Bağırsak-beyin Nöral İletişiminin Gerçek Zamanlı Analizi: Bağırsak Glukoz Stimülasyonuna Yanıt Olarak Korteks Çapında Kalsiyum Dinamiği

Araştırma kapsamımız, bağırsak-beyin sinir iletişimini, özellikle de gıda tercihindeki rolünü ortaya koymaktadır. Vagus siniri ile ilgili deneyler genellikle tek bir demet olarak ele alınmıştır, ancak son araştırmalar vagus sinirinin özellikleri ve organ özgüllüğünü seçtiğini ortaya koymuştur. Bu yüzden istatistiklerini araştırmanın, bilirsiniz, gelecekte dikkat çekeceğini düşünüyorum.

Bağırsağa kateter takmanın bu yöntemi, daha önce önerilen yöntemden daha düşük maliyetli, daha az invaziv ve daha kolay uygundur. Geleneksel olarak, bağırsağa kateter bağlantısı dikilerek yapılırdı. Burada, siyanoakrilat yapıştırıcı eki ile sütürlemeyi değiştirerek farelerdeki cerrahi hasarı azalttık.

Laboratuvarımızda, farelerde fiziksel ve psikolojik stresin bağırsak-beyin sinir iletişimini nasıl etkilediğinin mekanizmasını araştırıyoruz. Başlamak için, silikon tüpü yedi santimetrelik kesin bir uzunlukta kesmek için makas kullanın. Siyanoakrilat yapıştırıcı kullanarak, silikon tüpün ucundan yaklaşık üç milimetre uzakta küçücük plastik boncukları sabitleyin.

23 gauge iğnenin ucunu kesin ve iğne ucundan 1,5 santimetre kesin. Boncuğun karşı tarafındaki iğnenin kesilen kısmını silikon tüpe yerleştirin. Pense kullanarak, iğne ucundan bir santimetre çıkarın.

Modifiye edilmiş 23 gauge enjeksiyon iğnesini 2,5 mililitrelik bir şırıngaya takın. 23 gauge enjeksiyon iğnesinin üzerine 15 santimetrelik bir silikon tüp sürün. Enjeksiyon iğnesini uçtan 1,5 santimetre kesin ve silikon tüpe takın.

Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi ameliyat masasına sırtüstü yatırın ve ağzını inhalasyon aparatına yakın bir şekilde hizalayın. Yapışkan bant kullanarak farenin ağız boşluğunu, ön bacaklarını ve arka bacaklarını ameliyat masasına sabitleyin. Sol üst karın bölgesindeki tüyleri almak için tüy dökücü krem sürün.

Karnın sağ tarafında ve ksifoid işleminin beş milimetre altında 1,5 santimetrelik bir cilt kesisi yapın. Daha sonra karın duvarında ilk cilt kesisi ile aynı yerde 1,5 santimetrelik bir kesi oluşturun. Mideyi açığa çıkarmak için sol hepatik lobu künt uçlu forseps ile yanal olarak hafifçe hareket ettirin.

Şimdi mideyi kaldırın ve kesiden nazikçe çıkarın. Bir makas kullanarak, pilor antrumunda küçücük bir perforasyon oluşturun. Kateterin ucunu bir boncuk ile perforasyonun içine sokun.

Kateterin mideye sıkıca bağlandığını onayladıktan sonra, mideyi dikkatlice orijinal konumuna yeniden yerleştirin. Karın duvarını dikerek kateterin dışarıdan çıkmasına izin verin. Daha sonra cilt kesisini karın kapanışına benzer bir şekilde kapatın.

Ameliyat edilen bölgeyi klorheksidin glukonat solüsyonu ile temizleyin ve fareyi sterilize edilmiş bir kafese yerleştirin. Başlamak için, nabız ve solunumun etkilerini azaltmak için yardımcı kulak çubukları kullanarak anestezi uygulanmış fareyi stereotaksik bir platforma sabitleyin. Elektrikli tıraş makinesi veya epilasyon kremi kullanarak, saç derisindeki tüyleri dikkatlice alın.

Saç derisinin yüzeyini %0,1 ila %0,5 klorheksidin glukonat solüsyonu ile dezenfekte edin. Saç derisine lokal anestezik jel uygulayın ve beş ila 10 dakika bekleyin. Daha sonra, makas kullanarak başın arkasından alnına doğru düz bir kesim yapın.

Kafatasını açığa çıkaran fazla deriyi geri çekmek için klips kullanın. Periosteumun bağ dokusunu pamuklu çubukla çıkarın. Akrilik çimentoyu hemen kafatasına uygulayın ve çimentonun kuruması için beş dakika bekleyin.

Fareyi floresan stereo mikroskop altında hareket ettirin. Görüntüleme için, cıvalı bir ışık kaynağıyla birlikte geniş bantlı bir mavi floresan filtre seti kullanın. Ardından, kateter iğnesini kateterin ucundan çıkarın.

Yaklaşık 0.03 mililitre salin kullanarak fare tarafı kateter içindeki kalıntı içeriği temizleyin. Ardından kateteri fareden çıkarın. Uygun dozda% 10 glikoz çözeltisi şırıngaya aspire edin ve katetere takın.

Görüntüleme yazılımında kamera tanımayı kontrol edin ve kare hızını 10 hertz olarak ayarlayın. Çözünürlüğü 512 x 512 piksel ve derinliği 16 bit olarak ayarlayın. Kayıt işlemi düğmesine tıklayın ve 50 saniye boyunca spontan veri alın.

Son olarak, glikoz çözeltisinin kademeli bir infüzyonu ile farenin fizyolojik durum verilerini kaydedin. Spontan nöral aktivite, korteks boyunca rastgele kalsiyum salınımlarını ortaya çıkardı. Zamansal floresan yoğunluğu değişiklikleri, bir patlama bastırma modelini takiben kalsiyum salınımları gösterdi.

Glikoz enjeksiyonu, ikincil motor kortekste hemen aktivasyon ile glikoz uygulamasının tamamlanmasından dört ila sekiz saniye sonra kortikal kalsiyum dinamiklerinde önemli değişiklikler gösterdi. Ancak su uygulamasını takiben herhangi bir değişiklik gözlenmedi. Su uygulaması ile karşılaştırıldığında, glikoz enjeksiyonunu takiben ikincil motor korteks bölgesinde floresan yoğunluk oranlarında önemli değişiklikler gözlenmiştir.

Enjeksiyon sonrası farklı kortikal bölgelerdeki aktivasyon seviyeleri sadece ikincil motor korteks bölgesinde önemli farklılıklar gösterdi.