Name: Kültür Çanağı Kaplaması için Yetişkin İnsan Fibroblastlarından Kardiyak Hücre Dışı Matriks Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-22T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Öğrenin, yetişkin insan fibroblastlarından kardiyak hücre dışı matriks üretimini. Bu yöntem, kalp hücreleri ile matriks arasındaki etkileşimleri incelemek ve doku mühendisliği için üç boyutlu biyomimetik yapılar geliştirmek amacıyla kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Hücre kültürü için miyokardiyumu taklit eden ekstra hücresel matrisin oluşturulması

<ol><li>Gattazzo, F., Urciuolo, A., Bonaldo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix%3A+A+dynamic+microenvironment+for+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix: A dynamic microenvironment for stem cell niche.</a> Biochim Biophys Acta. 1840 (8), 2506-2519 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+extracellular+matrix+coatings+for+the+promotion+of+cell+proliferation+and+maintenance+of+cell+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific extracellular matrix coatings for the promotion of cell proliferation and maintenance of cell phenotype.</a> Biomaterials. 30 (23-24), 4021-4028 (2009).</li>
<li>Xing, H., Lee, H., Luo, L., Kyriakides, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-derived+biomaterials+in+engineering+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-derived biomaterials in engineering cell function.</a> Biotechnol Adv. 42, 107421(2020).</li>
<li>Andrés-Delgado, L., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+cardiac+function+and+heart+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Interplay between cardiac function and heart development.</a> Biochim Biophys Acta. 1863 (7), Pt B 1707-1716 (2016).</li>
<li>Hall, C., Gehmlich, K., Denning, C., Pavlovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+relationship+between+cardiac+fibroblasts+and+cardiomyocytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Complex relationship between cardiac fibroblasts and cardiomyocytes in health and disease.</a> J Am Heart Assoc. 10 (5), e019338(2021).</li>
<li>Castaldo, C., Chimenti, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+progenitor+cells%3A+The+matrix+has+you%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiac progenitor cells: The matrix has you.</a> Stem Cells Transl Med. 7, 506-510 (2018).</li>
<li>Nurzynska, D., Iruegas, M. E., Castaldo, C., Müller-Best, P., Di Meglio, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+biotechnology+in+myocardial+regeneration-tissue+engineering+triad%3A+cells%2C+scaffolds%2C+and+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Application of biotechnology in myocardial regeneration-tissue engineering triad: cells, scaffolds, and signaling molecules.</a> Biomed Res Int. 2013, 236893(2013).</li>
<li>Giacca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+regeneration+after+myocardial+infarction%3A+An+approachable+goal%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Cardiol+Rep%22%5BJournal%5D)">Cardiac regeneration after myocardial infarction: An approachable goal.</a> Curr Cardiol Rep. 22 (10), 122(2020).</li>
<li>Spedicati, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+design+of+bioartificial+scaffolds+for+the+in+vitro+modeling+of+human+cardiac+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biomimetic design of bioartificial scaffolds for the in vitro modeling of human cardiac fibrosis.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 983782(2022).</li>
<li>Souders, C. A., Bowers, S. L., Baudino, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+fibroblast%3A+The+renaissance+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac fibroblast: The renaissance cell.</a> Circ Res. 105 (12), 1164-1176 (2009).</li>
<li>Castaldo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+fibroblast-derived+extracellular+matrix+%28biomatrix%29+as+a+model+for+the+studies+of+cardiac+primitive+cell+biological+properties+in+normal+and+pathological+adult+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Cardiac fibroblast-derived extracellular matrix (biomatrix) as a model for the studies of cardiac primitive cell biological properties in normal and pathological adult human heart.</a> Biomed Res Int. 2013, 352370(2013).</li>
<li>Nurzynska, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+produced+cardiac+extracellular+matrix+for+studies+of+myocardium+regeneration+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">In vitro produced cardiac extracellular matrix for studies of myocardium regeneration potential.</a> Tissue Eng Part A. 21, 77(2015).</li>
<li>VanWinkle, W. B., Snuggs, M. B., Buja, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+ECM%3A+A+biosynthetic+extracellular+matrix+for+cardiomyocyte+culture%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Cardiac ECM: A biosynthetic extracellular matrix for cardiomyocyte culture.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32, 478-485 (1996).</li>
<li>Santhakumar, R., Vidyasekar, P., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+ECM%3A+A+nano-matrix+scaffold+with+potential+application+in+cardiac+regeneration+using+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cardiac ECM: A nano-matrix scaffold with potential application in cardiac regeneration using mesenchymal stem cells.</a> PLoS One. 9 (12), e114697(2014).</li>
<li>Gopal, S., Multhaupt, H. A. B., Couchman, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+in+cell-extracellular+matrix+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Calcium in cell-extracellular matrix interactions.</a> Adv Exp Med Biol. 1131, 1079-1102 (2020).</li>
<li>Hellewell, A. L., Rosini, S., Adams, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Rapid%2C+scalable+method+for+the+isolation%2C+functional+study%2C+and+analysis+of+cell-derived+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Rapid, scalable method for the isolation, functional study, and analysis of cell-derived extracellular matrix.</a> J Vis Exp. (119), e55051(2017).</li>
<li>Nurzynska, D., Di Meglio, F., Montagnani, S., Castaldo, C. Cardiac stem cells derived from epithelial-mesenchymal transition of epicardial cells: role in heart regeneration (method). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNurzynska%2C+D+%22Stem+Cells+and+Cancer+Stem+Cells%2C+vol.+5%3A+Therapeutic+Applications+in+Disease+and+Injury%22">Stem Cells and Cancer Stem Cells, vol. 5: Therapeutic Applications in Disease and Injury</a>. Hayat, M. A. , Springer. New York. 109-115 (2012).</li>
<li>Pagano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+versus+pathological+cardiac+fibroblast-derived+extracellular+matrix+differentially+modulates+cardiosphere-derived+cell+paracrine+properties+and+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Normal versus pathological cardiac fibroblast-derived extracellular matrix differentially modulates cardiosphere-derived cell paracrine properties and commitment.</a> Stem Cells Int. 2017, 7396462(2017).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+C+regulates+the+profibrotic+activity+of+fibroblasts+in+in+vitro+replica+settings+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Vitamin C regulates the profibrotic activity of fibroblasts in in vitro replica settings of myocardial infarction.</a> Int J Mol Sci. 24 (9), 8379(2023).</li>
<li>Jaffré, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+angiotensin+receptors+in+cardiac+fibroblasts+coregulate+adrenergic-dependent+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Serotonin and angiotensin receptors in cardiac fibroblasts coregulate adrenergic-dependent cardiac hypertrophy.</a> Circ Res. 104 (1), 113-123 (2009).</li>
<li>Błyszczuk, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+cardiac+fibroblasts+control+contraction+of+human+fibrotic+cardiac+microtissues+by+a+%CE%B2-adrenoreceptor-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Activated cardiac fibroblasts control contraction of human fibrotic cardiac microtissues by a β-adrenoreceptor-dependent mechanism.</a> Cells. 9 (5), 1270(2020).</li>
<li>Duval, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+physiological+events+in+2D+vs.+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol%22%5BJournal%5D)">Modeling physiological events in 2D vs. 3D cell culture.</a> Physiol. 32 (4), 266-277 (2017).</li>
<li>Ungerleider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+and+characterization+of+injectable+hydrogels+derived+from+decellularized+skeletal+and+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Fabrication and characterization of injectable hydrogels derived from decellularized skeletal and cardiac muscle.</a> Methods. 84, 53-59 (2015).</li>
<li>Seo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+heart+ECM+hydrogel+using+supercritical+carbon+dioxide+for+improved+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Decellularized heart ECM hydrogel using supercritical carbon dioxide for improved angiogenesis.</a> Acta Biomater. 67, 270-281 (2018).</li>
<li>Liguori, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+biomechanical+clues+from+cardiac+tissue+decellularized+extracellular+matrix+drive+stromal+cell+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Molecular and biomechanical clues from cardiac tissue decellularized extracellular matrix drive stromal cell plasticity.</a> Front Bioeng Biotechnol. 8, 520(2020).</li>
<li>Silva, A. C., Pereira, C., Fonseca, A. C. R. G., Pinto-do-Ó, P., Nascimento, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bearing+my+heart%3A+The+role+of+extracellular+matrix+on+cardiac+development%2C+homeostasis%2C+and+injury+response%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Bearing my heart: The role of extracellular matrix on cardiac development, homeostasis, and injury response.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 621644(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 L laboratuvar şişesi&nbsp;</td><td>VWR</td><td>215-1595</td><td>Kullanmadan önce temizleyin ve otoklavlayın</td></tr><tr><td>10 mL serolojik pipet</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td>Steril,&nbsp; polistiren</td></tr><tr><td>100 mm cam plaka&nbsp;</td><td>VWR</td><td>391-0578</td><td>Kullanmadan önce temizleyin ve otoklavlayın</td></tr><tr><td>100 mm plakalar</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td>İşlenmiş, steril hücre kültürü kabı</td></tr><tr><td>15 mL steril tüpler</td><td>Falcon</td><td>352097</td><td>Santrifüj steril tüpler, polipropilen</td></tr><tr><td>22 mm x 22 mm kapak camları</td><td>VWR</td><td>631-1570</td><td>Kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>25 mL serolojik pipet</td><td>Falcon</td><td>357525</td><td>Steril, &nbsp; polistiren</td></tr><tr><td>250 mL laboratuvar şişesi&nbsp;</td><td>VWR</td><td>215-1593</td><td>Kullanmadan önce temizleyin ve otoklavlayın</td></tr><tr><td>35 mm plakalar</td><td>Falcon</td><td>353001</td><td>İşlenmiş, steril hücre kültürü kabı</td></tr><tr><td>5 mL serolojik pipet</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td>Steril, polistiren</td></tr><tr><td>50 mL steril tüpler</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td>Santrifüj steril tüpler, polipropilen</td></tr><tr><td>500 mL laboratuvar şişesi</td><td>VWR</td><td>215-1594</td><td>Temiz ve Kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>60 mm plakalar</td><td>Falcon</td><td>353004</td><td>İşlenmiş, steril hücre kültürü kabı</td></tr><tr><td>Amonyum hidroksit (NH4OH)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>338818</td><td>Sıvı</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık neşterler</td><td>VWR</td><td>233-5526</td><td>Steril ve tek kullanımlık</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle Ortamı (DMEM)</td> <td>Sigma- Aldrich</td><td>D6429-500ml</td><td>2-8 ° C'de saklayın; C; ışığa maruz kalmaktan kaçının</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> <td>Sigma- Aldrich</td><td>F9665-500ml</td><td>-20 ° C'de saklayın. Serum daha küçük çalışma hacimlerine ayrılmalıdır</td></tr><tr><td>İnce forseps</td><td>VWR</td><td>232-1317</td><td>Kullanmadan önce temizleyin ve otoklavlayın</td></tr><tr><td>Domuz derisinden elde edilen jelatin</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>G1890-100G</td><td>Ticari Toz</td></tr><tr><td>Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)</td> <td>Sigma- Aldrich</td><td>H1387-1L</td><td>Toz</td></tr><tr><td>Büyük cerrahi makas</td><td>VWR</td><td>233-1211</td><td>Temiz ve kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>Mikrodiseksiyon makası&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S3146</td><td>Kullanmadan önce temizleyin ve otoklavlayın</td></tr><tr><td>Penisilin ve Streptomisin&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>P4333-100ml</td><td>-20 ° C'de saklayın. Çözüm&nbsp; daha küçük çalışma hacimlerine ayrılmalıdır</td></tr><tr><td>Potasyum Klorür</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>P9333</td><td>Toz</td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat Monobazik</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>P5665</td><td>Toz</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S7653</td><td>Toz</td></tr><tr><td>Sodyum Fosfat Dibazik</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>94046</td><td>Toz</td></tr><tr><td>Stericup Filtreler</td><td>Milipore</td><td>S2GPU05RE</td><td>Steril ve tek kullanımlık 0,22 mm filtre membranları&nbsp;</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td>Sıvı</td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>T4049-100ml</td><td>-20 ° C'de saklayın. Daha küçük çalışma hacimlerine ayrılmalıdır</td></tr></tbody></table>

kültür Çanağı kaplaması için yetişkin İnsan fibroblastlarından kardiyak hücre dışı matriks Üretimi

Production of Cardiac Extracellular Matrix from Adult Human Fibroblasts for Culture Dish Coating

Kültüre yerleştirilen küçük doğal miyokard parçalarından fibroblastların büyümesi 3-5 gün içinde gözlenmiştir (Şekil 1).
Sonraki günlerde, fibroblastların sayısı, muhtemelen kalp dokusu örneğinden sürekli büyüme ve çanak yüzeyinde göç etmiş fibroblastların çoğalması nedeniyle artmaya devam etti. Bir neşter ile mekanik ayrışma ile elde edilen tüm miyokard fragmanlarının aynı süre içinde aynı sayıda fibroblast vermesi beklenmemelidir, çünkü elde edilen doku fragmanları biraz farklı hacimlere ve hücre sağkalım oranlarına sahip olabilir. Özellikle, doğrulanmış büyüme aktivitesine sahip miyokard fragmanları tutulabilir ve yeniden kaplanabilir, böylece fibroblast izolasyonu için en az iki kez kullanılmalarına izin verilir.
Fibroblastlar, daha ileri deneyler için mevcut hücre sayısını artırmak için birkaç pasaj için alt kültürlenebilir. Bununla birlikte, birleşmeye ulaştıklarında, fibroblastlar in vitro olarak çoğalmayı bırakır ve hücre dışı matrisi biriktirerek sentez ve salgılama aktivitesini üstlenir. Sonraki hücre çözme, plakanın yüzeyini kardiyak ECM ağı ile kaplar hale getirir (Şekil 2). Fibroblast çıkarılması sırasında kültür kabının çıplak gözle ve ters çevrilmiş bir faz kontrast mikroskobu kullanılarak görsel olarak gözlenmesi, hücre giderme çözeltisindeki inkübasyon süresini gerekli ve yeterli minimuma indirmek için çok önemlidir. İnkübasyon sırasında yüzen bir örtünün varlığı, fibroblastların tek tabakasının geçirgenleşmesini ve ayrılmasını gösterir ve hücre giderme çözeltisi seyreltilmeli ve hemen ardından çıkarılmalıdır.
Fibroblast kaynaklı kardiyak ECM'nin bileşimi, fibroblastların kaynağına bağlıdır. Deneylerimizde, normal insan kalbinden ve iskemik kardiyopatili insan kalbinden izole edilen fibroblastlar tarafından üretilen kardiyak ECM'nin farklı protein içeriklerine sahip olduğu ve ilkel kardiyak hücre proliferasyonu, apoptoz ve göç üzerinde farklı etkileri olduğu görülmüştür11,12. Decellularizasyon işlemi sırasında ECM protein kaybı kaçınılmaz olmasına rağmen, mevcut protokolde kullanılan yöntem, in vitro üretilen kardiyak ECM'nin bileşimini ve mimarisini büyük ölçüde korumuştur (Şekil 3).
Bu protokolde atriyal doku hem normal (verici) hem de patolojik (alıcı) kalpten elde edilebildiği için kullanılmıştır. Patolojik (alıcı) kalbin tamamı kesitlere ayrılabilir ve araştırma için kullanılabilir (Helsinki Bildirgesi ilkelerine uygun olarak ve yerel etik kurul onayı ile), nakil sırasında donör kalpten ventrikül örnekleri almak mümkün değildir. Bu nedenle çalışmanın kapsamı normal ve patolojik koşullarda kalp dokusu arasındaki farklılıkları araştırmaksa, en iyi örnek kaynağı atriyal duvardır. Diğer canlı kardiyak doku kaynaklarının mevcudiyetine bağlı olarak, normal veya patolojik kalplerin atriyal veya ventriküler duvarlarından alınan numuneler, kardiyak ECM çanak kaplaması için aynı protokol izlenerek kullanılabilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig01.jpg"> Şekil 1: Kardiyak fibroblastların izolasyonu. 4 gün (A), 8 gün (B) ve 12 gün (C) kültürden sonra miyokard parçalarından fibroblast büyümesi. Ölçek çubukları: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig02.jpg"> Şekil 2: Hücre dışı matriksin hücreden çıkarılması. Decellularization solüsyonunda yaklaşık 10 s (A), 20 s (B), 30 s (C), 40 s (D), 50 s (E) ve 60 s (F) inkübasyondan sonra fibroblastlar. Ölçek çubukları: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig03.jpg"> Şekil 3: Decellularizasyondan önce ve sonra hücre dışı matris bileşimi. Tip III (A,E) ve tip IV (B,F) kollajen, laminin (C,G) ve fibronektin (D,H) dahil olmak üzere temsili kardiyak hücre dışı matris proteinlerinin dolaylı immünofloresan boyanması, (AD) öncesi ve sonrası (EH) fibroblast çıkarılması. Hücre çekirdekleri DAPI (mavi) ile boyandı. Ölçek çubukları: (A-C,E-G) 50 μm; (D,H) 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Çözümleri</td>
			<td colspan="2">Çözeltilerin bileşimi</td>
			<td>Son cilt</td>
			<td>Yorum</td>
		</tr><tr><td>Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)</td>
			<td colspan="2">Ticari olarak güçlendirilmiş tuzlar + çift damıtılmış steril su + 0,35 g sodyum bikarbonat</td>
			<td>1 L</td>
			<td>Filtrasyon ile sterilize edilmiştir / 4 ° C'de saklayın</td>
		</tr><tr><td>Hücreden arındırma çözümü</td>
			<td colspan="2">% 0.25 Triton X-100 + 10 mM NH4OH + PBS</td>
			<td>50 mL</td>
			<td>Filtrasyon ile sterilize edilmiştir / 4 ° C'de saklayın</td>
		</tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı (DMEM)</td>
			<td colspan="2">223.75 mL DMEM + 25 mL fetal sığır serumu + 1.25 mL penisilin / streptomisin çözeltisi</td>
			<td>250 mL</td>
			<td>4 °C'de saklayın</td>
		</tr><tr><td>Jelatin çözeltisi</td>
			<td colspan="2">0.2 g jelatin tozu + 100 mL Fosfat tamponlu salin</td>
			<td>100 mL</td>
			<td>Filtrasyon ile sterilize edilmiştir / 4 ° C'de saklayın</td>
		</tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (1x PBS)</td>
			<td colspan="2">0.1 g potasyum fosfat monobazik + 0.1 g potasyum klorür + 4.0 g sodyum klorür + 0.575 g sodyum fosfat dibazik + çift damıtılmış steril su</td>
			<td>500 mL</td>
			<td>Filtrasyon ile sterilize edilmiştir / 4 ° C'de saklayın</td>
		</tr><tr><td>Tripsin durdurma çözeltisi (TSS)</td>
			<td colspan="2">5 mL fetal sığır serumu + 45 mL Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi</td>
			<td>50 mL</td>
			<td>4 °C'de saklayın</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1: Çalışmada kullanılan her bir çözelti için bileşenler ve ilgili konsantrasyonlar.

Kültür Çanağı Kaplaması için Yetişkin İnsan Fibroblastlarından Kardiyak Hücre Dışı Matriks Üretimi

The myocardium is composed of cardiomyocytes and an even greater number of fibroblasts, the latter being responsible for extracellular matrix production. ...

production-cardiac-extracellular-matrix-from-adult-human-fibroblasts

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Birincil fare kardiyomyosit kültürleri miyofibriler organizasyon ve fonksiyon soruşturma için önemli araçlardan biridir. Aşağıdaki protokol neonatal fare kalpleri birincil kardiyomiyositlerde izolasyonunu ve kültür açıklar. Elde edilen kültürler, daha sonra kardiyomiyosit biyomekanik, biyokimyasal ve hücre-biyolojik tahlillerin çeşitli için kullanılabilmektedir.

İzolasyon ve Kültür Yenidoğan Fare kardiyomiyositlerin

Bu el yazması, yüzey işaretleyici ekspresyonu ve hücre sıralaması kullanılarak tanımlanmış tasarlanmış kardiyak dokuların oluşturulmasını açıklar. Tanımlanan dokular daha sonra insan kalbinin işlevsel, ancak kontrollü bir model sistemini sağlamak için kardiyak hücre tedavisi mekanizmalarını araştırmak için çok dokulu bir biyoreaktörde kullanılabilir.

Tanımlı İnsan Engineered Kalp Dokuların inşaatı Kardiyak Hücre Tedavisinin Mekanizmaları Eğitim için

Bu çalışmalarda, biz rejeneratif çalışmalarda kullanılmak üzere yeni, yenidoğan murin kardiyak iskeleleri için bir yöntem sağlamak.

Yenidoğan Kardiyak iskeleleri: Rejeneratif Çalışmaları Roman Matrisler

Bu iletişim kuralı tam decellularization insan Miyokardiyum, hücre dışı matriks bileşenlerinin koruma sırasında açıklar. Microparticles ve cytoprotective kendi kendine montaj hidrojel üretiminde hücre dışı matriks sonuçlarının daha fazla alay.

İnsan kalp dokusu hücre dışı matriks hidrojel Vitro ve In Vivo uygulamaları için kendi kendine montaj doğru işlenmesi

Kardiyak hücre dışı Matriks (ECM) anahtar süreçlerinde doku ve organların fizyolojik hayatı boyunca remodeling kalıcı süre alacak moleküllerinin karmaşık bir ağdır. Fetal ve yetişkin kalplerin standart decellularization 3D bir bağlamda yerel mimari ve biyomekanik özellikleri yakalayarak karşılaştırmalı deneysel çalışmalar hem dokuların izin verir.

Vitro çalışmalar için 3D benzeri platformlar olarak Fetal ve yetişkin kalp doku karşılaştırılabilir Decellularization Explants

Bu iletişim kuralı tatmin edici yapısal bütünlüğü ve zaman uyumlu dayak davranışı ile üç boyutlu iskele ücretsiz kalp doku oluşturmak için net bir kalıp tabanlı yöntemini açıklar.

Net kalıp tabanlı yöntemi iskele ücretsiz üç boyutlu kalp doku oluşturma

Bu iletişim kuralı bir rejeneratif iskele implant parçası olarak preklinik değerlendirme için uygun olan yara onarım için hedeflenen tüm hücre dışı matriks elyaf üretim hedeftir. Bu iplikler fibroblastlar hollow fiber membranlar üzerinde kültür tarafından üretilen ve membranlar dağılması tarafından ayıklanır.

Hücre dışı matriks liflerinin kurban Hollow Fiber membran hücre kültürü ile üretim

Bu yöntemin amacı sonraki hücresel tahliller için doğal bir iskele olarak fibroblast türetilmiş 3D matris elde etmektir. Fibroblastlar önceden işlenmiş bir kültür plakası içinde tohumlanır ve matris üretimi için askorbik asit ile uyarılır. Matrisler hücreden arındırılır ve kültürle ilgili hücrelere (örn. endotel hücreleri) bloke edilir.

Endotel Tüp Oluşumu Namına Uygulanan Fibroblast Türetilmiş 3D Matris Sistemi

Bu protokol, kalp hastalıkları için hücre implantasyon tedavisinin araştırılmasına olanak sağlamak için insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden elde edilen kardiyovasküler hücreleri içeren mesh şeklinde tasarlanmış kardiyak dokular üreder.

In Vivo Miyokardiyal Onarım için İnsan iPS Hücrelerinden Elde Edilen Örgü Şekilli Mühendislik Kardiyak Dokuların Hazırlanması

Burada, önceden ayırt edilmiş insan kaynaklı pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositler, kardiyak fibroblastlar ve endotel hücrelerinden oluşan 3D kendi kendine monte edilmiş kardiyak mikrotissue dizileri oluşturmak için kullanımı kolay bir metodolojiyi açıklıyoruz. Kardiyak mikrotissues üretmek için teknik gerektiren bu kullanıcı dostu ve düşük hücre, hastalık modellemesi ve ilaç gelişiminin erken aşamaları için uygulanabilir.

İnsan iPSC Türevli Kardiyomiyositler, Kardiyak Fibroblastlar ve Endotel Hücreleri Kullanılarak 3D Kardiyak Mikrotissue Dizilerinin İmalatı

Burada sunulan, mekanistik çalışmalar, hastalık modelleme ve tarama uygulamaları için uygun, çift kutuplu çok kuyulu bir plakada 48 dokudan oluşan paralel bir kültür için tasarlanmış bağ dokuları üretmek için bir protokoldür. Protokol, farklı organ ve türlerden fibroblastlarla uyumludur ve burada insan primer kardiyak fibroblastlarla örneklenmiştir.

Fibroblast Türetilmiş İnsan Tarafından Tasarlanmış Bağ Dokusu Tarama Uygulamaları için

Öğrenin, yetişkin insan fibroblastlarından kardiyak hücre dışı matriks üretimini. Bu yöntem, kalp hücreleri ile matriks arasındaki etkileşimleri incelemek ve doku mühendisliği için üç boyutlu biyomimetik yapılar geliştirmek amacıyla kullanılır.

Kültür Çanağı Kaplaması için Yetişkin İnsan Fibroblastlarından Kardiyak Hücre Dışı Matriks Üretimi

Daha fazla video keşfet