Name: Ergen C57BL/6 Erkek ve Dişi Fareler için Sosyal Yenilgi Stres Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-15T14:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Öğrenin ergen C57BL/6 farelerde hızlandırılmış sosyal yenilgi stres modelini. Bu yöntem, sosyal kaçınma davranışını tetikleyerek dayanıklı ve hassas bireyleri ayırt etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri tarafından finanse edilmiştir (CF Hibe Numaraları: MOP-74709; PJT 190045), Ulusal Uyuşturucu Bağımlılığı Enstitüsü (CF Hibe numarası: R01DA037911), Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi (CF Hibe Numarası: 2982226). Andrea Pantoja-Urban, Meksika'dan Ulusal Beşeri Bilimler, Bilim ve Teknoloji Konseyi / Consejo Nacional de Humanidades, Ciencias y Tecnologías (CONAHCYT) ve FRQNT - Yabancı öğrenciler için Başarı burs programı (PBEEE) tarafından desteklendi. Samuel Richer, McGill Üniversitesi'ndeki Entegre Sinirbilim Programı'ndan bir bursla desteklendi. Figür çizimleri BioRender.com'dan şablonlar kullanılarak oluşturulmuştur.

Deneysel prosedürler, Kanada Hayvan Bakımı Konseyi'nin yönergelerine uygun olarak gerçekleştirildi ve McGill Üniversitesi ve Douglas Hastanesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylandı (hayvan deneyi onay numarası: 2005-5084). Tüm fareler, Douglas Ruh Sağlığı Üniversitesi Enstitüsü Nörofenotipleme Merkezi'nde sıcaklık ve nem kontrollü (21-22 ° C; % 60) bir koloni odasında ve 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngüsünde (8: 00 saatte yanar) barındırıldı. Fareler, deneyler boyunca yiyecek ve suya ad libitum erişimine sahipti. Fareler her deney koşuluna rastgele atandı. Deney hayvanları ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz . Tablo 2 , her deney aşaması için hayvanın özelliklerini özetlemektedir. Toplamda, 20 deneysel kohortta 489 ergen C57BL / 6J faresi (259 erkek; 230 kadın) kullanıldı.
Tablo 2: Her deney aşaması için hayvan denekler. †Bu hayvanlar ciddi şekilde yaralanmazsa, astarlama için yeniden kullanılabilirler. ‡Bu hayvanlar ciddi şekilde yaralanmazsa, Douglas Ruh Sağlığı Üniversitesi Enstitüsü Nörofenotipleme Merkezi olan AcSD, § sırasında astarlama için yeniden kullanılabilirler. ¶Erkeklerle yapılan deneyler için, #Dişilerle yapılan deneyler için, yenilgi karışıksa, astarlama için dişileri kullanın. ††AcSD için kullanılmamalıdır. Kısaltmalar: AcSD = hızlandırılmış sosyal yenilgi stresi; PND = Doğum sonrası gün <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Table%202_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
1. Alışma
NOT: Bu aşama en az 1 hafta sürmelidir.
<ol><li>4 aylıktan daha eski ve ergen C57BL / 6J farelerinin iki katı miktarda erkek CD-1 emekli damızlık fareleri (Malzeme Tablosuna bakınız) satın alın (yani, 10 fare strese maruz kalacaksa, 20 CD-1 faresi satın alın). NOT: Bu miktarda CD-1 faresinin alınması önerilir, çünkü CD-1 farelerinin sadece küçük bir kısmı ergen farelere karşı agresif davranış gösterir.</li>
	<li>CD-1 erkek farelerin, tarama ve astarlamadan önce 1 hafta boyunca yiyecek ve su ad libitum ile ev kafeslerinde yeni tesise alışmalarına izin verin.</li>
	<li>Tarama ve hazırlama seansları için PND &gt;65'te (yetişkinler) ve PND 25 ± 3'te (ergenler) C57BL / 3 kullanın (Tablo 2). Yaralanma riskini azaltmak için her yaştan 4 C57BL / 6 adet hazırlama işlemi için 4 C57BL / 6 fare edinin (yani, 3 günlük hazırlama için, 12 PND &gt;65 ve 12 PND 25 ± 3) elde edin, çünkü bu hayvanlar tarama ve hazırlama işlemi için tekrar tekrar kullanılacaktır.</li>
</ol>2. CD-1 taraması ve astarlama
NOT: Bu fazın süresi 3 günlük tarama (dişi fareler için 1 gün) ve 3-4 günlük astarlamadır (bu, dişi fareler için ve CD-1 farelerinin agresif davranışına bağlı olarak artabilir.)
<ol><li>CD-1 saldırılarını aşağıda açıklandığı gibi kaydetmek için saldırının işlemsel tanımını kullanın.<ol><li>Bir saldırı, CD-1 faresinin C57BL/6J fareyi ısırması ve C57BL/6J farenin ısırığa yanıt olarak uzaklaşması olarak tanımlanır. Isırma, CD-1 farenin dişlerini C57BL/6J farenin vücudunun herhangi bir yerine yerleştirmesi olarak tanımlanır. Uzaklaşma, C57BL/6J farenin her iki arka pençesini CD-1 ona çarpmadan önce bulundukları konumdan hareket ettirmesi olarak tanımlanır.</li>
		<li>Ayrı saldırılar arasında en az ~2 sn fark olduğundan emin olun. Birden fazla ısırık &lt;2 saniye arayla meydana gelirse, bir saldırı olarak sayın.</li>
		<li>CD-1 faresi ara vermeden (&lt;~2 saniye aralıkla) art arda birden fazla kez ısırırsa, hayvanları plastik bir cetvelle nazikçe ayırın. CD-1 fare ısırır ve bırakmazsa, hayvanları nazikçe ayırın. C57BL/6J fare bir köşede sıkışırsa veya CD-1 fare tarafından sabitlenirse ve bir ısırığa tepki olarak hareket edemezse, hayvanları bir cetvelle nazikçe ayırın. Bunların hepsini tek bir saldırı olarak sayın (ayrılmaya kadar).</li>
	</ol></li>
	<li>Tarama<ol><li>Tüm hayvan muameleleri için nitril muayene eldivenleri kullanın ve parfüm veya koku kullanmaktan kaçının.</li>
		<li>Taramanın 1. gününü sadece CD-1 farelerinin ev kafesinde davetsiz misafir olarak (PND &gt;65) yetişkin C57BL / 6 erkek farelerle gerçekleştirin. Yeni bir deneyden önce daima CD-1 farelerini tarayın.</li>
		<li>Yetişkin bir erkek C57BL/6 fare PND &gt;65'i 3 dakika boyunca bir CD-1 erkek farenin ev kafesinde tanıtın. İlk saldırganlığın gecikmesini ve kaç tane saldırganlık gerçekleştirildiğini kaydedin (Ek Tablo 1'e bakınız).</li>
		<li>Taramanın 2. gününden son gününe kadar, yetişkin bir erkek C57BL / 6 PND&gt;65'i 1 dakika boyunca tanıtın (CD-1 çok agresifse 30 saniye ile sınırlayın) ve ardından 5 dakika boyunca bir ergen C57BL / 6 PND 25 ± 3 ile değiştirin. NOT: Taramanın ergen farelerle yapılması önemlidir, çünkü yetişkin C57BL / 6 erkek fareye saldıran tüm fareler ergen C57BL / 6'ya saldırmayacaktır. Aslında, ergen farelere saldıran CD-1 fareleri her zaman yetişkin C57BL / 6 erkeklere saldırmaz.</li>
		<li>Deney dişi farelere karşı saldırganlık içinse, deney fareleri her iki cinsiyeti de içerse bile, ergen dişi farelerle tarama ve astarlama yapın.</li>
		<li>İlk saldırganlığın gecikmesini, saldırı sayısını ve tüm C57BL / 6 fareleri tarafından alınan yaraları kaydedin (Ek Tablo 2'ye bakınız).</li>
		<li>Her türlü etkileşimi kaydedin: kovalama, montaj davranışları, koklama, tımar etme veya ısırma. CD-1, ergen C57BL/6 farelerine yaklaşmazsa kaydedin; bu davranış 2 gün boyunca tekrarlanırsa, CD-1'i hazırlamaya dahil etmeyin.</li>
		<li>Hazırlama aşaması için, ergen C57BL/6'yı kovalama, takma davranışları, koklama, takip etme, tımar etme veya ısırma gibi davranışlar sergileyen tüm CD-1 farelerini seçin.</li>
		<li>Seçili olmayan CD-1 farelerini saklayın ve bunları sosyal etkileşim testi (SIT) için kullanın. NOT: Bölgesel davranış zamanla artar; bu nedenle, seçilmemiş CD-1 fareleri bir sonraki deneyde ergen farelere karşı agresif hale gelebilir.</li>
	</ol></li>
	<li>CD-1 agresif davranışının hazırlanması<ol><li>Astarlama için seçilen CD-1 farelerini, astarlamanın son gününe kadar ev kafeslerinde saklayın.</li>
		<li>Yetişkin bir erkek C57BL/6J fare PND &gt;65'i 30 saniye boyunca CD-1 ev kafesine yerleştirin ve ardından 5 dakika boyunca ergen bir C57BL/6 PND 25 ± 3 fare ile değiştirin.</li>
		<li>İlk saldırganlığın gecikmesini, saldırı sayısını ve herhangi bir etkileşimi kaydedin (Ek Tablo 3'e bakın).</li>
		<li>Hazırlamayı 3-4 gün boyunca günde 2 kez, yenilgilerin planlandığı saatte (09:00 ve 14:00) yapın. NOT: Tüm CD-1 fareleri, özellikle hazırlama dişi farelere doğru ise, ilk günlerde ergen farelere saldırmaz. Hazırlama için gün sayısı, CD-1 fareleri tarafından gösterilen agresif davranışa bağlı olarak artabilir veya azalabilir.</li>
		<li>Hazırlama günlerinin sayısını azaltmak için, erkek farelerle daha önce bir sosyal yenilgi deneyinden geçmiş CD-1 farelerini yeniden kullanın. CD-1 fareleri artan saldırganlık göstermezse, kriterlere ulaşana kadar hazırlama günlerini uzatın.</li>
		<li>CD-1 fareleri aşırı agresif davranış gösteriyorsa (C57BL / 6 fareler aşırı yaralanma gösterirse) sosyal yenilgi sırasında ciddi yaralanmaları önlemek için hazırlama günlerini azaltın.</li>
		<li>Deneyin bir sonraki aşaması için, art arda 2 gün boyunca ergen farelere en az 10x (erkek) veya 5x (dişi) saldıran CD-1 farelerini seçin.</li>
	</ol></li>
</ol>3. AcSD protokolü
NOT: Bu aşama 3 günlük alışkanlık ve 4 günlük AcSD'ye maruz kalmaktan oluşur.
<ol><li>Alışkanlık<ol><li>Sosyal yenilgi için fare kafeslerini kurun (Şekil 1A-F). Uygun akrilik cam bölücüler kullanarak fare kafeslerini 2 bölmeye bölün (Şekil 1B,D; bkz. Malzeme Tablosu).</li>
		<li>Kafesin her iki tarafına sert talaş yatak takımı ekleyin, yatak malzemesi olarak her iki tarafa pamuklu bir kare ekleyin (Şekil 1D). Tel üst kısmının bağlayıcı klipslerle sabitlendiğinden emin olun (Şekil 1E). Fare kafesinin koruyucu pamuk olmadan kapak kapağıyla kapatıldığından emin olun (Şekil 1F).</li>
		<li>Kafesin bir tarafındaki her kafes için bir CD-1 fare yerleştirin. Her farenin kolay tanımlanması için kafesin dışına bir etiket yerleştirin.</li>
		<li>Seçilen CD-1 farelerini, AcSD protokolü başlamadan 2 veya 3 gün önce (CD-1 bölgesel davranışını geliştirmek için) sosyal yenilgi aparatında (Şekil 1F) barındırın.</li>
		<li>Deneyden 1 gün önce bir hazırlama seansı yapın; Bu, saldırganlığı tutarlı tutmak için önemlidir.</li>
	</ol></li>
	<li>Oturumları yenin<ol><li>Günde 2 seans (ilk seans: sabah 9, ikinci seans: 14:00) olmak üzere 4 gün boyunca toplam 8 seans uygulayın. Saldırganın her seans için farklı olmasını sağlamak için bir program yapın (bakınız Ek Tablo 4 ve Ek Tablo 5).</li>
		<li>C57BL/6 ergen fareyi kafesin CD-1 tarafına sokmadan önce tartın. Yetişkin bir erkek C57BL/6 fareyi &gt;65 30 saniye boyunca yenilgi kafesinin CD-1 tarafına sokun ve ardından 10 dakikalık uzun bir yenilgi bölümü veya oturum başına maksimum 10 saldırı için ergen bir C57BL/6 PND 24-28 fare ile değiştirin.</li>
		<li>Her saldırıdan sonra hayvanları plastik bir cetvelle ayırın. Her yenilgi seansından sonra, yaralanmaları kontrol edin ve ağrı kesici krem ile tedavi edin. Yaralanma sayısını kaydedin.</li>
		<li>Ergen C57BL/6J fareyi bir sonraki seansa kadar tanımadığınız bir saldırganın yanındaki serbest bölmeye yerleştirin. İşlemi her seansta farklı bir saldırganla tekrarlayın.</li>
		<li>Oturumu, önceki oturumda eşleştirilmemiş olan deneysel ve saldırgan farelerle başlatın. Astarlama için kullanılan yetişkin C57BL/6J erkek farelerin yaralanmalarını izleyin (Ek Tablo 6'ya bakınız).</li>
	</ol></li>
	<li>Hayvan refahı ve insancıl son noktalar için aşağıdaki tavsiyelere uyun.<ol><li>Sosyal yenilgiler için ilgili kurumsal inceleme kurulunun standart çalışma prosedürünü takip edin ve sürekli veteriner değerlendirmesini sağlayın.</li>
		<li>Hayvanların acı çekmesini ve ölümünü önlemek için çalışma boyunca farelerin sağlığını izleyin.</li>
		<li>Farelerin diğer bölmeye geçmesini önlemek için delikli bölücünün doğru şekilde ayarlandığını doğrulayın.</li>
		<li>Bir hayvanın uygun izleme için bir yarası olduğunda veteriner bakım personelini bilgilendirin ve yara tamamen iyileşene kadar her gün ağrı kesici krem uygulayın.</li>
		<li>Bir yaralanma kötüleşirse (yaraların boyutu artarsa), iyileşmeye izin vermek için bir sonraki seansta atakları 5 ile sınırlayın. Ciddi yaralanmalar olup olmadığını kontrol edin. Ağır yaralanmalar toplam 1 cm&gt; ulaşan yaralar olarak tanımlanır.</li>
		<li>İlk vücut ağırlığından ağırlıklarında% 15 -% 20'lik bir azalma gösteren hayvanları derhal çıkarın ve ötenazi yapın; azalmış / azalmış lokomotor aktivite ve bozulmuş tımar; 1 cm'&gt; yaraları olan fareler; kopmuş penis veya ön ayakların şişmesi ile ısırık izleri. NOT: Birincil ötanazi, izofluran / CO2 gaz odaları aracılığıyla gerçekleştirilir, ardından servikal çıkık ile yapılan ikincil ötanazi yapılır.</li>
	</ol></li>
	<li>Kontrol fareleri<ol><li>Günde 2 seans (ilk seans: sabah 9, ikinci seans: 14:00) olmak üzere 4 gün boyunca toplam 8 seans uygulayın. Kontrol farelerinin kafesi her seansta farklı bir C57BL / 6J varyantı ile paylaştığından emin olmak için bir program yapın (Ek Tablo 7 ve Ek Tablo 8'e bakınız). NOT: Kontrol fareleri bir saldırgana maruz kalmaz. Her yenilgi seansında yeni bir CD-1 faresine girişi taklit etmek için, kontrol fareleri her seansta yeni bir aynı cinsiyetten ve aynı yaştan türdeş (çöp olmayan) ile eşleştirilir.</li>
		<li>Kontrol farelerini sosyal yenilgi aparatında (Şekil 1) AcSD farelerininkinden ayrı bir odaya yerleştirin.</li>
		<li>Kafesin her iki tarafına birer tane olmak üzere kafes başına iki kontrol faresi yerleştirin. Fareleri kafesin farklı bir tarafında veya tamamen farklı bir kafeste barındırın, böylece kokuyu tanımazlar. Kontrol farelerini her seansta döndürün.</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66455/66455fig01.jpg"> Şekil 1: Ergen fareler için hızlandırılmış sosyal yenilgi stresi (AcSD) için aparat . (A) Soldan sağa, çubuklar arasında 0,6 cm mesafe bulunan eşleştirilmiş çelik tel üst kısımlar, 0,6 cm delik çapında şeffaf delikli polikarbonat bölücü, tel üst kısımları sabitlemek için bağlayıcı klipsler, kapak kapaklı şeffaf fare kafesi (pamuk koruyucu tabaka olmadan). (B) Yukarı: yetişkinlerde kronik sosyal yenilgi için polikarbonat bölücüler (solda) ve ergenlerde AcSD (sağda) arasında karşılaştırma; Aşağı: Ergen fareler için polikarbonat bölücüye yakın. (C) Yukarı: yetişkinlerde kronik sosyal yenilgi için çelik tel tepeler (solda) ve ergenlerde AcSD (sağda) arasında karşılaştırma; Aşağı: çelik tel üst kısımların yakın çekimi. (D-F) Toplumsal yenilgi aygıtının bir araya getirilmesi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/66455fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
4. Sosyal etkileşim testi
<ol><li>Daha önce57,58,59 açıklandığı gibi AcSD'yi takiben SIT'i gerçekleştirin.<ol><li>AcSD'nin son seansından 24 saat sonra SIT'i gerçekleştirin. SIT'i kırmızı ışık koşullarında (sarı ışık koşullarında değil) sabah 9 ile akşam 4 arasında gerçekleştirin.</li>
		<li>Ana kare arenayı ve baş üstü video kamerayı kurun (Malzeme Tablosuna bakın). Ana arena 3 alana ayrılmıştır: sosyal etkileşim bölgesi (SIZ), köşeler ve merkez; Bu alanlar arenada siyah bir çizgi ile işaretlenmelidir (siyah bir kalıcı işaretleyici kullanın). Her alan için aşağıdaki boyutları ve ölçütleri kullanın.<ol><li>SIZ'nin, kasayı çevreleyen 14 cm x 9 cm kare alan olduğundan emin olun. Köşeler, muhafazanın karşısındaki duvarın köşelerinde küçük, kare alanlardır (9 cm x 9 cm) ve SIZ'den en uzak noktayı temsil eder. Merkez, SIZ ile köşeler arasındaki alandır.</li>
		</ol></li>
		<li>Arenayı ve muhafazaları bir temizleme hidrojen peroksidaz solüsyonu ile temizleyin.</li>
		<li>Analiz için her hayvan için tanımlama etiketlerini yere yerleştirin. Çevrimdışı analiz için tüm hayvan davranışlarını kaydedin.</li>
	</ol></li>
	<li>Temel keşfi belirlemek için ilk oturum<ol><li>Arenanın duvarlarından birine boş bir tel örgü muhafaza yerleştirin. Deneysel (mağlup veya kontrol) ergen C57BL/6 fareyi arenanın ortasına yerleştirin. 2,5 dakika boyunca arenayı özgürce keşfetmesine izin verin. Fareyi geri alın.</li>
		<li>Arenayı ve muhafazaları bir temizleme hidrojen peroksidaz solüsyonu ile temizleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Sosyal etkileşim için ikinci oturum<ol><li>Tanımadığınız bir CD-1 fareyi tel örgü muhafazanın içine yerleştirin. Kasayı önceki oturumla aynı konuma yerleştirin.</li>
		<li>Aynı ergen C57BL/6 fareyi arenaya yeniden tanıtın. 2,5 dakika boyunca arenayı özgürce keşfetmesine izin verin. Fareleri alın.</li>
		<li>Arenayı ve muhafazaları bir temizleme hidrojen peroksidaz solüsyonu ile temizleyin.</li>
		<li>İşlemi tüm ergen C57BL / 6 fareleri (stresli ve kontrol fareleri) için dengeli bir sırayla tekrarlayın.</li>
		<li>Kullanım stresini ve yanlılığını azaltmak için SIT için birden fazla CD-1 fare kullanın (örneğin, 30 C57BL / 6 fareden oluşan bir kohort için 4 CD-1 fare kullanın). Onları ergen fareler arasında dengeleyin. NOT: Bu test, ilk olarak Krishnan5 ve Golden7 tarafından tanımlandığı gibi, deney farelerinin sosyal bir hedefe yaklaşma ve/veya kaçınma davranışını ölçer.</li>
	</ol></li>
	<li>Analiz<ol><li>Testin her iki oturumu sırasında etkileşim bölgesinde ve köşelerde geçirilen süreyi kaydedin.</li>
		<li>Sosyal etkileşim oranını, CD-1 saldırganı varken etkileşim bölgesinde geçirilen sürenin, CD-1 saldırganı yokken etkileşim bölgesinde geçirilen süreye bölünmesiyle hesaplayın.</li>
		<li>Stresli fareleri 1.00 &lt; duyarlı ve 1.00 ≥ dirençli olarak sınıflandırın.</li>
		<li>Lokomotor aktivitedeki farklılıkları kontrol etmek için ilk seans sırasında arenayı keşfetmeyen (yani, belirlenen alanlardan herhangi birinde 0 s geçiren) hayvanları tüm analizlerden hariç tutun.</li>
		<li>Temsili olmayan dayanıklı hayvanları önlemek için ≥4 sosyal yenilgi oturumunda 0 saldırı alan tüm hayvanları tüm analizlerden hariç tutun.</li>
		<li>Yüksek sosyal etkileşim oranlarının sosyal hedefteki gerçek ilgiyi yansıttığından emin olmak için etkileşim alanı içinde en az 61 saniye geçirmeyen fareleri (duyarlı değil) hariç tutun.</li>
		<li>Aykırı değer etkileşim oranı puanlarına sahip fareleri hariç tutun.</li>
	</ol></li>
</ol>

Davranışsal Araştırma için C57BL / 6 Farelerde Ergen Sosyal Stres Paradigması

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

CD-1 farelerinde tutarlı, agresif davranış Tarama aşamasında, CD-1 tarafından görüntülenen tüm davranışları (kovalama, takma davranışları, koklama, tımar etme veya ısırma) not etmek ve AcSD için CD-1 farelerini seçerken bu kayıtları yakından takip etmek çok önemlidir. Ergen fareye saldırmadan etkileşime giren bir CD-1 faresinin, hazırlama sırasında ergen farelere karşı saldırganlık geliştirmesi muhtemeldir. Buna karşılık, yetişkin bir fareye saldıran ancak ergen bir fareye yaklaşmayan bir CD-1 faresi, muhtemelen ergen farelere karşı saldırganlık geliştirmeyecektir.
CD-1 hazırlama aşaması, ergen farelere karşı agresif davranışlar geliştirmeye izin verir. Bu nedenle, davranışların doğru bir kaydına sahip olmak, farelerin seçimi için kritik öneme sahiptir. Ayrıca, bir CD-1 faresi daha önce yenilgiye uğramış olsa bile, yeni bir deneyden önce CD-1 farelerini her zaman taramak önemlidir. Bazı CD-1 fareleri, bir süre ev kafeslerinde rahatsız edilmeden bırakıldıklarında ergen farelere saldırmayı durdurabilir, diğerleri ise tecrit altında tutuldukları için artan bölgesel davranışlar geliştirebilir.
CD-1 farelerinin astarlanması için protokol 3 gün önermektedir. Saf CD-1 fareleri kullanılırsa, CD-1 fareleri ergen farelere aktif olarak saldırmazsa, astarlama uzatılabilir. Ergen farelerle sosyal yenilgiye uğramış CD-1 fareleri için, bu hazırlama aşamasının süresi azaltılabilir.
Tarama ve hazırlama aşamaları, başarılı AcSD oturumları için kritik öneme sahiptir. Örneğin, uygun şekilde hazırlanmış CD-1 fareleri, daha az agresif bir CD-1 faresinden daha hızlı saldıracak ve 10 saldırı sınırına ulaşacak ve kısa yenilgi bölümlerine izin verecektir.
AcSD sırasında, saldırılar çok şiddetli olduğunda hayvanları ayırmak çok önemlidir (yani, CD-1 faresi C57BL / 6J fareyi bırakmaz); Aksi takdirde, ergen fareler yaralanır ve saldırıların sınırlandırılması gerekir. Enfeksiyonları önlemek için yaralanmaları tedavi etmek de çok önemlidir; Yaralanmaları tedavi etmek için yağlı merhemlerin kullanılmaması tavsiye edilir, çünkü hayvanlar merhemi yalayacak, bu süreçte saçlarını kaybedecek ve yaralanmayı açığa çıkaracaktır.
Ergen C57BL/6 erkek ve dişi fareler için kullanılacak AcSD sorun giderme Kronik sosyal yenilgi stres modeli, hem erkek hem de dişi C57BL / 6 farelerinde erken ergenlik döneminde kullanımı için önemli sınırlamalar sunmuştur. Bu bölümde, ergenlik döneminde AcSD modelinin geliştirilmesi için yapılan değişiklikler anlatılmaktadır.
Ekipman: Ekipmanın tam listesi Malzeme Tablosunda listelenmiştir. Erken ergenlik dönemindeki C57BL/6 ergen fareleri (PND 21-30), daha önce laboratuvardakullanılan 60 tarif edilen ekipman için çok küçüktü. Akrilik cam bölücüler üzerindeki deliklerin çapı, C57BL / 6 farelerinin saldırganın bulunduğu bir bölmeden diğerine geçmesine izin verecek kadar büyüktür. Bunu önlemek için, küçük çaplı deliklere sahip akrilik cam bölücüler yapılmıştır. Ek olarak, farelerin kafeslerden kaçmasını önlemek için çelik telli üst kısmın klipslerle sabitlenmesi gerekiyordu. Kullanılan kapak kapakları tipik olarak havalandırmalı kafesler için kullanılır. Bu durumda, bu kapak kapakları, uygun havalandırmayı sağlamak ve farelerin kafesten kaçmasını önlemek için koruyucu pamuk olmadan kullanılmıştır. Kullanılan talaş yatak takımının miktarının, ergen farelerin yiyeceğe ve kapak kapağına yerleştirilen su sebiline ulaşmasına izin vermesi gerektiğini dikkate almak önemlidir. Bununla birlikte, büyük miktarlarda talaş ıslanabilir.
CD-1 farelerinin seçimi: Kronik modelde, CD-1 fareleri, deneyin başlamasından önce agresif davranışlar açısından taranır. CD-1 fareleri 3 günlük taramadan sonra seçilir ve agresif davranışları değerlendirilir. Taramadan sonra, 30 saniyenin altında atak gecikmesi olan ve tutarlı ataklar gösteren hayvanlar bir sonraki aşama için seçilir. Bununla birlikte, kronik sosyal yenilgi deneyleri sırasında, CD-1 fareleri 10 gün boyunca tutarlı bir saldırı sayısını sürdürmedi (Şekil 2B). Bu nedenle, davetsiz misafir fareye karşı saldırganlık eksikliği nedeniyle birkaç CD-1 faresinin deneyden çıkarılması gerekiyordu. Aslında, CD-1 farelerinin sadece küçük bir kısmı davetsiz misafir fareye saldırırken, bu farelerin bazıları son derece agresifti ve bazen erkek C57BL / 6 PND 21 farelerini ciddi şekilde yaraladı. Bu nedenle, CD-1 farelerinin taranması, ergen farelere karşı agresif fareleri seçmek için değiştirildi ve bu da fiziksel saldırganlığı artırdı.
Fiziksel saldırganlığın tutarlılığı: Tutarlı fiziksel saldırganlık, davetsiz misafirin hızlı ve sağlam bir şekilde yenilgiye uğratılmasına yol açar6. Deneyler ve deneyciler arasındaki prosedürleri standartlaştırmak için, saldırganlığın kesin nicel ölçümüne izin veren operasyonel bir saldırı tanımı57 kullanıldı.
Saldırganlığın hazırlanması: Kronik sosyal yenilgi deneyleri sırasında, saldırıların sayısı büyük ölçüde değişmiş ve deneyin son günlerinde azalmıştır (Şekil 2B). CD-1 farelerinin ergen C57BL / 6 erkek farelere karşı agresif davranışını arttırmak için, CD-1 fareleri, ev kafeslerine sokulan farelerden bağımsız olarak aktif olarak agresif olacak şekilde hazırlandı. Bu davranış, ergen fareden 1 dakika önce yetişkin bir C57BL / 6 erkek farenin tanıtılmasıyla elde edildi ve CD-1 faresini, yetişkin alındıktan sonra ergen farelere saldırmaya teşvik etti.
Modelin süresi: PND 21'deki ergen C57BL / 6 fareleri çok küçüktür ve CD-1 fareleri tek bir atakla onları ciddi şekilde yaralayabilir. Bu nedenle, erken ergenliği hedeflemek ve hala tekrarlanan sosyal yenilgi seanslarına sahip olmak için, klasik 10 günlük kronik sosyal yenilgi stresine alternatif bir model seçildi. Hızlandırılmış sosyal yenilgi stresi (AcSD)42 , sabah ve öğleden sonra olmak üzere günde iki seans fiziksel saldırganlıktan oluşur ve toplam 4 gün (8 seans) sürer. AcSD modeli, ergen farelerin yaşının PND 21'den PND 25'e yükselmesine izin verdi ve yine de sadece erken ergenliği hedefliyordu.
Ergenlikte AcSD'nin sınırlamaları AcSD modelinin bazı sınırlamaları vardır. Yetişkinlerde kronik sosyal yenilgi modeli ile karşılaştırıldığında, AcSD, ergen C57BL / 6 farelerinin CD-1 farelerinin iki katının taranmasını gerektirir. Hazırlama aşamasının süresi, CD-1 farelerinin agresif davranışına bağlı olarak değişebilir; bu nedenle, AcSD programı beklentiyle planlanmalı ve tüm bu değişkenlerin dikkate alınması gerekir. Ergen farelerin çoğu, AcSD'ye maruz kaldıktan sonra sosyal kaçınmaya karşı direnç göstereceğinden, temsili sayıda duyarlı fare elde etmek için, deney kohortu erkekler için en az 20 hayvan ve dişiler için 30 hayvan içermelidir.
Ergen farelerde AcSD, deneysel kohortlarda tutarlı sonuçlar verir Hem kronik sosyal yenilgi hem de AcSD protokolleri ile sosyal strese maruz kaldıktan sonra, çoğu ergen erkek fare sosyal kaçınmaya karşı direnç gösterdi. Bununla birlikte, kronik sosyal yenilgi modeli için, CD-1'in saldırı sayısındaki değişkenliği kafa karıştırıcı bir değişken olarak göz ardı etmek mümkün değildi. Buna karşılık, AcSD deneyleri için, CD-1 fareleri, oturumlar boyunca tutarlı sayıda saldırı elde etmek için her yenilgi oturumundan önce hazırlanır (Şekil 2D, E). Genel olarak, AcSD'ye maruz kalan farelerin tüm deneysel kohortları, oturumlar arasında benzer sayıda saldırı göstermektedir (Şekil 2D); bununla birlikte, kronik sosyal yenilgi modeline maruz kalan fare kohortları için durum böyle değildir (Şekil 2B).
Yetişkin C57BL / 6 dişi farelerde kronik sosyal yenilgi stresini kullanmak, bu modeli diğer türlerde vesuşlarda kullanan diğerlerine kıyasla zor olmuştur 9,13,45,61. Ergen C57BL / 6 dişi farelerde yapılan AcSD deneyleri için, CD-1 farelerinin agresif davranışını sağlamak için hazırlama aşaması uzatıldı (Şekil 4A). Bununla birlikte, kadın deney kohortları arasında saldırı sayısında değişkenlik gözlenebilir (Şekil 4B). Bununla birlikte, bu deneylerde, tüm CD-1 fareleri dişilere karşı agresif davranışlar gösterdi. Atak sayısını artırmak için, erkek farelerle hazırlama 1 dakikaya kadar uzatılabilir. Erkeklerde olduğu gibi, sosyal kaçınmaya karşı dirençli ergen C57BL / 6 dişi farelerin oranı, duyarlılık gösterenlerden daha yüksekti (Şekil 4C, D). Ayrıca, atak sayısı dirençli ve duyarlı fareler arasında farklılık göstermemiştir (Şekil 4E), bu da fenotipin ataklardan bağımsız olduğunu göstermektedir. AcSD, ergen C57BL / 6 dişi farelerde kullanılabilir ve deneyler aynı CD-1 fareleri kullanılarak her iki cinsiyette de aynı anda yapılabilir.

Kronik sosyal yenilgi stresi paradigması, yetişkin doğum sonrası gün (PND) >65 erkek kemirgende sosyal stresi modellemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu paradigma, bir davetsiz misafir bölgesini istila ettiğinde yetişkin bir erkek kemirgenin doğal saldırgan davranışına dayanmaktadır. Bu model, sıçanlar, hamsterlar ve fareler 1,2,3,4,5,6,7,8,9 dahil olmak üzere çeşitli kemirgen türlerinde kullanılır ve yaklaşık 10 gün süren fiziksel saldırganlık ve psikolojik stresin bir kombinasyonundan oluşur, bu sırada bir davetsiz misafir kemirgen, yerleşik kemirgenden birkaç dakikalık fiziksel saldırganlık deneyi yapar. İki kemirgen, sakinin ev kafesinde kalır ve duyusal ancak fiziksel temasa izin vermeyen bir bölücü ile ayrılır7. Fare deneylerinde, en yaygın olarak kullanılan yerleşik/saldırgan fareler, davetsiz misafir farelerekarşı sağlam bölgesel davranış gösteren emekli damızlık İsviçre CD-1 fareleridir 6,7. Davetsiz misafir fareler için en iyi karakterize edilen suş, akrabalı C57BL/6 suşu 2,4,5'tir. Yenilen fare, saldırganın alışmasını önlemek için her gün yeni bir saldırgana maruz kalır. Kontrol fareleri her gün farklı bir türdeşle barındırılır. Son yenilgi seansından 24 saat sonra, deneysel fareler, yeni bir CD-1 faresinin (hedef) yokluğunda (hedefsiz) veya varlığında açık bir alanı keşfedebilecekleri bir sosyal etkileşim testinde (SIT) test edilir. Kontrol fareleri, görevin hedef olmayan kısmına kıyasla hedefle etkileşim bölgesinde daha fazla zaman harcarlar. Yenilen fareler, sosyal etkileşim oranına göre (saldırganın bulunduğu etkileşim bölgesinde geçirilen süre / saldırganın olmadığı etkileşim bölgesinde geçirilen süre) duyarlı (oran<1) veya dayanıklı (oran>1) olarak sınıflandırılır. Bu prosedür, strese yanıt olarak bireysel farklılıkları incelemek için yararlı bir araç sağlar.
Son yıllara kadar, kronik sosyal yenilgi stresi modeli daha çok yetişkin erkek farelerde kullanılmıştır, çünkü vurgulanmış erkek egemenlik hiyerarşileri erkeklere karşı savaşmayı içerir, ancak dişilere karşı savaşmayı içermez 6,7. Ayrıca, erkek kemirgenler tipik olarak dişilere saldırmazlar; bunun yerine çiftleşme davranışlarında bulunurlar10. Bu engellere rağmen, yetişkin dişi fareler için kronik sosyal yenilgi stresi paradigmasını uyarlamak için farklı stratejiler geliştirilmiştir. Örneğin, Kaliforniya faresinin sosyal yenilgi modeli, bu tek eşli türün bölgelerini savunurken her iki cinsiyetten de doğal saldırganlığına dayanmaktadır 9,11. Diğer yaklaşımlar, ventromedial hipotalamuslarını tutarlı agresif davranışasahip olmaları için uyararak CD-1 farelerinin agresif davranışını indüklemeye odaklanır 10,12 veya CD-1 saldırganlarından13 saldırılar almak için deneysel yetişkin dişi farelere erkek idrarı uygulayarak CD-1 farelerinin agresif davranışını indüklemeye odaklanır. CD-1 farelerinin bu yüksek ve tutarlı saldırganlığı, deneysel davetsiz misafir farenin, etkileşimin uzunluğu boyunca saldırgan tarafından tekrarlanan saldırılara karşı açık davranışsal itaat belirtileri göstermesi için kritik öneme sahiptir6.
Kronik sosyal yenilgi modelinin ergen C57BL/6 farelerde kullanılmak üzere uyarlanması Ergenlik, beynin mikro ve makro mimarisindeki, özellikle prefrontal korteksteki değişikliklere paralel olarak ortaya çıkan, önemli psikososyal olgunlaşmanın damgasını vurduğu bir dönemdir. Hem insanlarda hem de kemirgenlerde, ergenlik döneminin spesifik başlangıcı ve sonu ile ilgili çok az fikir birliği vardır14,15. Ayrıca, ergenlik döneminde devam eden beyin ve bilişsel gelişimin deneyim kaynaklı bozulması için kritik savunmasızlık pencereleri vardır 16,17,18,19. Ergenlik ve ergenlik aynı anda ortaya çıkar, ancak bu terimler eşanlamlı değildir. Ergenlik, cinsel olgunlaşmanın başlangıcını ifade ederken, ergenlik, gençlik durumundan bağımsızlığa ulaşmaya kademeli geçiş ile karakterize edilen daha geniş bir aşamayı temsil eder20. Farklı gruplar, farelerde ergenliğin sütten kesmeden (PND 21) yetişkinliğe (PND 60) kadar uzandığını öne sürmüştür21. Özellikle, erken ergenlik sütten kesimden sonraki birinci ve ikinci haftalar (PND 21-34) ve orta ergenlik PND 35-48 dönemi olarak adlandırılabilir. Bu aralıklar, örneğin dopamin sisteminingelişimi 22,23,24, nöronal ağların geliştirilmesi üzerindeki ilaç etkilerine karşı savunmasızlık 17,25,26,27 ve farklı davranışsal özellikler16,20,28,29,30 ile ilgili ayrı gelişim dönemlerini kapsar 'dir.
Sosyal yenilgi protokolü için yerleşik farenin dövüş davranışı gereklidir. Bununla birlikte, dişi farelerde olduğu gibi, erkekler tipik olarak erken ergen farelerle agresif etkileşimlere girmezler, çünkü muhtemelen onları bir tehdit olarak algılamazlar. Ergen C57BL / 6 farelerinde kronik sosyal yenilginin etkilerini araştıran çalışmaların çoğu, orta ergenlik dönemindegerçekleştirilmiştir 31,32,33,34,35; diğerleri ergenlik maruziyetinin doğum sonrası gününübelirtmez 36,37 veya yenilgi günlerini erken yetişkinliğe38 uzatır veya duyusal temasaizin vermez 39; Ergen fareler üzerinde yapılan diğer çalışmalar farklı suşlar kullanır 40,41. Ergen erkek farelerde kronik sosyal yenilgi stresi kullanan bu çalışmaların özellikleri Tablo 1'de özetlenmiştir.
Araştırma grubumuz, C57BL / 6 farelerinde erken ergenlik de dahil olmak üzere belirli ergen maruz kalma pencerelerini hedeflemekle ilgilenmektedir. Farklı ergenlik dönemlerinin kısa sürmesi nedeniyle, kronik sosyal yenilgi stresi paradigmasının hızlandırılmış versiyonunun değiştirilmiş bir versiyonu tasarlanmıştır42. Bu model, ergen fareler için hızlandırılmış sosyal yenilgi stresi (AcSD) olarak adlandırıldı. Önceki çalışmalar, sıçanlarda 8,26,43,44,45 ergenlik döneminde sosyal strese duyarlılıkta ve ayrıca sosyal stresin insanlarda ruh sağlığı yörüngeleri üzerindeki zararlı etkilerinde önemli cinsiyet farklılıkları olduğunu göstermektedir 46,47,48,49,50,51,52, 53,54,55,56. AcSD modeli, ergen dişi fareler için de etkili bir şekilde çalışır ve potansiyel cinsiyete özgü sonuçları araştırmalarına ve nörobiyolojik temeli keşfetmelerine olanak tanır.
Tablo 1: Ergen erkek farelerde sosyal yenilgi stres paradigmalarını kullanan çalışmalar. Tür ve türler: Kaliforniya Faresi: Peromyscus californicus. C57BL/6: Mus musculus siyah 6 akraba fare türü. C57BL/6J: Jackson'ın laboratuvarları tarafından sağlanan M. musculus siyah 6 akraba fare modeli. CD-1: M. musculus , İsviçre soyundan gelen albino fare türünden. ICR: M. musculus Kanser Araştırmaları Enstitüsü soyundan çıkmış albino fare türü. OF1: M. musculus Oncins France 1 soylu albino fare türü. Kısaltmalar: wk = hafta; PND = Doğum sonrası gün; res = dirençli; Sus = duyarlı; unsus = duyarlı değil. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Table%201_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 ergen fareler&nbsp;</td><td>Ev yetiştiriciliğinde</td><td></td><td>fareler, Douglas Ruh Sağlığı Üniversitesi Enstitüsü'nün Nörofenotipleme Merkezi'nde yetiştirildi.</td></tr><tr><td>C57BL / 6 yetişkin fareler&nbsp;</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Suş Kodu: 027</td><td>Fareler, PND>65'e varacak şekilde sipariş edilir ve standart fare kafeslerinde grup halinde (kafes başına dört fare)</td></tr> barındırılır.<tr><td>C57BL/6J ergen fareler&nbsp;</td><td>Jackson Labs</td><td>Gerinim Kodu: 000664; RRID:IMSR_JAX:000664</td><td>Fareler, PND 24'e varacak şekilde sipariş edilir ve standart fare kafeslerinde grup halinde (kafes başına dört fare)</td></tr> barındırılır.<tr><td>CD-1 fareler&nbsp;</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Suş Kodu: 022</td><td>Fareler, üç aylıktan büyük emekli yetiştiriciler ve baştan sona barındırıldı.</td></tr><tr><td>Temizleme solüsyonu&nbsp;</td><td>Virox Hayvan Sağlığı</td><td>DIN 02537222</td><td>hakimdir: hızlandırılmış hidrojen peroksit. Dezenfekte edici temizleyici ve koku giderici.</td></tr><tr><td>Şeffaf delikli akrilik cam bölücü &nbsp;</td><td>Douglas Hastanesi tarafından üretilmiştir, özel sipariş</td><td></td><td>0,6 cm (g) & kez; 45,7 cm (d) & kez; 22,23 cm (y); 0,6 cm çapında delikler. Bölücüler deliklidir, duyusal olarak izin verir, ancak fare çifti arasında fiziksel temas yoktur.</td></tr><tr><td>Şeffaf dikdörtgen sıçan kafesleri&nbsp;</td><td>Allentown</td><td></td><td>24 cm (g) & kez; 48.3 cm (d) & kez; 22.23 (y).</td></tr><tr><td>Yatak takımları için pamuklu kareler</td><td>Inotiv Envigo</td><td>T.6060 iso-BLOX</td><td>2,5 cm x 2,5 cm. Sosyal yenilgi aparatına eklendi.</td></tr><tr><td>Sert talaş yatak</td><td>takımı Inotiv Envigo</td><td>Teklad 7090, 7115</td><td>Sani-chip yatak takımı.</td></tr><tr><td>Çelik tel üst kısımları sabitlemek için büyük bağlayıcı klipsler</td><td>ZIMBA</td><td>Ürün #: 132429, Model #: 24178-CA</td><td>51 mm</td></tr><tr><td>Çelik tel üstleri sabitlemek için orta bağlayıcı klipsler</td><td></td><td>Ürün #: 132367, Model #: 24172-CA</td><td>32 mm, fare kafeslerinin kapak kapaklarının büyük klipslerle kapanmaması durumunda</td></tr><tr><td>Ağrı kesici krem</td><td>Polysporin</td><td></td><td>Plus Ağrı Giderici Krem (kırmızı format, Merhem DEĞİL), 2 Antibiyotik artı lidokain hidroklorür</td></tr><tr><td>Eşleştirilmiş Çelik tel üstleri&nbsp;</td><td></td><td></td><td>24 cm (g) ve kez; 48 cm (d), ızgara arasında 0,6 cm (g) mesafe ile</td></tr><tr><td>Çıkarılabilir tel örgü muhafaza&nbsp;</td><td>Johnston endüstriyel plastikler</td><td></td><td>11 cm (g) & kez; 6,8 cm (d) & kez; 42 cm (y) özel sipariş; Her sosyal etkileşim için iki adet önceden kesilmiş şeffaf polikarbonatla sabitlenmiş</td></tr><tr><td>test alanı Sosyal etkileşim açık alan arenası</td><td>PEXIGLAS</td><td></td><td>45 cm (g) & kez; 45 cm (d) & kez; 49 cm (y), opak akrilik camdan (Pleksiglas) özel olarak üretilmiştir</td></tr>.<tr><td>Kronometre&nbsp;</td><td></td><td></td><td>Yenilgi oturumlarını zamanlamak için</td></tr><tr><td>Kızılötesi ışıklı video kamera&nbsp;</td><td>Swann</td><td>SRDVR-44580V&nbsp;</td><td>Swann Kamera - 4 Kanal 1080p Dijital Video Kaydedici & 2 x PRO-T853</td></tr><tr><td>Video izleme yazılımı&nbsp;</td><td>Topscan</td><td></td><td>2.0 Akıllı Sistemler A.Ş.</td></tr></tbody></table>

ergen c57bl/6 erkek ve dişi fareler için sosyal yenilgi stres modeli

Social Defeat Stress Model for Adolescent C57BL&#47;6 Male and Female Mice

Ergenlik döneminde sosyal sıkıntı yaygındır ve ruh sağlığı yörüngelerini olumsuz yönde etkileyebilir. Ergen erkek ve dişi kemirgenlerde sosyal stresin modellenmesi, devam eden beyin gelişimi ve davranışsal sonuçlar üzerindeki etkilerini anlamak için gereklidir. Kronik sosyal yenilgi stresi paradigması (CSDS), yetişkin bir erkek kemirgenin kendi bölgesini istila eden bir davetsiz misafire karşı sergilediği saldırgan davranıştan yararlanarak yetişkin C57BL / 6 erkek farelerde sosyal stresi modellemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu paradigmanın bir avantajı, mağlup fareleri, son yenilgi seansından 24 saat sonra sosyal davranışlarındaki bireysel farklılıklarına dayanarak esnek ve duyarlı gruplara ayırmaya izin vermesidir. Bu modeli ergen C57BL / 6 farelerinde uygulamak zor olmuştur çünkü yetişkin veya ergen fareler tipik olarak erken ergen erkek veya dişi farelere saldırmaz ve ergenlik kısa bir yaşam periyodu olduğu için gizli zamansal kırılganlık pencerelerini kapsar. Bu sınırlama, ergen erkek ve dişi fareler için kullanılacak CSDS'nin hızlandırılmış bir versiyonunun uyarlanmasıyla aşıldı. Günde 2 fiziksel saldırı seansı içeren bu 4 günlük stres paradigması, CD-1 faresini erkek veya dişi ergen fareye kolayca saldıracak şekilde saldırganlığa hazırlamak için bir C57BL / 6 erkek yetişkin kullanır. Bu model, ergen fareler için hızlandırılmış sosyal yenilgi stresi (AcSD) olarak adlandırıldı. Ergenlerin AcSD'ye maruz kalması, hem erkeklerde hem de kadınlarda 24 saat sonra sosyal kaçınmaya neden olur, ancak yalnızca mağlup farelerin bir alt kümesinde. Bu güvenlik açığı, saldırı sayısının dayanıklı ve duyarlı gruplar arasındaki oturumlar arasında tutarlı olmasına rağmen oluşur. AcSD modeli, ergenlik dönemindeki ayrı dönemlerde maruz kalmaya izin verecek kadar kısadır, farelerin sosyal kaçınma davranışının varlığına veya yokluğuna göre ayrılmasına izin verir ve ergen C57BL / 6 dişi farelerde sosyal yenilgi stresini incelemek için mevcut olan ilk modeldir.

Ergen C57BL / 6 erkek farelerde (PND 21) kronik sosyal yenilgi stresi modeli kullanılarak toplam dört farklı deney yapıldı. Bununla birlikte, bu model, erken ergen C57BL / 6 farelerinde kullanımı için önemli sınırlamalar sunmuştur.
Ergen C57BL/6 fareler için gerekli ekipman modifikasyonları İlk sınırlama, sosyal yenilgi aygıtı için kullanılan ekipmanın yetişkin fareler için tasarlanmış olmasıydı. Büyüklükleri nedeniyle, PND 21'deki ergen C57BL / 6 fareleri, bölücülerin deliklerinden saldırgan tarafa geçebildi. Bu, duyusal temas süresini kesintiye uğrattı. Ek olarak, ergen fareler çelik tel üstlerinin çubuklarından kaçmayı başardılar. Bu nedenle, farelerin kaçmasını önlemek için ekipman değiştirildi (Şekil 1). Deliklerin çapı 1,1 cm'den 0,6 cm'ye değiştirildi (Şekil 1B) ve çelik tel üst kısım, çubuklar arasında 1,1 cm mesafe olan bir üst kısımdan 0,6 cm mesafe olan bir üst kısımla değiştirildi (Şekil 1C). Ek olarak, üst kısım klipslerle sabitlendi ve fare kafesleri de koruyucu pamuk içermeyen plastik örtülerle kaplandı. Talaş yatakları da ergen fareler için uygun bir seviyeye ayarlandı (Şekil 1D-F).
AcSD modeli, tutarlı, agresif nöbetler sağlamak için yetişkin erkek CD-1 farelerinin astarlanmasını gerektirir İkinci ve daha önemli sınırlama, CD-1 farelerinin ergen farelere karşı fiziksel saldırganlığındaki tutarlılık eksikliğiydi. Kronik sosyal yenilgi seansları sırasında, saldırganlık, 10 dakikalık seans boyunca sıfır agresif ataklardan, ergen farelerin küçük boyutu nedeniyle ölümcül olan bir veya iki ısırığa kadar değişiyordu. Bununla birlikte, CD-1 fareleri birden fazla deney için kullanılmışsa, saldırı sayısındaki tutarlılık artmıştır.
Şekil 2B , her bir kronik sosyal yenilgi deneysel kohortu (P0, A0, A1 ve A2) için günlük saldırı sayısını göstermektedir. Gün ve kohort arasında bir etkileşim bulundu (Şekil 2B, iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA: F(27, 234) = 3.83, p &lt; 0.0001), günün ana etkisi (F(6.288, 163.5) = 6.2, p &lt; 0.0001) ve kohortun ana etkisi (F(3, 26) = 3.8, p = 0.02). Post hoc test, 1, 2, 3 ve 7. günlerde kohortlar arasında farklılıklar ortaya çıkardı (Holm-Sidak post hoc testleri: 1. gün, P0 vs. A2, p = 0.02; A1 ve A2, p = 0.02; 2. gün, A1 ve A2, p = 0.04; gün, 3 A0 ve A1, p = 0.007; A1'e karşı A2, p = 0.04; 7. gün, A0 ve A1, p = 0.04). P0 ve A0 deneylerindeki tüm CD-1 fareleri son 3 gün içinde saldırmayı bıraktı. P0 ve A0 deneyleri için kullanılan CD-1 fareleri, saldırılarda bir tutarlılık olduğu A1'de kullanıldı (Şekil 2B), bu da CD-1'in daha önce fiziksel etkileşimlere maruz kaldığında saldırganlığa daha yatkın olduğunu gösterdi.
Bu nedenle, adım 2.1 ve 2.2'de açıklandığı gibi, CD-1 fareleri, ergen farelere yönelik saldırganlıkları için özel olarak tarandı ve ergen C57BL / 6 farelerine karşı saldırganlık için yetişkin bir C57BL / 6 erkek ile hazırlandı. Ayrıca, yaşı PND 21'den PND 25'e çıkarmak ve hala erken ergenliği hedeflemek için AcSD kullanıldı.
AcSD oturumları sırasında, CD-1 fareleri, Şekil 2D'de gösterildiği gibi daha tutarlı bir şekilde ergen farelere yönelik saldırıların sayısını arttırdı. Kronik sosyal yenilgi paradigmasının aksine, oturum ve deneysel kohort arasında anlamlı bir etkileşim bulunamadı (Şekil 2D, iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA: F(35, 483) = 1.33, p = 0.1), oturumun ana etkisi (F(5.644, 389.5) = 14.15, p &lt; 0.0001) ve kohortun ana etkisi (F(5, 69) = 7.91, p &lt; 0.0001); Holm-Sidak post hoc testi kohortlar arasında anlamlı farklılıklar göstermedi. Kohortlar arasındaki saldırı ortalamalarının karşılaştırılması, bu etkinin çoğunlukla önemli ölçüde daha yüksek sayıda saldırıya sahip olan kohort A7 tarafından yönlendirildiğini ortaya koydu (veriler gösterilmedi, tek yönlü ANOVA F(5, 69) = 7.911, p &lt; 0.0001; Holm-Sidak post hoc testleri: A3 ve A6, p = 0.04; A7 ve A5, p = 0.002; A7 ve A6, p &lt; 0.0001; A7 ve A8, p = 0.0001).
Ergen fareler, AcSD sırasında astarlanmış CD-1 fareleriyle, kronik bir sosyal yenilgi protokolüne maruz kalan ergen farelere göre daha fazla saldırı aldı (Şekil 2E, Welch düzeltmesi ile eşleşmemiş t-testi, t = 15.40, df = 17.87, p &lt; 0.0001) saf (astarlanmamış) CD-1 fareleri kullanarak. Saldırılar, kronik sosyal yenilgi protokolü sırasında tutarlı değildi ve aslında, birkaç deney faresi hiç saldırıya uğramadı.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66455/66455fig02.jpg"> Şekil 2: Kronik sosyal yenilgi stresi ile AcSD arasındaki günlük atak sayısının karşılaştırılması. (A) Kronik sosyal yenilgi stresi modelinin zaman çizelgesi. (B) Ergen C57BL / 6 erkek farelerde kronik sosyal yenilgi stresi sırasında her deneysel kohort (P0, P1, A1 ve A2) için günlük saldırı sayısı (iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA). (C) Hızlandırılmış sosyal yenilgi stresi (AcSD) modelinin zaman çizelgesi. (D) Ergen C57BL / 6 erkek farelerde AcSD sırasında her deneysel kohort (A3-A8) için günlük saldırı sayısı (iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA). (E) Ortalama saldırı sayısı AcSD için anlamlı olarak daha yüksekti (Welch düzeltmesi ile eşleşmemiş t testi, ****p &lt; 0.0001). Tüm veriler ortalama ± SEM olarak gösterilir. Kısaltmalar: CSDS = kronik sosyal yenilgi stresi; SIT = sosyal etkileşim testi; PND = doğum sonrası gün; P0, A0-A8 = her deneysel kohort için etiketler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/66455fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
AcSD oturumları sırasındaki atak paterni 24 saat sonra sosyal fenotipi etkilemez Sosyal yenilgi stresine maruz kaldıktan sonra, çoğu ergen erkek fare, SIT'de test edildiğinde sosyal kaçınma göstermedi (Şekil 3B, kronik sosyal yenilgi: tek yönlü ANOVA F (2, 43) = 14.57, p &lt; 0.0001. F, AcSD: Kruskal-Wallis testi, H(2) = 72.35, p &lt; 0.0001). Her iki model için de, sosyalden kaçınan ve sosyal kaçınmayan mağlup fareler arasındaki saldırı sayısında anlamlı bir fark yoktu (Şekil 3D, kronik sosyal yenilgi: iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA, F(9, 252) = 4.07, p = 0.21. H. AcSD: iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA, F(7, 511) = 1.32, p = 0.24). Bununla birlikte, kronik sosyal yenilgiyi takiben dirençli farelerin oranı, AcSD maruziyetini takiben olduğundan daha yüksekti (Şekil 3C, G,% 70'e karşı% 55.26, binom testi (tek kuyruklu), p = 0.0047).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66455/66455fig03.jpg"> Şekil 3: Kronik sosyal yenilgi stresi ve AcSD paradigmalarını takiben sosyal etkileşim testi (SIT) puanlarının karşılaştırılması. (A) Kronik sosyal yenilgi stresi modelinin zaman çizelgesi. (B) Ergenlikte kronik sosyal yenilgi stresi sonrası SIT puanının dağılımı (tek yönlü ANOVA). (C) Ergenlik döneminde kronik sosyal yenilgi stresinden sonra dirençli/duyarlı oranı. (D) Kronik sosyal yenilgi stresi sırasında alınan fenotipe göre atak sayısı, dirençli ve duyarlı arasında anlamlı bir fark bulunmadı (iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA). (E) Hızlandırılmış sosyal yenilgi stresi (AcSD) modelinin zaman çizelgesi. (F) Ergenlikte AcSD sonrası SIT puanının dağılımı (Kruskal-Wallis). Bu rakam57'den değiştirildi. (G) Ergenlikte AcSD'den sonra dirençli / duyarlı oranı. Bu rakam57'den değiştirildi. (H) AcSD sırasında alınan fenotipe göre saldırıların sayısı; esnek ve duyarlı arasında bir fark yoktur (iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA). Bu rakam59'dan değiştirildi. **p &lt; 0.001, ****p &lt; 0.0001. Tüm veriler ortalama ± SEM olarak gösterilir. Kısaltmalar: PND = doğum sonrası gün; Con = kontroller; Res = dayanıklı; Sus = duyarlı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/66455fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
AcSD, ergen C57BL / 6 dişi farelerde kullanılabilir PND 25 C57BL / 6 erkek ve dişi fareler üreme olgunluğuna ulaşmadığından, hazırlanmış CD-1 fareleri, ergen erkek farelere karşı olduğu gibi ergen dişi farelere karşı agresif saldırılar gösterebilir. Bununla birlikte, tutarlı bir saldırı sayısına ulaşmak için hazırlama aşamasının uzatılması gerekiyordu (Şekil 4A). Şekil 4B'de gösterildiği gibi, deneyler arasında gün ve kohort arasında etkileşim bulunamadı (Şekil 4B, iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA: F(35,707) = 1.38, p = 0.07), oturumun ana etkisi (F(6.286, 634.9) = 16.1, p &lt; 0.0001) ve kohortun ana etkisi (F(5, 101) = 11.34, p &lt; 0.0001; Holm-Sidak post hoc testleri: oturum 2 C4 ve C8, p = 0.03; oturum 6 C7'ye karşı C4, p = 0.02; C7'ye karşı C5, p = 0.02; oturum 7 C8 ve C3, p = 0.02; C8'e karşı C4, p = 0.045). AcSD'ye maruz kalan ergen C57BL / 6 dişi farelerin çoğu, ergen erkek farelere benzer şekilde sosyal kaçınmaya karşı dirençliydi (Şekil 4C, Brown-Forsythe'ın ANOVA'sı: F (2,113.4) = 27.2, p &lt; 0.0001). Dirençli ve duyarlı fareler arasında atak sayısında anlamlı bir fark bulunmadı (Şekil 4E, iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA, oturum x fenotip etkileşimi: F(7, 714) = 0.73, p = 0.64, oturum F(6.375, 650.3) = 7.02, p &lt; 0.0001, fenotipin ana etkisi yok (1, 102) = 0.4, p = 0.53).
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66455/66455fig04.jpg"> Şekil 4: Ergen dişi farelerde AcSD. (A) Deneyin zaman çizelgesi. (B) AcSD sırasında deney ile günlük saldırı sayısı (iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA). (C) Dişi farelerde ergenlik döneminde AcSD sonrası SIT skorunun dağılımı (Brown-Forsythe'ın ANOVA'sı). (D) Ergenlikte AcSD sonrası dirençli / duyarlı oranı (sağda). (E) AcSD sırasında alınan fenotipe göre saldırıların sayısı; esnek ve duyarlı fareler arasında anlamlı bir fark bulunamadı (iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA). Tüm veriler ortalama ± SEM olarak gösterilir. (C-E) Bu rakamlar59'dan değiştirilmiştir. Kısaltmalar: SIT = sosyal etkileşim testi; PND = doğum sonrası gün; C3-C8 = her deneysel kohort için etiketler; Con = kontroller; Res = dayanıklı; Sus = duyarlı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/66455fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 1: Yetişkinlerle taramanın 1. günü için puanlama sayfası şablonu. Kısaltmalar: CD-1 = Taranan CD-1 farelerinin kimliği, Exp = Deney Kimliği, 3 dk = C57BL / 6 yetişkin fareler için tarama oturumunun süresi, BL6 Kimliği = Tarama için kullanılan C57BL / 6 yetişkin farelerin kimliği, Lat 1 YETİŞKİNLER = CD-1'den C57BL / 6 yetişkin fareye doğru ilk saldırının gecikmesi, # saldırganlıklar = CD-1 tarafından gerçekleştirilen saldırıların sayısı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%201_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 2: Yetişkinler ve ergenlerle yapılan tarama için puanlama sayfası şablonu. Kısaltmalar: Exp = Deney ID, 1 dk = C57BL/6 yetişkin fareler için tarama oturumunun süresi, BL6 ID = Tarama için kullanılan C57BL/6 yetişkin farelerin ID'si, Lat 1 YETİŞKİNLER = CD-1'den C57BL/6 yetişkin fareye doğru ilk saldırının gecikmesi, # saldırganlıklar = CD-1 tarafından gerçekleştirilen saldırı sayısı, 5 dk = C57BL/6 ergen fareler için tarama oturumunun süresi, BL6 Ad = Tarama için kullanılan C57BL / 6 ergen farelerin kimliği, Lat 1 Ergenler = CD-1'den C57BL / 6 ergen fareye doğru ilk saldırının gecikmesi, CD-1 = Taranan CD-1 farelerinin kimliği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%202_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 3: Hazırlama aşaması için puanlama sayfası şablonu. Kısaltmalar: CD-1 = Hazırlama için kullanılan CD-1 farelerinin kimliği, Exp = Deney Kimliği, 30 sn = C57BL/6 yetişkin fareler için hazırlama oturumunun süresi, BL6 ID = Hazırlama için kullanılan C57BL/6 yetişkin farelerin kimliği, Lat 1 YETİŞKİNLER = CD-1'den C57BL/6 yetişkin fareye doğru ilk saldırının gecikmesi, # saldırganlıklar = CD-1 tarafından gerçekleştirilen saldırıların sayısı, Min: 3 = C57BL / 6 ergen fareler için hazırlama oturumunun süresi, BL6 Ad = Hazırlama için kullanılan C57BL / 6 ergen farelerin kimliği, Lat 1 Ergenler = CD-1'den C57BL / 6 ergen fareye doğru ilk saldırının gecikmesi, # montaj = C57BL / 6 ergen fareler tarafından alınan montaj sayısı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%203_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 4: Sosyal yenilgi planlaması için puanlama sayfası şablonu (20 ergen fare). Kısaltmalar: CD1 = CD-1 farelerinin kimliği, E = Deney, H = Nem, 1 st = Oturum 1, 2. = Oturum 2, BL6 yetişkin = Astarlama için kullanılan C57BL / 6 yetişkin farenin kimliği, Ağırlık = C57BL / 6 ergen farenin ağırlığı, # ataklar = CD-1 tarafından gerçekleştirilen saldırı sayısı, # yaralar = C57BL / 6 ergen fareler tarafından alınan yara sayısı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%204_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 5: Sosyal yenilgi planlaması örneği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%205_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 6: Yetişkin C57BL/6 erkek farelerin yaralanma izlemesi için şablon. Kısaltmalar: 1. - # yaralar = C57BL / 6 yetişkin farenin 1. oturumda aldığı yara sayısı, 2. - # yaralar = C57BL / 6 yetişkin farenin 2. oturumda aldığı yara sayısı, BL6 = Astarlama için kullanılan C57BL / 6 yetişkin farenin kimliği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%206_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 7: Kontrol grubu planlama şablonu (10 ergen fare). Karıştırma kuralları: Aynı özelliği tekrarlamayın; Bir fare aynı gün içinde kutunun aynı tarafını tekrarlayamaz; fareler, ev kafeslerinden farklı kafeslerden farelerle karıştırılmalıdır; ev kafesleri numaralandırılmıştır; Fare numaraları, ev kafes numarasına bağlı olarak verilir; Mağlup ve kontrol grupları ev kafesinden rastgele alınır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%207_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 8: Kontrol grubu zamanlama örneği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%208_RE.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Hem erkeklerde hem de kadınlarda çalışan ve ayrı ergenlik dönemlerinde maruz kalmaya izin veren ergen C57BL / 6 fareleri için hızlandırılmış bir sosyal yenilgi stres modeli geliştirdik. Bu modele maruz kalmak, sosyal kaçınmaya neden olur, ancak yalnızca mağlup erkek ve dişi farelerin bir alt kümesinde.

Ergen C57BL/6 Erkek ve Dişi Fareler için Sosyal Yenilgi Stres Modeli

Social adversity in adolescence is prevalent and can negatively impact mental health trajectories. Modeling social stress in adolescent male and female ...

Ergen sosyal sıkıntısının nörogelişim ve davranışsal sonuçlar üzerindeki etkisini, özellikle erkek ve dişi C57BL / 6 farelerine odaklanarak araştırıyoruz. Kronik sosyal mağlup stres paradigmasının uyarlanmış bir versiyonunu kullanarak sosyal sıkıntıyı modelliyoruz. Hızlandırılmış sosyal mağlup stres adı verilen modelimiz, ergen C57BL / 6 farelerinde kullanımı için uyarlanmıştır.Sosyal mağlup stres protokolü, yerleşik farenin agresif davranışlarını gerektirir. Mevcut çalışmalar genellikle orta ergenlik döneminde yürütülmektedir veya doğum sonrası maruziyet günü açısından bir özgüllükten yoksundur. Bazı çalışmalar erken yetişkinliğe kadar uzanır veya yaygın olarak kullanılmayan fare türlerini kullanır.Ergen C57BL / 6 farelerinde sosyal yenilgi modelini uygulamak zor olmuştur, çünkü yetişkin veya ergen fareler tipik olarak erken ergen erkek veya dişi farelere saldırmaz ve ergen, gizli zamansal savunmasızlık pencerelerini kapsayan kısa bir yaşam süresidir. ACSD modeli, hem erkeklerde hem de kadınlarda 24 saat sonra sosyal kaçınmayı başarılı bir şekilde indükler. Ergenlik dönemindeki gizli dönemlerde maruz kalmaya izin verecek kadar kısadır.Esnek ve duyarlı farelerin ayrılmasına izin verir ve ergen C57BL / 6 dişi farelerde sosyal mağlup stresi incelemek için mevcut olan ilk modelde. Modelimiz ergen erkek ve dişi C57BL/6 farelerinde kullanılmak üzere oluşturulmuştur. Günde iki fiziksel saldırı seansı içeren bu dört günlük stres paradigması, C1 faresini saldırganlığa hazırlamak için yetişkin bir C57BL / 6 erkek fare kullanır ve C1 faresinin deneysel erkek veya dişi fareye kolayca saldırmasını sağlar.

social-defeat-stress-model-for-adolescent-c57bl6-male-and-female-mice

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Y-labirent bariyer görevi ödül için çaba harcamak için motivasyon inceleyen bir davranış testidir. Burada, kronik kortikosteron ve bu davranış ile sosyal yenilgi stres idestmesi de dahil olmak üzere birden fazla iyi doğrulanmış kronik stres test tartışmak, yanı sıra yeni kronik non-ayrımcı sosyal yenilgi stres (CNSDS), hangi kadınlarda etkilidir.

Kronik Stres Shifts Çabalar-İlgili Seçim Davranış Farelerde Bir Y-Labirent Bariyer Görev

Sosyal tehdit-güvenlik testi, her ikisi de kronik olarak sosyal olarak mağlup olmuş erkek farelerden oluşan tek bir gruptaki strese duyarlı ve strese dayanıklı bireyleri tanımlamak için kullanılan, caydırıcı koşullu öğrenme ve sosyal tehdit-güvenlik ayırt etme yeteneğinin bir ölçümü olarak sosyal kaçınma gelişiminin eşzamanlı olarak değerlendirilmesine izin verir.

Sosyal Tehdit-Güvenlik Testi Psikososyal Stresle İlişkili Fenotipleri Ortaya Çıkarıyor

Bu protokol, farelerin %60'ından fazlasında yetişkinlikte uzun süreli sosyal kaçınma sağlamak için erken ergen erkek farelerde 10 günlük kronik sosyal yenilgi stresinin nasıl gerçekleştirileceğini detaylandırır.

Erken Ergen Erkek Farelerde Kronik Sosyal Yenilgi Stresi

Bu çalışma, dört günlük sosyal stresörleri entegre ederek, dişi C57BL / 6J farelerinde psikiyatrik bozukluklar için çoklu entegre bir sosyal stres (MISS) modelini tanımlamaktadır. On günlük tekrarlanan MISS maruziyetinden sonra, fareler depresif ve anksiyete benzeri fenotipler geliştirdi, böylece kadın deneklerde psikiyatrik bozuklukları incelemek için doğal, etiyolojiye dayalı bir hayvan modeli sağladı.

Dişi C57BL/6J Farelerde Psikiyatrik Bozukluklar için Çoklu Entegre Sosyal Stres Modeli

Lashley III labirent caydırıcı uyaran ya da görsel ipuçları dayanmaz bir rota-öğrenme görevi. Bu nedenle, özellikle yaşlanma fareler ya da başka stres dikkate, öğrenme ve hafıza değerlendirmek için son derece cazip bir seçenek.

Farelerde Lashley III Labirent Düşük stres Rota Öğrenme

Bu protokol açıklanan prosedür testosteron testosteron hakkında yönetim ve halk inançları, sosyal davranışları ile doğrudan karşı ilişkili olabileceğini göstermektedir.

Davranış Endokrinoloji ve Deneysel İktisat birleştiren: Testosteron ve Sosyal Karar Verme

Burada Crawley sosyallik ve sosyal yenilik testi için tercih kullanarak farelerde sosyallik incelenmesi için ayrıntılı bir protokol açıklar. Biz sonuçların doğru yorumlanması için önemli kritik ayrıntılar da dahil olmak üzere bu işlem için avantaj ve olası uygulamalar açıklanmaktadır.

Sosyal Etkileşim Davranışları Değerlendirme

Geliştirilmiş in vitro nörotoksisite testleri, yeni nöroprotektif bileşiklerin tanımlanmasına yardımcı olacaktır. Nöronal hücre hatlarında sitotoksisite ve sitoproteksiyonu belirlemek ve ikinci haberci yolakların katılımını tanımlamak ve böylece nöroproteksiyon mekanizması hakkında bilgi kazanmak için gerçek zamanlı empedans tabanlı bir hücre analizörünün faydası sunulmaktadır.

Bir Nöronal Hücre Line Neurotoxicity ve nöro ilgilendim Moleküler Pathways Delineate bir aracı olarak Real-Time Empedans tabanlı Cell Analyzer

Burada, stresli bireylerin kaçınma durumunu ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Bu paradigma güçlü ancak kullanıcı dostudur ve Drosophila melanogaster'de genlerin ve çevrenin bir tür sosyal etkileşim üzerindeki etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi Drosophila melanogaster

Bu makale melanogaste motivasyon incelemek için r Drosophila erkek çiftleşme sürücüsünü kullanan bir davranış deneyi anlatır. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar bu motivasyonu altında yatan genetik moleküler ve hücresel mekanizmaları ortaya çıkarmak için ileri sinek neurogenetic teknikler kullanabilirler.

Ölçme ve Male Değiştirme Çiftleşme Sürücü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Öğrenin ergen C57BL/6 farelerde hızlandırılmış sosyal yenilgi stres modelini. Bu yöntem, sosyal kaçınma davranışını tetikleyerek dayanıklı ve hassas bireyleri ayırt etmeyi sağlar.

Ergen C57BL/6 Erkek ve Dişi Fareler için Sosyal Yenilgi Stres Modeli

Daha fazla video keşfet