCSCX+ hücrelerinin ayrılması tavsiye edilir.
iMSCSCX+ hücreleri silikon plakalara yerleştirildikten sonra, germeden önce hücre yapışmasına izin vermek için gece boyunca 37 °C'de inkübe edilmelidir. Silikon plakalarda tarif edilen 1.25 x 104 hücre /cm2 hücre yoğunluğu, statik gerilime katkıda bulunabilecek tek tabakalı aşırı büyümeyi önlemek için optimize edilmiştir24. Ek olarak, çalışmalar, değişen sertlikteki substratlarda birleşik kültürlerde doğrudan hücreden hücreye temasın hücre davranışını değiştirebileceğini düşündürmektedir 24,25,26. Pilot deneyler sırasında, özellikle daha sonraki zaman noktalarında, silikon plakalardan bazı görünür hücre ayrılması gözlenmiştir (Şekil 4D). Bu, aşırı birleşme nedeniyle ECM hücre tabakalarının oluşumunabağlanabilir 24. Bu nedenle, kritik parametreler hücre yoğunluğunu ve gerilme nöbetlerinin sayısını içerir. Mevcut yöntemlerde, gen ekspresyon analizi ile tenojenik potansiyelin değerlendirilmesi için hücreler 3. ve 7. günlerde toplandı. Bununla birlikte, hücrelerin 2D biyoreaktörde en az üç gün gerilmesi ve ardından aşırı büyümeyi ve hücre ayrılmasını önlemek için gerilmiş ve statik plakaların izlenmesi önerilir.
Birkaç esneme nöbetinden sonra, bir dereceye kadar hücre hizalaması ve organizasyonu gözlemlenebilir (Şekil 4C1,E). Bu, in vitro24,27 tek eksenli suşa yanıt olarak gerinim eksenine dik hücre hizalamasının gözlendiği birçok çalışma ile uyumludur. Buna karşılık, statik plaka stokastik hücre organizasyonunu gösterir (Şekil 4C2,E).
Bildiğimiz kadarıyla, sadece birkaç çalışma, MSC'lerin tenositlere veya ligamentositlerefarklılaşması için SCX aşırı ekspresyonunun ve mekanik stimülasyonun sinerjik etkilerini araştırmıştır 24,28,29. Gaspar ve ark. burada tarif edilene benzer bir 2D biyoreaktör sistemi kullandılar, ancak daha yüksek seviyelerde toplam gerinim uyguladılar (12 saat/gün boyunca 1 Hz'de %10). İlginç bir şekilde, BM-MSC'lerde ve insan tenositlerinde SCX, TNMD ve COL1a1 ekspresyonundaki değişiklikleri tespit edemediler. Bununla birlikte, bu, çalışmalarında kullanılan daha yüksek uygulanan suşlara bağlanabilir24. Chen ve ark. çok katmanlı tabakalar halinde bir araya getirilmiş hESC-MSC'lerde SCX'i aşırı eksprese etmek için bir lentiviral vektör kullandı. Tek eksenli döngüsel yük uyguladılar (21 güne kadar 2 saat / gün boyunca 1 Hz'de %10 gerinim) ve COL1a1, COL1a2, COL14 ve TNMD'nin yukarı regülasyonunun yanı sıra ECM birikiminin arttığını gözlemlediler29. Nichols ve ark. tam uzunlukta murin Scx cDNA ile C3H10T1/2 hücrelerini geçici olarak transfekte etti ve hücreleri tek eksenli siklik suş altında (% 1, 1 Hz, 14 güne kadar 30 dakika / gün) 3D kollajen hidrojellerde kültürledi. Bulgularımıza benzer şekilde, grupları gergin ve aşırı eksprese edilen yapılarda SCX ve COL1A1'in yüksek ekspresyonunu gözlemledi, ancak döngüsel gerilmeye yanıt olarak TNMD ekspresyonunda hiçbir değişiklik bulamadı28.
Ek olarak, MKX gibi tendonla ilgili diğer belirteçlerin aşırı ekspresyonunu düşünmek ilgi çekici olabilir. Tsutsumi ve ark. C3H10T1/2 hücrelerinde MKX'in aşırı eksprese edilmesinin ve bunları bir 3D sistemde döngüsel mekanik gerilmeye maruz bırakmanın birleşik etkisini araştırdı. Kollajen fibril demetlerinin ve aktin filamentlerinin30 hizalanması ile birlikte SCX, COL1a1, DCN ve COL3a1'de önemli bir yukarı regülasyon gösterdiler.
iTenosit oluşturmak için bu yöntemin sınırlamaları olduğunu kabul etmek önemlidir. Ticari olarak temin edilebilen 2D biyoreaktör, kavram kanıtlama çalışmaları için avantajlı olsa da, boyutu verimi kısıtlar. Bu hücrelere yüksek verimli tahliller için veya tendon onarım tedavileri için potansiyel bir hazır hücre kaynağı olarak ihtiyaç duyulursa, tek eksenli gerdirmeyi daha büyük ölçekte uygulayabilen sistemlerin araştırılması düşünülmelidir. Ayrıca, daha ileri araştırmalar, stabil tenojenik ekspresyonunu doğrulamak için iTenositlerin genişlemesini kapsamalıdır ve in vivo rejenerasyona katkılarının değerlendirilmesi, tenojenik potansiyellerini değerlendirmek için çok önemlidir.

Tendon ve bağ onarımındaki çağdaş sorunların üstesinden gelmek için, hücre bazlı tedavilere uygun uygun bir hücre adayına ihtiyaç vardır. Tendon onarımı için doku mühendisliğinde bir araştırma yolu, potansiyel stratejiler olarak kemik iliği kaynaklı mezenkimal stromal hücrelerin (BM-MSC'ler) ve adipoz doku kaynaklı stromal hücrelerin (ASC'ler) araştırılmasını içerir. Bu hücreler multipotent yeteneğe, büyük bolluğa ve in vivo rejeneratif potansiyele sahiptir. Ek olarak, hayvan modellerinde gelişmiş iyileşme kapasitesi ve gelişmiş fonksiyonel sonuçlar göstermişlerdir1. Bununla birlikte, bu hücreler sınırlı kendini yenileme yetenekleri, fenotipik çeşitlilik ve özellikle tendon oluşumu için sınırlı kapasite sergilerler. İndüklenmiş pluripotent kök hücre (iPSC) teknolojisi, olağanüstü kendini yenileme kapasitesi ve eşsiz gelişimsel uyarlanabilirliği nedeniyle bu kısıtlamalara bir çözüm sunar. Araştırma ekibimiz ve diğerleri, iPSC'lerin mezenkimal stromal hücre benzeri varlıklara (iMSC'ler) başarılı bir şekilde farklılaşmasını sağlamıştır2,3. Bu nedenle, iMSC'ler tendon hücre tedavisi uygulamaları için allojenik bir kaynak olma potansiyeline sahiptir.
Skleraksi (SCX), tendon gelişimi için gerekli olan bir transkripsiyon faktörüdür ve farklılaşmış tenositler için en erken saptanabilir belirteç olarak kabul edilir. Ek olarak, SCX, diğerlerinin yanı sıra tip 1a1 zincir kollajen 1 (COL1a1), mohawk (MKX) ve tenomodulin (TNMD) dahil olmak üzere aşağı akış tendon farklılaşma belirteçlerini aktive eder 4,5,6. Tendon olgunlaşması sırasında eksprese edilen diğer genler arasında tübülin polimerizasyonunu teşvik eden protein ailesi üyesi 3 (TPPP3) ve trombosit kaynaklı büyüme faktörü reseptörü alfa (PDGFRa)7 bulunur. Bu genler tendon gelişimi ve olgunlaşması için gerekli olmakla birlikte, ne yazık ki tendon dokusuna özgü değildir ve kemik veya kıkırdak gibi diğer kas-iskelet dokularında eksprese edilir 5,7.
Tendon gelişimi sırasında belirteçlerin ekspresyonuna ek olarak, mekanostimülasyon embriyonik tendon gelişimi ve iyileşmesi için önemli bir unsurdur 4,5,6. Tendonlar mekano-duyarlıdır ve büyüme modelleri çevrelerine tepki olarak değişir. Moleküler düzeyde, biyomekanik ipuçları tenositlerin gelişimini, olgunlaşmasını, bakımını ve iyileşme tepkilerini etkiler8. Fizyolojik yükleri ve biyomekanik ipuçlarını modellemek için çeşitli biyoreaktör sistemleri kullanılmıştır. Bu model sistemlerden bazıları ex vivo doku yüklemesi, çift eksenli veya tek eksenli gerilim uygulayan 2D hücre yükleme sistemleri ve iskele ve hidrojel kullanan 3D sistemleriiçerir 9,10. 2D sistemler, mekanik stimülasyonun tendona özgü genler veya hücre kaderi bağlamında hücrelerin morfolojisi üzerindeki etkilerini incelerken avantajlıdır, 3D sistemler ise hücre-ECM etkileşimlerini daha doğru bir şekilde kopyalayabilir 9,10.
2D yükleme sistemlerinde, hücreler ve kültür substratı arasındaki gerilme homojendir, yani hücrelerin hücre iskeletine uygulanan yük tamamen kontrol edilebilir. Çift eksenli yükleme ile karşılaştırıldığında, tenositler ağırlıklı olarak in vivo9 kollajen demetlerinden tek eksenli yüklemeye maruz kaldığından, tek eksenli yükleme fizyolojik olarak daha önemlidir. Günlük aktiviteler sırasında tendonların %6'ya kadar tek eksenli gerilme yüküne maruz kaldığı bulunmuştur11. Spesifik olarak, önceki çalışmalar, %4-5 fizyolojik aralıklarında yüklemenin, SCX ve TNMD gibi tendonla ilgili belirteç ekspresyonunu koruyarak ve ayrıca artan kollajen üretimini koruyarak tenojenik farklılaşmayı teşvik ettiği gösterilmiştir 9,10. % 10'dan fazla suşlar travmatik olarak ilişkili olabilir, ancak fizyolojik olarak anlamlı olmayabilir12,13.
Burada, tenosit üretimi için gerekli olabilecek mekanik ve biyolojik stimülasyonun sinerjik etkisini hesaba katan bir protokol sunulmaktadır. İlk olarak, embriyoid cisimlerin büyüme faktörlerine kısa süreli maruz kalması yoluyla iPSC'leri iMSC'lere indüklemek için tekrarlanabilir bir yöntem tanımladık ve akış sitometrisi kullanılarak MSC yüzey belirteçleri ile doğrulanmıştı. Daha sonra, iMSC'leri SCX'in (iMSCSCX+) kararlı aşırı ekspresyonuna sahip olacak şekilde tasarlamak için bir lentiviral transdüksiyon yöntemini detaylandırıyoruz. Daha fazla hücre olgunlaşması için, iMSCSCX+ , fibronektin kaplı silikon plakalara ekilir ve CellScale MCFX biyoreaktörü kullanılarak optimize edilmiş tek eksenli gerilim protokolüne tabi tutulur. Tenterojenik potansiyel, erken ve geç tendon belirteçlerinin yukarı regülasyonunun yanı sıra kollajen birikimi14 gözlemlenerek doğrulandı. Bu iTenosit üretme yöntemi, tendon hücre tedavisi uygulamaları için sınırsız kullanıma hazır, allojenik bir kaynak sunabilen bir kavram kanıtıdır.

<table><tbody><tr><td>2-merkaptoetanol ve nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>StemCell Teknolojileri</td><td>7920</td><td>hücre ayrışma reaktifi</td></tr><tr><td>Antibiyotik-antimikotik çözelti</td><td>Thermofisher</td><td>15240096</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD105</td><td>Ancell</td><td>326-050</td><td></td></tr><tr><td>APC fare anti-insan CD44</td><td>BD Biosciences</td><td>559942</td><td></td></tr><tr><td>APC fare IgG2 K izotip kontrolü</td><td>BD Biosciences</td><td>555745</td><td></td></tr><tr><td>BenchMark fetal sığır serumu</td><td>GeminiBio</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>Biglycan</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00959143_m1</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Millipore Sigma</td><td>A3733</td><td></td></tr><tr><td>Kollajen tip I alfa 1 zincirli insan Taqman astarı</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00164004_m1</td><td></td></tr><tr><td>Kollajen tip III alfa 1 zincirli insan Taqman astar</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00943809_m1</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit</td><td>Millipore Sigma</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, düşük glikoz, piruvat, glutamin yok, fenol kırmızısı</td><td>yok Thermofisher</td><td>11054020</td><td></td></tr><tr><td>Eagle'ın minimum esansiyel ortamı (EMEM)ATCC</td><td></td> <td>30-2003</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektin sığır plazması</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>FITC fare anti-insan CD90</td><td>BD Biosciences</td><td>555595</td><td></td></tr><tr><td>Domuz derisinden Jelatin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G1890</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti Fare IgG1-PE</td><td>Bio-Rad</td><td>STAR117</td><td></td></tr><tr><td>HEK 293T / 17</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td></td></tr><tr><td>IMDM, fenol kırmızısı yok</td><td>Thermofisher</td><td>21056023</td><td></td></tr><tr><td>iPSC'ler: 83i-cntr-33n1</td><td>Sedir-Sina iPSC Çekirdek Tesis</td><td>N/A</td><td>https://biomanufacturing.cedars-sinai.org/product/cs83ictr-33nxx/</td></tr> <tr><td>İzotip Kontrol Antikoru, fare IgG2a-FITC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-113-271</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut serum replasmanı</td><td>Thermofisher</td><td>10828010</td><td></td></tr><tr><td>L-askorbik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A4544</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Thermofisher</td><td>2503081</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>bazal membran matrisi</td></tr><tr><td>MechanoCulture FX</td><td>CellScale</td><td>N/A</td><td>germe aparatı</td></tr><tr><td>MEM esansiyel olmayan amino asit çözeltisi</td><td>Thermofisher</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Mohawk insan Taqman astarı</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00543190_m1</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR Plus</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>100-0276</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Thermofisher</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Trombosit kaynaklı büyüme faktörü reseptörü Bir insan Taqman astarı</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00998018_m1</td><td></td></tr><tr><td>Poli (2-hidroksietil metakrilat)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>192066</td><td></td></tr><tr><td>Polibren enfeksiyonu / transfeksiyon reaktifleri</td><td>Millipore Sigma</td><td>TR-1003</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan&nbsp; TGF-beta 1 protein insan Taqman astarı</td><td>RnD Sistemleri</td><td>240-B</td><td></td></tr><tr><td>Scleraxis insan Taqman astarı</td><td>Thermofisher</td><td>Hs03054634_g1</td><td></td></tr><tr><td>SCXA (SCX) (NM_00108050514) insan etiketli ORF klonu</td><td>OriGene</td><td>RC224305L4</td><td></td></tr><tr><td>Silikon plakalar</td><td>CellScale</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum azid</td><td>Millipore Sigma</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Tenascin C insan Taqman astarı</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00370384_m1</td><td></td></tr><tr><td>Tenomodulin insan Taqman astarı</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00223332_m1</td><td></td></tr><tr><td>Trombospondin 4 insan Taqman astarı</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00170261_m1</td><td></td></tr><tr><td>Transfeksiyon reaktifi, BioT Bioland</td><td>Scientific LLC</td><td>B01-01</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (%0,25)</td><td>Thermofisher</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tübülin polimerizasyonunu teşvik eden protein ailesi üyesi 3</td><td>Thermofisher</td><td>Hs03043892_m1</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 dihidroklorür</td><td>Biyogemler</td><td>1293823</td><td></td></tr></tbody></table>

kombine skleraksi aşırı ekspresyonu ve 2d tek eksenli gerilim yoluyla indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı itenositlerin üretilmesi

Generation of Induced Pluripotent Stem Cell-Derived iTenocytes via Combined Scleraxis Overexpression and 2D Uniaxial Tension

Günümüzün tendon ve bağ onarımındaki zorlukları, tendon rejenerasyonunu desteklemek için hücre bazlı tedavi için uygun ve etkili bir adayın belirlenmesini gerektirmektedir. Mezenkimal stromal hücreler (MSC'ler), tendon onarımı için potansiyel bir doku mühendisliği stratejisi olarak araştırılmıştır. Multipotent olmalarına ve in vivo rejeneratif potansiyele sahip olmalarına rağmen, kendi kendini yenileme kapasiteleri sınırlıdır ve fenotipik heterojenlik sergilerler. İndüklenmiş pluripotent kök hücreler (iPSC'ler), yüksek kendini yenileme kapasiteleri ve benzersiz gelişimsel plastisiteleri nedeniyle bu sınırlamaları aşabilir. Tenosit gelişiminde, Skleraksi (Scx), tendon farklılaşmasının çok önemli bir doğrudan moleküler düzenleyicisidir. Ek olarak, mekanoregülasyonun embriyonik tendon gelişimini ve iyileşmesini yönlendiren merkezi bir unsur olduğu gösterilmiştir. Bu nedenle, tenosit üretmek için gerekli olabilecek biyolojik ve mekanik stimülasyonun sinerjik etkisini kapsüllemek için bir protokol geliştirdik. iPSC'ler mezenkimal stromal hücreler (iMSC'ler) haline geldi ve akış sitometrisi yoluyla klasik mezenkimal stromal hücre belirteçleri ile karakterize edildi. Daha sonra, bir lentiviral vektör kullanılarak, iMSC'ler SCX'i (iMSCSCX+) stabil bir şekilde aşırı eksprese etmek için dönüştürüldü.Bu iMSCSCX+ hücreleri, bir 2D biyoreaktör kullanılarak tek eksenli çekme yüklemesi yoluyla iTenositlere daha da olgunlaştırılabilir. Elde edilen hücreler, erken ve geç tendon belirteçlerinin yukarı regülasyonunun yanı sıra kollajen birikiminin gözlemlenmesiyle karakterize edildi. Bu iTenosit üretme yöntemi, araştırmacılara tendon hücre tedavisi uygulamaları için potansiyel olarak sınırsız bir kullanıma hazır allojenik hücre kaynağı geliştirmede yardımcı olmak için kullanılabilir.

İnsan iPSC'lerinin iMSC'lere göre farklılaşması Daha önce açıklandığı gibi, iPSC'leri iMSC'lere ayırmak için mevcut protokol, embriyoid cisimciklerininoluşumunu içerir 2. Bu işlem, iPSC'lerden iMSC'leri indüklemek için yaklaşık on gün sürer (Şekil 1A <img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65837/65837fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65837/65837fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65837/65837fig02v2.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65837/65837fig02largev2.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65837/65837fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65837/65837fig03large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65837/65837fig04.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65837/65837fig04large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65837/65837fig05.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65837/65837fig05large.jpg" target="_blank"></a>

Bu makale, bir lentiviral vektör ve bir 2D biyoreaktör aracılığıyla tek eksenli germe kullanarak Skleraxis'in kombine aşırı ekspresyonu ile iPSC'den türetilmiş mezenkimal stromal hücreler üreterek iTenositler üretme prosedürünü açıklamaktadır.

Kombine skleraksi aşırı ekspresyonu ve 2D tek eksenli gerilim yoluyla indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı iTenositlerin üretilmesi

Today&#39;s challenges in tendon and ligament repair necessitate the identification of a suitable and effective candidate for cell-based therapy to ...

Tendon yaralanması, ABD'deki en yaygın kas-iskelet sistemi problemlerinden biridir ve yılda tahmini 33 milyon insanı etkilemektedir. Araştırmamız, hasta sonuçlarını büyük ölçüde iyileştirebilecek tendonları onarmak için bir hücre ve doku mühendisliği yaklaşımı geliştirmeye odaklanmaktadır. Tendon araştırmalarını ilerletmek için kullanılan mevcut teknolojiler, tendon için gerekli çevresel ipuçlarını taklit etmek için biyoreaktörler, genetik mühendisliği biyomalzemeleri ve diğer doku mühendisliği tekniklerinin kullanımı ile birlikte indüklenmiş pluripotent kök hücreler gibi farklı kaynaklardan kök hücrelerin kullanımını içerir.Tendonların kökenlerinden nasıl geliştiğine dair anlayışımız sınırlıdır. Tendon olgunlaşması sırasında çok yüksek oranda eksprese edilen birkaç iyi bilinen gen vardır. Ancak, ne yazık ki tendon dokusuna özgü değildirler.Bu, araştırmacıların başarılı tendon farklılaşmasını standart olarak değerlendirmesini zorlaştırır. Bir protokol, dikkate değer IPC farklılaşma potansiyelinden ve tendon gelişimi hakkında şimdiye kadar bildiklerimizden yararlanır. Amacımız tendon hücre tedavisi uygulamaları için allojenik hücre kaynağı geliştirmektir.Laboratuvarlarımız, tendon gelişimini daha iyi anlamak için tendon sülfat ile ilgili yolları aydınlatmaya odaklandı. Geleneksel tendon onarımı için daha etkili alternatifler geliştirmek için bu bilgiyi doku mühendisliği teknolojileri ve biyomalzemelerle birlikte uygulamak istiyoruz.

generation-induced-pluripotent-stem-cell-derived-itenocytes-via

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu video indüklenebilir lentivirüs kullanarak bağlı pluripotent kök hücreleri üretmek için prosedürü ifade Oct4, Sox2, c-Myc ve Klf4 gösterir.

Sox-2 Zorla İfade yoluyla MEFS iPS Hücreler oluşturma, Eki 4, c-Myc ve Klf4

Stemgent Dox Đndüklenebilir Fare TF lentivirüs Set bağlı pluripotent kök (IPS) hücreleri fare embriyonik fibroblastlar (MEFS) yeniden programlamak. Burada fare reprogramming transkripsiyon faktörleri Oct4 DOX indüklenebilir ifade için protokol göstermek, Sox2, Klf4 ve c-Myc ifade ortak MES pluripotency belirteçlerinin iPS koloniler oluşturmak için.

Dört Transkripsiyon Faktör Fare Embriyonik Fibroblastlar yeniden programlanması Bağlı Pluripotent Kök Hücre Üretimi, Doksisiklin lentiviral İletim Sistemi Đndüklenebilir

Biz, insan faktörleri Oct4, Sox2, Nanog ve Lin28 lentivirüs aracılı teslim kullanarak insan somatik hücre alınan uyarılmış pluripotent kök hücreleri üretimi için protokol göstermektedir. Pluripotency morfolojisi ve embriyonik kök (ES) hücre-spesifik belirteçler varlığı teyit edilmiştir.

Stemgent İnsan TF lentivirüs İnsan Fibroblastlar yeniden programlanması Bağlı Pluripotent Kök Hücre Üretimi ayarla

Onlar pluripotency için standart testleri geçmek bile oluşturuluyor indüklenen pluripotent kök hücre (IPSC) hatları gelişim potansiyeli birbirinden farklı çizgiler üretir. Burada sahip tam olarak pluripotency IPSC hattı tanımlayan iPSCs, tamamen edilen fareler üretmek için bir protokol...

İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Elde Edilen Fare Üretimi

Pluripotent kök hücreler, embriyonik veya uyarılmış pluripotent kök (iPS) hücreleri ya, kardiyomiyositler dahil olmak üzere insan farklılaşmış hücrelerin, değerli bir kaynak oluşturmaktadır. Burada, bir embriyoid organları tabanlı protokol ile fonksiyonel insan kardiyomiyositlerin elde etmek için bunları nasıl kullanacağınızı gösteren, iPS hücrelerin kalp indüksiyon üzerinde durulacak.

İnsan kardiyomiyositleri Üretimi: Besleyici-ücretsiz İnsan Bağlı Pluripotent Kök Hücre A Farklılaşma Protokolü

Burada, biz insana biyolojik özelliklerini özetlemek permisif kültür koşulları altında kasılma myofibers (myospheres) üç boyutlu kümeler oluştururlar iskelet kası atalarıdır, homojen bir nüfusa üreten doğru insan embriyonik kök hücreleri (hESC) epigenetik yeniden programlama dayalı bir protokol açıklar iskelet kasları.

Epigenetik yeniden programlanması ile hESC itibaren Myospheres Üretimi

Burada, biz tutarlı sonuç ve geliştirilmiş verimlilik gösterir Sendai virüs ile transgen-özgür insan iPSCs içine insan somatik hücreleri yeniden programlamak için kurulan yöntem sunuyoruz.

Sendai-virüs ile İnsan Somatik Verimli Üretimi İnsan uyarılmış pluripotent kök hücrelerin

Bu protokol, yeniden programlama faktörleri içeren matrigel ve Sendai virüs vektörlerinin bir kombinasyonunu kullanarak, besleyicisiz koşullarda insan periferik T hücrelerinden indüklenmiş pluripotent kök hücrelerin (iPSC'ler) nasıl üretileceğini açıklar.

Besleyici içermeyen şartlar Sendai virüs kullanılarak insan periferik T hücrelerinden uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi

Gelecekteki hastalığı modelleme uygulamaları olan kimyasal olarak tanımlanan koşullarda, burada İnsan İndüklenmiş pluripotent kök hücre farklılaşma içine her somite türev (myotome, sclerotome, dermatome ve syndetome) için bir iletişim kuralı mevcut ve Ortopedik cerrahi hücre tabanlı terapiler.

Somite türevleri indüklenen insan nesil Vitro Pluripotent kök hücreler

Hizalanmış miyokard doku nesil klinik açıdan yararlı amaçlar için kök hücre biyolojisi ile ilgili güncel gelişmeleri adapte için önemli bir gerekliliktir. Bu yazıda hücre şekli ve fonksiyonu hassas kontrolü için mikrokontak baskı yaklaşımı açıklar. Kardiyak progenitörler türetilmiş embriyonik kök hücre son derece saf popülasyonlarının kullanarak, biz sonra anizotropik fonksiyonel miyokard doku oluşturur.

Mikrokontak baskı sayesinde Bağlantısızlar Fonksiyonel Miyokard Doku Üretimi

Öğrenin iPSC kaynaklı mezenkimal stromal hücrelerden skleraksi aşırı ekspresyonu ve 2D tek eksenli gerilim ile iTenosit üretimini. Bu yöntem tendon doku mühendisliği için umut vadeden bir yaklaşım sunar.

Kombine skleraksi aşırı ekspresyonu ve 2D tek eksenli gerilim yoluyla indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı iTenositlerin üretilmesi (Video) | JoVE Journal

Kombine skleraksi aşırı ekspresyonu ve 2D tek eksenli gerilim yoluyla indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı iTenositlerin üretilmesi

Daha fazla video keşfet