Name: Jiawei Shengjiang Sanın Diyabetik Nefropatinin Sıçan Modeli Üzerindeki Antagonistik Etkisi: EGFR / MAPK3 / 1 Sinyal Yolu ile İlgili (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-10T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Keşfedin ağ farmakolojisi ve moleküler docking teknikleriyle Jiawei Shengjiang San'ın diyabetik nefropati tedavisindeki etki mekanizmasını. Bu yöntem geleneksel bitkisel ilaçların aktif bileşenlerini sistematik olarak analiz eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Jiawei Shengjiang San, Ağ Farmakolojisi Kullanarak Diyabetik Nefropatiyi Ele Alacak

<table><tbody><tr><td>2 kez; SYBR Yeşil qPCR Master Karışımı&nbsp;</td><td>Servicebio, Wuhan, Çin</td><td>G3320-05</td><td></td></tr><tr><td>24 saatlik idrar proteini miktar tayini (UTP)</td><td>Nanjing Jiancheng Biyoloji Mühendisliği Enstitüsü</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>3,3'-Diaminobenzidin</td><td>Şangay Huzheng Biotech, Çin</td><td>91-95-2</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik biyokimyasal analiz cihazı</td><td>Hitachi, Japonya</td><td>7170A</td><td></td></tr><tr><td>Susuz Etanol</td><td>Biosharp, Tianjin, Çin</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>BAX Primer antikorları&nbsp;</td><td>Afinite, ABD</td><td>AF0120</td><td>Sıçan</td></tr><tr><td>BCL-2 Birincil antikorlar&nbsp;</td><td>Affinity, ABD</td><td>AF6139</td><td>Sıçan</td></tr><tr><td>BX53 mikroskobu</td><td>Olympus, Japonya</td><td>BX53</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform İkamesi</td><td>ECOTOP, Guangzhou, Çin</td><td>ES-8522</td><td></td></tr><tr><td>Desmond yazılımı&nbsp;</td><td>New York, NY, ABD</td><td>Sürüm 2019-1</td><td></td></tr><tr><td>Dijital Sabit Sıcaklık Su Banyosu</td><td>Changzhou Jintan Liangyou Enstrüman, Çin</td><td>DK-8D</td><td></td></tr><tr><td>EGFR Birincil antikorlar&nbsp;</td><td>Affinity, ABD</td><td>AF6043</td><td>Sıçan</td></tr><tr><td>Gömme-812 REÇİNE</td><td>Kabuk Kimyasal, ABD</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>Açlık kan şekeri (FBG)</td> <td>Nanjing Jiancheng Biyoloji Mühendisliği Enstitüsü</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>FC tipi tam dalga boylu enzim etiket analizörü</td><td>Multiskan; Termo, ABD</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH&nbsp; Primer antikorlar&nbsp;</td><td>Affinity, ABD</td><td>AF7021</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan Glikasyonlu serum proteini (GSP)</td><td>Nanjing Jiancheng Biyoloji Mühendisliği Enstitüsü</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Transmisyon elektron mikroskobu</td><td>Hitachi, Japonya</td><td>H-7650</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen/eozin (HE) boyama solüsyonu</td><td>Servicebio, ABD</td><td>G1003</td><td></td></tr><tr><td>Image-Pro Plus</td><td>MEDYA SİBERNETİĞİ, ABD</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Gerçek Zamanlı PCR Amplifikasyon Aleti</td><td>Uygulamalı Biyosistemler, ABD</td><td>iQ5&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Irbesartan tabletler</td><td>Hangzhou Sanofi İlaç</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>İzopropanol</td><td>Biosharp, Tianjin, Çin</td><td>N/</td><td></td></tr><tr><td>A&nbsp; JWSJS granülleri</td><td>Guangdong Yifang İlaç</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kodak Image Station 2000 MM görüntüleme sistemi</td><td>Kodak, ABD</td><td>IS2000</td><td></td></tr><tr><td>Düşük yoğunluklu kolesterol (LDL-C)</td><td>Nanjing Jiancheng Biyoloji Mühendisliği Enstitüsü</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>MAPK3/1Birincil antikorlar&nbsp;</td><td>Affinity, ABD</td><td>AF0155</td><td>Sıçan</td></tr><tr><td>Tıbbi Santrifüj</td><td>Hunan Xiangyi Laboratuvar Enstrüman Geliştirme, Çin&nbsp;</td><td>TGL-16K</td><td></td></tr><tr><td>Mini trans-blot transfer sistemi</td><td>Bio-Rad, ABD</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN elektroforez sistemi</td><td>Bio-Rad, ABD</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>NanoVue Plus Spektrofotometre</td><td>Healthcare Bio-Sciences AB, İsveç</td><td>111765</td><td></td></tr><tr><td>p-EGFR Primer antikorlar&nbsp;</td><td>Afinity, ABD</td><td>AF3044</td><td>Sıçan</td></tr><tr><td>Periyodik asit-Schiff (PAS) boyama çözeltisi</td><td>Servicebio, ABD</td><td>G1008</td><td></td></tr><tr><td>p-MAPK3 / 1 Birincil antikorlar&nbsp;</td><td>Afinite, ABD</td><td>AF1015</td><td>Sıçan</td></tr><tr><td>İkincil antikorları</td><td>&nbsp; Santa Cruz, ABD</td><td>sc-2357</td><td>Tavşan</td></tr><tr><td>Streptozotosin</td><td>Sigma, ABD</td><td>S0130</td><td></td></tr><tr><td>SureScript Birinci İplikli cDNA Sentez Kiti</td><td>GeneCopeia, ABD</td><td>QP056T</td><td></td></tr><tr><td>TriQuick Reaktif</td><td>Solarbio, Pekin, Çin</td><td>R1100</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Temiz Tezgah</td><td>Suzhou Arıtma Ekipmanı, Çin</td><td>SW-CJ-1F&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

jiawei shengjiang san'ın diyabetik nefropatinin sıçan modeli Üzerindeki antagonistik etkisi: egfr / mapk3 / 1 sinyal yolu ile İlgili

Antagonistic Effect of Jiawei Shengjiang San on a Rat Model of Diabetic Nephropathy: Related to EGFR/MAPK3/1 Signaling Pathway

Protokolün ardından, JWSJS'nin 90 aktif bileşeni, belirlenen OB ve DL standartlarına göre tarama ve tekilleştirmeden sonra analizden nihayet elde edildi. Bunlar arasında 20 çeşit Hedysarum Multijugum Maxim, 23 çeşit Epimrdii Herba, 15 çeşit Smilacis Glabrae Rhixoma, 16 çeşit Radix Rhei et Rhizome, dört çeşit Curcumaelongae Rhizoma, 15 çeşit Cicadae Periostracum ve altı çeşit Bombyx Batryticatus bileşeni vardı. JWSJS'de birçok aktif bileşen bulunduğundan, sadece 20 tanesi listelenmiştir (bakınız Tablo 1). Tekilleştirmeden sonra, JWSJS'nin aktif bileşenlerine karşılık gelen 396 hedef nihayet elde edildi.
Hastalıkla ilişkili genler araştırıldıktan sonra, birleştirme ve tekilleştirme işleminden sonra 3035 DN ile ilişkili hedef gen elde edildi. DN'nin karşılık gelen hedefleri, ilaçların aktif bileşenlerinin hedefleri ile karşılaştırıldı ve analiz edildi. Kesişim belirlendi ve bu da JWSJS ve DN'nin 227 kesişme hedefiyle sonuçlandı. Daha sonra bir Wayne diyagramı çizildi (bkz. Şekil 1A). "İlaç-içerik-hedef" ağ diyagramı Cytoscape 3.8.0 yazılımı kullanılarak oluşturuldu (bkz. Şekil 1B) ve topolojik analiz yapıldı. Her düğüm, derece değerine göre yüksekten düşüğe doğru sıralandı. İlk beş ilaç bileşeni kuersetin, palmitoleik asit, luteolin, kaempferol ve naringenin idi ve ilk beş hedef PTGS2, PTGS1, NCoA2, AR ve ESR1 idi.
Daha sonra, JWSJS ve DN kesişme hedefleri için bir PPI ağı geliştirildi (ortalama derece değeri 17.4 olan 196 düğüm ve 1714 kenar). Ayrıca, DN tedavisi için JWSJS'nin anahtar hedefleri olabilecek yedi anahtar hedef, üç taramadan sonra elde edildi: MAPK14, TP53, MAPK3, MYC, HIF1A, ESR1 ve MAPK1 (bkz. Şekil 1C).
Daha sonra, DN tedavisinde JWSJS hedefinin biyolojik özellikleri hakkında spekülasyon yapmak için GO zenginleştirme analizi yapıldı. BP, CC ve MF arasında, ilk on zenginleştirilmiş giriş Şekil 1D'de çizilmiştir. Sonuçlar, JWSJS'nin membran sallarında ve membran mikro alanlarında transkripsiyon faktörleri ve protein kinazlarla bağlanarak hücre proliferasyonunu, farklılaşmasını ve apoptozu düzenleyebileceğini ve böylece DN üzerinde terapötik bir etki yaratabileceğini göstermektedir. DN'deki JWSJS'nin potansiyel etki yollarını keşfetmek için katılımcı hedefler üzerinde KEGG yolu zenginleştirme analizi yapıldı. En üstteki otuz zenginleştirilmiş yol Şekil 1E'de çizilmiştir. Sonuçlar, DN'nin JWSJS tedavisinin, esas olarak lipid ve ateroskleroz, PI3K-Akt sinyal yolu, kimyasal karsinogenez, hepatit, prostat kanseri, apoptoz, HIF-1 sinyal yolu ve TNF sinyal yolunu içeren 181 sinyal yolu üzerinde etkili olabileceğini göstermektedir.
KEGG ile zenginleştirilmiş ilk 30 yolun hedeflerini daha fazla araştırmak için, JWSJS ile tedavi edilen DN için bir KEGG sinyal yolu ilişki ağı haritası oluşturmak için Cytoscape 3.8.0 yazılımını kullandık. MAPK1, MAPK3, EGFR ve AKT1'in birlikte hareket eden çoklu yolların hedefleri olduğu bulundu (bkz. Şekil 1F), bu proteinlerin JWSJS'nin DN üzerindeki etkilerine aracılık etmede merkezi bir rol oynayabileceğini düşündürmektedir.
DN'yi tedavi etmede JWSJS'nin potansiyel hedeflerini daha da doğrulamak için, daha sonra PPI ağında ve KEGG sinyal yolu ağında yüksek dereceli değerlere sahip MAPK1, MAPK3 ve EGFR olmak üzere üç temel hedefi taradık. Bunlar, DN tedavisi için JWSJS'nin ilk üç çekirdeğinin bileşenleri olan quercetin, palmitoleik asit ve luteolin ile moleküler olarak kenetlendi. PDB kimliğinin taranması için koşullar aşağıdaki gibidir: (1) İnsanlardan türetilmiş olmak; (2) Konformasyonel çözünürlük ≤ 2.5Å, yani mümkün olduğunca küçük; (3) Konformasyonel dizinin mümkün olduğu kadar eksiksiz olması, yani yapısal kompleksin küçük molekül ligand bilgisine sahip olması gerekir; ve (4) Kristal pH değeri, insan vücudunun normal fizyolojik aralığına mümkün olduğunca yakın olmalıdır35. Son olarak, MAPK1, MAPK3 ve EGFR'nin PDB kimlikleri 4QTA, 4QTB ve 7JXQ idi.
Bu çalışmada36 AutoDock yazılımının yerleştirme sistemine güvenilirliğini doğrulamak için, önce MAPK1, Mapk3 ve EGFR'nin üç proteinini yeniden yerleştirdik. Üç hedef proteinin orijinal kristal yapısındaki ligand konformasyonu, kenetlenmeden sonra ligandlarla üst üste bindirildi (Şekil 2A). Kenetlenme sonrası ligand konformasyonu ile orijinal kristal yapı arasındaki kök-ortalama-kare sapması (RMSD) değerleri daha sonra hesaplandı. RMSD değerleri sırasıyla 1.129, 1.201 ve 1.877 şidi ve tümü 2ş≤. Bu, yerleştirme yönteminin güvenilir olduğunu ve bir sonraki moleküler yerleştirme doğrulaması için kullanılabileceğini gösterdi. Çekirdek bileşenlerin inhibitör potansiyelini karşılaştırmak ve beyan etmek için, MAPK1, MAPK3 ve EGFR'nin orijinal ligandları daha sonra kontrol olarak kullanıldı. Kenetlenme analizi, luteolin, palmitoleik asit ve quercetin ile üç çekirdek hedef arasındaki bağlanma enerjisini başarılı bir şekilde tahmin etti. Bunların hepsi negatifti ve -637'den azdı; Tablo 2'ye bakınız. Dikkat çekici bir şekilde, luteolin ve MAPK1 arasındaki moleküler kenetlenme, en yüksek boşluk boyutuna ve en düşük bağlanma enerjisine sahiptir. Genel olarak, moleküler yerleştirme sonuçları, luteolin, palmitoleik asit ve kuersetinin üç temel hedefle iyi bağlanma aktivitesine sahip olduğunu gösterdi (Şekil 2B, C).
RMSD, bir referans çerçevesine göre seçilen bir atom grubunun ortalama yer değiştirme değişikliklerini ölçmek için kullanılır. Bu arada, RMSF, protein zinciri boyunca lokalize değişiklikleri etkili bir şekilde karakterize eder. RMSD grafiği (Şekil 2D), luteolin-MAPK1 kompleksi ve quercetin-MAPK3 kompleksi bileşiğinin RMSD değerlerinin 5 ns içinde stabilize olduğunu göstermektedir. Luteolin-EGFR kompleksi, 0-35 ns arasında değişen dalgalı bir RMSD gösterdi; bu değer, 100 ns MD simülasyonunun sonuna kadar 35 ns'de stabilize edildi. Tüm kompleksler, 100 ns MD simülasyonunun sonunda kararlı bir şekilde etkileşime girdi. RMSF değeri, MD simülasyon yörüngesinden değerlendirildi: Aktif bölgedeki atomlar ve minimum düzeyde dalgalanan ana zincir, minimal bir konformasyonel değişiklik anlamına geliyordu, bu da bahsedilen kurşun bileşiğinin, hedef proteinin bağlanma cebinin boşluğu içinde güvenli bir şekilde sabitlendiğini düşündürüyor. RMSF sonuçları, karmaşık yapılarda sınırlı dalgalanmalar olduğunu gösterdi.
Son olarak, yukarıdaki sonuçları in vivo olarak doğruluyoruz. İlk olarak model grubundaki sıçanların ağırlığının anlamlı olarak azaldığını ve GSP, LDL-C, UTP ve FBG'nin anlamlı olarak arttığını gözlemledik (P &lt; 0.05). Sıçanların vücut ağırlığı, irbesartan grubunda ve her JWSJS grubunda model grubuna göre önemli ölçüde artmıştır. GSP, LDL-C, UTP ve FBG farklı derecelerde azalmıştır (P &lt; 0.05; bakınız Tablo 3).
Daha sonra, HE boyaması normal gruptaki glomerüllerin normal bir boyuta sahip olduğunu gösterdi. Düzenli ve berrak bir yapıya sahiplerdi ve pürüzsüz bir bazal zara, düzgün bir şekilde düzenlenmiş böbrek tübüllerine sahiptiler ve enflamatuar hücre infiltrasyonu yoktu. Model grubunda glomerüller hipertrofik, bazal membran kalınlaşmış ve mezanjiyal matriks artmıştır. İnterstisyum inflamatuar hücrelerle infiltre edildi. Her uygulama grubunun patolojik belirtileri, model grubuna kıyasla farklı derecelerde hafifletilmiştir (bkz. Şekil 3A).
PAS boyama, model grubunun normal gruba göre artmış glomerüler hacimlere, kalınlaşmış bazal membrana ve artmış mezanjiyal matrikse sahip olduğunu gösterdi. Bu patolojik belirtiler her bir uygulama grubu tarafından önemli ölçüde hafifletilmiştir (bkz. Şekil 3B). Transmisyon elektron mikroskobu kullanarak, model grubundaki glomerüler bazal membranın normal gruba göre kalınlaştığını bulduk. Mezanjiyal matris büyüdü ve podosit ayak süreçleri yoğun bir şekilde kaynaştı. Her bir uygulama grubundaki sıçanların mikroskobik belirtileri, model grubuna göre değişen derecelerde rahatladı (bkz. Şekil 3C).
Son olarak, JWSJS ile tedavi edilen DN sıçanlarında değişip değişmediklerini görmek için toplam EGFR, p-EGFR, MAPK3 / 1 ve p-MAPK3 / 1 ekspresyonları tespit edildi. Model gruplarında toplam EGFR ve MAPK3/1 ekspresyonunda normal gruba göre anlamlı bir değişiklik yoktu. p-EGFR, p-MAPK3/1 ve BAX ekspresyonu anlamlı olarak arttı ve BCL-2 ekspresyonu önemli ölçüde azaldı. Model grubuna kıyasla, p-EGFR, p-MAPK3 / 1 ve BAX ekspresyonu önemli ölçüde azaldı ve BCL-2 ekspresyonu, her doz grubundaki sıçan böbrek dokularında değişen derecelerde önemli ölçüde arttı (Şekil 3D, E). Bu sonuç immünohistokimya ile doğrulandı (Şekil 3F,G). Bu çalışma, JWSJS'nin p-EGFR, p-MAPK3 / 1, BAX ve BCL-2 proteinlerinin ekspresyonunu düzenleyerek ve hücre apoptozunu azaltarak DN sıçanlarında böbrekleri koruyabileceğini gösterdi. Ek olarak, çeşitli gruplarda MAPK3, MAPK1 ve EGFR mRNA'nın ekspresyon seviyelerini değerlendirmek için qPCR kullanıldı. Sonuçlar, DN grubundaki nispi ekspresyonun kontrol grubunun yanı sıra Irbesartan, JWSJS-L, JWSJS-M ve JWSJS-H gruplarına kıyasla anlamlı derecede yüksek olduğunu ortaya koydu. Bu bulgu, ilk sonuçları daha da doğrulamaktadır (Şekil 3H).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66179/66179fig01.jpg"> Şekil 1: Ağ Farmakolojisi, diyabetik nefropatide JWSJS potansiyel hedeflerini ve sinyal yolaklarını açıklığa kavuşturdu. (A) JWSJS ve diyabetik nefropatinin kesişen hedeflerinin Venn diyagramı. Yeşil, JWSJS bileşenlerinin terapötik hedeflerinin sayısını temsil eder ve mor, DN'nin ilgili hedeflerinin sayısını temsil eder. Kesişen kısım, kesişen hedeflerin sayısını temsil eder (yani, DN için JWSJS'nin hedef sayısı). (B) DN tedavisinde JWSJS'nin "ilaç-bileşen-hedef" ağ diyagramı. Açık mavi, DN tedavisi için JWSJS'nin ilgili hedeflerini temsil eder. Fuşya, Bombyx Batryticatus'un aktif bileşenini temsil eder. Yeşil, Hedysarum Multijugum Maxim'in aktif bileşenlerini temsil eder. Koyu mavi, Radix Rhei et Rhizome'un aktif bileşenlerini temsil eder. Kırmızı, Cicadae Periostracum'un aktif bileşenlerini temsil eder. Mor, Epimrdii Herba'nın aktif bileşenlerini temsil eder. Sarı, Smilacis Glabrae Rhixoma'nın aktif bileşenlerini temsil eder. Gök mavisi, Curcumaelongae Rhizoma'nın aktif bileşenlerini temsil eder. (C) JWSJS ve DN kesişme hedeflerinin PPI ağı. (D) DN'nin JWSJS tedavisinde yer alan tedavi hedef genlerinin ontolojik analizi yoluyla tanımlanan en önemli 10 gen. (E) DN'nin JWSJS tedavisinde yer alan tedavi hedef genlerinin yol analizi yoluyla tanımlanan en önemli 30 gen. (F) JWSJS tarafından DN tedavisinde KEGG sinyal yolunun ilişki ağı. Sarı simgeler sinyal yollarını temsil eder. Mavi simgeler eylem hedeflerini temsil eder. Daha büyük bir grafik, ona daha fazla yolun bağlı olduğunu ima eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66179/66179fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66179/66179fig02.jpg"> Şekil 2: Diyabetik nefropati tedavisinde JWSJS'nin moleküler yerleştirme ve moleküler dinamik yörüngelerinin görselleştirilmesi. (A) Üç hedef protein kompleksi 7JXQ (a), 4QTA (b) ve 4QTB (c)'nin orijinal kristal yapısındaki ligandın konformasyonları, kenetlenmeden sonra ligandın konformasyonları ile karşılaştırılır. Yeşil, turuncu ve pembe sırasıyla EGFR, MAPK1 ve MAPK3 hedef proteinleridir. Altın, orijinal ligand molekülüdür ve mavi, kenetlenmeden sonraki ligand molekülüdür. (B) Diyabetik nefropati tedavisinde JWSJS'nin 3D moleküler yerleştirme görselleştirmesi. Yeşil, turuncu ve pembe, sırasıyla 7JXQ, 4QTA ve 4QTB hedef proteinleridir. 1a-3a, 7JXQ, 4QTA ve 4QTB'nin orijinal inhibitör (mavi) ile etkileşim diyagramını temsil eder. 1b-3b, 7JXQ, 4QTA, 4QTB ve luteolinin (sarı) etkileşim diyagramını temsil eder. 1c-3c, 7JXQ, 4QTA, 4QTB ve palmitoleik asidin (fuşya) etkileşim diyagramını temsil eder. 1D-3D, 7JXQ, 4QTA, 4QTB ve quercetin (mor) etkileşim diyagramını temsil eder. (C) Diyabetik nefropati tedavisinde JWSJS'nin 2D moleküler yerleştirme görselleştirmesi. 1a-3a, 7JXQ, 4QTA ve 4QTB'nin orijinal inhibitör ile etkileşim diyagramını temsil eder. 1b-3b, 7JXQ, 4QTA, 4QTB ve luteolinin etkileşim diyagramını temsil eder. 1c-3c, 7JXQ, 4QTA, 4QTB ve palmitoleik asidin etkileşim diyagramını temsil eder. 1D-3D, 7JXQ, 4QTA, 4QTB ve quercetin'in etkileşim diyagramını temsil eder. (D) (a) luteolin ve hedef protein 7JXQ, (b) luteolin ve hedef protein 4QTA ve (c) kuersetin ve hedef protein 4QTB komplekslerinin moleküler dinamik yörüngelerinin RMSD ve RMSF analizi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66179/66179fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66179/66179fig03.jpg"> Şekil 3: JWSJS, böbrek hasarını hafifletir ve in vivo deneylerde EGFR/MAPK3/1 sinyal yolu aktivasyonunu baskılar. (A) HE boyaması ve (B) farklı gruplardaki sıçan böbrek dokularının periyodik asit-Schiff (PAS) boyaması (Büyütme, 200x; n = 10). (C) Farklı sıçan gruplarında böbrek dokusunun transmisyon elektron mikroskobu (Büyütme, 5000x; n = 3). (D) EGFR, p-EGFR, MAPK3 / 1, p-MAPK3 / 1, BAX ve BCL-2, diyabetik sıçan böbrek dokusunda western blotting yoluyla (n = 3). (E) p-EGFR, p-MAPK3/1, BAX ve BCL-2 ekspresyonunun istatistiksel analizi. (F) Altı grupta p-EGFR VE p-MAPK3/1 ekspresyonunun immünohistokimyasal analizi (n = 6). (G) p-EGFR VE p-MAPK3/1 ifadesinin istatistiksel analizi. (H) Altı grupta MAPK3, MAPK1 ve EGFR mRNA ekspresyonunun qPCR analizi. *P &lt; 0.05'e karşı kontrol. **P &lt; 0,01'e karşı kontrol. ▲P &lt; 0,05'e karşı DN. ▲▲P &lt; 0,01'e karşı DN. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66179/66179fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Tablo 1: JWSJS'nin bazı aktif bileşenlerinin bilgileri. Her bir bileşen ve bunların özellikleri veya özellikleri hakkında ayrıntılar verir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66179/Table%201.zip" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Tablo 2: JWSJS'nin temel hedeflerinin ve ana aktif bileşenlerinin yerleştirme sonuçları tablosu. Tablo, JWSJS'nin temel hedeflerinin ve ana aktif bileşenlerinin yerleştirme çalışmalarından elde edilen sonuçları sunmaktadır. Bu tablo, bu bileşenlerin kendi hedefleriyle nasıl etkileşime girdiğini gösterir ve bu da JWSJS'nin etki mekanizması hakkında fikir verebilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66179/Table%202.zip" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Tablo 3: Diyabetik nefropatili sıçanlarda JWSJS'nin vücut ağırlığı ve biyokimyasal indeksler üzerindeki etkisi (ortalama ± standart sapma olarak ifade edilir, n = 10). Normal grupla karşılaştırıldığında: * P &lt; 0.05. Model grubuyla karşılaştırıldığında: # P &lt; 0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66179/Table%203.zip" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Jiawei Shengjiang San'ın Diyabetik Nefropatinin Sıçan Modeli Üzerindeki Antagonistik Etkisi: EGFR / MAPK3 / 1 Sinyal Yolu ile İlgili

We aimed to delve into the mechanisms underpinning Jiawei Shengjiang San's (JWSJS) action in treating diabetic nephropathy and deploying network ...

antagonistic-effect-jiawei-shengjiang-san-on-rat-model-diabetic

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Mevcut protokol, bir membranöz nefropati (MN) hayvan modelinin kurulmasını ve Kemeng Fang'ın inhibisyonunun PI3K / AKT sinyal yolunu aktive ederek MN sıçan podosit apoptozunu nasıl azalttığını açıklamaktadır.

Kemeng Fang'ın PI3K / AKT Sinyal Yolu ile Membranöz Nefropatili Sıçanlarda Podosit Apoptozunu İnhibisyon Mekanizması

Kan-beyin bariyeri bozulması, beyin bazı ilaçların ulaştırılması, yardımcı olur. Mannitol fiziksel bariyer düzenini bozacak içi arterially kan damarları çevreleyen daralır hücreleri teslim.

Kan-beyin bariyer bozulması arasında Rat Modeli Nörovasküler Therapeutics Hedefli izin ver için

Osteoartrit (OA), ya da dejeneratif eklem hastalığı, yalnızca kısmen kullanılabilir analjezik tarafından kontrol kalır ağrı ile ilişkili bir zayıflatıcı bir durumdur. Hayvan modelleri OA ile ilgili ağrı mekanizmalarının anlayışımızı geliştirmek için geliştirilmektedir. Burada fare OA ağrısının monoiodoacetate modeli için bir yöntem tarif eder.

Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

Aşağıda açıklanan sıçan karotis balon yaralanması modeli, araştırmacıların yaralanmaya bağlı arteriyel hiperplaziyi ortadan kaldıran ilaçları veya terapötikleri değerlendirmesine olanak tanır. Hayvanın ameliyat öncesi detaylı hazırlığı, cerrahi prosedürü ve ameliyat sonrası bakımları anlatılır.

Rat Karotis Balon Yaralanma Modeli Anti-vasküler Tadilat Therapeutics Test

Yağ kaynaklı kök hücreler (ASCs) kolayca izole ve normal sıçanlar FAT'tan hasat. ASC yaprak hücre sayfalık mühendislik kullanılarak oluşturulabilir ve tam-kalınlık sergilenmesi diyabetik yağlı sıçanlar kusurları maruz kemik ile deri ve suni deri bilayer ile kaplı Zucker içine nakledilmektedir.

Oluşturma ve diyabetik yara iyileşmesi manken bir yağ elde edilen kök hücre (ASC) Sheet nakli

Burada, biz bir en iyi duruma getirilmiş, Langendorff tabanlı bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu tek hücreli atriyal cardiomyocytes yalıtım için açıklayınız. El ile düzenleme intraluminal basınç kalp boşlukları, işlevsel olarak sağlam miyositler uyarma-kasılma-kaplin çalışmaları için uygun verim için uygulanır.

Bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu atriyal Cardiomyocytes izolasyonu

Telli myograph teknik vasküler düz kas fonksiyonları ve ekran yeni ilaçlar araştırmak için kullanılır. Biz fare mezenterik arter izometrik contractility ölçme ve vasküler düz kas yeni gevşetici süzmek için detaylı bir protokol raporu.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

Biz hiperlipidemi ve diyabet ile tavşanlar periferik iskemi ikna etmek için kullanılan bir cerrahi prosedür açıklanmaktadır. Bu cerrahi hastalarda periferik arter hastalığında deneyimli koşullar için preklinik bir model olarak davranır. Anjiyografi, tanıtılan iskemi ve perfüzyon iyileşmesi kapsamını ölçmek için bir araç olarak da tanımlanır.

Diyabetik tavşanların arka ekstremite Iskemi preklinik modeli

Bu protokolün amacı, farklı yapay gözyaşı formülasyonlarının bir in vitro model kullanarak insan kornea epitel hücrelerinin desiccation'dan korunup korunamayacağı değerlendirmedir. Yapay gözyaşı formülasyonlarına ve desiccation maruz kaldıktan sonra, insan kornea epitel hücreleri metabolik aktivite için değerlendirilir.

Yapay Gözyaşı Formülasyonlarının Desiccation'a Maruz Kalma sonrası İnsan Kornea Epitel Hücrelerinin Metabolik Aktivitesi Üzerine Etkisi

Bu protokolün amacı hiperoksinin kistik fibrozis hava yolu mikrobiyal toplulukları üzerindeki etkisi için bir model sistemi geliştirmektir.  Yapay balgam ortamı balgam bileşimine öykünür ve hiperoksik kültür koşulları ek oksijenin akciğer mikrobiyal toplulukları üzerindeki etkilerini modeller.

Ek Oksijenin Kistik Fibrozis Hava Yolu Mikrobiyomu Üzerindeki Etkisini Incelemek için Bir Modelin Tasarımı ve Geliştirilmesi

Keşfedin ağ farmakolojisi ve moleküler docking teknikleriyle Jiawei Shengjiang San'ın diyabetik nefropati tedavisindeki etki mekanizmasını. Bu yöntem geleneksel bitkisel ilaçların aktif bileşenlerini sistematik olarak analiz eder.

Jiawei Shengjiang Sanın Diyabetik Nefropatinin Sıçan Modeli Üzerindeki Antagonistik Etkisi: EGFR / MAPK3 / 1 Sinyal Yolu ile İlgili (Video) | JoVE Journal

Jiawei Shengjiang San'ın Diyabetik Nefropatinin Sıçan Modeli Üzerindeki Antagonistik Etkisi: EGFR / MAPK3 / 1 Sinyal Yolu ile İlgili

Daha fazla video keşfet