Name: Yüksek Boyutlu Tek Hücreli Kütle Sitometrisi ile Akut İskelet Kası Yaralanması Sırasında İn Vivo Miyojenik Progenitörlerin Tanımlanması ve Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-01T14:35:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Keşfedin yüksek boyutlu tek hücreli kütle sitometrisi ile iskelet kası kök hücrelerinin moleküler imzalarını tanımlama yöntemini. Bu teknik, yaşlanma ve hastalıkta hücre yenilenmesi mekanizmalarını anlamak için araştırmacılara güçlü bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Kas Rejenerasyonunda Miyojenik Progenitörlerin Tek Hücreli CyTOF Analizi

<table><tbody><tr><td>15 mL santrifüj tüpü</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-886</td><td></td></tr><tr><td>20 G iğne</td><td>KDM</td><td>KD-ince 900123</td><td></td></tr><tr><td>28 G, 0.5 mL insülin şırıngası&nbsp;</td><td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>29 G, 0.3 mL insülin şırıngası</td><td>BD</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>3 mL şırınga</td><td>Terumo medical</td><td>MDSS03SE</td><td></td></tr><tr><td>40 & mikro; m hücreli süzgeçler</td><td>Fisher Scientific</td><td>11587522</td><td></td></tr><tr><td>5 mL polipropilen tüpler&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>352002</td> 35 & <td></td></tr><tr><td>ile 5 mL polistiren test tüpleri; m hücreli süzgeç</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>5 mL şırınga</td><td>Terumo medikal</td><td>SS05LE1</td><td></td></tr><tr><td>50 mL santrifüj tüpü</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-13</td><td></td></tr><tr><td>5-İyodo-2-deoksiüridin (IdU)</td> <td>Merck</td><td>I7125-5g</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD104 FITC (klon: 346-11A)</td> <td>Biolegend</td><td>123605</td><td>Stok = 0.5 mg / mL</td></tr><tr><td>anti-CD11b APC-Cy7 (Klon: M1 / 70)</td><td>Biolegend</td><td>101226</td><td>Stok = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD31 APC-Cy7 (klon: 390)</td><td>Biolegend</td><td>102440</td><td>Stok = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD45 APC-Cy7 (Klon: 30-F11)</td><td>Biolegend</td><td>103116</td><td>Stok = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD9 APC (klon: KMC8)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17-0091-82</td><td>Stok = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-Sca1 (Ly6A/E) APC-Cy7 (klon: D7)</td><td>Biolegend</td><td>108126</td><td>Stok = 0.2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-&alfa; 7 integrin PE (klon: R2F2))</td><td>UBC AbLab</td><td>67-0010-05</td><td>Stok = 1 mg/mL</td></tr><tr><td>BD FACS Aria III (4 lazer) cihazı</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>405, 488, 561 ve 633 nm lazer</td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7030-50G</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin 0.3 mg/mL</td><td>Ceva</td><td>Vnr 054594</td><td></td></tr><tr><td>CD104 (Klon: 346-11A)</td><td>BD Biosciences</td><td>553745</td><td>Dy162; Ev içi konjuge</td></tr><tr><td>CD106/VCAM-1 (Klon: 429 MVCAM. a)</td> <td>Biolegend</td><td>105701</td><td>Er170; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>CD11b (Klon: M1/70)</td><td>BD Biosciences</td><td>553308</td><td>Nd148; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>CD29/Integrin & beta; 1 (Klon: 9EG7)</td><td>BD Biosciences</td><td>553715</td><td>Tm169; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>CD31 (Klon: MEC 13.3)</td><td>BD Biosciences</td><td>557355</td><td>Sm154; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>CD34 (Klon: RAM34)</td><td>BD Biosciences</td><td>551387</td><td>Lu175; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>CD44 (Klon: IM7)</td><td>BD Biosciences</td><td>550538</td><td>Yb171; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>CD45 (Klon: MEC 30-F11)</td><td>BD Biosciences</td><td>550539</td><td>Sm147; Ev içi konjuge</td></tr><tr><td>CD9 (Klon: KMC8)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14-0091-85</td><td>Yb174; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>CD90.2 / Thy1.2 (Klon: 30-H12)</td> <td>BD Biosciences</td><td>553009</td><td>Nd144; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>CD98 (Klon: H202-141)</td><td>BD Biosciences</td><td>557479</td><td>Pr141; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>Hücre Edinme Çözümü/Maxpar CAS-tampon</td><td>Standardı Biotools</td><td>201240</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Kimliği İnterkalatörü-İridyum</td><td>Standardı Biyoaletler</td><td>201192B</td><td>katyonik nükleik asit interkalatörü</td></tr><tr><td>Sisplatin</td><td>Merck</td><td>P4394</td><td>Pt195</td></tr><tr><td>Sisplatin (cis-Diaminplatin (II) diklorür)</td> <td>Merck</td><td>P4394</td><td></td></tr><tr><td>Şeffaf 1,5 mL tüp</td><td>Fisher Scientific</td><td>11926955</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz, Tip II</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004177</td><td></td></tr><tr><td>Sayma odası</td><td>Merck</td><td>BR718620-1EA</td><td></td></tr><tr><td>CXCR4 / SDF1 (Klon: 2B11 / CXCR4 )</td> <td>BD Biosciences</td><td>551852</td><td>Gd158; Ev içi konjuge</td></tr><tr><td>DAPI (1 mg / mL)</td> <td>BD Biosciences</td><td>564907</td><td></td></tr><tr><td>Dark 1.5 mL tüp</td><td>Fisher Scientific</td><td>15386548</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Makası</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14568-09</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (düşük glikoz, piruvatlı)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11885-092</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (Etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu)</td> <td>Merck</td><td>E5134</td><td>Na2EDTA-2H20</td></tr><tr><td>EQ Dört Elemanlı Kalibrasyon Boncukları (EQ boncukları)</td> <td>Standart Biyoaletler</td><td>201078</td><td>Kalibrasyon boncukları</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu, nitelikli, Brezilya menşeili</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>Forseps Dumont #5SF</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Forseps Dumont #7</td><td>Hounisen.com</td><td>1606.3350</td><td></td></tr><tr><td>Keçi serumu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16210-072</td><td></td></tr><tr><td>Helios CyTOF sistemi</td><td>Standart Biotools</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>At Serumu, ısı inaktive edilmiş, Yeni Zelanda menşeli</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26-050-088</td><td></td></tr><tr><td>IdU</td><td>Merck</td><td>I7125</td><td>I127</td></tr><tr><td>İridyum-İnterkalatör</td><td>Standart Biyoaletler</td><td>201240</td><td>Ir191/193</td></tr><tr><td>İzofluran/Attane Vet</td><td>ScanVet</td><td>Vnr 055226</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>M/3900/17</td><td></td></tr><tr><td>Myf5 (Klon: C-20)</td><td>Santa Cruz</td><td>Biyoteknoloji Sc-302</td><td>Yb173; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>MyoD (Klon: 5.8A)</td><td>BD Biosciences</td><td>554130</td><td>Dy164; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>MyoG (Klon: F5D)</td><td>BD Biosciences</td><td>556358</td><td>Gd160; Ev içi konjuge</td></tr><tr><td>Nalgene Hızlı Akışlı Steril Tek Kullanımlık Şişe Üstü 0.20 &mu; M PES Filtreler</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>595-4520</td><td></td></tr><tr><td>Notexin</td><td>Latoxan</td><td>L8104</td><td>50 & mikroya yeniden süspansiyon; steril PBS'de g/ml. Stok tutun (örn. 50 & l) -20 & derecede; C</td></tr><tr><td>Besin karışımı F-10 (Jambon)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31550031</td><td></td></tr><tr><td>pAkt (Klon: D9E)</td> <td>Standart Biyoaletler</td><td>3152005A</td><td>Sm152</td></tr><tr><td>Pax7 (Klon: PAX7)</td> <td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>Sc-81648</td><td>Eu153; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (10.000 U/mL) (Kalem/Strep)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>PES Filtre Üniteleri 0.20 &; M</td><td>Fisher Scientific</td><td>15913307</td><td></td></tr><tr><td>PES Şırınga Filtresi</td><td>Fisher Scientific</td><td>15206869</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Sarstedt</td><td>82.1472.001</td><td></td></tr><tr><td>PFA% 16 EM sınıfı</td><td>MP Biyomedikal</td><td>219998320</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür (KCl)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>10375810</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat, monobazik&nbsp; susuz (KH2PO4)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10573181</td><td></td></tr><tr><td>pRb (Klon: J112-906)</td><td>Standart Biotools</td><td>3166011A</td><td>Er166</td></tr><tr><td>pS6 kinaz (Klon: N7-548)</td><td>Standart Biotools</td><td>3172008A</td><td>Yb172</td></tr><tr><td>Sca-1 (Klon: E13-161.7)</td><td>BD Biosciences</td><td>553333</td><td>Nd142; Şirket içi konjuge</td></tr><tr><td>Sodyum Azide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10553515</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat, dibazik, heptahidrat (Na2HPO4-6H2O)</td><td>Merck</td><td>S9390</td><td></td></tr><tr><td>Steril tuzlu su çözeltisi %0,9</td> <td>Fresenius</td><td>B306414/02</td><td></td></tr><tr><td>&alfa; 7 integrin (Klon: 3C12)</td><td>MBL uluslararası</td><td>K0046-3</td><td>Ho165; Kurum içi konjuge</td></tr></tbody></table>

yüksek boyutlu tek hücreli kütle sitometrisi ile akut İskelet kası yaralanması sırasında İn vivo miyojenik progenitörlerin tanımlanması ve analizi

Identification and Analysis of Myogenic Progenitors In Vivo During Acute Skeletal Muscle Injury by High-Dimensional Single-Cell Mass Cytometry

Burada, (i) iskelet kasındaki kök ve progenitör hücrelerin hücresel ve moleküler dinamiklerini incelemek için noteksin enjeksiyonu ile akut yaralanma zaman seyrinin yüksek boyutlu CyTOF analizini içeren bu birleşik yaklaşımı kullanmak için deneysel kuruluma genel bir bakış sunuyoruz (Şekil 1, üst şema); ve (ii) bu popülasyonları izole etmek ve işlevleri hakkında derinlemesine çalışmalar yapmak için CD9 ve CD104 olmak üzere iki hücre yüzeyi markörü kullanan kök ve progenitör hücrelerin FACS'ı...

Yüksek Boyutlu Tek Hücreli Kütle Sitometrisi ile Akut İskelet Kası Yaralanması Sırasında İn Vivo Miyojenik Progenitörlerin Tanımlanması ve Analizi

Skeletal muscle regeneration is a dynamic process driven by adult muscle stem cells and their progeny. Mostly quiescent at a steady state, adult muscle ...

identification-analysis-myogenic-progenitors-vivo-during-acute

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Enzimatik disosiasyon, fibro / adipogenic ve fare iskelet kası miyojenik atalarıdır flow sitometri ile yüzey etiketleme ve arıtma yöntemi.

İskelet Kası progenitörlerin saflaştırılması

İnsan kasından türetilen ana yapışık hücre tipleri miyojenik hücreler ve fibroblastlardır. Burada, hücre popülasyonları, CD56 antijenine dayalı olarak manyetik olarak aktive edilen hücre sıralaması kullanılarak zenginleştirilir. Spesifik antikorlarla müteakip immüno-etiketleme ve görüntü analiz tekniklerinin kullanılması, tek tek hücrelerde sitoplazmik ve nükleer özelliklerin miktar tayinine izin verir.

İnsan İskelet Kası İlköğretim andMyogenic Hücreleri ve Fibroblast İzolasyon ve Kantitatif İmmünositokimyasal Karakterizasyonu

Bu yazıda, yetişkin farelerde ve diseksiyon olarak kasların sonraki manipülasyonlar, dondurma, kesme, rutin boyama ve myofiber kesit alanı analizi akut iskelet kas yenilenmesini meydana ayrıntılı bir protokol açıklamaktadır.

Cardiotoxin Enjeksiyonu ile Akut İskelet Kası Regeneration indüksiyon

Aktif otofaji, Kas Kök Hücresi (MuSC) aktivasyonu için gerekli olan üretken kas rejenerasyonu ile ilişkilidir. Burada, LC3'ün in situ tespiti için bir protokol sunuyoruz, kontrol ve yaralı farelerdeki kas dokusu bölümlerinin MyoD pozitif MuSC'lerinde bir otofaji markörü.

Otofajinin Kas Hücrelerinde Yerinde İmmunofloresan Boyanması

Burada, insan miyoblastlarının saf bir popülasyonunu yetişkin kas dokusundan elde etmek için bir metodoloji tarif ederiz. Bu hücreler, in vitro iskelet kası diferansiasyonunu incelemek ve özellikle Ca 2+ sinyallemeyle ilgili proteinleri incelemek için kullanılırlar.

İnsan Myoblastlarının İzolasyonu, Miyojenik Farklılaşmanın Değerlendirilmesi ve Mağazada Kullanılan Kalsiyum Giriş Ölçümü

Kas iskelet farklılaşma özellikle nükleer konumlandırma üzerinde dayanır son derece dinamik bir süreçtir. Burada, yanında canlı hücre düşsel myoblast farklılaşma ve myotube oluşumu sırasında çekirdeği hareketlerini takip ve otomatik izleme bilgileri ayıklanıyor tarafından çekirdek dynamics nicel bir karakterizasyonu gerçekleştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Parça çekirdeği canlı görüntüleme sırasında Myoblast farklılaşma ve füzyon istismar

İskelet kas biyopsi sözünde nizolating, culturing, karakterizasyonu ve insan primer kas atası hücreleri (hMPCs) ayırt etme teknikleri salıyoruz.  bu yöntemlerle elde edilen ve karakterize edilen hMPC'ler daha sonra insan miyogenezi ve iskelet kası rejenerasyonu ile ilgili araştırma sorularını ele almak için kullanılabilir.

İskelet Kas Biyopsisi Prosedüründen İnsan Kas Atası Hücrelerinin İzolasyon, Kültür, Karakterizasyonu ve Farklılaşması

İskelet kasının kardiyotoksin aracılı yaralanması ve kendi kendine teslim edilen siRNA enjeksiyonunun bir kombinasyonunu kullanarak uydu hücrelerinde belirli bir genin fonksiyonel kaybını araştırmak için in vivo yöntemini tanımlıyoruz.

İskelet Kas Rejenerasyonu Sırasında Kardiyotoksin Yaralanması ve Kendi Kendine Teslim SiRNA In Vivo Enjeksiyonu Sırasında Uydu Hücre Fonksiyonuanalizi

Bu protokol, Fibro-adipojenik progenitörleri (FAP'ler) ve miyojenik progenitörleri (milletvekilleri) sıçan iskelet kasından izole etmek için bir yöntemi özetlemektedir. Sıçanın kas yaralanması modellerinde kullanılması, analiz için atrofik kastan doku mevcudiyetinin artmasını ve serbest hareket eden hayvanlarda kas gücünü ve yürüyüşlerini değerlendirmek için doğrulanmış yöntemlerden oluşan daha büyük bir repertuar sağlar.

Sıçandaki İskelet Kasında Fibro-Adipojenik Progenitörlerin (FAP' ler) ve Miyojenik Progenitörlerin (Milletvekilleri) Tanımlanması, İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Bu protokolde, kas kök hücreleri için endojen nişleriyle etkileşimlerinin çoğunu koruyan bir in vitro kültleme ve fonksiyonel analiz yöntemi tanımlanmıştır.

Yetişkin Kas Kök Hücre İşlevselliğinin Değerlendirilmesi için Tek Miyofiber Kültür Tahlil Ex Vivo

Fibro-adipojenik progenitör hücrelerin (FAP'lar) ve kas kök hücrelerinin (MuSC'ler) kesin olarak tanımlanması, fizyolojik ve patolojik koşullarda biyolojik işlevlerini incelemek için kritik öneme sahiptir. Bu protokol, FAP'ların ve MuSC'lerin yetişkin fare kaslarından izolasyonu, saflaştırılması ve kültürü için kılavuzlar sağlar.

FACS-İzolasyon ve Fibro-Adipojenik Progenitörlerin ve Kas Kök Hücrelerinin Bozulmamış ve Yaralı Fare İskelet Kasından Kültürü

Keşfedin yüksek boyutlu tek hücreli kütle sitometrisi ile iskelet kası kök hücrelerinin moleküler imzalarını tanımlama yöntemini. Bu teknik, yaşlanma ve hastalıkta hücre yenilenmesi mekanizmalarını anlamak için araştırmacılara güçlü bir araç sunar.

Yüksek Boyutlu Tek Hücreli Kütle Sitometrisi ile Akut İskelet Kası Yaralanması Sırasında İn Vivo Miyojenik Progenitörlerin Tanımlanması ve Analizi (Video) | JoVE Journal

Yüksek Boyutlu Tek Hücreli Kütle Sitometrisi ile Akut İskelet Kası Yaralanması Sırasında İn Vivo Miyojenik Progenitörlerin Tanımlanması ve Analizi

Daha fazla video keşfet