Endometrioma ile İlgili İnfertiliteyi İncelemek için Deneysel Bir Fare Modelinin Kurulması

Araştırmamızın kapsamı, endometrioma ile ilişkili infertilitenin altında yatan mekanizmaları anlamaya odaklanmıştır. Endometrioma'yı simüle eden bir fare modeli geliştirerek ve doğurganlık üzerindeki etkisini araştırarak bilgi boşluğunu gidermeyi amaçlıyoruz. Endometriozis araştırmaları alanındaki son gelişmeler arasında endometriozisin altında yatan moleküler mekanizmaların anlaşılmasındaki ilerlemeler, tanı ve tedavi için yeni belirteçlerin tanımlanması ve endometrioma gibi spesifik alt tipleri incelemek için yenilikçi modellerin geliştirilmesi yer almaktadır. Bu gelişmeler, endometriozis için bilgi ve potansiyel tedavi stratejilerinin geliştirilmesine katkıda bulunmaktadır. Endometrioma araştırmalarındaki mevcut deneysel zorluklar arasında güvenilir bir hayvan modelinin olmaması, patogenez ve doğurganlık etkisinin sınırlı anlaşılması ve nüks çalışmalarına ve tanı testine duyulan ihtiyaç yer almaktadır. Endometrioma fare modeli ve bulguların birleştirilmesi bu zorlukları ele alır ve alanı ilerletir.

Protokolümüz diğer tekniklere kıyasla belirgin avantajlar sunar. Özellikle endometriomayı taklit etmeye odaklanırken, bu yöntemle başka hiçbir alt tip oluşturulmamıştır. Yüksek başarı oranıyla genetik modifikasyonlara olanak tanır ve insanlara benzer üreme özelliklerini kopyalar, bu da onu endometrioma ile ilişkili kısırlığın incelenmesi için değerli bir araç haline getirir. Bulgularımız endometriozis araştırmalarında yeni bir çağın yolunu açtı. Modelimiz, uzun süredir devam eden bir boşluğu doldurarak, endometrioma anlayışımızda, tedavimizde ve potansiyel olarak önlenmesinde devrim yaratacak dönüştürücü içgörüler vaat ediyor. Araştırmamız, nüks ve teşhis çalışmalarından elde edilen bulguları entegre ederek, endometriozis araştırmaları ve hasta bakımının daha geniş bağlamını geliştirir.

[Anlatıcı] Erkek feromon içeren yatakları topladıktan sonra, onları 48 saat boyunca dişi fare kafesine koyun. Bir Petri kabına 10 mililitre PBS dökün ve sıvıyı emmek için pamuklu çubuğun bir ucunu içine daldırın. Bir fareyi kafesinden yavaşça çıkarın ve kapağın üzerine yerleştirin. Nemlendirilmiş pamuklu çubuğu vajinaya nazikçe yerleştirin ve çubuğu hayvanın vücudunun uzun eksenine 45 derece hafifçe döndürün. Hücreleri vajinal aydınlatıcı duvarlardan topladıktan sonra, swabı dikkatlice geri çekin. Toplanan hücreleri aktarmak için swab ucunu temiz, önceden etiketlenmiş bir cam slayt üzerinde yavaşça yuvarlayın. Kızgınlık evresini gösteren kornifiye epitel hücrelerinin varlığı için slaytı mikroskop altında inceleyin. Başlamak için, donör ötenazi uygulanmış östrus aşaması dişi farenin karın bölgesini% 70 etanol ile dezenfekte edin. Peritonun orta hattı boyunca bir santimetrelik bir kesi yapmak için steril cerrahi makas kullanın ve kas tabakasını açığa çıkarın. Ardından, kas tabakasını kesmek ve pelvik boşluğu ortaya çıkarmak için farklı bir makas kullanın. Forsepsin uçlarını kapatın ve künt orta kısmı kullanarak bağırsakları nazikçe kaldırın. Uterusun yerini belirledikten sonra, tüm uterus boynuzunu steril bir şekilde inceleyin ve her iki uterus boynuzunun çıkarılmasını sağlayın. Eksize edilen dokuları PBS içeren bir Petri kabına yerleştirin ve fazla yağ dokularını çıkarın. Steril bir neşter kullanarak, dokuları bir milimetre küp parçalara ayırın. Dokuları nemli tutmak için periyodik olarak PBS ekleyin. Anestezi uygulanmış alıcı fareyi steril bir cerrahi tahtaya sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Derinin altında kemikli bir çıkıntı hissetmek için arka ayakları nazikçe hareket ettirerek ameliyat bölgesini tanımlayın. Cerrahi bölgeyi %70 etanol çubukla ve ardından Betadine ile dezenfekte edin. Seçilen bölgede, üç ila beş milimetre arasında hassas bir yanal kesi yapın. Yumurtalığı baskın olmayan el forsepsleri ile stabilize edin ve hafif bir ayrılma gözlemleyerek yumurtalık bursasına 100 mikrolitre PBS enjekte edin. Bursada küçük bir yarık açın ve mikro forseps kullanarak bir milimetre küp uterus dokusu parçalarını nakledin. Ameliyattan sonra kas katmanlarını emilebilir dikişlerle, cildi ise emilmeyen dikişlerle dikin. Dört hafta sonra, nakledilen alıcı fareyi muhafaza kafesinden çıkarın. Ötenazi yapılan alıcı farede orta hat kesisi yapın ve organ muayenesi için karın boşluğunu açığa çıkarın. Karın boşluğunu yabancı endometriotik lezyonlar açısından iyice inceleyin. Ardından, fotoğraf çekmek için görünür lezyonları olan yumurtalıkları çıkarın. Yumurtalıkları lezyonlu %10 nötr tamponlu formalin içinde sabitleyin. Doku bölümlerini bir slayt üzerine kesit alıp monte ettikten sonra, parafini çıkarmak için slayt ksilen solüsyonunu yerleştirin. Slaytı bir dizi azalan etanol konsantrasyonuna yerleştirerek doku bölümlerini yeniden sulandırın. Doku kesitlerini oda sıcaklığında beş ila 10 dakika boyunca %1 periyodik asitle tedavi edin. Ardından, kalan periyodik asidi çıkarmak için slaytı damıtılmış suyla iyice durulayın. Şimdi, doku kesitlerini 15 dakika boyunca kaydırma solüsyonu ile boyayın. Fazla lekeyi çıkarmak için slaytı sıcak musluk suyunda ve ardından damıtılmış suda durulayın. Doku bölümlerini iki ila üç dakika boyunca Mayer hematoksilin ile boyayın. Mavileştirme reaktifini 30 saniye uygulamadan önce slaytı akan musluk suyunda durulayın. Slaytı damıtılmış suda duruladıktan sonra, bölümleri artan etanol konsantrasyonlarında kurutun. Bölümleri şeffaf hale getirmek için ksilene batırın. Bölümlere bir montaj ortamı uygulayın ve hava kabarcıklarından kaçınarak bir lamel yerleştirin. Kuruduktan sonra, yumurtalıkta endometriozisi doğrulayan endometriyal bezler, stroma ve hemorajik kistlerin varlığı için lamı ışık mikroskobu altında inceleyin. Sahte kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, endometriyal grupta transplantasyondan dört hafta sonra yumurtalık morfolojisi ile ilişkili olarak ektopik endometriyal kistik büyüme görüldü. Daha ileri histopatolojik inceleme, ektopik endometriyal dokunun endometriyal grupta başarılı bir şekilde implantasyonunu doğruladı.