Name: Delinme Yara Hemostazı ve Montajlı Geniş Alan Elektron Mikroskobu Analizi için Örneklerin Hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 41 s
Description: Öğrenin delinme yara hemostazı ve montajlı geniş alan elektron mikroskobu analizi için örnek hazırlama yöntemlerini. Fare modellerinde trombüs oluşumunun yapısal özelliklerini inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Delinme Yarası Hemostazı ve Montajlı Elektron Mikroskobu

<ol><li>Rhee, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+puncture+and+wound+hemostasis+results+in+a+vaulted+thrombus+structured+by+locally+nucleated+platelet+aggregates%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">Venous puncture and wound hemostasis results in a vaulted thrombus structured by locally nucleated platelet aggregates.</a> Comm Biol. 4 (1), 1090(2021).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tethered+platelet+capture+provides+a+mechanism+for+restricting+circulating+platelet+activation+in+the+wound+site%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Pract+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Tethered platelet capture provides a mechanism for restricting circulating platelet activation in the wound site.</a> Res Pract Thromb Haemost. 7 (2), 100058(2023).</li>
<li>Yadav, S., Storrie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+basis+of+platelet+secretion%3A+emerging+structure%2Ffunction+relationships%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">The cellular basis of platelet secretion: emerging structure/function relationships.</a> Platelets. 28 (2), 108-118 (2017).</li>
<li>Joshi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+and+sample+collection+for+3D+electron+microscopy+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced arterial thrombosis and sample collection for 3D electron microscopy analysis.</a> J Vis Exp. (193), e64985(2023).</li>
<li>Guerrero, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+von+Willebrand+factor%2Fglycoprotein+Ib-IX+axis+with+a+platelet-type+von+Willebrand+disease+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Visualizing the von Willebrand factor/glycoprotein Ib-IX axis with a platelet-type von Willebrand disease mutation.</a> Blood. 114 (27), 5541-5546 (2009).</li>
<li>Kato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+glycoprotein+VI+to+stable+platelet+adhesion+and+thrombus+formation+illustrated+by+targeted+gene+deletion%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The contribution of glycoprotein VI to stable platelet adhesion and thrombus formation illustrated by targeted gene deletion.</a> Blood. 102 (5), 1701-1707 (2003).</li>
<li>Tomaiuolo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrelationships+between+structure+and+function+during+the+hemostatic+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+NatlAcad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Interrelationships between structure and function during the hemostatic response to injury.</a> Proc NatlAcad Sci U S A. 116 (6), 2243-2252 (2019).</li>
<li>Cocchiaro, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasmic+lipid+droplets+are+translocated+into+the+lumen+of+the+Chlamydia+trachomatis+parasitophorous+vacuole%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Cytoplasmic lipid droplets are translocated into the lumen of the Chlamydia trachomatis parasitophorous vacuole.</a> Proc Natl Acad Sci. 105 (27), 9379-9384 (2008).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlamydia+trachomatis+hijacks+intra+-+Golgi+COG+complex+-+dependent+vesicle+trafficking+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Chlamydia trachomatis hijacks intra - Golgi COG complex - dependent vesicle trafficking pathway.</a> Cell Microbiol. 14 (5), 656-668 (2012).</li>
<li>Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+electron+microscope+tomography+using+robust+prediction+of+specimen+movements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Str+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated electron microscope tomography using robust prediction of specimen movements.</a> J Str Biol. 152 (1), 36-51 (2005).</li>
<li>Kremer, J. R., Mastronarde, D. N., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+visualization+of+three-dimensional+image+data+using+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Str+Biol%22%5BJournal%5D)">Computer visualization of three-dimensional image data using IMOD.</a> J Str Biol. 116 (1), 71-76 (1996).</li>
<li>Chan, N. C., Eikelboom, J. W., Weitz, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+treatments+for+arterial+and+venous+thrombosis%3A+role+of+the+direct+oral+anticoagulants%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Evolving treatments for arterial and venous thrombosis: role of the direct oral anticoagulants.</a> Circ Res. 118 (9), 1409-1424 (2016).</li>
<li>Kiernan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde%2C+formalin%2C+paraformaldehyde%2C+and+glutaraldehyde%3A+what+they+are+and+what+they+do%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Today%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde, formalin, paraformaldehyde, and glutaraldehyde: what they are and what they do.</a> Microscopy Today. 8 (1), 8-13 (2000).</li>
<li>Storrie, B., Attardi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+mitochondrial+genome+in+HeLa+cells%3A+XV.+Effect+of+inhibition+of+mitochondrial+protein+synthesis+on+mitochondrial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+CellBiol%22%5BJournal%5D)">Expression of the mitochondrial genome in HeLa cells: XV. Effect of inhibition of mitochondrial protein synthesis on mitochondrial formation.</a> J CellBiol. 56, 819-831 (1973).</li>
<li>Liu, S., Pokrovskaya, I. D., Storrie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+-+pressure+freezing+followed+by+freeze+substitution%3A+an+optimal+electron+microscope+technique+to+study+Golgi+apparatus+organization+and+membrane+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">High - pressure freezing followed by freeze substitution: an optimal electron microscope technique to study Golgi apparatus organization and membrane trafficking.</a> Meth Mol Biol. 2557, 211-223 (2023).</li>
<li>Klarhofer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+blood+flow+velocity+measurements+in+the+human+finger%5BTitle%5D)+AND+%22Mag+Res+Med%22%5BJournal%5D)">High-resolution blood flow velocity measurements in the human finger.</a> Mag Res Med. 45 (4), 716-719 (2001).</li>
<li>Chaudry, R., Miao, J. H., Rehman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology%2C+cardiovascular%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls%22%5BJournal%5D)">Physiology, cardiovascular.</a> StatPearls. , Treasure Island, FL, USA. (2022).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNARE+-+dependent+membrane+fusion+initiates+a-granule+matrix+decondensation+in+mouse+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">SNARE - dependent membrane fusion initiates a-granule matrix decondensation in mouse platelets.</a> Blood Adv. 2 (21), 2947-2958 (2018).</li>
<li>Pokrovskaya, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+ultrastructural+analysis+of+a-granule%2C+dense+granule%2C+mitochondria%2C+and+canalicular+system+arrangement+in+resting+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Pract+Thrombosis+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">3D ultrastructural analysis of a-granule, dense granule, mitochondria, and canalicular system arrangement in resting human platelets.</a> Res Pract Thrombosis Haemostasis. 4 (1), 72-85 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>% 0.9 Normal Salin</td><td>Solüsyonu Medline</td><td>BHL2F7123HH</td><td></td></tr><tr><td>27G x 3/4 EXELint kafa derisi damar seti</td><td>Medline</td><td>NDA26709</td><td></td></tr><tr><td>30G x 1/2 EXELint hipodermik iğneler</td><td>Medline</td><td>NDA264372</td><td></td></tr><tr><td>33G x 1/2 EXELint özel hipodermik iğneler</td><td>Medline</td><td>NDA26393</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Konik Tüpler</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-443-20</td><td></td></tr><tr><td>Alkol Hazırlama Pedleri (%70 İzopropil Alkol)</td><td>Medline</td><td>MDS090670Z</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum Folyo</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan Isıtma Plakası</td><td>Physitemp Aletleri</td><td>HP-1M</td><td></td></tr><tr><td>Araldite GY 502</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>10900</td><td></td></tr><tr><td>Axiocam 305 Renkli R2 Mikroskopi Kamerası</td><td>Carl Zeiss Mikroskobu</td><td>426560-9031-000</td><td></td></tr><tr><td>BD Luer-Lok Şırıngalar, 20 mL</td><td>Medline</td><td>B-D303310Z</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum</td><td>Klorür Fisher Scientific</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Kültürü Kapları 35mm x 10mm</td><td>Corning Inc.</td><td></td><td></td>430165</tr><tr><td>Pamuk Uçlu Aplikatörler</td><td>Medline</td><td>MDS202055H</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30 Aktivatör Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>Dodecenyl Süksinik Anhidrit / DDSA</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>13700</td><td></td></tr><tr><td>Pansuman Forseps, 5", kavisli, tırtıklı, dar uçlu</td><td>Integra Miltex</td><td>6-100</td><td></td></tr><tr><td>Pansuman Forseps, 5", standart, tırtıklı</td><td>Integra Miltex</td><td>6-6</td><td></td></tr><tr><td>EMBED 812 Reçine Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>Etil Alkol, susuz 200 kanıt</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>15055</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand 4 Tüp Rafı</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-17</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Dijital Zamanlayıcı</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-649-17</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Tek Şırınga İnfüzyon Pompası</td><td>Fisher Scientific</td><td>7801001</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı Bez Süngerler 2 "x 2" - 4 Katlı</td><td>Medline</td><td>NON26224H</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehit (% 10 Çözelti)</td> <td>Elektron Mikroskobu Sciences</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran Sıvı İnhalan Anestezi, 100 mL</td><td>Medline</td><td>66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>Kuyumcu Tarzı Mikro-İnce Forseps, Stil 5F</td><td>Integra Miltex</td><td>17-305</td><td>2 çifte ihtiyacınız var.</td></tr><tr><td>L/S Pompa Borusu, Silikon, L/S 15; 25 Ft</td><td>VWR</td><td>MFLX96410-15</td><td></td></tr><tr><td>L-Aspartik Asit</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP374-100</td><td></td></tr><tr><td>Kurşun Nitrat</td><td>Fisher Scientific</td><td>L-62</td><td></td></tr><tr><td>Malakit Yeşili 4</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>18100</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Kolay Yükleme II Pompa Kafası</td><td>VWR</td><td>MFLX77200-62</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Değişken Hızlı Dijital Sürücü</td><td>VWR</td><td>MFLX07528-10</td><td></td></tr><tr><td>MSC Xcelite 5" Tel Kesiciler</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-191-9855</td><td></td></tr><tr><td>Osmiyum Tetroksit %4 Sulu Çözelti</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>19150</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit (%16 Çözelti)</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Physitemp Sıcaklık Kontrol Cihazı</td><td>Physitemp Aletleri</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Ferrosiyanür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-8131</td><td></td></tr><tr><td>Propilen Oksit, ACS Reaktif</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>20401</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex Cam Beherler</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-555-25B</td><td></td></tr><tr><td>Fareler için Rektal Sıcaklık Probu</td><td>Physitemp Aletleri</td><td>RET-3</td><td></td></tr><tr><td>Scotch Magic Görünmez Bant, 3/4 "x 1000"</td> <td>3M Şirket</td><td>305289</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Kakodilat Tamponu 0.2M, pH 7.4</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>11623</td><td></td></tr><tr><td>SomnoFlo Düşük Akışlı Elektronik Buharlaştırıcı</td><td>Kent Scientific</td><td>SF-01</td><td></td></tr><tr><td>Fareler için SomnoFlo Başlangıç Kiti</td><td>Kent Scientific</td><td>SF-MSEKIT</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Minutyin</td><td>Pimleri Güzel Bilimler Araçlar</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop steREO Discovery.V12</td><td>Carl Zeiss Mikroskobu</td><td>495015-9880-010</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikon Elastomer</td><td>Dünyası Hassas Aletler</td><td>SYLG184</td><td>silikon mat</td></tr><tr><td>Tanik Asit</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>21700</td><td></td></tr><tr><td>Tiyokarbohidrazid (TCH)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>88535</td><td></td></tr><tr><td>Uranil Asetat Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Yaylı Mikro Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Von Graefe Göz Sargısı Forseps, 2.75", Kavisli, Tırtıklı</td><td>Integra Miltex</td><td>18-818</td><td>2 çifte ihtiyaç var.</td></tr><tr><td>Wagner Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>Wahl MiniFigura Hayvan Düzeltici</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-9868</td><td></td></tr><tr><td>Zen Lite Yazılımı</td><td>Carl Zeiss Mikroskopi</td><td>410135-1001-000</td><td></td></tr></tbody></table>

delinme yara hemostazı ve montajlı geniş alan elektron mikroskobu analizi için Örneklerin hazırlanması

Puncture Wound Hemostasis and Preparation of Samples for Montaged Wide-Area Electron Microscopy Analysis

Delinme yarası kanama süresi üzerindeki ilaç etkilerinin kantitatitasyonu Delinme yarası kanama süreleri, farelerde kolayca gerçekleştirilebilecek bir ilaç riskinin fizyolojik bir modelini sağlar. Bir delinme yarası deneyinden elde edilen sonuçlar tahmine dayalıdır. Burada dabigatran doz-yanıt kanama eğrisi gösteriliyor. Bir trombin inhibitörü olan dabigatran, DOAC12 olarak adlandırılan oral doğrudan etkili bir anti-pıhtılaştırıcı olarak kullanılır. Juguler ven ponksiyon yara modeli, farelerde gecikmiş trombüs oluşumu yoluyla potansiyel uzun süreli kanama yoluyla farklı dabigatran dozlarının doğasında bulunan riski değerlendirmek için kullanıldı. Juguler ven ponksiyonundan 20 dakika önce intravenöz olarak (i.v.) 15, 50 veya 150 μg / kg dabigatran'ın değişen bir dozu uygulandı. Dabigatranın çeşitli konsantrasyonlarında kanama süresi ortalamalarını gösteriyoruz (Şekil 4). Doz düzeyinde, kanama süresinde önemli bir uzama gözlenir, p &lt;0.051. Bu, ilacın insanlarda kullanımında önemli bir risk faktörü olduğunu gösterir. Deneysel olarak, bu dozlardaki ilacın, oluşturan trombüsün ultrastrüktürü üzerinde önemli bir etkisi vardır.
Oluşan bir ponksiyon yara trombüsünde trombosit aktivasyon durumunun değerlendirilmesi WA-TEM yaklaşımı, hem daha düşük büyütmede bakıldığında tek bir düzlemde bir yara alanına genel bir bakış hem de daha yüksek büyütmede çok fazla ayrıntı sağlar (Şekil 5). Elde edilen ayrıntılar doğrudan genel bakış bağlamına yerleştirilebilir. Bu yaklaşımı, diskoid şekilli trombositlerin oluşturan bir ponksiyon yara trombüsüne alımını değerlendirmek için kullandık. Dolaşımdaki trombositler diskoiddir, dolayısıyla adı ve tam bir salgı granülü seti içerir. Önemli bir soru, dolaşımdaki trombositlerin, kalan trombositlerin serbest akış özelliklerini bozmadan büyüyen trombüse nasıl alınabileceğidir. Çalışmamız, dolaşımdaki trombositlerin, tam bir organel seti içeren diskoid trombositler olarak bir bağlama işlemi yoluyla teker teker trombüse alındığı bir Tether ve Activate hipotezine işaret etmektedir2. Bunun kanıtı, ponksiyondan 1 dakika sonra juguler ven trombüsünün WA-TEM'inden gelir. Hala kanayan yaranın ortasından tam trombüs dilimleri elde etmek için kesit aldıktan sonra, otomatik bir aşama ve SerialEM yazılımı10 kullanarak bir transmisyon elektron mikroskobu kullanarak trombüsün enine kesitteki tüm boyutu boyunca dikdörtgen bir XY raster ızgarasında 500-800 kare, 4.000 x 4.000 piksel, 3.185 nm piksel boyutu görüntüledik. Çerçeveler daha sonra IMOD program paketi11'in bir parçası olan eTomo yazılımı kullanılarak birleştirildi. Bu, farklı boyutlarda tek bir görüntü ile sonuçlanır, örneğin, düşük yakınlaştırmada tam ekran, 0.02 veya daha yüksek yakınlaştırmada ayrıntılı, yine IMOD program paketinin bir parçası olan 3DMOD yazılımı kullanılarak 0.25 ila 1.0 piksel arasında 120.000 piksel x 120.000 piksel (Şekil 5). Net olarak, yazılım güdümlü analiz, delme deliği içindeki periferik olarak bağlı, trombüsle ilişkili diskoid trombositlerin bir ip üzerinde boncuklar halinde aralıklı olduğunu buldu. Trombüs içinde kısa bir mesafede, diskoid şekil daha az belirgindi ve trombositler birbirleriyle daha sıkı bir şekilde ilişkiliydi. Trombüsün daha derinlerinde, trombositler yuvarlaklaştırıldı, sıkıca paketlendi ve kısmen degranüle edildi. Bir morfoloji dizisi, trombositlerin trombüse uzun bir bağ molekülü, muhtemelen von Willebrand faktörü yoluyla ilk bağlandığını ve daha sonraki trombosit aktivasyon adımlarının, oluşturan trombüsün iç kısmı ile sınırlı olduğunu önerdi. Bu nedenle, trombüse trombosit alımı, juguler ven içindeki kan dolaşımını bozmadan gerçekleşebilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig01.jpg"> Şekil 1: Şah damarı/femoral arter ponksiyon yarası trombüs deneyi yapmak için cerrahi kurulum. Cerrahi ekipman (A) ve aletler (B), deney sırasında zamanlama kritik olduğu için hareketin verimliliği için dikkatlice düzenlenmiştir. (C) Perfüzyon fiksasyonundan sonra, ponksiyon yaralı trombüsünü içeren damarın bir kısmı, ışık mikroskobu altında görüntülenirken 35 mm'lik bir kültür kabında silikon bir mata tutturulur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig02.jpg"> Şekil 2: Bir kan damarından WA-TEM veya SBF-SEM için bölümlere ayrılacak plastik gömülü numunelere geçiş. (A) Delinme yarası ve biriken ekstravasküler trombüs oluşumu (daire ve ok) olan bir femoral arter gösterilmiştir. (B) WA-TEM için kesit almak üzere plastiğe bir trombüs (daire ve ok) gömülür ve sonraki 2D görüntüleme için bir mikrotom bulunur. (C) Bir trombüs (daire ve ok) plastiğe gömülür, bir SBF-SEM görüntüleme odası içindeki bir pime takmak için 1 mm'den daha az kısa bir çubuk verecek şekilde kesilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig03.jpg"> Şekil 3: Trombüs oluşumuna giden delinme yarası: Bir delinme yarasından (A) ponksiyondan 1 dakika sonra juguler ven trombüsünün (B) görüntü dilimine hazırlık akışının şeması. Damar duvarı görüntü diliminde mavi ile etiketlenmiştir, damar duvarının yanındaki küçük siyah noktalar kırmızı kan hücreleridir ve trombüs trombosit agregatları koyu gri alanlar olarak görünür. Bu rakam1'den değiştirildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig04.jpg"> Şekil 4: Bir juguler ven ponksiyon yarası deneyinde oluşturulan grafik biçiminde bir veri örneği. Bir dabigatran doz-yanıt kanama eğrisi gösterilmiştir. Bu rakam1'den değiştirildi. Çeşitli dabigatran konsantrasyonlarındaki kanama süresi ortalamaları, artı veya eksi standart sapmayı gösteren hata çubukları ile birlikte gösterilir. Student'ın t-testi kullanılarak yapılan istatistiksel analizde p değeri &lt;0.05 olarak bulunmuştur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66479/66479fig05.jpg"> Şekil 5: Bir montaj oluşturmak için bir araya getirilmiş bir dilimin WA-TEM görüntüleri. (A) Tek tek yüksek çözünürlüklü çerçeveler toplanır ve daha sonra özellikleri daha geniş bir bağlama yerleştirmek amacıyla bir araya getirilir. (B) Yakınlaştırma yoluyla, önemli ayrıntılar bağlam içinde ortaya çıkarılabilir (poli: polimorfonükleer lökosit, endo: endotel ve col: kollajen lifleri). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66479/66479fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Delinme Yara Hemostazı ve Montajlı Geniş Alan Elektron Mikroskobu Analizi için Örneklerin Hazırlanması

Hemostasis, the process of normal physiological control of vascular damage, is fundamental to human life. We all suffer minor cuts and puncture wounds ...

puncture-wound-hemostasis-preparation-samples-for-montaged-wide-area

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz beyin bölümlerinin kesit alma fareler, kaldırma ve kesit beynin yanı sıra immunoperoksidaz boyama, reçine gömme ve ultra ince transcardiac perfüzyon için bir protokol tanımlamaktadır. Bu prosedürlerin tamamlanmasının ardından, ile immunohistokimyasal malzeme transmisyon elektron mikroskobu ile incelenmesi için hazırdır.

Fare Beyin Dokusu Immunoelectron Mikroskopi için hazırlanması

Cryo elektron mikroskopları, Tarama (SEM) veya İletim (TEM), ya çok yüksek su içeriği ile 1 biyolojik örneklerin veya diğer malzemelerin karakterizasyonu için kullanılır. A SEM / Odaklı İyon Işın (FİB) örneklerinde ilgi özelliklerini belirlemek ve cryo-TEM transfer için ince, elektron-saydam tabakalara ayıklamak için kullanılır.

Odaklanmış iyon demeti Of Cryo-elektron Mikroskopi Numune Hazırlama By Means

Bu protokolün amacı, doğal cilde benzeyen üç boyutlu tam kalınlıkta bir cilt eşdeğeri oluşturmaktır. Özel olarak yapılmış bir otomatik yaralama cihazı ile, sterilitenin korunması altında hassas ve tekrarlanabilir yaralar oluşturulabilir.

Üç-boyutlu Tam Kalınlığı Deri Üretimi Eşdeğer ve Otomatik Yaralama

Burada, hücreden arındırılmış kalp dokularında hücre dışı matriks üst yapısını görselleştirmek için bir yöntem gösterilmiştir.

Macerated Tissue taramalı elektron mikroskobu Ekstraselüler Matrix Visualize&#39;a

Bir araç ve yöntemleri transmisyon elektron mikroskopi nanoliter ölçekli örnek birimleri hazırlanması için sunulmaktadır. Hiçbir kağıt kurutma işlem, böylece bu önemli ölçüde örnek kaybı azaltılması ve tek hücre için görsel proteomik lysate analizini sağlayan proteinler için olabilir zararlı sonuçları kaçınarak gereklidir.

Kırılan numune hazırlama için iletim elektron mikroskobu

Burada iki örnek işleme teknikleri, buz gibi yüksek basınç birleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut ve mikrodalga destekli örnek işleme, veri odaklı iyon demeti Taramalı elektron mikroskobu (FIB-SEM) ile edinme için gömme en az reçine izledi. Bu bir fare tibial sinir örnek ve Caenorhabditis eleganskullanarak gösterilmiştir.

Yüksek basınç dondurucu, mikrodalga destekli kontrast geliştirme ve en az reçine birim görüntüleme için katıştırma tarafından biyolojik örnek hazırlama

Burada, farelerde kolonoskopik güdümlü çimdik biyopsilerini indüklemek ve yara kapanışını gerçek zamanlı olarak izlemek için prosedürün ayrıntılı bir açıklamasını sunuyoruz. Ayrıca yara yatağının histolojik, immünohistokimyasal ve moleküler analizleri için dokuların hazırlanması için yöntemler sağlanmaktadır.

Farelerde Kolonoskopik Güdümlü Çimdik Biyopsilerinin Yapılması ve Sonraki Doku Değişikliklerinin Değerlendirilmesi

Bu protokol, farelerde ikili, tam kalınlıkta eksizyonel yaraların nasıl üretileceğin ve yaraların morfometrik analiziçin nasıl izlendiğini, hasat edilip hazırlanacağını açıklar. Morfometrik kusurları tanımlamak, tam olarak ölçmek ve tespit etmek için seri histolojik bölümlerin nasıl kullanılacağına iliş bir açıklama dahildir.

Murine Eksizyonel Yara İyileştirme Modeli ve Histolojik Morfometrik Yara Analizi

Burada, iletim elektron mikroskopisi (TEM) kullanılarak megakaryositlerin yerinde ultrayapısını analiz etmek için bir protokol sunuyoruz. Murine kemik ilikleri toplanır, sabitlenir, epoksi reçineye gömülür ve ultra ince bölümlerde kesilir. Kontrast boyamadan sonra kemik iliği 120 kV'da TEM mikroskobu altında gözlenir.

In Situ İletim Elektron Mikroskopisi Kullanılarak Murine Megakaryopoez Keşfi

Bu protokol, arteriyel trombozu indüklemek için FeCl3 aracılı bir yaralanmanın nasıl kullanılacağını ve elektron mikroskobu analizi için trombozun çeşitli aşamalarında arteriyel yaralanma örneklerinin nasıl toplanacağını ve hazırlanacağını açıklamaktadır.

Ferrik Klorür Kaynaklı Arteriyel Tromboz ve 3D Elektron Mikroskobu Analizi için Numune Toplama

Öğrenin delinme yara hemostazı ve montajlı geniş alan elektron mikroskobu analizi için örnek hazırlama yöntemlerini. Fare modellerinde trombüs oluşumunun yapısal özelliklerini inceleyin.

Delinme Yara Hemostazı ve Montajlı Geniş Alan Elektron Mikroskobu Analizi için Örneklerin Hazırlanması

Daha fazla video keşfet