Name: Biyobankacılık ve su ürünleri yetiştiriciliğini desteklemek için mercan spermlerinin dondurularak saklanması için yarı otomatik bir iş akışı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 25 s
Description: Öğrenin mercan spermlerinin yarı otomatik dondurularak saklanma yöntemini. Bu protokol, tehdit altındaki mercan türlerinin genetik çeşitliliğini korumak ve resif restorasyonunu desteklemek için ölçeklenebilir bir çözüm sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Tehdit Altındaki Mercan Türlerinden Mercan Sperminin Kriyoprezervasyonunun Optimize Edilmesi

<ol><li>Eakin, C. M., Sweatman, H. P. A., Brainard, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2014-2017+global-scale+coral+bleaching+event%3A+Insights+and+impacts%5BTitle%5D)+AND+%22Coral+Reefs%22%5BJournal%5D)">The 2014-2017 global-scale coral bleaching event: Insights and impacts.</a> Coral Reefs. 38 (4), 539-545 (2019).</li>
<li>Anthony, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+interventions+are+needed+to+save+coral+reefs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Ecology+%26+Evolution%22%5BJournal%5D)">New interventions are needed to save coral reefs.</a> Nature Ecology & Evolution. 1 (10), 1-3 (2017).</li>
<li>Wildt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+resource+banking+for+wildlife+research%2C+management%2C+and+conservation%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+journal+%2F+National+Research+Council%2C+Institute+of+Laboratory+Animal+Resources%22%5BJournal%5D)">Genome resource banking for wildlife research, management, and conservation.</a> ILAR journal / National Research Council, Institute of Laboratory Animal Resources. 41 (4), 228-234 (2000).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preserving+and+using+germplasm+and+dissociated+embryonic+cells+for+conserving+Caribbean+and+Pacific+coral%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Preserving and using germplasm and dissociated embryonic cells for conserving Caribbean and Pacific coral.</a> PLoS ONE. 7 (3), e33354(2012).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+frozen+repository+for+the+Great+Barrier+Reef+coral+created%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">First frozen repository for the Great Barrier Reef coral created.</a> Cryobiology. 65 (2), 157-158 (2012).</li>
<li>Zuchowicz, N., Daly, J., Lager, C., Williamson, O., Hagedorn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Freezing+on+the+beach%3A+A+robust+coral+sperm+cryopreservation+design%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Freezing on the beach: A robust coral sperm cryopreservation design.</a> Cryobiology. 101, 135-139 (2021).</li>
<li>Hobbs, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decade+of+coral+biobanking+science+in+Australia+-+transitioning+into+applied+reef+restoration%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Marine+Science%22%5BJournal%5D)">A decade of coral biobanking science in Australia - transitioning into applied reef restoration.</a> Frontiers in Marine Science. , 9(2022).</li>
<li>Daly, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+can+assist+gene+flow+on+the+Great+Barrier+Reef%5BTitle%5D)+AND+%22Coral+Reefs%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation can assist gene flow on the Great Barrier Reef.</a> Coral Reefs. 41, 455-462 (2022).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+gene+flow+using+cryopreserved+sperm+in+critically+endangered+coral%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Assisted gene flow using cryopreserved sperm in critically endangered coral.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (38), e2110559118(2021).</li>
<li>Daly, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+cryopreservation+of+coral+larvae+using+vitrification+and+laser+warming%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Successful cryopreservation of coral larvae using vitrification and laser warming.</a> Scientific Reports. 8, 1-10 (2018).</li>
<li>Daly, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+proof+of+concept+demonstration+of+nanowarming+in+coral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Sustainable+Systems%22%5BJournal%5D)">The first proof of concept demonstration of nanowarming in coral tissue.</a> Advanced Sustainable Systems. , (2023).</li>
<li>Powell-Palm, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+and+revival+of+Hawaiian+stony+corals+via+isochoric+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation and revival of Hawaiian stony corals via isochoric vitrification.</a> Nature Communications. 14, 4859(2023).</li>
<li>Reef Restoration and Adaptation Program. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://gbrrestoration.org">https://gbrrestoration.org</a> (2023).</li>
<li>Florida Coral Rescue. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://myfwc.com/research/habitat/coral/disease/rescue">https://myfwc.com/research/habitat/coral/disease/rescue</a> (2023).</li>
<li>Harrison, P. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarrison%2C+PL+%22Coral+reefs%3A+An+ecosystem+in+transition%22">Coral reefs: An ecosystem in transition</a>. , Chapter 6 59-85 (2011).</li>
<li>Hagedorn, M., Carter, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryobiology%3A+Principles%2C+species+conservation+and+benefits+for+coral+reefs%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%2C+Fertility+and+Development%22%5BJournal%5D)">Cryobiology: Principles, species conservation and benefits for coral reefs.</a> Reproduction, Fertility and Development. 28 (8), 1049(2016).</li>
<li>Zuchowicz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+coral+sperm+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Assessing coral sperm motility.</a> Scientific Reports. 11, 61(2021).</li>
<li>Thomas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+an+automated+cryovial+dispensing+system+for+cell+banking%5BTitle%5D)+AND+%22Genetic+Engineering+%26+Biotechnology+News%22%5BJournal%5D)">Evaluation of an automated cryovial dispensing system for cell banking.</a> Genetic Engineering & Biotechnology News. 37 (17), 22-23 (2017).</li>
<li>Coral cryopreservation training course. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://nationalzoo.si.edu/center-for-species-survival/coral-cryopreservation-training-course">https://nationalzoo.si.edu/center-for-species-survival/coral-cryopreservation-training-course</a> (2023).</li>
<li>Bailey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+sperm+counting+methods+using+limits+of+agreement%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Andrology%22%5BJournal%5D)">Validation of sperm counting methods using limits of agreement.</a> Journal of Andrology. 28 (3), 364-373 (2007).</li>
<li>Hu, E., Yang, H., Tiersch, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+cryopreservation+of+spermatozoa+of+blue+catfish+%28Ictalurus+furcatus%29%3A+Establishment+of+an+approach+for+commercial-scale+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">High-throughput cryopreservation of spermatozoa of blue catfish (Ictalurus furcatus): Establishment of an approach for commercial-scale processing.</a> Cryobiology. 62 (1), 74-82 (2011).</li>
<li>Pickett, B. W., Berndtson, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+bovine+spermatozoa+by+freezing+in+straws%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">Preservation of bovine spermatozoa by freezing in straws: A review.</a> Journal of Dairy Science. 57 (11), 1287-1308 (1974).</li>
<li>Westbrook, C. E., Daly, J., Bowen, B., Hagedorn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+the+collector+urchin+embryo%2C+Tripneustes+gratilla%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of the collector urchin embryo, Tripneustes gratilla.</a> Cryobiology. 15, 104865(2024).</li>
<li>Maria, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+cryotubes+for+the+cryopreservation+of+Tambaqui+fish+semen+%28Colossoma+macropomum%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Use of cryotubes for the cryopreservation of Tambaqui fish semen (Colossoma macropomum).</a> Cryobiology. 70 (2), 109-114 (2015).</li>
<li>Fuchs, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+biobanking%3A+Employing+a+robotic+system+for+automated+mononuclear+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Biopreservation+%26+Biobanking%22%5BJournal%5D)">Next-generation biobanking: Employing a robotic system for automated mononuclear cell isolation.</a> Biopreservation & Biobanking. 21 (1), 106-110 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ovation ALI-Q 2 VS Pipet Kontrol Cihazı - Aliquotting pipeti</td><td>Vistalab</td><td>2100-1005</td><td>Sıvı işleme &ndash; sperm hacminin ölçülmesi, kriyoprotektan solüsyonun eklenmesi, numunelerin kriyoviyallere</td></tr><tr><td>ayrılması 5 mL serolojik pipetler (toplu)</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>Nunc 170355</td><td>Sıvı işleme &ndash; sperm hacminin ölçülmesi, kriyoprotektan solüsyonun eklenmesi, numunelerin kriyoviyallere</td></tr><tr><td>ayrılması 10 mL serolojik pipetler (toplu)</td><td>Thermo Scientific</td><td>Nunc&nbsp; 170356</td><td>Sıvı işleme &ndash; sperm hacminin ölçülmesi, kriyoprotektan solüsyonun eklenmesi, numunelerin kriyoviyallere alikosyon</td></tr><tr><td>P2 0.2&ndash; 2 ve mikro; L pipetleyici</td><td>Gilson</td><td>F144054M</td><td>Sperm aktivasyon solüsyonlarının hazırlanması ve konsantrasyon ve motiliy değerlendirmesi için sperm numunesinin işlenmesi</td></tr><tr><td>P10 1&ndash; 10 ve mikro; L pipetleyici</td><td>Gilson</td><td>F144055M</td><td>Sperm aktivasyon solüsyonlarının hazırlanması ve konsantrasyon ve motiliy değerlendirmesi için sperm numunesinin işlenmesi</td></tr><tr><td>P20 2&ndash; 20 ve mikro; L pipetatör</td><td>Gilson</td><td>&nbsp; F144056M</td><td>Sperm aktivasyon solüsyonlarının hazırlanması ve konsantrasyon ve motiliy değerlendirmesi için sperm numunesi işleme</td></tr><tr><td>P200 20&ndash; 200 ve mikro; L pipetleyici</td><td>Gilson</td><td>F144058M</td><td>Sperm aktivasyon solüsyonlarının hazırlanması ve konsantrasyon ve motiliy değerlendirmesi için sperm numunesi işleme</td></tr><tr><td>P1000 100&ndash; 1000 ve mikro; L pipetleyici</td><td>Gilson</td><td>F144059M</td><td>Sperm aktivasyon solüsyonlarının hazırlanması ve konsantrasyon ve motiliy değerlendirmesi için sperm numunesi işleme</td></tr><tr><td>Vakum pompası</td><td>Kırlangıç</td><td>WP6122050</td><td>Çözelti hazırlama için filtrelenmiş deniz suyunun hazırlanması</td></tr><tr><td>Yeniden kullanılabilir şişe üstü filtrasyon sistemi</td><td>Thermo Scientific</td><td>DS0320-5045</td><td>Çözelti hazırlama</td></tr> <tr><td>için filtrelenmiş deniz suyunun hazırlanması0.22-&mikro; M Filtre Diskleri, Karışık Selüloz Esterleri&nbsp;</td><td>Merck Millipore</td><td>GSWP04700</td><td>Çözelti hazırlama için filtrelenmiş deniz suyunun hazırlanması</td></tr><tr><td>Filtrelenmiş deniz suyu</td><td>N/A</td><td>&ndash;</td><td>Sperm aktivasyonu ve kriyoprotektan solüsyonlar için temel ortam</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4540</td><td>Sperm kriyoprezervasyonu için filtrelenmiş deniz suyunda %10 v/v'lik nihai konsantrasyonda kullanılan kriyoprotektan kimyasal</td></tr><tr><td>Kafein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0750</td><td>Sperm hareketliliğini aktive etmek için kullanılır</td></tr><tr><td>BSA ısı şoku fraksiyonu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td>CASA kuyu kızaklarına sperm yapışmasını en aza indirmek için kullanılır</td></tr><tr><td>15 mL tüpler - raflı</td><td>Thermo Bilimsel</td><td>339651</td><td>Sperm aktivasyon solüsyonunun hazırlanması</td></tr><tr><td>50 mL tüpler raflı</td><td>Thermo Scientific</td><td>339653</td><td>Gamet demetlerinin ve filtrelenmiş sperm örneklerinin toplanması için</td></tr><tr><td>Transfer pipetleri</td><td>Thermo Scientific</td><td>Samco 202PK</td><td>Su yüzeyinden gamet demetlerinin toplanmasına yardımcı olmak için</td></tr><tr><td>100-&mikro; m filtre sepetleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363549</td><td>Sperm örneğinin ayrılması sırasında yumurtaları dışlamak için</td></tr><tr><td>Eppendorf rafları</td><td>Interpath</td><td>511029</td><td>Konsantrasyon ve motiliy değerlendirmesi için spermin seyreltilmesi ve aktivasyonu</td></tr><tr><td>Eppendorf 1.5 mL tüp</td><td>Eppendorf</td><td>30120086</td><td>Konsantrasyon ve motiliy değerlendirmesi için spermin seyreltilmesi ve aktivasyonu</td></tr><tr><td>Cam lameller 18x18 mm</td><td>Marka</td><td>4700 45</td><td>Faz mikroskobu kullanılarak sperm konsantrasyonu ve motilitesinin değerlendirilmesi</td></tr><tr><td>Düz cam slaytlar, önceden temizlenmiş, 75x25 mm</td><td>Corning</td><td>2947</td><td>Faz mikroskobu kullanılarak sperm konsantrasyonu ve motilitesinin değerlendirilmesi</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Hausser Scientific</td><td>1492</td><td>Faz mikroskobu kullanılarak sperm konsantrasyonu ve motilitesinin değerlendirilmesi</td></tr><tr><td>CASA slaytları (Leja 20-&mikro; m 4 odacık, SC-20-01-04-B)</td><td>IMV Technologies</td><td>025107</td><td>Bilgisayar Destekli Sperm Analizi (CASA) kullanılarak sperm konsantrasyonu ve hareketliliğinin değerlendirilmesiMakler</td></tr> <tr><td>sperm sayma odası (CASA)</td><td>IVFStore</td><td>SM-373</td><td>Bilgisayar Destekli Sperm Analizi (CASA) kullanılarak sperm konsantrasyonu ve hareketliliğinin değerlendirilmesi,</td></tr> <tr><td>accu-bead&reg; boncuk sayma</td><td>Hamilton-Thorne</td><td>710111</td><td>Bilgisayar Destekli Sperm Analizi (CASA) kullanılarak sperm konsantrasyonu ve hareketliliğinin değerlendirilmesiCASA</td></tr> <tr><td>sistemi + dizüstü bilgisayar</td><td>Hamilton Thorne</td><td>Ceros II</td><td>Bilgisayar Destekli Sperm Analizi (CASA) kullanılarak sperm konsantrasyonu ve hareketliliğinin değerlendirilmesiGüvenlik</td></tr> <tr><td>Gözlükleri</td><td>Jenerik</td><td>&ndash;</td><td>Kişisel koruyucu ekipman [DMSO ve sıvı nitrojen Laboratuar önlüğü ile çalışırken kullanım için Uzun</td></tr><tr><td></td><td>kollu, tam uzunlukta</td><td>&ndash;</td><td>Kişisel koruyucu ekipman [DMSO ve sıvı nitrojen ile çalışırken kullanım için</td></tr><tr><td>Kriyoeldiven (çift)</td> <td>Tempshield</td><td>Orta Kol</td><td>Kişisel koruyucu ekipman [DMSO ve sıvı nitrojen ile çalışırken kullanım için Orta</td></tr><tr><td>forseps</td><td>Jenerik</td><td>&ndash;</td><td>Dondurularak saklanmış numuneleri kriyo raflarından çıkarmak ve numuneleri sıvı nitrojen içinde manipüle etmek için</td></tr><tr><td>Barkod tarayıcı (2D uyumlu)</td><td>Zebra</td><td>DS2278</td><td>Numune yönetimi için kriyoviyallerdeki 1 ve 2 boyutlu barkodları okumak için</td></tr><tr><td>2,0 mL CryoStorage Şişesi, dış dişli, önceden kapaklı, 2D SafeCode (DataMatrix/ECC200), doğrusal ve insan tarafından okunabilir</td><td>Eppendorf</td><td>30079434</td><td>Sperm örneklerinin dondurularak saklanması için barkodlu kriyoviyaller</td></tr><tr><td>Kriyovial raf</td><td>Simport</td><td>T315</td><td>Kriyovialleri tutmak için raf, bir yandan kapağın açılmasına ve kapatılmasına izin vermek için kilitleme tabanı ile</td></tr><tr><td>Dondurma rafları</td><td>Özel</td><td>&ndash;</td><td>Mercan spermi için özel olarak tasarlanmış, 3D baskılı ve kolayca bulunabilen bileşenler kullanan kriyoprezervasyon sistemi. Parça listesi ve montaj talimatları Zuchwicz ve diğerleri, 2021'de mevcuttur (doi:10.1016/j.cryobiol.2021.04.005)</td></tr><tr><td>Dondurucu raf kapağı</td><td>Özel</td><td>&ndash;</td><td>Mercan spermi için özel olarak tasarlanmış, 3D baskılı ve kolayca bulunabilen bileşenler kullanan kriyoprezervasyon sistemi. Parça listesi ve montaj talimatları Zuchwicz ve diğerleri, 2021'de mevcuttur (doi:10.1016/j.cryobiol.2021.04.005)</td></tr><tr><td>Dondurucu Termos &ndash; 1.5 Litre 18/8 Paslanmaz Çelik Çift Cidarlı Vakumlu Yemek</td><td>Kabı Isosteel</td><td>&nbsp; VA-9683 ve nbsp;</td><td>Mercan spermi için özel olarak tasarlanmış, 3D baskılı ve kolayca bulunabilen bileşenler kullanan kriyoprezervasyon sistemi. Parça listesi ve montaj talimatları Zuchwicz ve diğerleri, 2021'de mevcuttur (doi:10.1016/j.cryobiol.2021.04.005)</td></tr><tr><td>Laboratuvar zamanlayıcıları</td><td>Genel</td><td>&ndash;</td><td>Kriyoprezervasyon öncesi kriyoprotektan dengesinin zamanlaması için</td></tr><tr><td>Azot banyosu 9L</td><td>BelArt</td><td>M16807-9104</td><td>Kriyopreservaton sırasında numunelerin söndürülmesi ve sıralama ve işleme sırasında numunelerin tutulması için</td></tr><tr><td>Termokupl veri kaydedici - çok kanallı</td><td>Omega</td><td>HH520</td><td>Donma hızını ve bitiş noktasını belirlemek için kriyoprezervasyon sırasında sıcaklık izleme</td></tr><tr><td>Termokupl probu > K Tipi</td><td>Omega</td><td>5SC-TT-K-30-36</td><td>Donma oranını ve bitiş noktasını belirlemek için kriyoprezervasyon sırasında sıcaklık izleme</td></tr><tr><td>Cryo kalemler/renkli kalıcı kalem</td><td>Staedtler Lumocolor</td><td>318</td><td>Numune yönetimine yardımcı olmak için kriyoviyal kapakları işaretlemek için isteğe bağlı</td></tr><tr><td>Kuru Gönderici - şarjlı</td><td>Taylor Wharton</td><td>CXR100 veya CX500</td><td>Dondurularak saklanmış numunelerin saha/toplama alanlarından biyolojik depoya aktarılması için depolama</td></tr></tbody></table>

biyobankacılık ve su ürünleri yetiştiriciliğini desteklemek için mercan spermlerinin dondurularak saklanması için yarı otomatik bir iş akışı

A Semi-Automated Workflow for the Cryopreservation of Coral Sperm to Support Biobanking and Aquaculture

Bu protokolde özetlenen adımlar, Hagedorn ve ark.4 tarafından tanımlanan mercan spermi kriyoprezervasyonu için orijinal yöntemlere ve ardından Zuchowicz ve ark.6 tarafından yapılan iyileştirmelere dayanmakta ve kriyoprezervasyon ve biyobankacılık için sperm işlemenin verimliliğini artırmak için önemli iyileştirmeler sağlamaktadır. Barkodlu kriyoviallerin ve alikotasyon yapan bir otomatik pipetleyicinin kullanılması, kriyoviyalleri yazdırma ve elle etiketleme ihtiyacını ortadan kaldırarak sperm paketleme prosedürünü basitleştirir ve çok sayıda numuneyi elle pipetleme zorluğunu azaltır. Daha da önemlisi, bu iyileştirmeler kriyoprezervasyon için numune hazırlama için gereken süreyi yaklaşık 8-10 dakikadan 5 dakikanın altına düşürür. CASA'nın kullanımıyla birlikte, bu iyileştirmeler, mercan sperminin verimli biyobankacılığı için gereken personel sayısını, orijinal yöntemlerde 4'ten 6'ya, mevcut protokolü kullanan iki kişiye kadar azaltmaktadır. Ek olarak, barkodlu kriyoviyallerin kullanılması, her tüpün benzersiz bir tanımlayıcıya sahip olduğu anlamına gelir, bu nedenle her biri, toplu olarak yazdırılan etiketler kullanılarak önceki yöntemden daha yüksek çözünürlükle veritabanı içinde izlenebilir.
Avustralya'daki 2022 Great Barrier Reef yumurtlama sezonu sırasında protokolün iki yumurtlama olayında saha testi, iki operatör (CASA için bir kişi, kriyoprezervasyon için bir kişi) tarafından 5 türdeki 57 koloniden 389 numunenin dondurularak saklanması ve biyobankacılığı ile sonuçlandı. Avustralya, Queensland'deki Konomie'de (Kuzey Keppel Adası) Kasım 2022'de yapılan yumurtlama olayı sırasında, 24 Acropora millepora kolonisinden 150 numune, 2 saatlik bir süre boyunca iki operatör tarafından dondurularak saklandı. Bu kadar çok sayıda mercan kolonisinden alınan bu hacimdeki numunelerin verimli bir şekilde işlenmesi ve dondurularak saklanması, öncelikle numune hazırlama süresinde elde edilen verimlilikler ve iş istasyonları arasında basitleştirilmiş meta veri aktarımı ile sağlandı.
Aralık 2023'te yumurtlama sırasında iş akışının daha fazla test edilmesi, mercan spermi için Makler sayma odasının, CASA sistemlerinde yaygın olarak kullanılan, ticari olarak mevcut sabit lamel tek kullanımlık hazne slaytlarına kıyasla daha doğru motilite ve konsantrasyon verileri sağladığını belirledi. Makler sayma odası, 4 μL numune hacmi ve mercan spermi için kullanılan standart CASA ayarları17 ile bilinen bir konsantrasyonda ticari olarak temin edilebilen lateks mikro boncuklar kullanılarak CASA için doğrulanmıştır. Bu analizler, üretici tarafından sağlanan beklenen konsantrasyon aralığına (46.0 ila 7.0 milyon / mL) düşen düşük değişkenliğe (44.5 ±± 0.7 milyon / mL) sahip tutarlı sayımlar gösterdi (Şekil 2). Makler sayma odası ve sabit lamel odası slaytları kullanılarak toplanan Acropora millepora için CASA verilerinin karşılaştırılması, iki oda tipi arasında sperm konsantrasyonu sayımlarında önemli bir fark buldu (P = 0.002; Şekil 2), Makler sayma odası kullanılarak belirlenen konsantrasyonun yarısından daha azını kaydeden sabit lamel haznesi kızakları ile. Bu eğilim, diğer iki mercan türünden alınan sperm örneklerinde de gözlenmiştir (veriler gösterilmemiştir). Aralık 2023'te yapılan testlerde ayrıca, DMSO ile 1:1 seyreltme veya 0 DMSO ile 1:2 seyreltme (sperm: kriyodilüs) kullanılarak dondurularak saklanan örneklerde toplam, hareketli veya aşamalı olarak hareketli spermlerin çözülme sonrası konsantrasyonlarında önemli bir fark bulunmadı (Şekil 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66233/66233fig01.jpg"> Şekil 1: Kriyoprezervasyon için mercan sperminin yarı otomatik işlenmesi için kullanılan iş akışı ve sahada kullanılan mobil ekipman örnekleri. (A) Mercan gamet demetleri, 5 mL FSW üzerinde 5 mL demetler oranında toplanır ve yumurtaları ve spermleri ayırmak için parçalanır (i). Koloni meta verileri otomatik veri sayfasına (ii) girilir ve izole edilen sperm örneği bilgisayar destekli sperm analizi (CASA) (iii) kullanılarak değerlendirilir. FSW'de (iv) veya 0 DMSO ilavesini hesaplamak için sperm kalitesi parametreleri otomatik veri sayfasına eklenir ve seyreltilmiş numune barkodlu kriyoviyallere (v) ayrılır. Kriyovialler kriyo rafına yüklenir ve otomatik veri sayfasına (vi) taranır, ardından -20 °C/dk ila -80 °C (vii) hızında soğutulur. Numuneler daha sonra sıvı nitrojen içinde söndürülür ve Taronga CryoDiversity Bank'a (viii) taşınmak üzere kuru nakliyecilere aktarılır. (B) Konomie Çevre Eğitim Merkezi'ndeki sınıfta uzak bir saha sahasında kurulan CASA (solda) ve kriyoprezervasyon (sağda) istasyonlarının örneği. (C) Avustralya Deniz Bilimleri Enstitüsü Ulusal Deniz Simülatörü'nde birden fazla kriyo rafını çalıştırmak üzere kurulan laboratuvar tabanlı yüksek kapasiteli kriyoprezervasyon istasyonu örneği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66233/66233fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66233/66233fig02.jpg"> Şekil 2: Mercan sperm konsantrasyonunun ölçümü için iki farklı oda slayt seçeneğinin karşılaştırılması. (A) Acropora millepora'da (n = 3 kişi) toplam sperm konsantrasyonu ölçümlerinin Makler sayma odası ve ticari olarak temin edilebilen sabit lamel odası slaytları kullanılarak karşılaştırılması. Sütunlar ortalama ± SEM'i gösterir; yıldız işaretleri önemli bir farkı gösterir (P = 0.002). (B) Mercan spermi için bilinen bir konsantrasyonda ve standart CASA ayarlarında ticari olarak temin edilebilen lateks mikro boncuklar kullanılarak Makler sayma odasının doğrulanması. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66233/66233fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66233/66233fig03.jpg"> Şekil 3: Dondurularak saklanmış örneklerde toplam, hareketli veya aşamalı olarak hareketli spermin çözülme sonrası konsantrasyonları. Kriyoprezervasyon için nihai% 10 DMSO konsantrasyonunu elde etmek için FSW'de% 20 veya% 30 DMSO kullanılarak toplam, hareketli ve aşamalı olarak hareketli sperm konsantrasyonlarının çözülme sonrası karşılaştırmaları. N = 3 bireyden alınan numuneler, her biri 2 alikota bölündü, bir alikot% 20 DMSO ilavesiyle 1: 1 kriyoprezervasyon ile kriyoprezerve edildi ve ikinci alikot, 1: 2 ilavesi ile FSW kullanılarak &lt;2 × 109 / mL'ye seyreltildi (sperm: kriyodilent)% 30 DMSO. Sütunlar ortalama ± <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66233/66233fig03large.jpg" target="_blank">SEM'i gösterir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 1: Mercan biyobankacılık otomatik veri sayfası dosyası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66233/Coral%20biobanking%20auto%20datasheets_TEMPLATE.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Biyobankacılık ve su ürünleri yetiştiriciliğini desteklemek için mercan spermlerinin dondurularak saklanması için yarı otomatik bir iş akışı

Coral reefs are facing a crisis as the frequency of bleaching events caused by ocean warming increases, resulting in the death of corals on reefs around ...

a-semi-automated-workflow-for-cryopreservation-coral-sperm-to-support

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu zebrafish yüksek verimlilik için bir sperm dondurulması protokol. Sperm bu protokolü kullanarak,% 25, ​​sonraki vitro fertilizasyon doğurganlık ortalama ve uzun yıllardır istikrarlı dondurularak saklanabilir.

Zebra balığı sperm Kriyoprezervasyon için bir Yüksek Verim Yöntem ve In Vitro Gübreleme

Burada fare sperm dondurulması için yeni geliştirilen I • Cryo kiti göstermektedir. Sperm ile dondurulmuş çözülmüş İki hücreli evre embriyo gelişimi bu kit kullanımı ile 5 fare suşlarının sürekli geliştirildi. 1.5 yıllık bir dönemde, 49 genetiği değiştirilmiş fare hatları I • Cryo kiti ile sperm dondurulması tarafından arşivlendiği ve daha sonra başarılı IVF tarafından kurtarıldı.

I · Cryo Kit kullanarak Fare Sperm Kriyoprezervasyon ve Kurtarma

MicroSecure Vitrifikasyon, FDA iyi üretim ve doku işleme uygulamalarıyla uyumlu, ticari olmayan, aseptik kapalı bir vitrifikasyon cihazı sistemi olarak geliştirilmiştir. Hidrofobik tıkalı embriyo pipetlerinin endüstriden çekilmesi nedeniyle, vitrifikasyon prosedürü, standart iç pamuk tapadan önce bir iç conta içerecek şekilde değiştirildi.

Modifiye MicroSecure Vitrifikasyon: İnsan Blastosistlerinin A, Güvenli Basit ve Etkili Kryoprezervasyon Prosedürü

Burada, Yunus sperm toplama, dondurma ve sığır yumurta kullanarak kapaklı tüp bebek performansı için başarılı bir şekilde kullanılmıştır protokolleri mevcut.

Şişe burunlu yunus (Tursiops truncatus) sperm: koleksiyon, dondurma ve kapaklı In Vitro fertilizasyon

Bu çalışmanın temel amacı iğne adapte Vitrifiye (NIV) yordamı tüm Zebra balığı testis cryopreserve dalmış oldu. Ayrıca, beş farklı Zebra balığı suşları yönteminde tekrarlanabilirlik test edildi.

Zebra balığı Spermatogonia bütün testis iğne tarafından dondurma hızlı soğutma dalmış

Mevcut iletişim kuralını kullanarak bilgisayar destekli sperm analizi ve soğutma aygıtlarının balık sperm değerlendirmesi bir yordam açıklanır. Yazılım bir hızlı, doğru ve kantitatif analiz yetiştiricilik üreme başarı geliştirmek için yararlı bir araç olabilir sperm hareketliliği göre balık sperm kalitesi verir.

Yazılımı kullanarak ve soğutma aygıtlarının balık Sperm değerlendirmesi

İletişim kuralları Avrupa yılan balığı olgunlaşma ve sperm dondurma için son yıl içinde geliştirilmiştir. Bu makalede, en iyi Protokolü olgunlaşma ve cryoprotectant olarak metanol inducing için insan Korionik gonadotropin (hCG) kullanarak kullanılabilir.

Kullanım ve tedavi, erkek Avrupa yılan balığı (Anguilla anguilla) Hormonal olgunlaşma ve Sperm dondurma için

Mercanlar hem insanlar hem de deniz canlıları için önemli olan biyoçeşitlilik ekosistemleri oluştururlar. Ancak, hala tam potansiyel ve birçok mercan hücrelerinin fonksiyonu anlamıyorum. Burada, taşlı mercan hücre popülasyonlarının izolasyonu, etiketlemi ve ayrılması için geliştirilmiş bir protokol salıyoruz.

Skleraktin Hücre Popülasyonlarının İzolasyoniçin Floresan-Aktive Hücre Sıralaması

Bu protokol, mercan holobiontunun fizyolojik özelliklerini araştırmak için kullanılabilecek bir mikro-respirometri sisteminin kurulumunu ve çalıştırılmasını açıklar.

Yeni Bir Mikro-Respirometri Aracı Kullanılarak Mercan Holobiontunun Fizyolojik Karakterizasyonu

Burada, gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi analizi için bir mercan holobiontundan polar ve yarı polar metabolitlerin yanı sıra ayrılmış mercan konakçı dokusu ve Symbiodiniaceae hücre fraksiyonlarının ekstraksiyonunu ve hazırlanmasını sunuyoruz.

Gaz Kromatografisi-Kütle Spektrometresi Tabanlı Sert Mercan Örneklerinin Hedefli Metabolomikleri

Öğrenin mercan spermlerinin yarı otomatik dondurularak saklanma yöntemini. Bu protokol, tehdit altındaki mercan türlerinin genetik çeşitliliğini korumak ve resif restorasyonunu desteklemek için ölçeklenebilir bir çözüm sunar.

Biyobankacılık ve su ürünleri yetiştiriciliğini desteklemek için mercan spermlerinin dondurularak saklanması için yarı otomatik bir iş akışı (Video) | JoVE Journal

Biyobankacılık ve su ürünleri yetiştiriciliğini desteklemek için mercan spermlerinin dondurularak saklanması için yarı otomatik bir iş akışı

Daha fazla video keşfet