Yarı otomatik 8 kollu radyal labirentte fareler için iştah açıcı bir uzamsal çalışma belleği görevi, labirentteki korkulu hafıza ilişkisini azaltır

Kemirgenler için yapılan davranış deneylerinin çoğu başlangıçta fareler için tasarlanmıştır. Sıçanlar ve fareler arasındaki davranışsal farklılıklar nedeniyle, bazen fareler için modifikasyonlar gerekebilir. Farelerde uzamsal çalışma belleğini test etmek için bir yöntem sunuyoruz ve çalışma belleği görevi sırasındaki stresi en aza indiriyoruz.

Kemirgenler için yapılan davranış deneylerinin çoğu başlangıçta fareler için tasarlanmıştır. Genetik mühendisliğindeki son avantajlarla, araştırmacılar genellikle fareler için oluşturulan protokolleri kullanarak farelerle davranış deneyleri yaparlar. Sıçanlar ve fareler arasındaki davranış farklılıkları nedeniyle, bazen fareler için protokolü değiştirmeniz gerekir. Bu videoda, farelerde uzaysal çalışma belleğini test etmek için bir protokol açıklıyoruz. Çalışma belleği, manipüle edilirken ve zihinsel bir görevin planlanması ve yürütülmesinde kullanılırken kısa bir süre için sınırlı miktarda bilgi tutabilen bilişsel bir süreçtir. İnsanlardaki akışkan zeka ölçümleri ile ilişkilidir ve öğrenme için önemlidir. Bu nedenle, çalışma belleği kendi başına çalışmak için önemli bir konudur.

[Öğretim Görevlisi] Yeni bir deney için standart yuvalama malzemelerini kullanarak yeni kafesler kurun. Yeni kafese yeni yatak talaşı, kağıt kağıt tüneli, kağıt yuvalama şeritleri ve tahta ısırma bloğu koyun. Davlumbaz hunisini yerleştirin ve kapağı kapatın. Fareyi, ev kafesinde elle verilen kağıt tüneline yönlendirin. Kağıt tünelini kullanarak fareyi gruplandırılmış kafesten yavaşça kaldırın. Fareyi elinize koyun ve birkaç saniye göğüs hizasında tutun. Alternatif olarak, farenin elinize tırmanmasına izin verin. Fareleri asla kuyruklarından tutmayın. Hayvanları minimum stresle ele almak, davranış deneyleri için çok önemlidir. Fareleri deneyciye alıştırmak da önemlidir. Aynı işleme yöntemini kullanarak fareyi yakalayın. Vücut ağırlığını izlemek için fareyi tartıya koyun ve vücut ağırlığını kaydedin. Tarttıktan sonra, fareyi daha önce hazırlanan yeni kafese koyun. Fareleri tutarken hızlı hareket ederek veya büyük sesler çıkararak fareleri korkutmadığınızdan emin olun. Aksi takdirde, fareler ölçekten veya elden atlayabilir. Cihaza maruz kalmadan önce fareleri bir hafta boyunca bu miktar kısıtlamasına koyun. Deney sırasında seyreltilmiş, şekerli yoğunlaştırılmış süt olan yiyecek ödülleri için labirentte yiyecek aramaya motive olmalarını sağlamak için standart yem miktarını kontrol edin. Kafese iki ila üç gram standart yem koyun ve deney boyunca vücut ağırlıklarını başlangıç vücut ağırlıklarının %85 ila 90'ı arasında tutun. Ayrıca bu aşamada, fareleri alıştırmak için ev kafesindeki küçük plastik kapta bir mililitre seyreltilmiş yoğunlaştırılmış süt sağlayın. Bir süre yerseler onları gözlemleyin, farenin yiyecek neofobisi göstermediğinden emin olun. Fareleri yavaşça araba üzerindeki davranış test odasına getirin. Ardından, odanın aydınlatmasını ayarlayın, dizindeki merkezi hub'ı sıcak beyaz ampullerle 80 lux'te aydınlatın ve merkezi hub'da ölçülen 70 desibelde beyaz gürültüyü oynatın. Deneye başlamadan önce fareleri beş dakika boyunca rahatsız etmeyin. Alışkanlık, birinci aşama. Labirent kontrolü, farenin, fare izleme yazılımı tarafından çalıştırılan kapılarla labirenti keşfetmesine izin verecek şekilde ayarlanmıştır. Bu aşama, fareleri kapı hareketlerine ve seslerine alıştırmak içindir. Yazılımdaki başlat düğmesine tıklayarak denemenizi ve video kaydınızı başlatın ve ardından fareyi labirente getirin ve fareyi merkezi hub'a yerleştirin. Fare davranışını izlemeye devam edin. Labirentte yiyecek ödülü yoktur. Fare herhangi bir kolu ziyaret edebilir ve ne kadar çok isterse etsin. Kapılar 30 dakika boyunca farenin hareketlerini bozmadan kontrol edilir. 30 dakika geçene kadar devam edin. Denemeden sonra, fareyi bir kolda toplayın ve ev kafesine geri koyun. Bir sonraki fare için labirenti temizleyin. Bunu iki gün boyunca sırayla her fare için yapın. Tahkim ikinci aşama. Labirent kontrolü, farenin bir kapı çalıştırılmadan labirenti özgürce keşfetmesine ve kolların ucundaki yiyecek yuvalarında yiyecek ödülleri bulmasına izin verecek şekilde ayarlanmıştır. Bu aşama, fareleri yiyecek ödülleri için labirenti özgürce keşfetmeye teşvik eder. Her davlumbaza 70 mikrolitre ödül koyun. Artık ev kafeslerinde, yerleşimden, ikinci aşamadan vermeyin. Yazılımdaki başlat düğmesine tıklayarak bir deneme sürümünü ve video kaydını başlatın ve ardından fareyi labirente getirin. Farenin davranışını izleyin. Bu aşamada, fareler yavaş hareket eder, temkinli görünürler ve birçok kez yiyecek kuyusuna geri dönebilirler. Fare her kola en az iki kez girene veya 30 dakika geçene kadar devam edin. Denemeden sonra, fareyi bir kolda toplayın ve ev kafesine geri koyun. Bir sonraki fare için labirenti temizleyin. Bunu her fare için sırayla iki gün boyunca günde iki kez yapın. Yerleşim aşaması üç. Labirent kontrolü, farenin birinci ve ikinci aşamaların kombinasyonuna alışmasına izin verecek şekilde ayarlanmıştır. Farelerin her kola en az bir kez girmesine izin verilir. Tüm yiyecek kuyularını 70 mikrolitre ödülle yemleyin. Yazılımdaki başlat düğmesine tıklayarak denemeyi ve video kaydını başlatın ve ardından fareyi labirente getirin. Farenin davranışını izleyin. Fare her kola en az bir kez girene veya 30 dakika geçene kadar devam edin. Denemeden sonra, fareyi bir kolda toplayın ve ev kafesine geri koyun. Bir sonraki fare için labirenti temizleyin. Bunu sırayla her fare için iki gün boyunca günde iki kez yapın. Bu panelde de görebileceğiniz gibi, fareler zamanla daha fazla kolu ziyaret eder. Yerleşimin altıncı gününde, fareler her bir kola yedi ila 15 dakika içinde en az bir kez girer ve her kolda benzer bir süre geçirirler, bu da hayvanların labirente alıştığını ve göreve hazır olduğunu gösterir. Bu uzaysal çalışma belleği görevi, bir denemede üç bölümden oluşur. Fareler zorunlu koşudan, merkezi göbekte beş saniyelik hapisten ve ardından serbest koşudan geçer. Zorunlu çalıştırmada, dört kol sözde rastgele seçilir ve fareye tek tek sunulur. Serbest koşu sırasında, farelerin, kalan dört ödülün en verimli şekilde toplanması için denemedeki zorunlu koşuda hangi kolları ziyaret ettiklerini hatırlamaları gerekir. Labirent, önceki ekranda gösterilen şemayı takip edecek şekilde ayarlanmıştır ve her biri, turun denemesinde aynı zorunlu silah setinden geçmelidir. Fareler dokuz gün boyunca günde altı deneme yapar Bir denemeye başlamadan önce, tüm kolları 40 mikrolitre ödülle yemleyin. Farelerin merkezi göbekten görmesini zorlaştırmak için ödülü her yiyeceğe merkezi göbeğe çok yakın bir yere yerleştirin. Yazılımdaki başlat düğmesine tıklayarak bir deneme sürümü ve video kaydı başlatın. Fareyi strese sokmadan fareyi labirent merkez göbeğine getirin. Duruşma, merkezi merkezde beş saniye hapsedildikten sonra otomatik olarak başlatılacaktır. Beş saniyelik hapis sırasında, labirentten uzaklaşın ve labirente çok yakın olmayan bir yerde oturun. Davranışı izleyin ve fare tüm ödülleri toplayana kadar puanlama için kol ziyaret sırasını yazın. Fare labirentteki tüm ödülleri topladıktan sonra, dört ekstra kolu ziyaret etmesine izin verin. Bunu yaparak, fareler, bir sonraki nereye gideceklerine karar vermelerinin önemli olduğu merkezi merkeze yakalanmayı ilişkilendirmeyecektir. Ayrıca, çalışma belleği görevinin tamamlanması ve yakalanma doğrudan ilişkilendirilmeyecektir. Ek olarak, daha önce ziyaret edilen kollarda ödüllerin yenilenmediği gerçeğini pekiştirecektir. Dördüncü kolun arkasında, diğer elinizle kolu kapatırken farenin elinize geçmesine izin verin ve fareyi tekrar ev kafesine koyun. Labirenti temizlemeden önce, bir sonraki denemeden önce uyarılma durumlarını dengelemek için bir sonraki farenin ev kafesine dokunun. Labirenti temizlemek için bir boya fırçası, bir ıslak mendil ve iki kuru mendil kullanın. Fare pisliklerini temizlemek için bir boya fırçası kullanın. Yoğunlaştırılmış süt kalıntılarını gidermek için labirenti önce kuru mendille silin. Labirent zeminini ıslak mendille silin. Labirenti kuru mendille kurulayın ve bir sonraki denemeye geçin. Günlük başarı oranı puanı, toplam kol giriş sayısına dört bölünmesiyle hesaplanır ve deneyin son gününde ortalama başarı oranı yaklaşık %80'e ulaşır. Mükemmel deneme oranı puanı, mükemmel deneme sayısının altıya bölünmesiyle hesaplanır ve deneyin son gününde %60'ın üzerine çıkar. Yazılım üzerinde farenin hızı, mesafesi ve ivmesinin analizini seçin ve analiz edin. Dört ekstra kol ziyaretini bu analizlerin dışında tuttuğunuzdan emin olun. Ayrıca dört ekstra kol ziyaretinin süresini de ölçün. Mesafe zamanla kısalmalıdır. Hız ve ivme düz olmalı ve görevlerini iyi öğrenirlerse ek dört kol ziyaretinin süresi zamanla daha uzun olmalıdır.

Bu deneyi gerçekleştirirken, fareleri deneyci ile tanıştırmak ve fareleri deney odası ortamına alıştırmak çok önemlidir, bu da fareler için stresi tamamen en aza indirmelidir.

Bu protokolün kullanımı kolaydır ve verileri çoğaltmak için güvenilirdir. Labirent yarı otomatik olduğundan, bu protokol emek yoğun değildir ve laboratuvar görüntüleme ve elektrofizyoloji için uygulanabilir. Bu protokol, uzaysal çalışma belleğini incelemek için güçlü bir araçtır.