Name: Zaman atlamalı Mikroskopi Sökme Aktin İzlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-08T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Öğrenin, akış odası ve füzyon odası yapımını dik mikroskop görüntüleme için. Parafilm kullanarak kanallar oluşturun ve ısı ile mühürleyin. Bu yöntem, gelişmiş görüntüleme çalışmaları için erişilebilir bir laboratuvar tekniği sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Videoda gösterildiği gibi bir akış odası oluşturun. Parafilm mühür sıkı olduğundan emin olun ve yıkanmış lamelleri kullanabilirsiniz. </li><li> 5-10 &#39;odasında inkübe aktin bağlayıcı ajan. </li><li> Engelleyici bir protein ile cam lamel non-spesifik bağlayıcı siteleri engellemek. </li><li> Odanın içinde tampon polimerize G-aktin akan polimerize aktin. </li><li> Solukluk fazla tampon akan unpolymerized aktin. </li></ol>

zaman atlamalı mikroskopi sökme aktin İzlenmesi

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Zaman atlamalı Mikroskopi Sökme Aktin İzlenmesi

Pekala, bugün sizlere dik mikroskopta görüntüleme yapmak için bir akış odası, yani bir füzyon odasının nasıl oluşturulacağını göstermek istiyorum. Ardından, film kullanarak iki boşluk oluşturuyorum. Bunun için parafilm alıp onu küçük şeritler halinde kesiyorum.Sıradaki adımda, temel olarak kanal duvarlarını oluşturacağım ve bunları eğik bir hava akımıyla kurutacağım. Lamelini parafinin üzerine yerleştiriyorum ve işte tamamlandı. Ardından, parafini eritmek ve temel olarak bir sızdırmazlık sağlamak için ısıtıcı blok üzerinde ısıtıyorum.Burada gördüğümüz şey lamine camdır ve lamine camın üzerinde, tam burada gördüğünüz gibi, iki katman film bulunmaktadır. Bunun üzerinde ise tekrar, 22 x 22 mm boyutlarında bir lamine cam vardır. Mühürlemeyi tamamlamak için filmin üzerine bastırdığım cam budur.Tamam, sıvı burada tek yönde ilerliyor ve ben onu buradaki filtre kağıdıyla bu yönde çekebiliyorum. Bunu nasıl yapacağınızı birazdan göstereceğim. Benim tercih ettiğim yöntem ise, bunu oldukça basit olan nemlendirilmiş bir hazneye yerleştirmektir.İki adet yükseltilmiş şerit alın ve altına bir filtre kağıdı yerleştirin. Akış odasını sızdırmaz tutmak için üzerine bir kapatma lamı yerleştiriyorum. Çembere bir solüsyon ekleme yöntemi, pipet ucunu odanın girişine yerleştirip solüsyonu eklemektir.Şimdi yapacağım işlem, hazneyi kapağı kapalı olarak 10 dakika boyunca inkübe etmektir. Sıvıyı diğer taraftan çekmek için genellikle kullandığım yöntem, bir filtre kağıdını alıp şu şekilde ince şeritler halinde kesmektir. Bu ince şeritlerden birini alıyorum ve bir yandan çözeltiyi giriş kısmına uygularken, diğer yandan filtre kağıdını çıkış kısmına yerleştirerek değişim çözeltisini çekiyorum.Böylece sıvının çözelti boyunca aktığını göreceksiniz. Ardından, orta kısmın kapanması için beş dakika bekliyorum. Şimdi yapmaya hazır olduğum şey, aktini yerleştirmek; aktini aslında polimerize etmem gerekiyor, polimerizasyonu akış odasının içinde gerçekleştiriyorum ve bu, önceki prosedürlerle aynıdır.Bu şekilde olduğu için ve artık aktin polimerize olduğu için, fazla polimerize olmamış aktini sadece tampon kullanarak büyük bir hacimle yıkayıp uzaklaştırıyorum. Burada yaklaşık 100 µL tamponum var ve bu, birkaç reaksiyon odası hacmine karşılık geliyor. Filtre kağıdı doyuma ulaştığında yönünü değiştirmem gerekiyor. Tamam mı?Böylece bununla görüntüleme yapmaya hazırım. Aktin'in tutturulduğu perfüzyon odası hazır. Şimdi lamı alıp mikroskobun altına yerleştiriyorum ve yağlı objektif ile görüntüleme yapacağım için lamın üst yüzeyine, içeriye aktin üzerine bir solüsyon, protein veya herhangi bir madde ekleyebilmek için imersiyon yağı damlatıyorum.Bu nedenle, zaman ayarlı görüntüleme yaparken aslında solüsyon tarafını değiştirebiliyorum.

monitoring-actin-disassembly-with-time-lapse-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

GFP-aktin ifade canlı endotel hücreleri mikroskobik görüntüleme iskelet yapıları dinamik değişimlere karakterizasyonu sağlar. Sabit örneklerinde kullanan teknolojilerden farklı olarak, bu yöntem önce aynı hücrelerde aktin hücre iskeletinin temporal değişikliklerin ayrıntılı bir değerlendirme sırasında, çeşitli fiziksel, farmakolojik veya inflamatuvar uyaranlara sonra sağlar.

GFP-Aktin ifade Canlı Endotel Hücreleri Aktin Sitoiskelet Çalışması

Mikrotübüller doğal kararsız polimerler, büyüme ve kısalması arasında kendi anahtarlama stokastik ve kontrol etmek zordur. Burada photoablatable stabilize kapaklar ile segmentli mikrotübülleri kullanarak protokolleri açıklar. Parçalara Mikrotübüllerin depolimerizasyonu böylece sökmeden mikrotübül uçları ile hareketleri analizi yardımcı, yüksek zamansal ve mekansal çözünürlük ile tetiklenebilir.

Sökme Mikrotubul saplı tarafından Driven Hareketleri Eğitim için Segment Mikrotübüller hazırlanması

Biz nasıl sıkı BAĞLAMAK ve photoactivation gibi mikro - ve photomanipulation teknikleri hareketliliği parametreleri belirlenmesi etkinleştirmek ve proteinler geçiş içinde kronolojik zamanmekansal dinamikleri hücreleri tanımlamak. Deneysel veriler hücre altı dinamikleri ve ciro hareketliliği düzenleyiciler veya temel aktin sitoiskeleti içerir.

Morfogenetik dinamiklerini analiz ve hücre iskeleti düzenleyiciler ciro sağlayan Embriyolardan teknikleri

Kemirgenlerin ve insan deneklerin beyin dokularından alınan ex vivo biyolojik örneklerde aksin filamentlerinin nicelleştirilmesi için basit, zaman verimli ve yüksek verimli floresan spektroskopi tabanlı bir tahlil rapor ediyoruz.

Kemirgen ve İnsan Beyin Dokularında Aktüer Polimerizasyon Durumunu Değerlendirmek için Zaman Verimli Floresan Spektroskopi Tabanlı Bir Tahlil

Burada, prosesif miyosin-5 motorları üzerinde ultra hızlı kuvvet kelepçesi deneyleri gerçekleştirmek için kapsamlı bir protokol sunulmaktadır ve bu, diğer proses motor sınıflarının çalışmasına kolayca genişletilebilir. Protokol, deney cihazının kurulumundan numune hazırlama, veri toplama ve analize kadar gerekli tüm adımları detaylandırır.

İşlemsel Miyosinlerin Mekanoenzimatik Özelliklerinin Ultra Hızlı Kuvvet-Kelepçe Spektroskopisi ile Diseksiyonu

Basit aktin filament mikroakışkan tahlilleri için, floresan mikroskobu ile birlikte, bireysel aktin filamentlerini gerçek zamanlı olarak doğru bir şekilde izlemeyi ve sırayla farklı protein çözeltilerine maruz bırakmayı sağlayan protokoller sunuyoruz.

Tek Aktin Filamentlerin ve Demetlerin Montaj Dinamiğini İncelemek için Mikroakışkanlar ve Floresan Mikroskobu Kullanma

Bu protokol, floresan mikroskobu kullanılarak yeniden oluşturulmuş, membrana bağlı sitoiskelet ağlarının dinamiklerini incelemek için desteklenen lipid çift katmanlarının oluşumunu ve hücre iskeleti filamentlerinin ve motor proteinlerin eklenmesini açıklar.

Membrana Bağlı Minimal Aktin Kortekslerinin Desteklenen Lipid Çift Katmanlı Üzerinde Yeniden Sulandırılması

Bu protokol, in vitro toplam iç floresan (TIRF) mikroskopi testi kullanarak dinamik aktin ve mikrotübülleri görselleştirmek için bir kılavuzdur.

Aktin ve Mikrotübül Eşleşme Dinamiğinin In Vitro Total İç Yansıma Floresan (TIRF) Mikroskobu ile Görselleştirilmesi

Bu yazıda, birlikte dolaşık aktin filamentleri ve mikrotübüllerinin ayarlanabilir üç boyutlu kompozit ağlarının mühendisliği ve karakterizasyonu için protokoller sunulmaktadır. Kompozitler, miyozin II ve kinesin motorları tarafından tahrik edilen aktif yeniden yapılanma ve balistik harekete uğrar ve aktin, mikrotübüller, motor proteinler ve pasif çapraz bağlayıcıların göreceli konsantrasyonları tarafından ayarlanır.

Aktin-Mikrotübül Kompozitlerinin Ayarlanabilir Motor Tahrikli Dinamiği ve Mekaniği ile Yeniden Yapılandırılması ve Karakterize Edilmesi

Bu çalışmada, kontrollü koşullar altında aktomiyosin jellerinin poroelastisitesini incelemek için in vitro rekonstrüksiyon yaklaşımı kullanılmıştır. Aktomiyosin jelinin ve gömülü çözücünün dinamikleri, ağ poroelastisitesinin gösterildiği şekilde ölçülür. Ayrıca deneysel zorlukları, ortak tuzakları ve hücre hücre iskeleti mekaniği ile olan ilgisini tartışıyoruz.

Hücre Hücre İskeletinin Model Sistemi Olarak (Poro-)Elastik Kasılma Aktomyosin Ağlarının Mekaniği

Burada, saflaştırılmış proteinlerden yarı iki boyutlu (2D) dolaşık, çapraz bağlı ve sıvı kristal aktin düzeneklerinin hazırlanması için yöntemler sunuyoruz.

Aktif Aktin Bazlı Montajların Kasılma ve Deformasyon Modlarının In Vitro Olarak Ayarlanması: İki Boyutlu Aktif Ağlardan Sıvı Kristal Damlalara

Öğrenin, akış odası ve füzyon odası yapımını dik mikroskop görüntüleme için. Parafilm kullanarak kanallar oluşturun ve ısı ile mühürleyin. Bu yöntem, gelişmiş görüntüleme çalışmaları için erişilebilir bir laboratuvar tekniği sunar.

Zaman atlamalı Mikroskopi Sökme Aktin İzlenmesi

Daha fazla video keşfet