Name: Nakledilen Fare Akciğerinin İntravital İki Foton Mikroskobu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: Keşfedin, fare akciğer naklinde iskemi-reperfüzyon yaralanması ve bağışık yanıtlarını incelemek için intravital iki foton mikroskobu kullanımını. Bu yöntem, alıcı monositlerin nötrofil infiltrasyonunu nasıl teşvik ettiğini ortaya koyar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Fare akciğer naklinde hücresel dinamiklerin gerçek zamanlı izlenmesi

<table><tbody><tr><td>% 0.75 povidon-iyot</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>Dezenfektan için</td></tr><tr><td>1 inç 20G IV kateter</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>Endotrakeal tüp (ETT) için1</td></tr> <tr><td>inç ipek bant</td><td>Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>Fareyi yerinde sabitlemek için</td></tr><tr><td>20x suya daldırmalı uzun objektif lens</td><td>Olympus</td><td>N20X-PFH</td><td></td></tr><tr><td>3M Vetbond yapıştırıcı</td><td>Medi-Vet.com</td><td>10872</td><td>Kapak camını akciğere yapıştırmak için</td></tr><tr><td>655 nm hedeflenmemiş kuantum noktaları</td><td>ThermoFisher</td><td>Q21021MP</td><td>Kan damarlarının etiketlenmesi için</td></tr><tr><td>%70 etanol</td><td>Sigma</td><td>Aldrich EX0281</td><td>Dezenfektan için</td></tr><tr><td>Argent High Temp İnce Uçlu Kotery Kalem</td><td>McKesson</td><td>231</td><td></td></tr><tr><td>Siyah O halka (2 cm)</td><td>Hırdavatçı</td><td>N/A</td><td>Özel yapım görüntüleme için hazne</td></tr><tr><td>Cıvata (2)</td><td>Hırdavatçı</td><td>N/A</td><td>Özel yapım görüntüleme odası için</td></tr><tr><td>Pirinç başparmak somunu (2)</td><td>Hırdavatçı</td><td>N/A</td><td>Özel yapım görüntüleme odası için</td></tr><tr><td>Buprenorfin 1.3 mg/mL</td><td>Fidelis Hayvan Sağlığı</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>Ağrı kontrolü için</td></tr><tr><td>Bukalemun titanyum-safir femtosaniye darbeli lazer</td><td>Tutarlı</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kapak camı (24 mm x 50 mm)</td><td>Thomas Scientific</td><td>1202F63</td><td>Özel yapım görüntüleme odası için</td></tr><tr><td>Kavisli sivrisinek kelepçesi (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Çift kanallı ısıtıcı kontrol cihazı</td><td>Warner Instruments</td><td>TC-344B</td><td></td></tr><tr><td>İnce makas (1)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15040-11</td><td></td></tr><tr><td>Sabit kademeli dik mikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı bez (1 cm x 3 cm'ye kadar kesilmiş)</td><td>McKesson</td><td>476709</td><td>Sol akciğerin altına yerleştirmek için</td></tr><tr><td>Yüksek vakumlu gres</td><td>Dow Corning</td><td>N/A</td><td>Kapak camını üst plakaya yapıştırmak için</td></tr><tr><td>İzofluran %1</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>26675-46-7</td><td>Anestezi için</td></tr><tr><td>Ketamin hidroklorür 100 mg/mL</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>Anestezi için</td></tr><tr><td>Metal levha (3 cm x 7 cm)</td><td>Hırdavatçı</td><td>N/A Özel</td><td>yapım görüntüleme odası için</td></tr><tr><td>Sivri uçlu pamuk uçlu aplikatörler</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>Akciğeri manipüle etmek ve künt diseksiyon için</td></tr><tr><td>Power Pro Ultra kesme</td><td>makinesi Oster</td><td>078400-020-001</td><td></td></tr><tr><td>Puralube Vet göz merhemi</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>Göz kurumasını önlemek için</td></tr><tr><td>Küçük hayvan ventilatörü</td><td>Harvard Aparat</td><td>55-0000</td><td></td></tr><tr><td>Düz forseps (1)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>91113-10</td><td></td></tr><tr><td>Üç kanallı deklanşör sürücüsü</td><td>Uniblitz</td><td>VMM-D3</td><td>Rezonans tarayıcı</td></tr><tr><td>x.y.z optik step motor</td><td>Önceki Bilimsel</td><td>OptiScan II</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin 20 mg / mL</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>Ağrı kontrolü için</td></tr></tbody></table>

nakledilen fare akciğerinin İntravital İki foton mikroskobu

Intravital Two-Photon Microscopy of the Transplanted Mouse Lung

4 ° C'de 1 saat soğuk iskemik depolamadan sonra, sol akciğeri bir B6 faresinden ortotopik olarak bir B6'ya naklettik. LysM-GFP fare4 ve daha sonra yukarıda tarif edildiği gibi intravital iki fotonlu görüntüleme gerçekleştirildi. Nakil sonrası 2 saat (Şekil 3A) ve 24 saat (Şekil 3B) olmak üzere iki zaman noktasında görüntüleme gerçekleştirdik. Kan damarları, görüntülemeden hemen önce enjekte edilen q-noktaları ile kırmızı renkle etiketlenir. Ek olarak, 24 saat4'te q-dot alan monositleri görselleştirebiliriz. Yeşil etiketli alıcı kaynaklı nötrofiller, nakilden 24 saat sonra ilgili videoda akciğer greftine sızarken görülebilir (Ek Video 1). Alveoller, kollajenden gelen SHG'ye bağlı olarak koyu renkli kraterler olarak görselleştirilebilir ( Şekil 3'te beyaz oklar). Transplantasyondan 24 saat sonra, nakilden 2 saat sonrasına kıyasla akciğerde daha fazla nötrofil olduğunu gözlemliyoruz (Şekil 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig01.jpg"> Şekil 1: Farenin iki fotonlu görüntüleme için hazırlanması. (A) Sol torakotomi üzerinde cilt yeniden açıldı. (B) Sol göğsün üzerinden eksize edilen deri ve yumuşak doku. (C,D) Kaburgalar bölünmeden önce 10 saniye boyunca kenetlenir. (E) Sol 3rd-5. kaburgalar, ~ 0.8 cm kraniyokaudal x 1.0 cm anteroposterior ölçülerinde bir pencere oluşturmak için rezeke edildi. (F) Sol akciğer, sol göğüsten çıkarılmış ve bir gazlı bez şeridi üzerine yerleştirilmiştir. (G) Sol akciğerin üzerinde görüntüleme penceresi olan bir görüntüleme odası. (H) Mikroskop tablasına yerleştirilen görüntüleme odası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig02.jpg"> Şekil 2: Görüntüleme odası kurulumu. (A) Mikroskop tablasına yerleştirilen görüntüleme odası. (B) Üst plakayı sol akciğerin üzerine sabitlemek için yaylı cıvata mekanizmasının büyütülmüş görünümü. (C) O-ring ve kapak camı uygulanmış üst plakanın önü ve arkası. Beyaz çizgiler, kapak camını üst plakaya yapıştırmak için vakumlu gresin uygulandığı alanı temsil eder. Gri daire, kapak camına uygulanacak bir tutkal halkasını temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig03.jpg"> Şekil 3: B6'dan B6'ya fare sol akciğer naklinin iki fotonlu intravital görüntülemesi. 1 saat soğuk iskemik depolamalı LysM-GFP fare. Görüntüleme, transplantasyondan (A) 2 saat ve (B) 24 saat sonra yapılır. Kırmızı, q noktalarını temsil eder. Yeşil, B6'dan gelen nötrofilleri temsil eder. LysM-GFP alıcısı. Mavi, kollajen açısından zengin alveollerden elde edilen SHG'yi temsil eder. Beyaz oklar alveolar hava sahalarını gösterir. Ölçek çubuğu 20 μm'yi temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Şekil 1: Ek ısıtma sağlamak için iki rezistans takılı üst plaka. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Figure%201.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video 1: B6'dan B6'ya nakledilen fare sol akciğerinin iki fotonlu hızlandırılmış görüntülemesi. Transplantasyondan 24 saat sonra gerçekleştirilen 1 saat soğuk iskemik depolamaya sahip LysM-GFP faresi. Kırmızı, q noktalarını temsil eder. Yeşil, LysM-GFP alıcısından gelen nötrofilleri temsil eder. Mavi, kollajen bakımından zengin alveollerden ikinci harmonik nesli temsil eder. Ölçek çubuğu 20 μm'yi temsil eder. Bu <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Video%201.zip" target="_blank">Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Nakledilen Fare Akciğerinin İntravital İki Foton Mikroskobu

Complications after lung transplantation are largely related to the host immune system responding to the graft. Such immune responses are regulated by ...

intravital-two-photon-microscopy-of-the-transplanted-mouse-lung

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz roman laboratuar araçları ve timus intravital görüntü elde etmek için protokoller geliştirdik. Bizim tekniği T hücre gelişimi oluşur timus içinde "nişler" belirlenmesinde yardımcı olacaktır.

2-Foton Mikroskopi kullanarak Fare Thymus intravital Görüntüleme

Bu protokol, vakumla stabilize edilmiş bir görüntüleme penceresi kullanarak sağlam akciğerin gerçek zamanlı olarak uzun süreli yüksek çözünürlüklü, tek hücreli görüntülemesini gerçekleştirmek için çoklu foton mikroskobunun kullanımını açıklar.

Bir Vakum Stabilize Görüntüleme Penceresi ile Akciğer uzun vadeli Yüksek Çözünürlüklü Intravital Mikroskopi

Bu iletişim kuralı transgenik fareler hücre özgü floresan işaretleri ifade intravital görüntüleme açıklar. İntravital görüntüleme implante edilebilir windows üzerinden süreçlerin mikroskobik görselleştirme mümkündür kullanarak yaşayan hayvanlarda yüksek çözünürlüklü gözlemler için non-invaziv bir yöntem sağlar. Bu yöntem boyuna işlemleri incelemek özellikle kullanışlıdır.

Tümör ilişkili damarlara kullanmanın intravital mikroskobu gelişmiş Dorsal deri kıvrım pencere Chambers transgenik floresan fareler üzerinde

Bu çalışmada, biz iki fotonlu intravital görüntüleme ve hücre etkileşim fare trakeal mukoza grip virüsü ile enfeksiyon sonra çözümlemesi için bir protokol mevcut. Bu iletişim kuralı bağışıklık hücre dynamics sırasında solunum yolu enfeksiyonları eğitim araştırmacılar için ilgili olacaktır.

İki fotonlu Intravital mikroskobu kullanılarak grip virüsü enfeksiyonu sırasında trakeal mukozasında görüntüleme hücre etkileşimi

Burada tanıtılan Protokolü içinde vivo inflamatuar koşullar altında birincil insan lenfosit akciğer izleme kapasitesini karakterizasyonu sağlar. Alerjik iltihap bir fare modeli adoptively transfer edilen insan bağışıklık hücrelerinin pulmoner infiltrasyon görüntüsü ve kimyasal olarak temizlenen Akciğer doku ışık sayfalık Floresans mikroskobu tarafından sayılabilir.

Akciğer yolu bulabilen insan lenfosit içinde deneysel bir alerjik iltihap ışık sayfalık mikroskobu üzerinde dayalı, Vivo modeli görüntüleme gelişmiş

İn vivo görüntüleme, sağlık ve hastalıkta biyoloji çalışmaları için güçlü bir araçtır. Bu protokol, standart iki foton mikroskobu ile fare retinasının transpupiller görüntülemesini tanımlar. Ayrıca, retinanın birden fazla hücresel kohortunu floresan olarak etiketlemek için farklı in vivoimaging yöntemleri göstermektedir.

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

Burada, akciğerin yüksek çözünürlüklü, intravital görüntülemesini sağlayan murine toraks için kalıcı olarak indwelling optik pencerenin cerrahi implantasyonu için bir protokol sunuyoruz. Pencerenin kalıcılığı, akciğerdeki dinamik hücresel süreçlerin, özellikle de yayılan tümör hücrelerinin metastatik ilerlemesi gibi yavaş gelişen süreçlerin incelenmesine çok uygun hale getirir.

Akciğere Kanser Metastazını Araştırmak İçin Kalıcı Bir Pencere

Fare beyninde lusiferaz-yeşil floresan proteini (GFP) eksprese eden ikili muhabir bir vektör ile transdüke edilen insan nöral progenitör hücrelerinin intraparankimal transplantasyonunu tanımladık. Transplantasyondan sonra, lusiferaz sinyali, floresan mikroskobu kullanılarak beyin bölümlerinde tanımlanan in vivo biyolüminesans ve GFP eksprese eden aşılanmış hücreler kullanılarak tekrar tekrar ölçülür.

İntraserebral Transplantasyon ve Fare Beynindeki İnsan Nöral Progenitör Hücrelerinin İnVivo Biyolüminesans İzlenmesi

El yazması, ortotopik olarak enjekte edilen meme tümörlerinden spontan akciğer metastazının kurulması ve uzunlamasına büyüme izlemesi için metastatik kaskadının tüm aşamalarında müdahaleye uygun bir metodolojiyi açıklamaktadır.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Hücre tedavisi, hasarlı dokuyu onarmak ve akciğer fonksiyonunu iyileştirmek için progenitör hücreleri kullanarak pulmoner fibroz için umut verici bir müdahale sunar. Görüntüleme, hücre entegrasyonunun izlenmesinde çok önemli bir rol oynadığından, burada, bir fare modelinde pulmoner fibroz için hücre tedavisinin manyetik parçacık görüntüleme kılavuzluğunda in vivo takibini açıklıyoruz.

Manyetik Parçacık Görüntüleme Kullanılarak Pulmoner Fibroz için Nakledilen Distal Akciğer Epitelyal Progenitör Hücrelerinin Görüntü Kılavuzluğunda In Vivo İzlenmesi

Burada, zayıflatılmış BSL-2 onaylı Mycobacterium tuberculosis'un intravital görüntüleme protokolünü sunuyoruz. sürün akciğerinde kalıcı akciğer penceresi kullanarak. Bu yaklaşım, aynı akciğer mikro ortamında bakteriler lokalizasyonu, damar dinamikleri ve makrofaj alımı dahil olmak üzere erken konakçı-patojen etkileşimlerinin uzunlamasına, tek hücre çözünürlüklü analizini mümkün kılar.

Erken Intravasküler Enfeksiyonda Sönmüş Oksotrofik Mycobacterium Tuberculosis'in Sönük Oksotrofik Mycobacterium Tuberculosis'in Erken Intravasküler Enfeksiyonda

Keşfedin, fare akciğer naklinde iskemi-reperfüzyon yaralanması ve bağışık yanıtlarını incelemek için intravital iki foton mikroskobu kullanımını. Bu yöntem, alıcı monositlerin nötrofil infiltrasyonunu nasıl teşvik ettiğini ortaya koyar.

Nakledilen Fare Akciğerinin İntravital İki Foton Mikroskobu

Daha fazla video keşfet