Name: Akciğer İskemisi Reperfüzyon Hasarının Murin Sol Pulmoner Hiler Klemp Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-12T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: Keşfedin akciğer iskemi-reperfüzyon hasarını fare modellerinde sol pulmoner hiler klemp yöntemiyle. Bu teknik nötrofil ve B hücrelerinin rolünü inceleyerek akciğer nakli sonuçlarını iyileştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, kamu, ticari veya kar amacı gütmeyen sektörlerdeki herhangi bir finansman kuruluşundan özel bir hibe almadı.

Akciğer İskemi-Reperfüzyon Hasarını İncelemek için Fare Modeli

<ol><li>Bharat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+link+between+primary+graft+dysfunction+and+chronic+lung+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Immunological link between primary graft dysfunction and chronic lung allograft rejection.</a> Ann Thorac Surg. 86 (1), 189-195 (2008).</li>
<li>Daud, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+immediate+primary+lung+allograft+dysfunction+on+bronchiolitis+obliterans+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of immediate primary lung allograft dysfunction on bronchiolitis obliterans syndrome.</a> Am J Respir Crit Care Med. 175 (5), 507-513 (2007).</li>
<li>Halazun, K. J., Al-Mukhtar, A., Aldouri, A., Willis, S., Ahmad, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warm+ischemia+in+transplantation%3A+search+for+a+consensus+definition%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Warm ischemia in transplantation: search for a consensus definition.</a> Transplant Proc. 39 (5), 1329-1331 (2007).</li>
<li>Warnecke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warm+or+cold+ischemia+in+animal+models+of+lung+ischemia-reperfusion+injury%3A+is+there+a+difference+%5BTitle%5D)+AND+%22Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Warm or cold ischemia in animal models of lung ischemia-reperfusion injury: is there a difference .</a> Thorac Cardiovasc Surg. 52 (3), 174-179 (2004).</li>
<li>Hasenauer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cold+or+warm+ischemia+and+ex-vivo+lung+perfusion+on+the+release+of+damage+associated+molecular+patterns+and+inflammatory+cytokines+in+experimental+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Effects of cold or warm ischemia and ex-vivo lung perfusion on the release of damage associated molecular patterns and inflammatory cytokines in experimental lung transplantation.</a> J Heart Lung Transplant. 40 (9), 905-916 (2021).</li>
<li>Iskender, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+warm+versus+cold+ischemic+donor+lung+preservation+on+the+underlying+mechanisms+of+injuries+during+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of warm versus cold ischemic donor lung preservation on the underlying mechanisms of injuries during ischemia and reperfusion.</a> Transplantation. 102 (5), 760-768 (2018).</li>
<li>Santos, P., Teixeira, P. J. Z., Moraes Neto, D. M., Cypel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donation+after+circulatory+death+and+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bras+Pneumol%22%5BJournal%5D)">Donation after circulatory death and lung transplantation.</a> J Bras Pneumol. 48 (2), e20210369(2022).</li>
<li>Moskowitzova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transplantation+enhances+murine+lung+viability+and+recovery+after+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transplantation enhances murine lung viability and recovery after ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 318 (1), L78-L88 (2020).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+blockage+of+S100A8%2FA9+ameliorates+ischemia-reperfusion+injury+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Functional blockage of S100A8/A9 ameliorates ischemia-reperfusion injury in the lung.</a> Bioengineering (Basel). 9 (11), 673(2022).</li>
<li>Nakata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+anti-HMGB1+monoclonal+antibody+on+lung+ischemia+reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Protective effects of anti-HMGB1 monoclonal antibody on lung ischemia reperfusion injury in mice.</a> Biochem Biophys Res Commun. 573, 164-170 (2021).</li>
<li>Wang, Q., Li, Y., Wu, C., Wang, T., Wu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-1+inhibition+exacerbates+ischemia-reperfusion-induced+lung+injury+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-1 inhibition exacerbates ischemia-reperfusion-induced lung injury in mouse.</a> Am J Med Sci. 365 (1), 84-92 (2023).</li>
<li>Gielis, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury%3A+tricks+of+the+trade%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> J Surg Res. 194 (2), 659-666 (2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitogen-activated+protein+kinases+regulate+HO-1+gene+transcription+after+ischemia-reperfusion+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mitogen-activated protein kinases regulate HO-1 gene transcription after ischemia-reperfusion lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 283 (4), L815-L829 (2002).</li>
<li>Sharma, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+A2A+receptor+activation+on+CD4%2B+T+lymphocytes+and+neutrophils+attenuates+lung+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Adenosine A2A receptor activation on CD4+ T lymphocytes and neutrophils attenuates lung ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 139 (2), 474-482 (2010).</li>
<li>Yang, Z., Sharma, A. K., Linden, J., Kron, I. L., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+lymphocytes+mediate+acute+pulmonary+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">CD4+ T lymphocytes mediate acute pulmonary ischemia-reperfusion injury.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 137 (3), discussion 702 695-702 (2009).</li>
<li>Sayah, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+are+pathogenic+in+primary+graft+dysfunction+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps are pathogenic in primary graft dysfunction after lung transplantation.</a> Am J Respir Crit Care Med. 191 (4), 455-463 (2015).</li>
<li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am J Transplant. 6 (7), 1672-1679 (2007).</li>
<li>Hsiao, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> J Clin Invest. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li>
<li>Sharma, A. K., Mulloy, D. P., Le, L. T., Laubach, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NADPH+oxidase+mediates+synergistic+effects+of+IL-17+and+TNF-alpha+on+CXCL1+expression+by+epithelial+cells+after+lung+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">NADPH oxidase mediates synergistic effects of IL-17 and TNF-alpha on CXCL1 expression by epithelial cells after lung ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306 (1), L69-L79 (2014).</li>
<li>Zanotti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+critical+role+of+Toll-like+receptor+4+in+lung+ischemia-reperfusion+injury+and+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Novel critical role of Toll-like receptor 4 in lung ischemia-reperfusion injury and edema.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297 (297), L52-L63 (2009).</li>
<li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals%22">Guide for the care and use of laboratory animals</a>. , The National Academies Press. Washington, DC. (2011).</li>
<li>Saito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pirfenidone+alleviates+lung+ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Pirfenidone alleviates lung ischemia-reperfusion injury in a rat model.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 158 (1), 289-296 (2019).</li>
<li>Tanaka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+Imatinib+on+ischemia%2Freperfusion+injury+in+rat+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Protective effects of Imatinib on ischemia/reperfusion injury in rat lung.</a> Ann Thorac Surg. 102 (5), 1717-1724 (2016).</li>
<li>Kreisel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+two-photon+imaging+reveals+monocyte-dependent+neutrophil+extravasation+during+pulmonary+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In vivo two-photon imaging reveals monocyte-dependent neutrophil extravasation during pulmonary inflammation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (42), 18073-18078 (2010).</li>
<li>Koletsis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+cooling+in+a+lung+hilar+clamping+model+of+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">In situ cooling in a lung hilar clamping model of ischemia-reperfusion injury.</a> Exp Biol Med (Maywood). 231 (8), 1410-1420 (2006).</li>
<li>Hermsen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+landscape+of+rat+strain+and+substrain+variation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Genomic landscape of rat strain and substrain variation.</a> BMC Genomics. 16 (1), 357(2015).</li>
<li>Beck, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genealogies+of+mouse+inbred+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Genealogies of mouse inbred strains.</a> Nat Genet. 24 (1), 23-25 (2000).</li>
<li>Liao, W. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orotracheal+intubation+and+ventilated+lung+ischemia+reperfusion+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orotracheal intubation and ventilated lung ischemia reperfusion surgery.</a> J Vis Exp. (187), 64383(2022).</li>
<li>Murata, T., Nakazawa, H., Mori, I., Ohta, Y., Yamabayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reperfusion+after+a+two-hour+period+of+pulmonary+artery+occlusion+causes+pulmonary+necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Reperfusion after a two-hour period of pulmonary artery occlusion causes pulmonary necrosis.</a> Am Rev Respir Dis. 146 (4), 1048-1053 (1992).</li>
<li>Ukita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large+animal+model+for+pulmonary+hypertension+and+right+ventricular+failure%3A+Left+pulmonary+artery+ligation+and+progressive+main+pulmonary+artery+banding+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A large animal model for pulmonary hypertension and right ventricular failure: Left pulmonary artery ligation and progressive main pulmonary artery banding in sheep.</a> J Vis Exp. (173), 62694(2021).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+right+ventricular+failure+by+pulmonary+artery+constriction+and+evaluation+of+right+ventricular+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of right ventricular failure by pulmonary artery constriction and evaluation of right ventricular function in mice.</a> J Vis Exp. (147), 59431(2019).</li>
<li>Welbourn, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+ischaemia+reperfusion+injury%3A+central+role+of+the+neutrophil%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of ischaemia reperfusion injury: central role of the neutrophil.</a> Br J Surg. 78 (6), 651-655 (1991).</li>
</ol>

Yazarlar konuyla ilgili herhangi bir açıklama bildirmemiştir.

Bu çalışmada, pulmoner arter ve venler ile bronşları tıkayan sol hilusa bir slipknot uygulanarak sıcak iskemi ve ardından reperfüzyon yapılan bir hiler klemp tekniği tarif edilmiştir. Hiler klemplemeden sonra, sol akciğer histoloji, akış sitometrisi, toplu veya tek hücre dizilimi ve kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu gibi çeşitli deneysel teknikler için hasat edilebilir. Ek olarak, kan ve dalak sistemik etkileri incelemek için kullanılabilirken, iskemik olmayan sağ akciğer iç kontrol görevi görebilir. Bu protokolde, ABG ölçümlerini elde etmek ve/veya hücre ekstravazasyonunu belirlemek için ayrıntılı yöntemler de açıklanmaktadır.
Murin hiler klempleme tekniği, akciğer IRI çalışması ve daha geniş akciğer nakli alanı için kritik öneme sahiptir. Örneğin, bu hiler klemp modelini kullanarak, grubumuz dalak kaynaklı CCR2 + klasik monositlerin IRI18'i takiben akciğere nötrofil ekstravazasyonuna aracılık ettiğini buldu. Başka bir grup, tip II alveolar epitel hücrelerinin, bir hiler kelepçe modeli19 kullanarak NADPH oksidaz-IL-17-TNFa'ya bağımlı bir şekilde CXCL1 (bir nötrofil kemoatraktan) ürettiğini gösterdi. TLR4'ün hiler klempleme20'nin murin modelinde ödem gelişiminde rol oynadığı bulunmuştur.
Ortotopik murin akciğer nakli klinik olarak daha uygulanabilir ve hem sıcak hem de soğuk iskemiyi simüle edebilirken, aynı zamanda vasküler ve bronşiyal anastomozlardan kaynaklanan cerrahi travmayı ve donör-alıcı uyumsuzluğundan kaynaklanan allojenik uyaranları da beraberinde getirir. Bu nedenle, hiler klemp tekniğinin ana avantajı, akciğer IRI'nin etkilerini bu diğer faktörlerden izole etme yeteneğidir. Ek olarak, deneyimsiz fare mikrocerrahı için, hiler klemp prosedürü teknik olarak daha az zahmetlidir ve akciğer nakline kıyasla daha hızlı bir şekilde ustalaşabilir. Hiler kelepçe modelinin bir sınırlaması, soğuk iskeminin elde edilmesinin zor olmasıdır. Sol pulmoner arter25 yoluyla antegrad flush perfüzyonu olan domuzlarda in situ soğuk iskemi gerçekleştirilmiştir, ancak bu, daha küçük boyutu ve ameliyat sırasında normotermiyi sürdürme ihtiyacı nedeniyle farede çok daha zordur. Bununla birlikte, izole sıcak iskeminin incelenmesi, organ fonksiyonu için genellikle soğuk iskemiden daha zararlı olduğu için önemlidir 4,5,6. Ayrıca, nakil merkezleri, geleneksel DBD akciğer nakillerinden çok daha uzun sıcak iskemik sürelerin eşlik ettiği DCD akciğer nakillerini giderek daha fazla benimsemektedir7. Bu nedenle, sıcak iskemi ve müteakip reperfüzyon periyodu sırasındaki olayların ayrıntılı çalışması kritiktir ve bu hiler klemp modeli ile gerçekleştirilebilir.
Son birkaç on yılda hiler kelepçe tekniğinin birçok varyasyonu yaratılmıştır. Bunlar arasında atravmatik mikrovasküler klemp 8,9,10,11,12,13, Rumel turnike14,15 ve hilum16 etrafında kaymalı bir bağ kullanımı yer alır. Farelerde slipknot tekniğinin uyarlamasını anlatıyoruz. Bu tekniğin diğer hiler klemp tekniklerine göre en büyük avantajı, iskemi döneminde göğsün kapanmasına izin vermesidir, bu da özellikle iskeminin daha uzun olduğu protokollerde hissedilmeyen sıvı kayıplarını en aza indirir. Bu, hilum üzerine bir kelepçe veya turnike yerleştirildiğinde gerçekleştirilemez.
Hayvan seçimi ile ilgili olarak, bu modeli sıçan veya domuz gibi büyük hayvan modellerinin aksine farede geliştirmeyi seçtik. Akıl yürütme iki yönlüdür - laboratuvarımız ortotopik fare akciğer nakli ile fare mikrocerrahisi konusunda geniş deneyime sahiptir17. İkinci olarak, fareler sıçanlardan daha küçük ve teknik olarak ameliyat edilmesi daha zor olsa da, şu anda sıçan suşlarından daha fazla ticari olarak temin edilebilen transgenik fare suşları vardır26,27. Fareler ayrıca daha hızlı ürerler, bu da yeni suşların daha hızlı gelişmesine izin verir, bu da IRI'nin bağışıklık mekanizmalarını araştırırken özellikle yararlıdır. Bu nedenlerden dolayı, farelerde bu tekniği geliştirmeyi seçtik.
Bildiğimiz kadarıyla, bu, farede kaymalı sol akciğer hiler klempi tekniğini kullanan ilk video tabanlı makaledir. Saito ve arkadaşları, bir mikrovasküler klemp22 kullanarak sıçanlarda hiler klempi gösteren video tabanlı bir makale yayınladılar. Farede, Liao ve arkadaşları pulmoner arter (PA) klemplemesi ile bir slipknot ile bir akciğer IRI modeli yayınladılar, ancak bu modelde bronş klempten çıkarıldığı için akciğer havalandırılmaya devam ediyor28. PA klempleme tekniği, pulmoner emboli29, pulmoner hipertansiyon ve/veya sağ ventrikül yetmezliğini(30,31) incelemek için bir model olarak kullanılmıştır. Transplantasyonda çalışma alanı akciğer IRI olduğundan, iskemik yaralanmanın yanı sıra barotravmayı en aza indirmek için bronş da dahil olmak üzere tüm hilusu klemplemeyi seçtik.
Dikkat çekici bir şekilde, 30 dakikalık sıcak iskemi ve ardından 1 saatlik reperfüzyon seçildi çünkü IRI sonrası çok erken dönemde akciğere sızan hücrelerin dinamikleri ile ilgileniyoruz. Örneğin, çalışmalar, sadece 30 dakikalık iskemi ve ardından 2 saatlik reperfüzyon13'ten sonra hem oksijenaz 1 gibi sitoprotektif genlerin yukarı regülasyonunu bildirmiştir. Nötrofillerin daha önce IRI32'den sonra akciğere sızan merkezi hücre tipi olduğu düşünülüyordu, ancak monositlerin akciğere gelişlerinde nötrofillerden önce geldiğini gösterdik 18,24. Daha yakın zamanlarda, B hücrelerinin monositlerden bile önce geldiğini ve reperfüzyondan 1 saat sonra akciğere girdiğini bulduk (yayınlanmamış veriler). Bu tekniği uyarlarken, sıcak iskemi ve reperfüzyon süreleri çalışma sorusuna ve hipoteze göre ayarlanabilir. Bu dönemde göğüs kapatılabildiğinden, aşırı sıvı ve ısı kaybı endişesi olmadan daha uzun sıcak iskemi dönemleri mümkündür.
Perioperatif olarak çeşitli komplikasyonlar ortaya çıkabilir ve nihai yaygın sonuç perioperatif ölümdür. Cerrahın tekniği tekrarlaması ile ameliyat sırasında hayvan ölümlerinin görülme sıklığının azaldığını gözlemledik. Cerrahların beceri açısından bir platoya ulaşmak için en az 2 aylık uygulama ve / veya en az 20 vaka gerektirdiğini tahmin ediyoruz. Bu noktada, intraoperatif mortalitenin yaklaşık 50 vakadan 1'inde meydana geldiğini tahmin ediyoruz. Anestezi uygulanmış farede ölüm genellikle diyafram ve göğüs duvarı kaslarının kuvvetli kasılmalarını içeren agonal nefeslerle müjdelenir. Bu agonal nefeslerin başlaması ile birlikte herhangi bir müdahale yapılmazsa 3-5 dakika içinde ölüm meydana gelecektir. İntraoperatif ölümü hızlandırabilecek birkaç neden vardır ve bunların çoğu tanınabilir ve önlenebilir. Başarılı bir sonuç elde etmek için bu ameliyatın kritik adımlarını ve sorun giderme tekniklerini aşağıda vurgulayacağız.
Entübasyon İlk kritik adım, yanlışlıkla ekstübasyonu önlemek için dikkatli entübasyon ve hava yolunun sabitlenmesidir. Bir hayatta kalma ameliyatında, fare ekstübasyondan sonra nefes alamayacağından, ilk entübasyon sırasında ses tellerinin hasar görmemesini sağlamak özellikle önemlidir. ETT'nin kordonları geçecek şekilde ilerlemesi, mikroskop aracılığıyla doğrudan görselleştirme altında yapılmalıdır. Entübasyon sırasında dirençle karşılaşılırsa, ETT körü körüne ilerletilmemelidir. Sivrisinek kıskacı ile orofarenksi açık tutarken, kan hava yolunun görüşünü engelleyeceği için ağız mukozasını delmemeye özen gösterilmelidir. Entübasyon girişimlerinin sayısı beşten az ile sınırlandırılmalıdır.
Kazara ekstübasyon İşlem sırasında herhangi bir noktada, akciğerler uygun şekilde şişiyor gibi görünmüyorsa, ETT'nin yerinden çıkmış olması mümkündür. Uzun süre fark edilmeyen kazara ekstübasyonun bir başka tezahürü, farenin aniden agonal solunum geliştirmesidir. İlk entübasyondan sonra, ETT'nin ipek bantla çevresel olarak buruna iyice sabitlenmesine özen gösterilmeli ve farenin boynu ve gövdesinin ayarlanması sınırlandırılmalıdır. Ne sol ne de sağ akciğer şişmiyorsa, ETT soluk borusundan çıkmış olabilir. ETT'yi geri itmek için girişimlerde bulunulabilir, ancak hayvanın erken ölümünü önlemek için farenin hızlı bir şekilde yeniden entübe edilmesi gerekebilir. Her ikisinin de beklendiği halde yalnızca bir akciğer şişiyorsa, ETT çok derin olabilir ve dikkatlice geri çekilmeli ve yeniden emniyete alınmalıdır.
Akciğer mobilizasyonu Kompresyon yaralanması alveollere zarar verebileceği ve akciğerin kompliyansını azaltabileceği için sol akciğer mobilizasyonu pamuk uçlu aplikatörler kullanılarak akciğer parankimine hafif baskı uygulayarak yapılmalıdır. Akciğer parankimine zarar vereceği için akciğerler forseps veya klemplerle kavranmamalıdır.
Hilar kelepçe uygulaması Sol hiler klemp, düğümü çok merkezi (sol atriyumu yakalayamayacak şekilde) veya çok periferik olarak (herhangi bir akciğer parankimini yakalayamayacak şekilde) yatırmamaya dikkat ederek doğrudan görüntüleme altına yerleştirilmelidir. Sol atriyumu hiler klemp ile yakalamak muhtemelen atriyal fibrilasyonu ve ardından ölümü hızlandıracaktır. Görüş alanını genişletmek için yeterli kaburga retraksiyonu sağlanarak hilumun görselleştirilmesi iyileştirilebilir. Slipknot'u bağladıktan sonra, bir işe alım manevrası yaparak kelepçenin tamamen tıkayıcı olduğundan emin olmak yararlıdır - ETT'yi ventilatöre bağlayan çıkış borusunu manuel olarak tıkayarak ve sol akciğerin pozitif basınçla genişlememesini sağlayarak. Pulmoner arter ve venlerin kıkırdaklı bronşlara kıyasla artmış katlanabilirliği göz önüne alındığında, bronşiyal oklüzyonun doğrulanması ile vasküler tıkanıklık varsayılır. Ek olarak, hiler klemp, sol ana gövde bronşunun kıkırdaklı kısımlarını ezeceği ve hiler klempin serbest bırakılmasını takiben sol akciğerin genişlemesini önleyeceği için aşırı kuvvetle bağlanmamalıdır. Hiler klemp serbest bırakıldıktan sonra, başka bir işe alım manevrası yaparak akciğerin hala havalandırılıp havalandırılamayacağını kontrol etmek önemlidir.
Göğüs kapatma Göğsü kapatırken, 4. ve 5. kaburgalar, akciğer maksimum son inspirasyonda olduğunda bir araya getirilmelidir. Bu, plevral boşlukta kalan hava miktarını en aza indirecek ve bu da kaburgalar kapandığında pnömotoraks ile sonuçlanacaktır. Gerilim pnömotoraksının gelişmesini önlemek için kas tabakaları ve cilt hava geçirmez bir şekilde kapatılmalıdır.
ABG'lerin Alınması Son olarak, ABG'leri elde ederken, ABG ölçümü sadece sol akciğer fonksiyonunu yansıtacakşekilde önce sağ hilumu klemplemek önemlidir 22,23. Sağ hiler klemp olmadan, normalde havalanan sağ akciğer, hasarlı iskemik sol akciğeri telafi etmekten daha fazlasını yapacak ve ABG ölçümleri normal görünecektir.
Özetle, yukarıda tarif ettiğimiz hiler klemp tekniği, akciğer nakli çalışması için değerli bir araçtır ve daha da önemlisi, allojenite, cerrahi anastomozla ilişkili travma veya soğuk iskemik depolama olmadan sıcak IRI çalışmasını izole edebilir. Özellikle, bu tarif edilen hiler klempleme tekniği kolayca öğretilir ve yaygın olarak benimsenebilir ve güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlara yol açabilir.

<a href="https://app.jove.com/t/6603">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/66232">10.3791/66232</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/66232">Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury</a>. The Protocol and Representative Results&#160;sections were&#160;updated.

Erratum: Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

Organ nakli sırasında IRI, primer greft disfonksiyonu ve daha sonraki greft reddi atakları için önemli bir risk faktörüdür 1,2. Transplantasyon sırasında sıcak iskemi süresi, donör aort kros klempinden soğuk perfüzyonun başlanmasına ve organın buzdan çıkarılmasından organ implantasyonuna kadar geçen süre olarak tanımlanır. Soğuk hava deposu süresi, soğuk perfüzyonun başlamasından organın buzdan çıkarılmasına kadar geçen süre olarak tanımlanır3. Sıcak iskemi, daha sonraki organ fonksiyonları için soğuk iskemi 4,5,6'dan daha zararlıdır ve altta yatan mekanizmaları, klinik öncesi modellerde daha fazla çalışmayı gerektirir. Ek olarak, kardiyak ölüm sonrası bağıştan (DCD) organ nakli, beyin ölümünden sonra geleneksel bağıştan (DBD) daha uzun sıcak iskemik sürelerle ilişkilidir7. DCD donörlerinin kullanımı donör havuzunu genişletebilir ve akciğer kullanımını artırabilirken, sıcak iskeminin nakil sonrası akciğer fonksiyonu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için daha fazla klinik öncesi çalışmaya ihtiyaç vardır. Aşağıda, farelerde sol pulmoner hiler klemp yoluyla bir sıcak IRI modelini açıklıyoruz.
Son birkaç yılda akciğer hiler klemplemesinin çeşitli hayvan modelleri geliştirilmiş ve uyarlanmıştır ve atravmatik mikrovasküler klemp 8,9,10,11,12,13, Rumel turnike14,15 veya sütür ligasyonu16 kullanımını içerebilir hilar kelepçe olarak. Hiler kelepçenin püf noktası, geri dönüşümlü olması ve reperfüzyonun elde edilebilmesi için hiler yapılarına minimum veya hiç zarar vermemesi gerektiğidir. Burada, farelerde sol pulmoner hilusun bir kayma düğümü ile geri dönüşümlü sütür ligasyonunu içeren hiler klemp tekniğimizi açıklıyoruz. Bu yöntem, pulmoner arteriyel girişi, venöz çıkışı ve ana gövde bronşunun içine ve dışına hava akışını tıkar. Vasküler bir klemp, klips veya turnike üzerindeki bir düğümün ana yararı, uzun süreli iskemi dönemlerinde göğsün kapatılabilmesi ve böylece farede duyarsız sıvı ve ısı kaybını en aza indirgemesidir. Güvenilir arteriyel kan gazı (ABG) ölçümleri elde etmek ve hiler klempleme sonrası hücre ekstravazasyonunu ölçmek için bir protokol sunuyoruz.
Bu hiler klemp tekniği, akciğer nakli ile ilgili daha geniş bir çalışmada önemli bir yer tutmaktadır. Ortotopik akciğer transplantasyonunun küçük hayvan modelleriyle karşılaştırıldığında, hiler klemp tekniği, cerrahi anastomoz travması veya allojenite eklenmeden IRI'nin etkilerini izole edebilir17. Ek olarak, hiler klemp tekniği, fare akciğer naklinden daha kolay ve hızlı bir şekilde ustalaşabilir. Aslında, hiler klemp teknikleri kullanılarak, son on yılda IRI patogenezinde TLR4, NADPH oksidaz ve adenozin A2A reseptörü 14,18,19,20 gibi birkaç önemli mekanizma tanımlanmıştır. Aşağıdaki protokolde, akciğer IRI'yi incelemek için bir araç olarak güvenilir, öğretilebilir ve tekrarlanabilir bir hiler klempleme yöntemi sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td><güçlü >İlaçlar< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>% 10 povidon-iyot çözeltisi</td> Dezenfektan <td>için</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td></tr><tr><td>Buprenorfin 1.3 mg / mL</td><td>Fidelis Hayvan Sağlığı</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>Ağrı</td></tr><tr><td>kontrolü için</td><td>Carprofen</td><td>Cronus Pharma</td><td>NDC 69043-027-18</td></tr><tr><td>Heparin 1000 birim / mL</td><td>Sagent</td><td>NDC 25021-404-01</td><td>Arteriyel kan elde etmek için</td></tr><tr><td>İzofluran %1-%1.5</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>26675-46-7</td><td>Anestezi için</td></tr><tr><td>Ketamin hidroklorür 100 mg/mL</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>Anestezi için</td></tr><tr><td>Puralube Vet göz merhemi</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>Göz bozulmasını önlemek için</td></tr><tr><td>Ksilazin 20 mg / mL</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>Ağrı kontrolü için</td></tr><tr><td><güçlü>Aletler ve Aletler< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Argent Yüksek Sıcaklık İnce Uçlu Kotery Kalem</td><td>McKesson</td><td>231</td><td>Kan damarlarını pıhtılaştırmak için</td></tr><tr><td>Kavisli sivrisinek kelepçesi</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>13009-12</td><td>Cerrahi prosedür için</td></tr><tr><td>İnce kavisli forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11274-20</td><td>Cerrahi için prosedür</td></tr><tr><td>İnce makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15040-11</td><td>Cerrahi prosedür için</td></tr><tr><td>Entübasyon kelepçesi kurulumu</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18374-44, 18144-30</td><td>Entübasyon sırasında fareyi dilinden dikey olarak tutmak için. Ek Şekil 1A'ya bakınız.</td></tr><tr><td>Manyetik kaburga ekartörleri</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18200-01, 18200-10</td><td>Torakotominin geri çekilmesi için. Manyetik fiksatör ve ekartör aşağıdaki mikro lateks boru ile bağlanmalıdır.</td></tr><tr><td>Optik Sınıf Plastik Fiber Optik Ceketsiz, 500 & mu; m</td><td>Edmund Optics</td><td>02-532</td><td>Endotrakeal tüp için introdüser yapmak için. Ek Şekil 1B'ye bakın. Bu optik fiberin 1,5 inç uzunluğunda, bir ucuna sabitlenmiş bir parça ipek bant bulunmalıdır. Daha sonra endotrakeal tüp için bir introdüser olarak kullanılabilir. Tanıtıcının ucu hafifçe eğri olmalıdır.</td></tr><tr><td>Power Pro Ultra kesme</td><td>makinesi Oster</td><td>078400-020-001</td><td>Saç kesmek için</td></tr><tr><td>Makas</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>14370-22</td><td>Cerrahi prosedür için</td></tr><tr><td>Küçük hayvan ısıtma yastığı</td><td>K & H Pet Ürünleri</td><td>Termo-Peep Isıtmalı Ped</td><td>Normotermiyi korumak için</td></tr><tr><td>Küçük hayvan ventilatörü</td><td>Harvard Aparatı</td><td>55-0000</td><td>Havalandırma için (TV 0.35 cc, PEEP 1 cm H2O, RR 100-105 / dak, FiO2 %100)</td></tr> <tr><td>Spearit Mikro Lateks Kauçuk Boru (1/8 dış çap, 1/16 iç çap)</td><td>Amazon.com</td><td>https://www.amazon.com/Rubber-Tubing-CONTINUOUS-Select-Length/dp/B00H4MT7V0?th=1</td><td>Geri çekilmesi için torakotomi</td></tr><tr><td>İstatistik Profili Prime Critical Care Kan Gazı Analizörü</td><td>Nova Biomedical</td><td>https://novabiomedical.com/prime-plus-critical-care-blood-gas-analyzer/index.php?gad=1&gclid=Cj0KCQjwmICoBhDx ARIsABXkXlInZX--R3ezBkc304nS_GVGI9Z2T3Esr33 2aM8WGPiUVhicPQZ Wj2AaAqhDEALw_wcB&nbsp; &nbsp;</td><td>Torakotominin retraksiyonu için</td></tr><tr><td>Düz kelepçe</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>13008-12</td><td>Cerrahi prosedür için</td></tr><tr><td>Düz forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>91113-10</td><td>Cerrahi prosedür için</td></tr><tr><td>Cerrahi mikroskop</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>artık üretilmiyor</td><td>Entübasyon ve cerrahi prosedür için; Leica cerrahi mikroskopları ile değiştirilmesini öneririz</td></tr><tr><td>Supplies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&frac12; &frac12 ile CC şırınga; inç 29G iğne</td><td>McKesson</td><td>942665</td><td>Ketamin / ksilazin intraperitoneal</td></tr> <tr><td>ve frac12 enjekte etmek için; 1 cc tüberkülin şırıngasında inç 31G iğne</td><td>McKesson</td><td>16-SNT1C2705</td><td>Sol ventrikülden arteriyel kan aspirasyonu için</td></tr><tr><td>1 inç 20G IV kateter</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>Endotrakeal tüp (ETT)</td></tr> <tr><td>için1 inç ipek bant</td><td>Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>ETT'yi buruna bantlamak ve uzuvları sabitlemek için</td></tr><tr><td>5/16 inç 31G iğneli 3/10 cc şırınga</td><td>McKesson</td><td>102-SN310C31516P</td><td>İnferior vena kavaya antikor enjeksiyonu için</td></tr><tr><td>P-10 iğnesi üzerinde 6-0 monofilament sütür</td><td>McKesson</td><td>S697GX</td><td>Torakotomi, kas tabakası ve cildin kapatılması için</td></tr><tr><td>6-0 ipek kravat</td><td>Cerrahi Uzmanlık Alanları Look</td><td>SP102</td><td>Hilar kelepçe için kayma yapmak için</td></tr><tr><td>Sivri uçlu pamuk uçlu aplikatörler</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>Akciğeri manipüle etmek ve künt diseksiyon için</td></tr></tbody></table>

akciğer İskemisi reperfüzyon hasarının murin sol pulmoner hiler klemp modeli

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

Akciğer nakli sırasında iskemi reperfüzyon hasarı (IRI), primer greft disfonksiyonu, akut ve kronik rejeksiyon ve mortalite dahil olmak üzere nakil sonrası komplikasyonlar için majör bir risk faktörüdür. IRI'nin temellerini inceleme çabaları, sol akciğer hiler klemplemesinin güvenilir ve tekrarlanabilir bir fare modelinin geliştirilmesine yol açmıştır. Bu model, anestezi uygulanmış ve entübe edilmiş bir farede gerçekleştirilen cerrahi bir prosedürü içerir. Sol torakotomi yapılır, ardından dikkatli akciğer mobilizasyonu ve sol pulmoner hilus diseksiyonu yapılır. Hiler klemp, sol ana gövde bronşundan arteriyel girişi, venöz çıkışı ve hava akışını durduran bir kayma ile pulmoner hilusun geri dönüşümlü sütür ligasyonunu içerir. Reperfüzyon, dikişin dikkatli bir şekilde çıkarılmasıyla başlatılır. Laboratuvarımız güncel incelemelerde deneysel model için 30 dk iskemi ve 1 saat reperfüzyon kullanmaktadır. Bununla birlikte, bu zaman dilimleri belirli deneysel soruya bağlı olarak değiştirilebilir. Kurban edilmeden hemen önce, elde edilen PaO2 değerlerinin sadece yaralı sol akciğere atfedildiğinden emin olmak için 4 dakikalık bir sağ hiler klempleme periyodundan sonra sol ventrikülden arteriyel kan gazı alınabilir. Ayrıca, kurban edilmeden önce incelenecek hücre(ler) için spesifik florokrom etiketli bir antikorun intravenöz enjeksiyonunu içeren akış sitometrisi ile hücre ekstravazasyonunu ölçmek için bir yöntem de tarif ediyoruz. Sol akciğer daha sonra akış sitometrisi, donmuş veya sabitlenmiş, parafine gömülü immünohistokimya ve kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu için hasat edilebilir. Bu hiler klemp tekniği, IRI'nin altında yatan hücresel ve moleküler mekanizmaların ayrıntılı olarak incelenmesine olanak tanır. Temsili sonuçlar, sol akciğer oksijenasyonunun azaldığını ve hiler klempleme sonrası akciğer hasarının histolojik kanıtlarını ortaya koymaktadır. Bu teknik, mikrocerrahi deneyimi olan ve olmayan personel tarafından kolayca öğrenilebilir ve çoğaltılabilir, bu da güvenilir ve tutarlı sonuçlara yol açar ve akciğer IRI'sini incelemek için yaygın olarak benimsenen bir model olarak hizmet eder.

Sol hiler klempleme sonrası, sol akciğere atfedilen arteriyel kandaki (PaO2) kısmi oksijenasyon basıncı ~100 mmHg olup, sahte torakotomi sonrası ~500 mmHg'ye kıyasla anlamlı derecede düşüktür (Şekil 7A, n=6-7). Dikkat çekici bir şekilde, sahte torakotomiler B6 farelerinde, yalnızca sol akciğere atfedilen değerleri temsil eden 4 dakikalık sağ hiler klemplemeden 4 dakika sonra ABG ölçümü ile gerçekleştirildi. Hiler klempli sol akciğerin H&amp;E boyalanması, hava yollarını dolduran inflamatuar hücrelerin infiltre olduğunu ve kan damarlarının eritrositlerle dolduğunu gösterirken, bu bulgular naif sol akciğerde yoktur (Şekil 7B, n=2). Bu sonuçlar, bir iskemi ve reperfüzyon periyodundan sonra ani doku hasarı ve hücre infiltrasyonunu göstermektedir.
Adım 6'da tartışıldığı gibi, intravasküler ve interstisyel nötrofiller, fedakârlıktan 5 dakika önce FITC etiketli anti-Ly6G antikorunun intravenöz enjeksiyonu ve ardından tüm nötrofillerin APC-Ly6G antikorları18,24 ile etiketlenmesiyle ayırt edilebilir. Temsili grafikler, nötrofillerin ~u'inin intravasküler (APC-Ly6G+) ve ~%'inin sol akciğerin hiler klemplenmesinden sonra interstisyel (APC-Ly6G+FITC-Ly6G-) olduğunu göstermektedir (Şekil 7C, n=4). Bu sonuçlar, nötrofil ekstravazasyonunu değerlendirmenin güvenilir bir yolunu göstermektedir ve kullanılan antikorlara bağlı olarak diğer hücre tiplerine uyarlanabilir (yani, monositler için anti-Ly6C, B hücreleri için anti-CD19). Bu teknik, IRI'yi takiben hücre dinamiğinin incelenmesi için kullanışlıdır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2.jpg"> Şekil 1: Fare entübasyonu. (A) Sol göğsü ve karnı traş edilmiş fare. (B) Ventilatör tüpüne bağlı endotrakeal tüp. (C) Entübasyon onaylandıktan sonra, tüpü farenin burnuna çevresel olarak bantlayın. (D) Küçük hayvan ventilatöründen ve ventilatörüne giriş ve çıkış boruları ile entübe fare. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig1v2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig02.jpg"> Şekil 2: Sol torakotomi. (A) 4. interkostal boşluk (ICS) üzerinde cilt kesisi. (B) Kas katmanları 4. interkostal boşluğa bölünmüştür. (C) 5. kaburganın hemen üzerinde küçük bir kesi yapılması. (D) 4. ICS'de insizyonun anterior ve posterior olarak uzatılması. (E) 4. ICS'de görüntülenen akciğer. (F-G) Kaburga ekartörleri yerleştirildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig03.jpg"> Şekil 3: Sol hiler klemp. (A) Sol akciğer, pamuklu çubuklarla mobilize edilmiştir. (B) İnferior pulmoner ligament (IPL) görselleştirildi. (C) Sol akciğer öne doğru çevrilmiş durumdayken, ipek kravat hilusun arkasına yerleştirilir. (D) İpek kravat üzerinde sola arkaya çevrilmiş durumdayken, ön hilum görüntülenir. (E) Sol hilum üzerinde kayma düğümü çalgı bağı. (F) Hilum üzerinde kayma düğümü. (G) Çıkışın manuel olarak tıkanması ile sol akciğer şişmez, bu da başarılı hiler klemp'i gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig04.jpg"> Şekil 4: Sol hiler klempin serbest bırakılması ve sol göğüs kapanması. (A) Kayma düğümü serbest bırakıldığında, sol akciğer yeniden şişirilir. (B) 4. kaburganın hemen üzerinde bir ısırık ve (C) 6. kaburganın hemen üzerinde bir ısırık ile kaburga kapanışı. (D-E) Göğüs kapatılır ve ilhamın sonunda bir dikiş bağlanır. (F) Kesintili dikişlerle cildin kapatılması (koşu dikişi ile kas tabakasının kapatılmasından sonra). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig05.jpg"> Şekil 5: Laparotomi, bilateral kapaklı torakotomi ve arteriyel kan alımı. (A) Fare sırtüstü pozisyona ayarlandı. (B) Orta hat karın üzerinden yapılan cilt kesisi. (C) Ksifoidden pubise kadar uzanan, en alt kaburga boyunca sola ve sağa uzanan laparotomi. (D-E) Göğüs boşluğuna girmek için diyaframın açılması, diyafram kesisinin en alt kaburga (noktalı çizgi) boyunca sola ve sağa uzatılması. (F) Göğüs apeksine doğru ön aksiller çizgilerde (noktalı çizgi) insizyonlarla birlikte bilateral kapaklı torakotomi. (G) Sağ akciğerin aksesuar lobu, inferior vena kavanın arkasında sol göğsün arkasına uzanır. (H) Aksesuar lob mobilize edildi ve sağ göğse geri döndü. (I) Sol ventrikülden arteriyel kan aspirasyonu (iç: sağ ve sol ventriküller arasındaki renk farkı). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig06.jpg"> Şekil 6: İnferior vena kavaya intravenöz enjeksiyon. (A) İnferior vena kava'yı (IVC) ortaya çıkarmak için sağ medial viseral rotasyon. (B) Çözeltinin IVC'ye enjeksiyonu. (C) Hemostaz elde etmek için IVC üzerine baskı uygulamak. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig06large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66232/66232fig07.jpg"> Şekil 7: Sol hiler klemp sonrası akciğer oksijenasyonu, histoloji ve nötrofil ekstravazasyonunun temsili sonuçları. (A) Sahte torakotomi ve hiler klemp uygulanan bir C57BL / 6 faresinin arteriyel kanındaki kısmi oksijen basıncı. Sonuçlar ortalama ± SEM, n=6-7 olarak sunulmuştur. p değerleri Mann-Whitney U testi ile hesaplanmıştır. **p &lt;0.01. (B) Sahte torakotomi ve hiler klemp uygulanan bir C57BL/6 faresinin formalinle sabitlenmiş, parafine gömülü akciğer bölümünün H&amp;E boyaması. Ölçek çubuğu 250 μm'yi temsil eder. (C) Hiler klempi takiben bir C57BL/6 farede intravasküler (APC-Ly6G+) ve ekstravasküler (APC-Ly6G+) Ly6G+ nötrofillerin dağılımının temsili rakamı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/66232fig07large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Şekil 1: Endotrakeal tüp için tanıtıcı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66232/Supplemental_Figure_1_updated.pdf" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Protokol, fare modellerinde akciğer iskemi-reperfüzyon hasarını incelemek için kullanılabilecek uygulanabilir, güvenilir ve tekrarlanabilir bir sol pulmoner hiler klempleme yöntemini özetlemektedir.

Akciğer İskemisi Reperfüzyon Hasarının Murin Sol Pulmoner Hiler Klemp Modeli

Ischemia reperfusion injury (IRI) during lung transplantation is a major risk factor for post-transplant complications, including primary graft ...

İskemi-reperfüzyon hasarının akciğer nakli sonrası sonuçlar üzerindeki etkilerini, altta yatan hücresel ve moleküler mekanizmaları anlamak amacıyla çalışmakla ilgileniyoruz. Akciğere giren nötrofiller iskemi-reperfüzyon hasarına veya IRI'ye katkıda bulunur. Son zamanlarda, B hücrelerinin akciğere girerken nötrofillere ilerlediğini ve IRI'yi takiben nötrofillerin toplanmasında rol oynadıklarını keşfettik.Farede sol akciğer nakli teknik olarak zordur ve tutarlı sonuçlar elde etmek için birkaç ay boyunca tam zamanlı, özel eğitim gerektirir. Ek olarak, alerjenite ve cerrahi anastomoz travmasını ortaya çıkarır. Bu nedenle, iskemi-reperfüzyon hasarı çalışmasını izole edebilecek daha erişilebilir bir tekniğe ihtiyacımız var.Hiler kelepçe modelimizi kullanarak, B hücrelerinin iskemi-reperfüzyon hasarından erken sonra akciğere girdiğini ve bir B hücresi reseptöründeki klasik monositleri TLR4'e bağımlı bir şekilde işe aldıklarını bulduk. Bu sonuçta akciğere nötrofil ekstravazasyonunun artmasına neden olur. Protokolümüz, sol pulmoner hilusun kayma düğümü ile geri dönüşümlü sütür ligasyonunu içerir.Sütürün esnek ve göze batmayan doğası, göğsün kapanmasına izin verir, bu da daha uzun süreli sıcak iskemiyi incelemek için yararlıdır, çünkü göğüs kapanması faredeki ısıyı ve duyarsız sıvı kayıplarını en aza indirir.

murine-left-pulmonary-hilar-clamp-model-lung-ischemia-reperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Cerrahi travma inflamatuvar yanıt indükler. Sitokinler ve endojen ligand iskemi ve reperfüzyon sonrası miyokard infarkt modüle bilinmektedir. Biz torakotomi etkilerini en aza indirmek için asılı ağırlıklar kullanılarak murin iskemi ve reperfüzyon değiştirilmiş bir kapalı göğüs modeli sunuyoruz.

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Benzersiz bir sıçan karaciğer hilar kelepçe modeli iskemi-reperfüzyon zedelenmesinin iyileşmesi farmakolojik moleküllerin etkisini incelemek için geliştirilmiştir. Bu model, doğrudan karaciğer taşınmasına izin veren, portal damar dalı ile iskemik karaciğer segment portal kaynağının doğrudan kanül içerir.

Bir Sıçan Karaciğer Hilar Kelepçe Modeli Kullanılarak Doğrudan Segmental İçi hepatik Dağıtım Yöntemi

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Klinik olarak ilgili kolorektal kanser karaciğer metastazları (CRLM) tümör modeli ve karaciğer iskemi reperfüzyonunun (I/R) tümör büyümesi ve metastazdaki etkisini ayrıntılı olarak açıklıyoruz. Bu model daha iyi karaciğer metastatik büyüme cerrahi kaynaklı promosyon altında yatan mekanizmaları anlamak için yardımcı olabilir.

İskemi Reperfüzyon Hasarı Ayarında Metastatik Karaciğer Tümörlerinin Murine Modeli

Sıçan kalbinin miyokard iskemi-reperfüzyon modeli, kendi kendine yapılan bir retraktör, polivinil klorür tüpü ve benzersiz bir düğümleme yöntemi kullanılarak geliştirilmiştir. Elektrokardiyogram, trifeniltetrazolyum klorür ve histolojik boyama ve yüzde sağkalım analizi sonuçları, geliştirilmiş model grubunun mevcut model grubundan daha yüksek başarı ve sağkalım oranlarına sahip olduğunu göstermiştir.

Miyokard İskemisi ve Reperfüzyon Hasarının Geliştirilmiş Kemirgen Modeli

Ventilasyonu korurken ve hipoksiden kaçınırken sol akciğer iskemisi reperfüzyonu (IR) hasarı oluşturmak için bir fare cerrahi modeli.

Orotrakeal Entübasyon ve Ventilasyonlu Akciğer İskemisi Reperfüzyon Cerrahisinin Bir Fare Modeli

Burada sunulan, farelerde sol koroner arterin kalıcı olarak bağlanması için cerrahi bir prosedürdür. Bu model, miyokard enfarktüsü sonrası patofizyolojiyi ve ilişkili inflamatuar yanıtı araştırmak için kullanılabilir.

Sol Koroner Arter Ligasyonu: Miyokard Enfarktüsünün Cerrahi Murin Modeli

Bu çalışmada, sıçanlarda laparotomi ile supra-çölyak aort çapraz klemplemesi sırasında viseral iskemi-reperfüzyonu takiben akut akciğer hasarı modeli anlatılmaktadır. Aort klemplemesinin hem klinik hem de biyolojik etkilerinin yanı sıra iskemi-reperfüzyonun altta yatan organlar ve uzak akciğer yaralanmaları üzerindeki etkisinin araştırılmasını sağlar.

Sıçanlarda Supra-Çölyak Aort Çapraz Klemplemesi ile Viseral İskemi-Reperfüzyonu Takiben Akut Akciğer Hasarı Modeli

Biz fareler tabi olan orta ve ağır iskemi-reperfüzyon bağlı böbrek hasarı modelleri tanımlamak tek taraflı renal pedikül sırasıyla, eş zamanlı veya gecikmeli taraf nefrektomi takip sıkma. Bu modeller sürekli böbrek fonksiyon bozukluğu ve post-yaralanma fibrozis yol, ancak yaralanma şiddeti ve yaşam fare arka plan, yaş ve cerrahi ekipman bağlıdır.

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Keşfedin akciğer iskemi-reperfüzyon hasarını fare modellerinde sol pulmoner hiler klemp yöntemiyle. Bu teknik nötrofil ve B hücrelerinin rolünü inceleyerek akciğer nakli sonuçlarını iyileştirmeye yardımcı olur.

Akciğer İskemisi Reperfüzyon Hasarının Murin Sol Pulmoner Hiler Klemp Modeli

Daha fazla video keşfet