Multipleks Floresan Görüntüleme için Agaroz Gömülü Akciğer Dokusunun Otomatik Vibratom Kesiti
October 6th, 2023
Akciğer kesitleri oluşturmak için vibratom ve agaroza gömülü akciğer dokusu kullanan bir doku işleme tekniği geliştirdik, böylece akciğer mimarisinin yüksek çözünürlüklü görüntülerinin elde edilmesine izin verdik. Spesifik akciğer yapısal belirteçleri kullanarak uzamsal protein ekspresyonunu gözlemlemek için immünofloresan boyama kullandık.
Bu protokol, zaman içinde küçük parçaları örnekleyebildiğimiz domuzlar gibi akciğer nakli ve rejenerasyonunun büyük hayvan modellerinde özellikle yararlıdır. Bu teknik, bu modellerde rol oynayan mekansal biyolojiyi daha iyi anlamamıza yardımcı olabilir. Bu teknik, antijen alımına gerek kalmadan immünofloresan görüntülemeye uygun minimal işlenmiş akciğer dilimleri üretir ve bugüne kadar test edilen tüm antikorlarda etkili olmuştur.
Bu prosedür, biraz daha kalın bölümleri, örneğin bir milimetre civarında kesmek için uyarlanabilir, bu daha sonra uzamsal protein ekspresyonunu daha üç boyutlu bir hacimde incelemek için ışık tabakası floresan mikroskobunda kullanılabilir. Araştırmamız, akciğer nakli reddini etkileyen faktörleri araştırıyor ve domuz modelimizi kullanarak reddi azaltmak için tedaviler geliştiriyor. Bu teknik, ameliyat sonrası nakil sonuçlarını etkileyen uzamsal protein değişikliklerinin anlaşılmasına yardımcı olur.
Şu anda bu tekniği, domuz akciğer nakli modelimizdeki uzamsal protein ekspresyon manzarasını keşfetmek için kullanıyoruz. Deneysel terapilerimizin arkasındaki mekanizmaları daha iyi anlamamıza yardımcı olacağını umuyoruz. Burada başarılı olmanın anahtarı, vibratom nişangahlarında yatmaktadır, yüksek bıçak genlikleri ve daha düşük kuvvet hızları, kesit kötü giderse bakılması gereken önemli şeylerdir.
Genel Bakış
Bu çalışma, yüksek çözünürlüklü akciğer kesitleri oluşturmak için vibratom ve agaroz gömülmüş akciğer dokusu kullanan yeni bir doku işleme tekniği sunmaktadır. Yöntem, akciğer yapısındaki mekansal protein ekspresyonunu gözlemlemek için immünofloresan boyama olanakları sunar.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Sinirbilim
- Biyoloji
- Akciğer Transplantasyonu
Arka Plan
- Akciğer modellerinde mekansal biyolojiyi anlamak, akciğer transplantasyonunu incelemek için kritik öneme sahiptir.
- Teknik, görüntüleme için uygun minimal işlem görmüş akciğer dilimleri üretir.
- Antijen geri kazanımı gerektirmeden çeşitli antikorlarla etkili olmuştur.
- Gelişmiş görüntüleme teknikleri için daha kalın kesitlerle uyum sağlanabilir.
Çalışmanın Amacı
- Akciğer transplantı reddini etkileyen faktörleri araştırmak.
- Akciğer transplantlarında reddi azaltmayı hedefleyen tedavileri geliştirmek.
- Bir domuz akciğer transplantı modelinde mekansal protein ekspresyonunu araştırmak.
Kullanılan Yöntemler
- Bölümlendirme için akciğer dokusunu agaroz içine gömme.
- Belirli kalınlıktaki akciğer dilimleri oluşturmak için vibratom kullanımı.
- Protein ekspresyonunu görselleştirmek için immünofloresan boyama.
- İnsan örneklerinde tip iki pnömosit dağılımının karşılaştırmalı analizi.
Ana Sonuçlar
- Yüksek çözünürlüklü akciğer kesitlerinin başarılı bir şekilde oluşturulması.
- Transplant sonuçlarını etkileyen mekansal protein değişikliklerinin tanımlanması.
- Yetişkinlere kıyasla bebek örneklerinde daha yüksek tip iki pnömosit sayımı ve iskele kapsamı.
- Tekniğin farklı akciğer doku örnekleri boyunca etkili kullanımı.
Sonuçlar
- Vibratom tekniği, akciğer yapısının anlaşılmasını artırır.
- Transplant biyolojisi ile ilgili mekansal protein ekspresyonu hakkında içgörüler sağlar.
- Bu yöntem, akciğer transplantasyonu ve rejenerasyon konusundaki gelecekteki araştırmaları kolaylaştırabilir.
