Name: Pulmoner Enfeksiyon Hastalıklarında Mikrobiyolojik Hızlı Yerinde Değerlendirme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T13:40:00.000+00:00
Duration: 3 min 22 s
Description: Öğrenin, pulmoner enfeksiyonlarda M-ROSE yöntemiyle hızlı mikrobiyolojik değerlendirme yapmayı. Bu protokol, Diff-Quik boyama ve mikroskobik görüntüleme kullanarak patojenleri gerçek zamanlı tanımlar ve hekimlerin tedavi stratejilerini geliştirmesine yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Mali destek için Chongqing Bilimsel Araştırma kurumunun performans teşvik ve rehberlik projesini (jxyn-2021-1-15 ve jxyn-2021-2-6) takdir ediyoruz.

Klinik araştırma, Chongqing Geleneksel Çin Tıbbı Hastanesi Onay Komitesi tarafından onaylanmıştır (No. 2022-ky-31). Tipik olguda Pneumocystis pnömonisi tanısı konulan bir hasta yer aldı ve hastadan bilgilendirilmiş onam alındı.
1. ROSE için ekipman ve malzeme gereksinimleri
<ol><li>Ekipman: Bu protokolde kullanılan ekipman için Malzeme Tablosu dosyasına bakın. NOT: Özel bir sitolojik mikroskop ve grafik görüntüleme sistemi kullanmak zorunludur (Şekil 1A).</li>
	<li>Malzeme hazırlama (Malzeme Tablosuna bakınız).<ol><li>Steril hücre kültürü slaytları (güçlü hücre yapışması ile), emici kağıt, pudrasız lateks eldivenler, tek kullanımlık 2,5-5 mL şırınga iğneleri hazırlayın ve Diff Quik (DQ) boyama solüsyonlarının tamamını kolay kullanım için kapalı kapaklı cam boyama kavanozlarına yerleştirin (Şekil 1).</li>
	</ol></li>
</ol>2. M-ROSE iş akışı
<ol><li>Sitolojik slaytların hazırlanması NOT: Slaytları hazırlamanın birçok yolu vardır ve aşağıda yaygın olarak kullanılan birkaç hazırlama yöntemi verilmiştir.<ol><li>Slaytları yuvarlayın NOT: Bu işlem sırasında doku numunesi kaybının minimum düzeyde olduğundan emin olun.<ol><li>2.5-5 mL kapasiteli tek kullanımlık bir şırınga iğnesi kullanarak doku parçacıklarını çıkarın (Şekil 2A).</li>
			<li>Steril sitoloji lamı üzerine, yaklaşık 1 cm çapında ve orta kalınlıkta dairesel bir alanı, lekeli ucun (güçlü hücre bağlanması sergileyen uç) iç kısımdan dış üçte bir kısmına yayın.</li>
		</ol></li>
		<li>Fırça slaytları NOT: Bu yöntem, geleneksel hücre fırçaları, kirlilik önleyici hücre fırçaları veya ultra ince hücre fırçaları kullanılarak elde edilen numunelerin yanı sıra balgam ve viskoz vücut sıvıları gibi yarı sıvı numunelere uygulanabilir.<ol><li>Fırça kafasını uzatın ve orta kalınlıkta yaklaşık 2 cm x 1 cm'lik dikdörtgen bir alan elde etmek için steril sitolojik cam slaytın (slayt güçlü hücre yapışma özelliklerine sahiptir) distal üçte birlik kısmına uygulayın.</li>
		</ol></li>
		<li>Sprey slaytları<ol><li>Delme iğnesini, sağlam hücre yapışması ile steril bir sitoloji slaytının lekeli ucunun üçte birine yerleştirin.</li>
			<li>Delici iğnenin ucuna hava basıncı uygulayın ve yaklaşık 1 cm çapında orta kalınlıkta dairesel bir alan oluşturacak şekilde iç taraftan dışa doğru sokun.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Sitolojik slayt boyama NOT: Dünya Sağlık Örgütü (WHO), ROSE sitolojik slaytının Diff'in5 boyası kullanılarak hızlı bir şekilde boyanmasını önermektedir. Diferansiyel boyası tekrar kullanılabilir ancak birçok kez tekrarlanamaz. Tortu varsa, kullanımdan sonra süzülmelidir. Çok derin boyama, tercihen artık boyanmayan metanol veya alkol ile uygun şekilde renkten arındırılabilir. Boyama çok derin veya çok sığ ise, boyama süresi veya çalışma sıvısı konsantrasyonu ayarlanmalıdır; pH değerinin boyama üzerinde belirli bir etkisi vardır ve lam temiz olmalı ve asit ve alkali kirliliğinden arındırılmış olmalıdır. Hem Diff A çözeltisi hem de Diff B çözeltisi uçucudur ve kullanımdan sonra mühürlenmeli ve saklanmalıdır.<ol><li>Slaytı 10-30 saniye boyunca Diff A çözeltisine batırın (Şekil 2B), ardından fazla Diff A çözeltisini çıkarmak için PBS boya banyosunda durulayın ve kalan tamponu nazikçe sallayın (Şekil 2C).</li>
		<li>Ardından, slaytı 20-40 saniye boyunca Diff B çözeltisine daldırın (Şekil 2E).</li>
		<li>Son olarak, su boyama tankındaki sürgüyü temizleyin (Şekil 2F), sürgünün kalan sıvısını emici kağıtla kurulayın ve silin (Şekil 2D) ve boyamayı bitirin. NOT: M-ROSE, patojenik mikroorganizmaların doğrudan görüntülenmesini sağlar ve solunum örneği kalitesinin değerlendirilmesini kolaylaştırır, enfeksiyon şiddeti ve prognozunun değerlendirilmesi için yol gösterici öneme sahip olan enfeksiyon ve kontaminasyonun yanı sıra enfeksiyon ve enfeksiyon arasında ayrım yapılmasını sağlar. Tartışma bölümü, herhangi bir deneysel prosedür içermediği için bu yönü kapsayacaktır.</li>
	</ol></li>
</ol>

M-ROSE Kullanarak Pulmoner Enfeksiyon Tedavisinin Geliştirilmesi

<ol><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+value+of+endoscopic+ultrasound-guided+fine+needle+aspiration+with+rapid+on-site+evaluation+performed+by+endoscopists+in+solid+pancreatic+lesions%3A+A+prospective%2C+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Diagnostic value of endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration with rapid on-site evaluation performed by endoscopists in solid pancreatic lesions: A prospective, randomized controlled trial.</a> J Gastroenterol Hepatol. 37 (10), 1975-1982 (2022).</li>
<li>Bruno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+cost+effectiveness+of+rapid+on+site+examination+%28ROSE%29+in+management+of+patients+with+mediastinal+lymphadenopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Efficacy and cost effectiveness of rapid on site examination (ROSE) in management of patients with mediastinal lymphadenopathies.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 17 (11), 1517-1522 (2013).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiology+rapid+on-site+evaluation%3A+a+better+method+for+Mucoid+Pseudomonas+Aeruginosa+diagnosis+in+bronchiectasic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Microbiology rapid on-site evaluation: a better method for Mucoid Pseudomonas Aeruginosa diagnosis in bronchiectasic patients.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 26 (5), 1738-1742 (2022).</li>
<li>Tao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+microbiological+rapid+on-site+evaluation+in+respiratory+intensive+care+units%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Application of microbiological rapid on-site evaluation in respiratory intensive care units: a retrospective study.</a> Ann Transl Med. 10 (1), 7(2022).</li>
<li>Yan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+value+of+microbiology+rapid+on-site+evaluation+of+sepsis+caused+by+pulmonary+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">The value of microbiology rapid on-site evaluation of sepsis caused by pulmonary infection.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 27 (12), 5862-5868 (2023).</li>
<li>Muri, R., Trippel, M., Borner, U., Weidner, S., Trepp, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+rapid+on-site+evaluation+on+the+quality+and+diagnostic+value+of+thyroid+nodule+fine-needle+aspirations%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">The impact of rapid on-site evaluation on the quality and diagnostic value of thyroid nodule fine-needle aspirations.</a> Thyroid. 32 (6), 667-674 (2022).</li>
<li>Wang, Z., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+rapid+on-site+evaluation+in+contemporary+pediatric+interventional+respiratory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Practical+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Application of rapid on-site evaluation in contemporary pediatric interventional respiratory diseases.</a> Chinese Journal of Practical Pediatrics. 12, 470-475 (2019).</li>
<li>Shah, P. L., Herth, F. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Respiration%22%5BJournal%5D)">Progress in interventional pulmonology.</a> Respiration. 95 (5), 287-288 (2018).</li>
<li>Hsia, D., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology.</a> Med Clin North Am. 95 (6), 1095-1114 (2011).</li>
<li>Moore, A. J., Mercer, R. M., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 271-280 (2018).</li>
<li>Majid, A., Fernandez-Bussy, S., Folch, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology+and+solitary+pulmonary+nodule%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Bronconeumol%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology and solitary pulmonary nodule.</a> Arch Bronconeumol. 54 (10), 497-498 (2018).</li>
<li>Ali, M. S., Sorathia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palliative+care+and+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Palliative care and interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 57-64 (2018).</li>
<li>Czarnecka, K., Yasufuku, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%3A+focus+on+pulmonary+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology: focus on pulmonary diagnostics.</a> Respirology. 18 (1), 47-60 (2013).</li>
<li>Schacht, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration%3A+performance+of+biomedical+scientists+on+rapid+on-site+evaluation+and+preliminary+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration: performance of biomedical scientists on rapid on-site evaluation and preliminary diagnosis.</a> Cytopathology. 27 (5), 344-350 (2016).</li>
<li>Pearson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+on-site+evaluation+of+fine-needle+aspiration+by+non-cytopathologists%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+diagnostic+accuracy+studies+for+adequacy+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Rapid on-site evaluation of fine-needle aspiration by non-cytopathologists: A systematic review and meta-analysis of diagnostic accuracy studies for adequacy assessment.</a> Acta Cytol. 62 (4), 244-252 (2018).</li>
<li>Arimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryobiopsy+with+endobronchial+ultrasonography+using+a+guide+sheath+for+peripheral+pulmonary+lesions+and+DNA+analysis+by+next+generation+sequencing+and+rapid+on-site+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Investig%22%5BJournal%5D)">Cryobiopsy with endobronchial ultrasonography using a guide sheath for peripheral pulmonary lesions and DNA analysis by next generation sequencing and rapid on-site evaluation.</a> Respir Investig. 57 (2), 150-156 (2019).</li>
<li>Gianella, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+rapid+on-site+cytologic+evaluation+during+endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration+in+malignant+and+nonmalignant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Utility of rapid on-site cytologic evaluation during endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration in malignant and nonmalignant disease.</a> Acta Cytol. 62 (5-6), 380-385 (2018).</li>
<li>Natella, V., Cozzolino, I., Sosa Fernandez, L. V., Vigliar, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+nodes+fine+needle+cytology+in+the+diagnosis+of+infectious+diseases%3A+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Infez+Med%22%5BJournal%5D)">Lymph nodes fine needle cytology in the diagnosis of infectious diseases: clinical settings.</a> Infez Med. 20, 12-15 (2012).</li>
<li>Baughman, R. P., Spencer, R. E., Kleykamp, B. O., Rashkin, M. C., Douthit, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventilator+associated+pneumonia%3A+quality+of+nonbronchoscopic+bronchoalveolar+lavage+sample+affects+diagnostic+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Ventilator associated pneumonia: quality of nonbronchoscopic bronchoalveolar lavage sample affects diagnostic yield.</a> Eur Respir J. 16 (6), 1152-1157 (2000).</li>
<li>Petrone, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+cytotechnician+training+influence+the+accuracy+of+EUS-guided+fine-needle+aspiration+of+pancreatic+masses%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Does cytotechnician training influence the accuracy of EUS-guided fine-needle aspiration of pancreatic masses.</a> Dig Liver Dis. 44 (4), 311-314 (2012).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması bildirmemiştir.

Girişimsel pulmonoloji, modern solunum yolu hastalıklarının değerli bir dalıdır; Özellikle, akciğer hastalıklarının tanısında yaygın olarak kullanılmaktadır 8,9. Son yıllarda, pulmoner malign tümörlerin prevalansının artması, alt solunum yollarında ilaca dirençli patojen enfeksiyonlarının daha fazla ortaya çıkması ve şaşırtıcı ve kritik solunum yolu hastalıklarının tanısı için talepte bulunulması nedeniyle tanısal girişimsel pulmonoloji gelişmektedir 10,11,12. Girişimsel tanı etkinliği, odak alanlarının büyüklüğü ve anatomik konumu, komplikasyon oranları ve biyopsi alanlarının sayısı ve altta yatan hastalıklar gibi faktörlere bağlıdır ve çok sayıda ileri teknoloji ve tesisin klinik kullanımını teşvik eder13. ROSE, girişimsel pulmonolojide tanı için "gerçek zamanlı eşlik eden bir teknik" olarak büyük ilgi görmüş ve hızla ortaya çıkmıştır.
ROSE, ponksiyon, biyopsi ve fırçalama gibi işlemler sırasında hızlı değerlendirme, ön tanı ve numune memnuniyetinin önceliklendirilmesi için tasarlanmıştır. Sonraki teknolojik gelişmelere rehberlik etmek için geri bildirim sağlar 14,15,16,17. ROSE'un bir dalı olan M-ROSE, doku hücresi malignitesini değerlendirmekten ziyade öncelikle mikrobiyal arka planı değerlendirmeye odaklanır5. M-ROSE yöntemi bir tanı aracından ziyade hızlı bir değerlendirme tekniğidir, bu nedenle tanısal etkinliği abartılmamalıdır. Klinik uygulaması temel olarak aşağıdaki hususları kapsar: belirli patojenik mikroorganizmaların görsel olarak tanımlanması, enfeksiyon ve kontaminasyon arasındaki ayrım ve enfeksiyon ile enfeksiyon dışı arasındaki ayrım7.
Hızlı boyamayı takiben, dokunun hücre çekirdeği morumsu-kırmızı bir renk tonu sergilerken, sitoplazma mavimsi-mor bir renk gösterdi. Bakteriler ve mantarlar mavi göründü, bu da doku hücreleri ve patojenler arasında belirgin bir kontrasta neden oldu7. M-ROSE, bakteri ve mantarları tanımlamada belirli bir düzeyde yetenek gösterebilir. Spesifik olarak, Aspergillus, cryptococcus, Pneumocystis jiroveci ve diğer mantarlar için yüksek bir pozitif oran sergiler 3,18. Bununla birlikte, küçük hacim ve çapa sahip patojenlerin veya hücre içi patojenik ajanların tanınması söz konusu olduğunda sınırlamaları vardır. Herhangi bir hastalığın teşhisinin, yalnızca patojenik mikroorganizmaların mikroskobik olarak tanımlanmasına dayanmak yerine, hastanın temel durumunu, klinik belirtilerini, görüntüleme incelemelerini ve diğer faktörleri kapsayan kapsamlı bir değerlendirmeye dayanması gerektiğinin altını çizmek çok önemlidir.
M-ROSE ayrıca alveoler lavaj sıvısı numunelerinin kalitesinin değerlendirilmesi gibi enfeksiyon ve kontaminasyonun tanımlanmasında da avantajlar sunar. Koşulların izin verdiği bölümlerde, lavaj sıvısının hasta başı değerlendirmesi santrifüj ve boyama yoluyla yapılabilir. Nitelikli alveoler lavaj sıvısı örnekleri, düşük güç mikroskobu altında tüm hücreler (kırmızı kan hücreleri hariç) arasındaki skuamöz hücrelerin oranının %1'den az, kolumnar epitel hücrelerinin %5'ten az ve kırmızı kan hücrelerinin %10'dan az olduğunu göstermektedir (travma veya kanama ile ilgili faktörler hariç)19. Sitoloji altyapısının mikroskobik incelemesi zamanında değerlendirme yapmamızı kolaylaştıracaktır.
Ayrıca, M-ROSE enfekte ve enfekte olmayan lezyonları ayırt etmede yardımcı olabilir5. Enfekte lezyonlarda, sıklıkla nötrofillerin, makrofajların ve lenfositlerin enflamatuar hücreler tarafından infiltrasyonu vardır ve bazen nötrofil fagositozu gözlenir. Tersine, enfekte olmayan lezyonlar tipik olarak inflamatuar hücre infiltrasyonundan yoksundur.
Burada sunulan protokol M-ROSE'un çalışma sürecini göstermektedir; Mikrobiyolojik arka planın yorumlanması ile ön tanı yapılabilir veya ayırıcı tanı daraltılabilir. Bulgularımızın önerdiği gibi, PCP tanısı, semptomatik yüksek riskli hastalarda bile klinik belirtilere ve görüntülemeye dayanmaması gereken Pneumocystis jiroveci'nin doğrulanmış kanıtını gerektirir. Ascus ve trofik formların mikroskobik olarak tanımlanması en sezgisel kanıttır. Teşhis verimliliği büyük ölçüde numunenin boyama yöntemi ile belirlenir. Tarihsel olarak, Wright's-Giemsa, hekzaamin gümüşü ve toluidin mavisi gibi geleneksel lekeler PCP için mevcuttur, ancak zaman alıcıdır ve daha düşük hassasiyete sahiptir. Bu durumda, PCP'nin acil tanısı, hastanın ROSE kullanımı ile yoğun bakım ünitesine transferinin ilk gününde doğrulandı. Diff-quick, net bir yapı, keskin kontrast ve ascus'un kolay tanımlanması ile karakterize edilen pneumocystis'i tanımlamadaki avantajını göstermiştir (Şekil 5A).
Etnik tıbbın uygulanmasında ROSE da önemli bir değere sahiptir. Örneğin, süpüratif hastalıklarda, klinisyenler mikrobiyolojik arka plan5 içinde esas olarak nötrofillerin hakim olduğu çok çeşitli enflamatuar hücreleri tanımlayabilirler. Sonuç olarak, diğerlerinin yanı sıra hanımeli, karahindiba ve patrinia gibi bu durumlar için potansiyel tedaviler olarak ısıyı temizleme ve detoksifiye edici özelliklere sahip ilaçlar seçilebilir.
ROSE, girişimsel pulmonolojide seçilmesi gerekmeyen ek bir program olduğundan, ROSE'un yürütülmesi işgücü ve ekonomik maliyetleri artırmaya mahkumdur. ROSE'un düzenli olarak kullanılması gerektiği tartışmalıdır. Ekonominin faydaları açısından, zaman ve işgücü maliyetleri bizi endişelendiriyor. Asıl ek iş gücü ihtiyacı değerlendiricidir. ROSE değerlendirmesi bir sitoteknolog, patolog veya klinisyen tarafından yapılabilir. Sitoteknologlar, ROSE prosedürü için en olası personeldir. Bununla birlikte, klinik uygulamada, klinisyenler rolün yerini alır, ancak belirli bir eğitim temeli gerektirebilir15. Önceki bir çalışma, bir eğitim programının klinisyenler tarafından gerçekleştirilen yeterlilik değerlendirmesinin doğruluğunu artırmaya ve kafa karıştırıcı değişkenleri ortadan kaldırmaya yardımcı olabileceğini göstermiştir20. Ek olarak, morfolojik bir tanı tekniği olarak M-ROSE, sonuç raporunda subjektif faktörlere sahiptir. Klinisyenler ek klinik bilgilere dayanarak kapsamlı bir değerlendirme yapmalıdır.
Uygun tesislere ve eğitimli profesyonellere sahip hastanelerin, zorlu solunum açısından kritik hastalıkların erken değerlendirmesini kolaylaştırabileceği ve klinik tedaviyi etkili bir şekilde yönlendirebileceği için ROSE prosedürünü solunum bölümlerinde veya yoğun bakım ünitelerinde uygulamayı düşünmelerini öneririz.

Hızlı yerinde değerlendirme tekniği (ROSE), akciğer hastalığı prosedürleri alanında kullanılan oldukça verimli bir yöntemdir. Anında sitolojik analizi kolaylaştırarak gerçek zamanlı örnekleme ve tanısal müdahaleye olanak tanır1. Bu yenilikçi yaklaşım, doku örneğinin bir kısmının, bütünlüğünü koruyarak bir lam üzerine basılmasını içerir. ROSE'un en önemli avantajlarından biri, özel mikroskopi teknikleri aracılığıyla klinik bilgilerin hızlı bir şekilde yorumlanmasını kolaylaştırma kapasitesinde yatmaktadır. Bu, hücre morfolojisinin analizini, sınıflandırılmasını, nicelleştirilmesini, bileşen oranlarının belirlenmesini, düzenlemenin değerlendirilmesini, korelasyon analizini, arka planın değerlendirilmesini ve yabancı cisimlerin tanımlanmasını kapsar. ROSE, tüm bu verileri hastanın klinik bilgileriyle entegre ederek, örnekleme yeterliliğini değerlendirmede ve gerçek zamanlı girişimsel prosedür ve tekniklere rehberlik etmede çok önemli bir rol oynamaktadır2.
ROSE teknolojisinin bir yan kuruluşu olan M-ROSE teknolojisi, iyi huylu ve kötü huylu hücreleri ayırt etmek yerine öncelikle hedef lezyonların mikrobiyolojik arka planını elde etmeye odaklanır 3,4. Bir yandan M-ROSE, Aspergillus, Cryptococcus, Pneumocystis ve Candida5 gibi patojenlerin mikroskobik olarak tanımlanmasını sağlar. Öte yandan, solunum örneği kalitesinin değerlendirilmesinde, bulaşıcı hastalıkların bulaşıcı olmayan hastalıklardan ayırt edilmesinde, enfeksiyonun kontaminasyondan ayırt edilmesinde ve ayrıca enfeksiyon şiddetinin ve prognozunun değerlendirilmesinde önemli yol gösterici etkilere sahiptir 6,7. Örneğin, bir solunum örneği içinde, sızan enflamatuar hücrelerin yanı sıra aynı morfolojiyi sergileyen bakterilerin bir arada bulunması bir enfeksiyonu gösterir; Tersine, epitel hücrelerinin eşlik ettiği çok sayıda morfolojik olarak farklı bakterinin varlığı kontaminasyonu düşündürür. Klinik bilgileri kapsamlı bir şekilde analiz etme ve sonuçları tahmin etme kapasitesi, M-ROSE'u pulmoner hastalık prosedürlerinde paha biçilmez bir araç haline getirmektedir.
Sonuç olarak, ROSE, akciğer hastalıklarının teşhisinin etkinliğini ve hassasiyetini önemli ölçüde artıran çok önemli bir sitolojik taşıyıcı olarak hizmet eder. Çok yönlü yetenekleri, gerçek zamanlı örnekleme ve tanısal müdahale teknikleri aracılığıyla zamanında müdahale sağlayarak ve doğru teşhisi kolaylaştırarak hasta sonuçlarının iyileştirilmesine katkıda bulunur. Bununla birlikte, bu gelişmelerin nitelikli numunelerin elde edilmesine dayandığına dikkat etmek önemlidir. Burada, slayt hazırlama, boyama teknikleri ve yorumlama yönergelerini kapsayan standartlaştırılmış bir M-ROSE protokolü sunuyoruz. Bu protokol, klinisyenlerin doğru değerlendirme ve tedavi planları oluşturmaları için paha biçilmez bir referans görevi görürken, hedef numunelerin daha sonra ele alınmasına ilişkin karar vermeyi kolaylaştırır.

<table><tbody><tr><td>Sitolojik mikroskop</td><td>Olympus Corporation</td><td>CX43</td><td></td></tr><tr><td>Diff Quik (DQ) boyama çözümleri</td><td>Besso Biotechnology Co. LTD</td><td>G1541</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık 2.5-5 mL şırınga</td><td>iğneleri Shandong Zhu İlaç Grubu</td><td>20183150304</td><td></td></tr><tr><td>Pudrasız lateks eldiven</td><td>Henan Yadu Industrial Co., LTD</td><td>20182140728</td><td></td></tr><tr><td>Steril hücre kültür slaytları</td><td>Jinan Preret sanayi ve ticaret A.Ş., LTD</td><td>7101</td><td></td></tr></tbody></table>

pulmoner enfeksiyon hastalıklarında mikrobiyolojik hızlı yerinde değerlendirme

Microbiological Rapid On-Site Evaluation for Pulmonary Infectious Diseases

Açıklanamayan akciğer enfeksiyonu ile başvuran hastalarda ampirik anti-enfektif tedavinin hızlı bir şekilde başlatılması çok önemlidir. Klinik pratikte görüntüleme elde edilmesi nispeten basit olmasına rağmen, özgüllüğünün olmaması genellikle hastalığın altta yatan etiyolojisini doğru bir şekilde tanımlamak için balgam kültürü, bronkoalveoler-lavaj sıvı kültürü veya genetik dizileme gibi ek zaman alıcı testler gerektirir. Ayrıca, ampirik anti-enfektif tedavinin sınırlı etkinliği, antibiyotik kötüye kullanımına katkıda bulunabilir. Hızlı yerinde değerlendirme (ROSE) slaytlarında mikrobiyal arka planın yorumlanmasındaki son gelişmeler, klinisyenlerin bronkoskopi yoluyla (örneğin, alveoler lavaj, mukozal fırçalama, doku klempi) derhal numune almalarını sağlayarak, temel mikrobiyal arka plan bilgilerini sağlayan yatak başı boyamayı ve yorumlamayı kolaylaştırmıştır. Sonuç olarak, bu, hedefe yönelik anti-enfeksiyon tedavisi ve kişiselleştirilmiş ilaç tedavisi planları geliştirmek için bir temel oluşturur. Hangi patojenlerin gerçek zamanlı olarak enfeksiyonlara neden olduğunu daha iyi anlayarak, doktorlar antibiyotik direncine katkıda bulunan gereksiz geniş spektrumlu antibiyotiklerden kaçınabilirler. Solunum tıbbı departmanlarında veya yoğun bakım ünitelerinde hızlı ve standartlaştırılmış bir M-ROSE iş akışı oluşturmak, doktorlara hastalar için doğru tedavi stratejileri formüle etmede büyük ölçüde yardımcı olacaktır ve bu da önemli klinik çıkarımlara sahiptir.

Tipik bir vakada, 63 yaşında bir erkek öksürük, ateş ve göğüs ağrısı ile hastaneye başvurdu. Hastaya daha önce proteinüri ve ödem ile karakterize nefrotik sendrom teşhisi kondu ve uzun süre prednizon ve takrolimus ile tedavi gördü. İlk laboratuvar bulgularında beyaz kan hücresi sayısı 10.49 x 109/L, nötrofil sayısı 8.87 x 109/L, tam kan C-reaktif protein ve (1-3)-β-D-glukan konsantrasyonları 155.81 mg/L ve 249.7 pg/mL olarak bulunmuştur. Göğüs bilgisayarlı tomografi (BT) taramasında yaygın, bilateral ve santral yerleşimli buzlu cam opaklaşması görüldü (Şekil 3A). Sefoperazon tazobaktam ile ilk anti-enfektif tedavi etkisizdi ve semptomları egzersiz sonrası kalp yorgunluğu, nefes darlığı ve nefes darlığı ile ağırlaştı; tekrarlanan BT görüntülemede anlamlı bir düzelme gözlenmedi (Şekil 3B). Daha sonra hasta mekanik ventilasyon için yoğun bakım ünitesine (YBÜ) transfer edildi ve bronkoskopi yapıldı. Odak örneklemesine sanal navigasyon rehberliğinde erişildi ve üç forseps biyopsi örneği toplandı (Şekil 4). Dokunun hemen mikroskobik değerlendirmesi için ROSE mevcuttu ve Pneumocystis jiroveci tanısı doğrulandı (Şekil 5A). Hasta hemen sülfametoksazol (1.92 g, q6h) ile antifungal tedavi aldı; sonraki boyama (Şekil 5B-E) bu tanıyı doğruladı. Bununla birlikte, tekrarlanan BT görüntülemesi hala anlamlı bir iyileşme göstermedi (Şekil 3C). Hastaya mantar enfeksiyonu için karbofungin (ilk gün 70 mg ve ardından günde 50 mg), metilprednizolon (günde 80 mg) ve immünoglobulin (günde 10 g) verildi. Semptomlar hızlı bir şekilde hafifledi ve hasta takip tedavisine devam etti.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig01.jpg"> Şekil 1: Ekipman ve malzemeler. (A) Sitolojik mikroskop ve Grafik görüntüleme sistemi. (B) Diff Quik (DQ) boyama solüsyonu A. (C) Diff Quik (DQ) boyama solüsyonu B. (D) Pudrasız lateks eldivenler. (E) Steril hücre kültürü slaytları. (F) Tek kullanımlık 2,5-5 mL şırınga iğneleri. (G) Emici kağıt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig02.jpg"> Şekil 2: M-ROSE iş akışı. (A) Slaytın yazdırılması. (B) Slaytı 10-30 saniye boyunca Diff A çözeltisine batırın. (C) Fazla Diff A çözeltisini çıkarmak için slaytı PBS boya banyosunda durulayın. (D) Slaytta kalan sıvıyı emici kağıtla kurulayın ve silin. (E) Slaytı 20-40 sn boyunca Diff B çözeltisine daldırın. (F) Slaytı su boyama tankında temizleyin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig03.jpg"> Şekil 3: Göğüs BT görüntüleri. (A) Başvuruda. (B) Yoğun bakım ünitesine transfer gününde. (C) Sülfametoksazol tedavisinden sonra <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig04.jpg"> Şekil 4: Sağ akciğerin alt lobunun posterior bazal segmentinin VBN ile lokalizasyonu. (A) Sağ ana bronş. (B) Sağ orta bronş. (C) Sağ akciğerin alt lobunun bronşunun arka bazal segmenti. (d) VBN'nin 3D haritası. (E) Göğüs BT'nin koronal haritası. (F) Göğüs BT'nin eksenel haritası. (G) Göğüs BT'nin sagital haritası <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig04large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig05.jpg"> Şekil 5: Çeşitli boyama yöntemlerinde pneumocystis görünümünü belgeleyen resimler. (A) GÜL 100 x 10; Beyaz ok: askospor içeren kistler. (B) Hematoksilen ve eozin (HE), 60 x 10. (C) Alcian mavisi, 60 x 10. (D) GIEMSA, 40 x 10. (E) Heksamin gümüşü, 20 x 10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Buradaki protokol, slayt yapımı, boyama ve yorumlama olmak üzere üç adımdan oluşan hızlı ve standartlaştırılmış bir mikrobiyolojik hızlı yerinde değerlendirme (M-ROSE) iş akışını göstermektedir. Bu protokol hekimlerin hızlı klinik kararlar almasına yardımcı olacaktır.

Pulmoner Enfeksiyon Hastalıklarında Mikrobiyolojik Hızlı Yerinde Değerlendirme

The prompt initiation of empirical anti-infective therapy is crucial in patients presenting with unexplained pulmonary infection. Although imaging ...

Amacımız, akciğer enfeksiyonu olan hastalar için doğru tedavi stratejileri formüle etmede doktorlara yardımcı olmak için gerçek zamanlı hızlı bir değerlendirme yöntemi olan M-ROSE'u tanıtmaktır. Hızlı hücre boyama teknolojisi ve yüksek çözünürlüklü mikroskobik görüntüleme sistemi şu anda bu alandaki araştırmaları ilerletmek için kullanılmaktadır. M-ROSE ile ilgili klinik çalışmaların sayısı nispeten sınırlıdır.En büyük zorluk, patojenleri görsel olarak tanımlamak ve enfeksiyon ile kontaminasyonu ayırt etmek zor olduğu için personel ve eğitimli personel gerektiren M-ROSE sonuçlarının yorumlanmasıdır. Enfeksiyonlara neden olan patojenlerin gerçek zamanlı olarak daha iyi anlaşılmasıyla, doktorlar antibiyotik direncine katkıda bulunan ve pulmoner enfeksiyonların tedavisi olarak gereksiz geniş spektrumlu antibiyotiklerden kaçınabilirler. M-ROSE gerçek zamanlı ve son derece verimlidir.M-ROSE, aspergillus, cryptococcus, number ve candida gibi patojenlerin mikroskobik olarak tanımlanmasını sağlar. Solunum temel kalitesinin boyutlandırılmasında, enfeksiyonları bulaşıcı olmayan hastalıklardan ayırt etmede, enfeksiyonu kontaminasyondan ayırt etmede ve ayrıca enfeksiyonu, şiddetini ve prognozunu değerlendirmede önemli yol gösterici etkilere sahiptir.

microbiological-rapid-on-site-evaluation-for-pulmonary-infectious

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Xpert MTB / RIF testi aynı anda tespiti için numune dekontaminasyon, eller serbest kullanım, on-board örnek işleme ve ultra-hassas hemi-nested PCR...

Xpert MTB / RIF Testi ile Akciğer Tüberkülozu Tanısı

Kaynak: Perinbam, K. ve Siryaporn, A. Amip kullanarak Hızlı Görüntü Tabanlı Bakteriyel Virulans Testi. J. Vis. Exp. (2018)Bu video, bakteriyel virülansı değerlendirmek için amoebaları yüzeye bağlı veya planktonik bakterilerle kuluçka altına almak, kalsein-asetoksimetil ester (kalsein-) agaroz pedi uygulamak ve konak hücre hasarını tespit etmek için floresans görüntüleme yöntemi kullanılarak hızlı ve görüntü tabanlı bir yöntem gösterilmektedir.

Yüzeyden Kaynaklanan Bakteriyel Virulansı Taramak İçin Hızlı Görüntü Tabanlı Bir Analiz

Bitki patojenleri yerinde, özellikle toprak kaynaklı patojenler, hızlı ve doğru tespiti daha fazla inoculum üretim ve alanında bitki hastalıklarının yayılması önlemek için çok önemli olduğunu. Burada bir taşınabilir gerçek zamanlı PCR algılama sistemi kullanılarak geliştirilen yöntem yerinde tanı alan koşullarında sağlar.

Toprak kaynaklı Phytopathogens bir taşınabilir gerçek zamanlı PCR sistemi kullanarak yerinde moleküler tespiti

Hızla konuşlandırılabilen, off-grid laboratuvar tasarlanmış ve inşa için uzak, kaynak kısıtlı genel ayarlar. Kritik lojistik gelişmiş, genişletilebilir, çok fonksiyonlu laboratuvar modülleri yönlerini ve özellikleri incelenmiştir. Temel Laboratuvar iş akışı için bir kontrol listesi ve solunum viral tanı testi için bir protokol geliştirilen ve sunuldu.

Uzak Laboratuvar Yönetimi: Solunum virüs tanılama

Bu protokol, D 2O metabolizmasının tek hücreli uyarılmış Raman saçılma görüntülemesi ile 2.5 saat içinde hızlı antimikrobiyal duyarlılık testi (AST) testi sunar. Bu yöntem, klinikte hızlı tek hücreli fenotipik AST için dönüştürücü olan idrar veya tam kan ortamındaki bakteriler için geçerlidir.

Tek Bir Bakteride Döteryum Birleşmesinin Uyarılmış Raman Saçılma Görüntülemesi ile Hızlı Antimikrobiyal Duyarlılık Testi

Protokol, temiz oda ortamında mikrobiyal biyolojik yükü en aza indirmek için en iyi uygulamaları özetler ve çevresel izleme, proses izleme ve ürün sterilite testi gibi stratejileri içerir. Mevcut iyi doku uygulamaları standartlarını ve mevcut iyi üretim uygulamaları standartlarını karşılamak için gerekli olan üretim ve test tesisleri ile ilgilidir.

Temiz Oda Ortamları ve Hücresel Terapiler için Mikrobiyal Kontrol ve İzleme Stratejileri

EUCAST, otomatik kan kültürleri için doğrudan bir antimikrobiyal duyarlılık testi (AST) protokolü geliştirmiştir. Bununla birlikte, kütle spektrometresi tabanlı mikrobiyal tanımlamaya bağımlılığı, otomatik bir mikrobiyal tanımlama sisteminde doğrudan bir aşı hazırlama protokolü kullanılarak ortadan kaldırılabilir. Bu yaklaşım, numune alındıktan sonraki 24 saat içinde AST raporları sağlayabilir.

Kütle Spektrometresi Olmadan EUCAST RAST Yöntemini Kolaylaştırmak için Otomatik Bir Mikrobiyal Tanımlama Sistemi Kullanarak Doğrudan Mikrobiyal Tanımlama

Çeşitli bakteriyel patojenler, doğru bir şekilde tespit edilmez ve derhal tedavi edilmezse solunum yolu enfeksiyonlarına neden olabilir ve ciddi sağlık sorunlarına yol açabilir. Döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla bu patojenlerin hızlı ve doğru tespiti, klinik ortamlarda solunum yolu enfeksiyonlarının etkili bir şekilde yönetilmesini ve kontrol edilmesini sağlar.

Mikroakışkan çip bazlı döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla alt solunum yolu enfeksiyonlarına neden olan bakteriyel patojenlerin hızlı tespiti

Biz yüksek içerik görüntüleme ile otomatik hücre kültür birleştirerek yüksek verimli bir şekilde, çoklu hücresel süreçleri ve yapıları görselleştirmek ve ölçmek için bir metodoloji açıklanmaktadır. Bu yöntemler daha fonksiyonel ek açıklama genomların yardım yanı sıra hastalık gen ağları ve potansiyel ilaç hedefleri belirleyebilir.

Nörodejeneratif Hastalıklar Yüksek İçerik Tarama

Pamuk fareleri son derece heyecanlıdır ve güçlü bir kaç ya da savaş tepkisine sahiptir. Hayvanların stresini azaltmak için optimize edilmiş bir işleme yöntemi tanımlanmıştır, bu da pamuk farelerini klinik öncesi bir model olarak daha erişilebilir hale getirecektir.

Oncolytic virüs klinik öncesi Değerlendirme Çalışmaları Pamuk Rat Taşıma

Öğrenin, pulmoner enfeksiyonlarda M-ROSE yöntemiyle hızlı mikrobiyolojik değerlendirme yapmayı. Bu protokol, Diff-Quik boyama ve mikroskobik görüntüleme kullanarak patojenleri gerçek zamanlı tanımlar ve hekimlerin tedavi stratejilerini geliştirmesine yardımcı olur.

Pulmoner Enfeksiyon Hastalıklarında Mikrobiyolojik Hızlı Yerinde Değerlendirme

Daha fazla video keşfet