Name: Oral Kandidiyazisin Murin Modelinde Kurkuminoid Aracılı Antimikrobiyal Fotodinamik Tedavi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-27T14:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Öğrenin, aPDT ile oral kandidiyazis tedavisinde kurkuminoidlerin antimikrobiyal etkisini fare modelinde nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu yöntem, antifungal direnç sorununa alternatif bir çözüm sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, FAPESP (São Paulo Araştırma Vakfı, süreç numarası FAPESP #2013/07276-1 (CePID CePOF) ve 2008/00601-6'nın mali desteğine teşekkür eder. Ayrıca CUR bazlı suda çözünür tuz hakkında bilgi verdiği için Dr. Ana Paula Silva'ya teşekkür ederiz.

Farelerin kullanımına ilişkin araştırma protokolü, UNESP, Araraquara Diş Hekimliği Fakültesi'ndeki Hayvan Kullanımı Etik Kurulu (vaka numaraları 05/2008 ve 09/2020) tarafından onaylanmıştır. Referans suş olarak C. albicans (ATCC 90028) kullanıldı. Bu çalışma için vücut kütlesi 20-30 g olan altı haftalık dişi İsviçre fareleri (n = 45) kullanıldı. Hayvanlar São Paulo Eyalet Üniversitesi, UNESP, Botucatu tarafından sağlandı.
1. PS'nin hazırlanması ve aPDT için ışık kaynağının seçimi
<ol><li>PS'yi test edilecek maddenin özelliklerine göre hazırlayın. NOT: Bu çalışmada, PS olarak suda çözünür bir kurkuminoid karışımı (CUR bazlı suda çözünür tuz karışımı12) kullanılmıştır (bkz. Malzeme Tablosu ve Şekil 1). 20 μM, 40 μM ve 80 μM'de (sırasıyla 15.6, 29.2 ve 58.4 mg/L) seyreltmeler, kullanımdan hemen önce ultra saf suda hazırlandı ve 5 °C'de tutuldu.</li>
	<li>Dokuyu ısıtmadan ışığa duyarlı hedefin tamamını eşit ve aynı anda aydınlatabilen uygun bir dalga boyuna (PS absorpsiyonununkiyle aynı) sahip bir ışık ekipmanı seçin. NOT: Bu çalışmada, Instituto de Física de São Carlos'ta (São Paulo Üniversitesi, São Carlos, SP, Brezilya) tasarlanan ışık yayan diyot (LED, bkz. Malzeme Tablosu) içeren bir el aleti kullanılmıştır. Işığın sağladığı çıkış gücü, yaklaşık 455 nm'lik mavi dalga boyunda 89,2 mW/cm2 idi.</li>
</ol>2. C. albicans inoculum'un hazırlanması
<ol><li>Referans suşu C. albicans (ATCC 90028) kullanana kadar -80 °C'de %50 gliserol ile maya-pepton-glikoz (YEPD, Malzeme Tablosuna bakınız) içinde saklayın.</li>
	<li>Donmuş suşu oda sıcaklığında çözdürün, kloramfenikol içeren Sabouraud dekstroz agar (SDA) içeren bir Petri kabına 100 μL'lik bir alikot yayın ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve 37 ° C'de 48 saat inkübe edin.</li>
	<li>Beş koloniyi %2 glikoz (YNBg) ortamı ile 10 mL maya nitrojen suyuna aktarın ve 16 saat boyunca 37 ° C'de aerobik olarak büyütün.</li>
	<li>Maya kültürünü taze YNBg (1:10) içinde seyreltin ve optik yoğunluk büyümenin orta log fazına ulaşana kadar aerobik olarak 37 °C'de inkübe edin. NOT: Daha önce her laboratuvar için mikrobiyal büyüme eğrisini standartlaştırın. Mevcut araştırmada, kültürlerin, 540 nm'de (OD540) optik yoğunluk ile gösterildiği gibi, ortalama değeri 0.536 ± 0.062 rastgele birim (ortalama ± standart sapma [SD]) ile gösterildiği gibi büyümenin orta log fazına ulaşana kadar yaklaşık 8 saat inkübe etmelerine izin verildi.</li>
	<li>Kültürü oda sıcaklığında 5.000 x g'da 5 dakika santrifüjleyin, süpernatanı atın ve peleti aynı hacimde steril fosfat tamponlu salin (PBS; 0.136 M NaCl, 2 mM KCl, 1 mM KH2PO4, 10 mM Na2HPO4, pH 7.4) ile iki kez yıkayın.</li>
	<li>PBS'de dört seri 10 kat seyreltme gerçekleştirmek için 100 μL alikot kullanın, seyreltmeleri SDA plakalarına yayın ve koloni sayımı için 37 ° C'de 48 saat inkübe edin. Standart olarak, mantar süspansiyonları mililitre başına yaklaşık 4.5 × 107 koloni oluşturan birim (CFU/mL)] konsantrasyonlarda kullanılır.</li>
</ol>
3. Farelerde OC indüksiyonu
NOT: Aşağıdaki metodoloji daha önce Takakura ve ark.13 tarafından tanımlanmış ve grubumuz10,14 tarafından bazı değişikliklerle yeniden üretilmiştir.
<ol><li>Fareleri, aynı sayıda tedaviye karşılık gelen dokuz gruba (n = 5) rastgele dağıtın (Ek Dosya 1). NOT: Farelerin ağız boşluğu Candida büyümesi için negatif olmalıdır. Bunun, ağız boşluğunu sürünerek ve numuneyi SDA üzerine kaplayarak kontrol edilmesi gerekir.</li>
	<li>Hayvanları, zemin kaplaması için odun talaşı ilebirlikte propilen kutularda 10 (kutu başına en fazla 5 fare), 23 ± 2 ° C'de 12/12 saat aydınlık/karanlık döngüsü altında sıcaklık kontrollü bir vivaryumda tutun. Belirli bir zenginleştirmenin sağlanmasına gerek yoktur.</li>
	<li>Fareleri ekstrüde fare diyeti ve filtrelenmiş su ad libitum üzerinde tutun.</li>
	<li>İmmünsüpresif ilaç olan prednizolonu (100 mg/kg vücut ağırlığı, bkz . Malzeme Tablosu), ilk gün ilk kez C + L + 20, C + L + 40, C + L + 80, C + L - 20 μM, C + L- 40, C + L- 80, C-L + ve C-L- gruplarının tüm üyelerine deri altına enjekte edin (Ek Dosya 1). NOT: Aynı gruptaki fareleri aynı kutuda tutun ve herhangi bir stres ve kilo kaybı belirtisi için günlük olarak izleyin. Stres veya kilo kaybı not edilirse analjezik veya değiştirilmiş yiyecek / su için veteriner tavsiyesi alın.</li>
	<li>Birinci günden başlayarak ve deneyin sonuna kadar, içme suyunda 0.83 mg / mL'de tetrasiklin hidroklorür sağlayın13.</li>
	<li>C + L + 20, C + L + 40, C + L + 80, C + L- 20, C + L- 40, C + L- 80, C-L + ve C-L- (Ek Dosya 1) grupları dahil olmak üzere fare dillerini ikinci günde C. albicans inoculum ile aşılayın. Bu fareleri negatif kontrol grubundan (NCtrl) aşılamayın.<ol><li>Aşılamadan önce her uyluk kasına 10 mg / kg klorpromazin klorür (bkz . Malzeme Tablosu) intramüsküler enjeksiyonu ile hayvanları sakinleştirin.</li>
		<li>Steril bir swabı (hayvan başına bir tane) taze hazırlanmış (yani aşılamadan hemen önce hazırlanmış) standartlaştırılmış bir C. albicans süspansiyonuna batırarak farelerin ağız içi aşılamasını gerçekleştirin.</li>
		<li>Sakinleştirilmiş fareleri sırtüstü pozisyona getirin. Steril bir forseps kullanarak dillerini nazikçe ağızlarından çekin. Her farenin dilini ıslatılmış bir bezle 30 saniye ovalayın. Sedasyondan kurtulana kadar fareleri izleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Beşinci günde, immünosupresyonunu sürdürmek için tamamlayıcı bir deri altı prednizolon (100 mg / kg vücut ağırlığı) enjeksiyonu uygulayın. NOT: Bu protokol, ağız içi aşılamadan sonra enfeksiyonu 7 gün boyunca tutmak için yeterlidir. Protokol zaman çizelgesi Şekil 2'de gösterilmektedir.</li>
</ol>4. Antimikrobiyal Fotodinamik Tedavi ve C. albicans'ın oral lezyonlardan kurtarılması
<ol><li>Yedinci günde, tedaviden önce, ksilazin (10 mg / kg vücut ağırlığı) ile birlikte intraperitoneal ketamin hidroklorür (100 mg / kg vücut ağırlığı) enjeksiyonu kullanarak hayvanları uyuşturun (bkz.</li>
	<li>Her hayvanı, ağzı açık tutmak için kesici dişlerin etrafına sarılabilen paslanmaz çelik tellerle donatılmış bir ped cihazı14,15 üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. NOT: Fareleri sakinleştirilirken ısıtmak, oda sıcaklığında hipotermiyi önlemek ve anesteziye bağlı ölümleri önlemek için izotermal pedler önerilir15. Anestezi uygulanan her hayvan, anestezi derinliğini doğrulamak için ayak parmakları sıkıştığında geri çekilme refleksinin olmaması ile izlenmelidir. Gerekirse orijinal dozun 1/3'ünde (ksilazin olmadan) bir idame dozu ketamin uygulanabilir.</li>
	<li>Mandibula ve yanaklar geri çekildiğinde, dili nazikçe ağzın dışına yerleştirin.</li>
	<li>C+L+ gruplarından fareler için, dilin sırtına 70 μL PS pipetleyin (test edilen konsantrasyonlardan birinde). Fareleri ışınlama öncesi süre olarak 20 dakika boyunca karanlık bir ortamda tutun. Bu süre zarfında, ışığa duyarlılaştırıcının (PS) yutulmasını önlemek için her hayvanın dilinin ağız boşluğunun içinde kaldığından emin olun.</li>
	<li>Işığa duyarlılık döneminden sonra, aydınlatma için dili ağızdan dışarı çekin. LED cihazını dilin sırtına yerleştirin ve 37.5 J/cm2'de (mevcut cihazla 7 dakika) aydınlatın (Şekil 3).</li>
	<li>C+L- gruplarından hayvanlar için, dilin sırtında test edilen konsantrasyonlardan birinde 70 μL PS pipetleyin ve bu fareleri 27 dakika karanlıkta tutun.</li>
	<li>C-L+ grubundaki hayvanlar için (önceden herhangi bir ışığa duyarlılık olmadan ışıkla tedavi edilir), dilin sırtına 70 μL steril salin solüsyonu pipetleyin. Fareleri 20 dakika karanlıkta tutun ve ardından dillerini 37,5 J/cm2'de (mevcut cihazla 7 dakika) aydınlatın.</li>
	<li>C-L grubundan fareler için (ne PS ne de ışıkla muamele edilmemiş), dilin sırtına 70 μL steril salin solüsyonu pipetleyin ve 27 dakika karanlıkta tutun.</li>
	<li>Tedaviden hemen sonra C. albicans'ı tüm farelerin dillerinden kurtarın. Dilin sırtını steril bir pamuklu çubukla 1 dakika boyunca temizleyin.</li>
	<li>Her numune swabını 1 mL steril salin içeren bir tüpe yerleştirin ve mikrobiyal hücreleri yeniden süspanse etmek için 1 dakika boyunca girdap yapın.</li>
	<li>Hemen PBS'de 10 kat seri seyreltme gerçekleştirin ve SDA plakaları üzerinde 25 μL'lik alikotları çoğaltın. Plakaları aerobik olarak 37 °C'de 48 saat inkübe edin.</li>
	<li>48 saat sonra, maya koloni sayımlarını belirlemek için dijital bir koloni sayacı ( Malzeme Tablosuna bakın) kullanın. Her hayvan için C. albicans yükünü (CFU/mL) hesaplayın.</li>
	<li>CFU/mL değerlerini log10'a dönüştürün ve deneyin tasarımına ve veri varsayımlarına göre uygun şekilde analiz edin. NOT: Bu çalışmada Welch'in tek yönlü ANOVA ve Games-Howell post-hoc testi (α = 0.05)16 kullanılmıştır.</li>
</ol>5. Histopatolojik analizler
<ol><li>Sekizinci günde, fareleri intraperitonial enjeksiyon yoluyla 10 mg / kg'da ksilazin ile birlikte 100 mg / kg'da ketamin ile uyuşturun ve aşırı dozda ketamin (intraperiotoniyal yoluyla uygulanan 200 mg / kg) ile ötenazi yapın. Solunum hareketinin (apne) ve kalp atışının (asistol) yokluğunu kontrol ederek ölümü onaylayın.</li>
	<li>Dili dikkatlice sıkıştırın ve hayvanın ağzından dışarı çekin. Manuel bir neşter kullanarak, ön ve orta bölgelerde herhangi bir yaralanmaya neden olmadan tüm dili cerrahi olarak çıkarmak için sirkumvalat papilladan önce bir kesi yapın.</li>
	<li>Dili 24 saat boyunca% 10 tamponlu formalin (pH 7.2-7.4) içinde sabitleyin ve 2 saat boyunca akan suda yıkayın.</li>
	<li>Parafin işlemine dahil edilmeye devam edin: dehidrasyon, berraklaştırma ve emprenye10,14.</li>
	<li>Bir mikrotom kullanarak seri bölümleri (5 μm kalınlığında) kesin, ardından bölümleri cam slaytlara yapıştırın. Histopatolojik inceleme ve ışık mikroskobu altında gözlem yoluyla mantarları tanımlamak için periyodik asit-Schiff ve hematoksilen (PAS-H) kullanarak bu bölümleri boyamaya devam edin.</li>
	<li>C. albicans enfeksiyonuna bağlı doku reaksiyonunu incelemek için tercihen çalışılan gruplara kör olan bir patoloğa danışın.</li>
	<li>Dokunun histolojik özelliklerini (epitel ve bağ dokusu), özellikle değişen yoğunluklarda lokal inflamatuar yanıtları tanımlayın.</li>
</ol>

Farelerde Oral Kandidiyazis için Kurkuminoidlerin Kullanıldığı Etkili aPDT

<ol><li>Vila, T., Sultan, A. S., Montelongo-Jauregui, D., Jabra-Rizk, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+candidiasis%3A+a+disease+of+opportunity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+fungi+%28Basel%2C+Switzerland%29%22%5BJournal%5D)">Oral candidiasis: a disease of opportunity.</a> Journal of fungi (Basel, Switzerland). 6 (1), 15(2020).</li>
<li>Sudbery, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+Candida+albicans+hyphae%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Growth of Candida albicans hyphae.</a> Nature Reviews Microbiology. 9 (10), 737-748 (2011).</li>
<li>Moyes, D. L., Richardson, J. P., Naglik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans-epithelial+interactions+and+pathogenicity+mechanisms%3A+scratching+the+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Candida albicans-epithelial interactions and pathogenicity mechanisms: scratching the surface.</a> Virulence. 6 (4), 338-346 (2015).</li>
<li>Lopes, J. P., Lionakis, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+virulence+of+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and virulence of Candida albicans.</a> Virulence. 13 (1), 89-121 (2022).</li>
<li>Quindós, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+tools+for+oral+candidiasis%3A+Current+and+new+antifungal+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina+oral%2C+patologia+oral+y+cirugia+buccal%22%5BJournal%5D)">Therapeutic tools for oral candidiasis: Current and new antifungal drugs.</a> Medicina oral, patologia oral y cirugia buccal. 24 (2), e172-e180 (2019).</li>
<li>Nishimoto, A. T., Sharma, C., Rogers, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+genetic+basis+of+azole+antifungal+resistance+in+the+opportunistic+pathogenic+fungus+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Molecular and genetic basis of azole antifungal resistance in the opportunistic pathogenic fungus Candida albicans.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 75 (2), 257-270 (2020).</li>
<li>Gholami, L., Shahabi, S., Jazaeri, M., Hadilou, M., Fekrazad, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+applications+of+antimicrobial+photodynamic+therapy+in+dentistry%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Clinical applications of antimicrobial photodynamic therapy in dentistry.</a> Frontiers in Microbiology. 13, 1020995(2013).</li>
<li>Trigo-Gutierrez, J. K., Vega-Chacón, Y., Soares, A. B., Mima, E. G. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+curcumin+in+nanoformulations%3A+a+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of curcumin in nanoformulations: a comprehensive review.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (13), 7130(2021).</li>
<li>Santezi, C., Reina, B. D., Dovigo, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Curcumin-mediated+Photodynamic+Therapy+for+the+treatment+of+oral+infections-A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Photodiagnosis+and+Photodynamic+Therapy%22%5BJournal%5D)">Curcumin-mediated Photodynamic Therapy for the treatment of oral infections-A review.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 21, 409-415 (2018).</li>
<li>Dovigo, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Curcumin-mediated+photodynamic+inactivation+of+Candida+albicans+in+a+murine+model+of+oral+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Mycology%22%5BJournal%5D)">Curcumin-mediated photodynamic inactivation of Candida albicans in a murine model of oral candidiasis.</a> Medical Mycology. 51 (3), 243-251 (2013).</li>
<li>Zangirolami, A. C., Carbinatto, F., Filho, J. D. V., Bagnato, V. S., Blanco, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+light-activated+curcumin+and+curcuminoids+films+for+catheters+decontamination%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+and+SurfacesB%3A+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Impact of light-activated curcumin and curcuminoids films for catheters decontamination.</a> Colloids and SurfacesB: Biointerfaces. 213, 112386(2022).</li>
<li>Santezi, C., Tanomaru, J. M., Bagnato, V. S., Júnior, O. B., Dovigo, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+of+curcumin-mediated+photodynamic+inactivation+to+reduce+oral+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Photodiagnosis+Photodynamic+Therapy%22%5BJournal%5D)">Potential of curcumin-mediated photodynamic inactivation to reduce oral colonization.</a> Photodiagnosis Photodynamic Therapy. 15, 46-52 (2016).</li>
<li>Takakura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+murine+model+of+oral+candidiasis+with+local+symptoms+characteristic+of+oral+thrush%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+and+immunology%22%5BJournal%5D)">A novel murine model of oral candidiasis with local symptoms characteristic of oral thrush.</a> Microbiology and immunology. 47 (5), 321-326 (2003).</li>
<li>Mima, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+Candida+albicans+to+photodynamic+therapy+in+a+murine+model+of+oral+candidosis%5BTitle%5D)+AND+%22OralSurgery%2C+Oral+Medicine%2C+Oral+Pathology%2C+Oral+Radiology+and+Endodontology%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of Candida albicans to photodynamic therapy in a murine model of oral candidosis.</a> OralSurgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology and Endodontology. 109, 392-401 (2010).</li>
<li>Solis, N. V., Filler, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+oropharyngeal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocol%22%5BJournal%5D)">Mouse model of oropharyngeal candidiasis.</a> Nature Protocol. 7 (4), 637-642 (2012).</li>
<li>Marôco, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMar%C3%B4co%2C+J+%22An%C3%A1lise+Estat%C3%ADstica+com+o+SPSS+Statistics+25%22">Análise Estatística com o SPSS Statistics 25</a>. , ReportNumber 7th ed, Lisboa, Portugal. (2018).</li>
<li>Naglik, J. R., Fidel, P. L. Jr, Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+mucosal+Candida+infection%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiology+Letters%22%5BJournal%5D)">Animal models of mucosal Candida infection.</a> FEMS Microbiology Letters. 283 (2), 129-139 (2008).</li>
<li>Samaranayake, Y. H., Samaranayake, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+oral+candidiasis+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Experimental oral candidiasis in animal models.</a> Clinical Microbiology Reviews. 14, 398-429 (2001).</li>
<li>Chamilos, G., Lionakis, M. S., Lewis, R. E., Kontoyiannis, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+mini-host+models+in+the+study+of+medically+important+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Role of mini-host models in the study of medically important fungi.</a> The Lancet Infectious Diseases. 7, 42-55 (2007).</li>
<li>Carmello, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+oral+candidiasis+using+Photodithazine-+mediated+photodynamic+therapy+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Treatment of oral candidiasis using Photodithazine- mediated photodynamic therapy in vivo.</a> PLoS One. 11 (6), e0156947(2016).</li>
<li>Sakima, V. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+photodynamic+therapy+mediated+by+curcumin-loaded+polymeric+nanoparticles+in+a+murine+model+of+oral+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial photodynamic therapy mediated by curcumin-loaded polymeric nanoparticles in a murine model of oral candidiasis.</a> Molecules. 23 (8), 2075(2018).</li>
<li>Abe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+glucocorticoid+antagonist%2C+mifepristone+affects+anti-Candida+activity+of+murine+neutrophils+in+the+presence+of+prednisolone+in+vitro+and+experimental+candidiasis+of+prednisolone-treated+mice+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunology+and+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A glucocorticoid antagonist, mifepristone affects anti-Candida activity of murine neutrophils in the presence of prednisolone in vitro and experimental candidiasis of prednisolone-treated mice in vivo.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 13 (4), 311-316 (1996).</li>
<li>Jones, J. H., Russell, C., Young, C., Owen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetracycline+and+the+colonization+and+infection+of+the+mouths+of+germ-free+and+conventionalized+rats+with+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Tetracycline and the colonization and infection of the mouths of germ-free and conventionalized rats with Candida albicans.</a> Journal Antimicrobial Chemotherapy. 2 (3), 247-253 (1976).</li>
<li>Russell, C., Jones, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oral+inoculation+of+Candida+albicans+in+tetracycline-treated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Effects of oral inoculation of Candida albicans in tetracycline-treated rats.</a> Journal of Medical Microbiology. 6 (3), 275-279 (1973).</li>
<li>Teichert, M. C., Jones, J. W., Usacheva, M. N., Biel, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+oral+candidiasis+with+methylene+blue-+mediated+photodynamic+therapy+in+an+immunodeficient+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22OralSurgery%2C+Medicine%2C+Pathology%2C+Radiology+and+Endodontology%22%5BJournal%5D)">Treatment of oral candidiasis with methylene blue- mediated photodynamic therapy in an immunodeficient murine model.</a> OralSurgery, Medicine, Pathology, Radiology and Endodontology. 93, 155-160 (2002).</li>
<li>Totti, M. G. A., Santos, E. B., Almeida, O. P., Koga-Ito, C. Y., Jorge, A. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+candidosis+by+Candida+albicans+in+normal+and+xerostomic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">Oral candidosis by Candida albicans in normal and xerostomic mice.</a> Brazilian Oral Research. 18, 202-207 (2004).</li>
<li>Hidalgo, K. J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+photodynamic+therapy+in+combination+with+nystatin+in+the+treatment+of+experimental+oral+candidiasis+induced+by+Candida+albicans+resistant+to+fluconazole%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial photodynamic therapy in combination with nystatin in the treatment of experimental oral candidiasis induced by Candida albicans resistant to fluconazole.</a> Pharmaceuticals (Basel). 12 (3), E140(2019).</li>
</ol>

C. albicans, bağışıklığı baskılanmış bir durum, diabetes mellitus, uzun süreli antibiyotik kullanımı ve kötü ağız hijyeni olan bireylerde oral ve özofagus enfeksiyonları ile ilişkilendirilmiştir 1,3. İnsan bulaşıcı hastalıklarının incelenmesi, klinik deneylerin güvenli ve doğru bir şekilde tasarlanabilmesi için hem in vitro hem de in vivo araştırmalar gerektirir. Bu çalışmada, C. albicans tarafından oral enfeksiyonların patogen...

Oral kandidiyazis (OC), ağız boşluğunun ana mantar enfeksiyonudur; Candida spp.'nin aşırı büyümesinden kaynaklanır. OK için predispozan faktörler arasında endokrin disfonksiyon, geniş spektrumlu antibiyotik kullanımı, radyoterapi ve kemoterapi, beslenme yetersizlikleri, kserostomi (düşük tükürük akımı), protez kullanımı, kötü hijyen ve özellikle immünosupresyonyer alır 1. Candida türleri arasında Candida albicans en yaygın ve öldürücü olanıdır; İnsan vücudunda ortak bir tür ve fırsatçı bir patojen olarak bulunur. C. albicans , morfolojisini kommensal mayalardan (blastopores) patojenik filamentlere (hif ve psödohif) değiştirme yeteneğine sahiptir2. Filamentli formlar, özellikle hifler, endositoz veya aktif penetrasyon yoluyla konakçı epitelini istila ederek enfeksiyona neden olabilir3. C. albicans'ın diğer virülans faktörleri arasında yapışma, biyofilm oluşumu ve lipazlar, fosfolipazlar, proteinazlar ve kandidalizin4 gibi lipolitik ve hidrolitik enzimlerin ve toksinlerin salgılanması yer alır.
OC tedavileri, antifungal ajanların, özellikle topikal polienlerin ve azollerin (nistatin ve mikonazol) kullanımını içerir5. Bununla birlikte, sadece kısa süreli etkinlik gösterirler ve nüks sıktır. Ek olarak, antifungallerin aşırı kullanımı, antifungal direnç gelişimi ve yayılması sorununa yol açmıştır6. Bu nedenle, oksijen varlığında bir ışığa duyarlılaştırıcı (PS) ve ışığı uygun bir dalga boyunda (PS absorpsiyonununkiyle aynı) birleştiren antimikrobiyal Fotodinamik Terapi (aPDT) gibi alternatif tedavilere ihtiyaç vardır. PS'ler hücrelere bağlanır veya hücreler tarafından alınır ve ışıkla aktive edildiğinde, duyarlı hücreler için toksik olan reaktif oksijen türleri (ROS) üretir7.
aPDT'de kullanılan ışığa duyarlılaştırıcılardan (PS'ler) biri, zerdeçal bitkisinin (Curcuma longa L.) rizomlarından ekstrakte edilen doğal olarak oluşan bir bileşik olan kurkumindir (CUR). Kurkumin, anti-inflamatuar, antioksidan, antikanser ve antimikrobiyal yetenekler dahil olmak üzere çok sayıda terapötik özelliğe sahiptir 8,9. Daha önce yapılan bir araştırma, CUR kullanan aPDT'nin, konakçının dokularına herhangi bir zarar vermeden bir murin oral kandidiyazis modelinde C. albicans'ı etkili bir şekilde azalttığını buldu10. CUR, zerdeçaldan ekstrakte edilen ana kurkuminoiddir, ancak bu bitkide demetoksikurkumin ve bis-demetoksikurkumin gibi diğer polifenoller de bulunur. Kurkuminoid aracılı aPDT, kateterlerde büyütülen Staphylococcus aureus biyofilmlerine karşı antibakteriyel aktivite gösterdi11. Bununla birlikte, bildiğimiz kadarıyla, C. albicans'a karşı antifungal aktivitesi belirsizliğini korumaktadır. Bu nedenle, bu çalışmada, bir murin OK modelinde C. albicans'a karşı bir kurkuminoid tuzun aracılık ettiği aPDT'yi değerlendirdik.

<table><tbody><tr><td>C. albicans</td><td>ATCC (Rockville, Md, ABD)</td> <td>90028</td><td>Candida inoculum Santrifüjünü hazırlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>;</td><td>Eppendorf&nbsp; Santrifüj 5804/5804R, B. Braun, Melsungen, Hessen, Almanya</td><td>022628146 (NA)</td><td>Candida inoculum</td></tr><tr><td>Chlorpromazine chloride 2 mg / mL'yi</td> hazırlamak için kullanılır <td>Bileşik eczane, Araraquara, SP, Brezilya</td><td>&nbsp;-&nbsp; &nbsp;</td><td>Kandida aşılaması sırasında hayvanları sakinleştirmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Kurkumin bazlı suda çözünür tuz</td><td>PDTPharma, Cravinhos, Brezilya</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td><td>% 53.4 doğal kurkumin ve& nbsp; % 46.6 diğer kurkuminoidlerden (demetoksikurkumin ve bis-demetoksikurkumin) oluşur. Su ve N-MetilD-Glucamin içinde hazırlanır (nihai ortalama moleküler ağırlık 730.32 g.mol ve eksi; 1)</td></tr> <tr><td>Dijital koloni sayacı</td><td>CP 600 Plus, Phoenix Ind Com Equipamentos Cient&iacute; ficos Ltda, Araraquara, SP, Brezilya</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td><td>Agar plakalarındaki kolonileri saymak için kullanılır</td></tr><tr><td>Ekstrüde fare yemi</td><td>Benelab gıda, Sanayi Qualy Hayvan Besleme ve Ticaret Ltda., Lind &oacute; ia, S&atilde; o Paulo Eyaleti, Brezilya.</td><td>&nbsp;-</td><td>Farelerin beslenmesi için kullanılır</td></tr><tr><td>Ketamin Hidroklorür% 10</td> <td>Ketamina Agener, Uni & atilde; o Qu&iacute; mika Farmaç & ecirc; utica Nacional S/A, Embu-Gua&ccedil; u, SP, Brezilya</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td><td>Tedavilerden önce hayvanları uyuşturmak ve ötenazi için kullanılır</td></tr><tr><td>Işık yayan diyot el aleti (prototip)</td><td>Instituto de F&iacute; sica de S&atilde; o Carlos, S&atilde Üniversitesi; o Paulo, S&atilde; o Carlos, SP, Brezilya</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td><td>LXHL-PR09, Luxeon III Yayıcı, Lumileds Aydınlatma, San Jose, California, ABD ile üretilmiştir</td></tr>.<tr><td>Metilprednizolon asetat 40 mg</td><td>DEPO-MEDROL, Pfizer, New York</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td><td>İmmünsüpresan olarak kullanılır</td></tr><tr><td></td><td>Mikrotom Leica&nbsp; Microsystems, Bannockburn, IL, ABD</td><td>SM2500</td><td>Dillerin seri bölümlerini kesmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Propilen kutular (kafes muhafazası) H13 x L20 x D30 cm</td><td>Bonther Ekipmanları, Ribeir&atilde; o Preto, SP, Brezilya</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td><td>Deney süresi boyunca hayvanları tutmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Kloramfenikol HiMedia ile Sabouraud Dekstroz Agar</td><td>, Mumbai, Hindistan</td><td>MM1067-500G</td><td>Maya büyümesi için kültür ortamı (agar)</td></tr> <tr><td>Spektrofotometre</td><td>Spektrofotometre Kasvi K37-VIS , S&atilde; o Jos&eacute; dos Pinhais, Halkla İlişkiler, Brezilya</td><td>K37-VIS&nbsp;</td><td>İnokulum konsantrasyonunu standartlaştırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Tetrasiklin hidroklorür ve nbsp;</td><td>Bileşik eczane, Araraquara, SP, Brezilya</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td><td>Oral disbiyozisi indüklemek için verilen antibiyotik</td></tr><tr><td>Odun talaşı</td><td>J.R. Ahşap Talaşı, Talaş Ltda., Conchal, S&atilde Merce; o Paulo Eyaleti, Brezilya</td><td>&nbsp;-</td><td>Muhafaza kutularının içinde zemin kaplaması için kullanılır:</td></tr><tr><td>Xylazine, %2,</td> <td>Calmiun, Uni&atilde; o Qu&iacute; mika Farmaç & ecirc; utica Nacional S/A, Embu-Gua&ccedil; u, SP, Brezilya</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td><td>Anestezi için ketamin ile kombinasyon halinde kullanılır</td></tr><tr><td>Maya Azot Suyu&nbsp;</td><td>Difco, InterLab, Detroit, MI, ABD</td><td>DF0919-07-3&nbsp;</td><td>Maya büyümesi için kültür ortamı (et suyu)</td></tr><tr><td>Maya Pepton Dekstroz Suyu</td><td>NutriSelect Basic, Sigma Aldrich</td><td>Y1375</td><td>Suşları -80 ° C'de tutmak için kültür ortamı; C ve büyümek</td></tr></tbody></table>

oral kandidiyazisin murin modelinde kurkuminoid aracılı antimikrobiyal fotodinamik tedavi

Curcuminoid-Mediated Antimicrobial Photodynamic Therapy on a Murine Model of Oral Candidiasis

Antimikrobiyal Fotodinamik Tedavi (aPDT) in vitro olarak kapsamlı bir şekilde araştırılmıştır ve klinik öncesi hayvan modelleri, klinik çalışmalardan önce alternatif tedavileri değerlendirmek için uygundur. Bu çalışma, oral kandidiyazisin bir murin modelinde aPDT'nin etkinliğini açıklamaktadır. Kırk fare, deri altı prednizolon enjeksiyonları ile immünosuprese edildi ve dilleri, daha önce bir C. albicans hücre süspansiyonuna batırılmış bir oral sürüntü kullanılarak aşılandı. Tetrasiklin, deney sırasında içme suyu yoluyla uygulandı. Mantar aşılamasından beş gün sonra, fareler rastgele sekiz gruba dağıtıldı; Tedavi edilmemiş enfekte olmamış farelerin dokuzuncu bir grubu negatif kontrol olarak dahil edildi (n = 5). Kurkuminoid karışımının üç konsantrasyonu (20 μM, 40 μM ve 80 μM) mavi bir LED ışıkla (89.2 mW /cm2; ~ 455 nm) ve ışıksız (sırasıyla C + L + ve C + L- grupları) test edildi. Tek başına ışık (C-L+), tedavi yok (C-L-) ve enfeksiyonu olmayan hayvanlar kontrol olarak değerlendirildi. Verilerin analizinde Welch analizi ANOVA ve Games-Howell testleri kullanıldı (α=0.05). Tüm enfekte hayvanlarda oral kandidiyazis kuruldu ve dillerin dorsumunda karakteristik beyaz lekeler veya psödomembranların varlığı ile makroskopik olarak görselleştirildi. Histopatolojik kesitler, C-L- grubunda epitelin keratinize tabakası ile sınırlı büyük bir maya ve filament varlığını doğruladı ve 40 μM veya 80 μM kurkuminoidlerle aPDT'ye maruz kalan farelerden elde edilen görüntülerde mantar hücrelerinin varlığı görsel olarak azaldı. 80 μM kurkuminoidlerin aracılık ettiği aFT, C-L- grubundakilere kıyasla koloni sayısında 2.47 log10'luk bir azalmayı destekledi (p = 0.008). Diğer tüm gruplar, ışığa duyarlılaştırıcı (C + L-) veya tek başına ışık (C-L +) grupları dahil olmak üzere koloni sayısında istatistiksel olarak anlamlı bir azalma göstermedi. Kurkuminoid aracılı aPDT, farelerin dillerinden mantar yükünü azalttı.

OC'nin murin modeli, tüm enfekte farelerin dilinde tipik beyaz lekeler ve psödomembranlar gösterdi (Şekil 4A). C-L-hayvanlarından elde edilen C. albicans , bu mikroorganizma tarafından doku kolonizasyonunu doğruladı (değerler 1.62 x 104 ila 4.80 x 105 CFU/mL arasında değişiyordu). Beklendiği gibi, NCtr grubundaki hayvanlar, örneklemeden sonra herhangi bir doku değişikliği veya koloni büyümesi göstermedi (Şekil 4B).
<p class="jo...

Bu protokol, oral kandidiyazisin bir fare modelinde antimikrobiyal Fotodinamik Terapinin (aPDT) uygulanmasını açıklar. aPDT, suda çözünür bir kurkuminoid ve mavi LED ışık karışımı kullanılarak gerçekleştirildi.

Oral Kandidiyazisin Murin Modelinde Kurkuminoid Aracılı Antimikrobiyal Fotodinamik Tedavi

Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) has been extensively investigated in vitro, and preclinical animal models of infections are suitable for ...

Oral kandidiyazis, özellikle bağışıklığı baskılanmış bireylerde yıllar içinde çıkarılabilir diş süreçlerinde oldukça yaygındır. Antifungallerle tedavinin nüks ve direnç gibi dezavantajları vardır. Bu nedenle grubumuz 20 yılı aşkın bir süredir terapötik alternatifleri araştırıyor.Klinik hayvan modellerine göre, klinik çalışmalardan önceki adımlar kadar önemlidir, oral kandidiyazis için bir fare modeli oluşturmaya çalışıyoruz. Antimikrobiyal fotodinamik tedavi veya APDT, mevcut antimikrobiyal tedavilere alternatif olarak yaygın olarak kullanılabilecek hızlı bir alternatiftir. Geleneksel ilaçlara dirençli olanlar da dahil olmak üzere geniş bir oral mikroorganizma yelpazesine karşı antimikrobiyal etkiler üretmek için ışığa duyarlılaştırıcı, ışık ve oksijenin bir kombinasyonunu gerektirir.Kurkumin, kandida biyofilmlerine karşı umut verici bir ışığa duyarlılaştırıcı olabilir. Bununla birlikte, suda düşük çözünürlüğe ve biyoyararlanıma sahip hidrofobik bir polifenoldür. Bu nedenle, ilaç dağıtım sistemleri kullanılarak veya ışığa duyarlılaştırıcıyı antimikrobiyal peptitlerle ilişkilendirerek kurkumin aracılı APDT'nin etkinliğini arttırmak için çalışmalar yapılmıştır.Antifungallerin yaygın

curcuminoid-mediated-antimicrobial-photodynamic-therapy-on-murine

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Burada, Candida albicans biyofilm büyüme üzerine kırmızı ışık uygulama sonucu değerlendirmek için bir protokol mevcut. 635 nm dalga boyu ve enerji yoğunluğu 87.6 J·cm-2 , tutarlı olmayan kırmızı ışık aygıtla Candida albicans biyofilmler 48 h için büyüme boyunca uygulandı.

Kırmızı ışık düzenlemek Candida albicans biyofilm büyüme ile günlük fototerapi

İlaca dirençli Candida albicans'ın artan insidansı dünya çapında ciddi bir sağlık sorunudur. Antimikrobiyal fotodinamik tedavi (aPDT), ilaca dirençli mantar enfeksiyonlarına karşı savaşmak için bir strateji sunabilir. Bu protokol, in vitro olarak çoklu ilaca dirençli C. albicans suşu üzerinde Gül bengal aracılı aPDT etkinliğini tanımlamaktadır.

Candida albicans'ı İnhibe Etmek için Gül Bengal Aracılı Fotodinamik Terapi

Candida spp. ilaç direncinde minyon kolonilerin önemi tam olarak araştırılmamıştır. Antimikrobiyal fotodinamik tedavi (aPDT), ilaca dirençli mantar enfeksiyonlarına karşı umut verici bir strateji sunmaktadır. Bu çalışma, gül bengal aracılı aPDT'nin Candida glabrata'yı etkili bir şekilde deaktive ettiğini ve küçük kolonileri indükleyerek benzersiz bir prosedür sunduğunu göstermektedir.

Rose Bengal Aracılı Fotodinamik Terapi ile Candida glabrate'de Minyon Kolonilerin İndüksiyonu

Zebra balığı hızla gelişmesi, küçük boyutu ve şeffaflık enfeksiyon doğal immün kontrolü çalışması için çok büyük avantajları...

Zebra balığı Larva yılında Dissemine Kandidiyazis non-invaziv Görüntüleme

İn vivo patojen ve immün savunmanın mukozal düzeydeki uzaysal-zamansal etkileşimleri, mevcut omurgalı konakçılarında kolayca görüntülenemez. Burada sunulan yöntem, genç zebra balığının yüzme kesesini bir enfeksiyon bölgesi olarak kullanarak canlı omurgalılarda mukozal kandidiyazisi incelemek için çok yönlü bir platformu tanımlamaktadır.

Swimbladder Enjeksiyon ile Larva Zebra balığı Mukozal Candidiazis Modelleme

Bu makale iki protokol sunar: biri konakçıyı başarılı bir şekilde istila edebilen ve hayatta kalabilen anaerobik bakterileri ölçmek, diğeri ise konakçı hücrelerle etkileşime giren anaerobik bakterileri görselleştirmek için. Bu çalışma, yetiştirilebilir herhangi bir anaeroba ve herhangi bir ökaryotik hücre tipine uygulanabilir.

Ana Hücreleri ile Anaerobik Bakteriler Etkileşim değerlendirilmesi için bir model organizma olarak Porphyromonas gingivalis

Bu protokolün amacı bir murin modelinde insan Grup B Streptococcus (GBS), vajinal kolonizasyonu taklit etmektir. Bu yöntem konak bağışıklık yanıtlarını ve GBS vajinal sebat katkıda bakteriyel faktörleri araştırmak için, yanı sıra tedavi stratejileri test etmek için kullanılabilir.

B Grubu bir murin modelinde<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vajinal Kolonizasyon

Çok ilaca dirençli (MDR) bakteri suşlarının neden olduğu enfeksiyonlar, halk sağlığı için ciddi bir tehdit olarak ortaya çıkmış ve alternatif terapötiklerin geliştirilmesini gerektirmiştir. Biyolüminesans görüntüleme kullanarak fare yanıklarında MDR Acinetobacter baumannii enfeksiyonları için antimikrobiyal mavi ışık (aBL) tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Çok ilaca dirençli için Antimikrobiyal Mavi Işık Tedavisinin Vivo İncelenmesinin Acinetobacter baumannii Biyoparlaklık ımaging&#39;i kullanarak Enfeksiyonlar Yanık

Protokol entübasyonda yetişkin zebra balığı ile bir biyolojik açıklar; daha sonra Diseksiyon ve bağırsak sitometresi, confocal mikroskobu ve qPCR için hazırlanıyor. Bu yöntem yönetime biyoaktif bileşiklerin bağırsak alımı ve uyarılmış yerel bağışıklık uyarıcı izlemek için izin verir. Sözlü prezervatiflerinin bağırsak dinamiklerini test etmek için uygundur.

Yetişkin zebra balığı sözlü entübasyon: bağırsak alımını biyoaktif bileşiklerin değerlendirmek için bir Model

Galleria mellonella Dissemine kandidiyazis için omurgasız bir model olarak hizmet vermektedir. Burada, enfeksiyon ayrıntılı protokol ve modelin etkinliği için destek veri sağlar.

Galleria mellonella Waxworm enfeksiyon modeli Dissemine kandidiyazis için

Öğrenin, aPDT ile oral kandidiyazis tedavisinde kurkuminoidlerin antimikrobiyal etkisini fare modelinde nasıl değerlendirebilirsiniz. Bu yöntem, antifungal direnç sorununa alternatif bir çözüm sunar.

Oral Kandidiyazisin Murin Modelinde Kurkuminoid Aracılı Antimikrobiyal Fotodinamik Tedavi

Daha fazla video keşfet