Name: Tam Otomatik Bir Sistem Kullanılarak Rekombinant Proteinlerin Hızlı Gliko-Kalitatif Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: Öğrenin, tam otomatik sistemle rekombinant proteinlerin gliko-kalitatif değerlendirmesini. Lectin tabanlı teknolojiler ve otomatik ölçüm süreçleri kullanılarak glikan analizi verimliliği artırılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Tek Uçta Boncuk Dizisi (BIST) Kullanarak Otomatik Lektin Bazlı Glikan Profili Oluşturma

<ol><li>Butler, M., Reichl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+cell+expression+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal cell expression systems.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 175, 1-36 (2021).</li>
<li>Silva, M. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+One+-+Lectin+biosensors+in+cancer+glycan+biomarker+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Chapter One - Lectin biosensors in cancer glycan biomarker detection.</a> Adv Clin Chem. 93, 1-61 (2019).</li>
<li>Hiono, T., Nagai-Okatani, C., Kuno, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4.07+-+Application+of+glycan-related+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Glycoscience+%28Second+Edition%29%22%5BJournal%5D)">4.07 - Application of glycan-related microarrays.</a> Comprehensive Glycoscience (Second Edition). , 134-148 (2021).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lectin+bead+array+in+a+single+tip+facilitates+fully+automatic+glycoprotein+profiling%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Lectin bead array in a single tip facilitates fully automatic glycoprotein profiling).</a> Anal Chem. 91 (17), 11162-11169 (2019).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GlycoBIST%3A+A+System+for+automatic+glycan+profiling+of+a+target+protein+using+milli-bead+array+in+a+tip%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">GlycoBIST: A System for automatic glycan profiling of a target protein using milli-bead array in a tip.</a> Curr Protoc Protein Sci. 99 (1), e103(2020).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+Technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: Technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).</li>
<li>Bojar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+useful+guide+to+lectin+binding%3A+machine-learning+directed+annotation+of+57+unique+lectin+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">A useful guide to lectin binding: machine-learning directed annotation of 57 unique lectin specificities.</a> ACS Chem Biol. 17 (11), 2993-3012 (2022).</li>
<li>Nagai-Okatani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2.0%3A+An+integrated+visualization+for+lectin+microarray-based+mouse+tissue+glycome+mapping+data+with+lectin+histochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">2.0: An integrated visualization for lectin microarray-based mouse tissue glycome mapping data with lectin histochemistry.</a> J Proteome Res. 20 (4), 2069-2075 (2021).</li>
<li>Geisler, C., Jarvis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+glycoanalysis+with+Maackia+amurensis+lectins+requires+a+clear+understanding+of+their+binding+specificities%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Effective glycoanalysis with Maackia amurensis lectins requires a clear understanding of their binding specificities.</a> Glycobiology. 21 (8), 988-993 (2011).</li>
<li>Noro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N+-glycan+structures+of+Wisteria+floribunda+agglutinin-positive+Mac2+binding+protein+in+the+serum+of+patients+with+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">N -glycan structures of Wisteria floribunda agglutinin-positive Mac2 binding protein in the serum of patients with liver fibrosis.</a> Glycobiology. 31 (10), 1268-1278 (2021).</li>
<li>Rawitch, A. B., Pollock, H. G., Yang, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thyroglobulin+glycosylation%3A+Location+and+nature+of+the+N-Linked+oligosaccharide+units+in+bovine+thyroglobulin%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Thyroglobulin glycosylation: Location and nature of the N-Linked oligosaccharide units in bovine thyroglobulin.</a> Arch Biochem Biophys. 300 (1), 271-279 (1993).</li>
<li>Dang, K., Zhang, W., Jiang, S., Lin, X., Qian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+lectin+microarrays+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+Open%22%5BJournal%5D)">Application of lectin microarrays for biomarker discovery.</a> Chemistry Open. 9 (3), 285-300 (2020).</li>
<li>Chen, S., Qin, R., Mahal, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sweet+systems%3A+Technologies+for+glycomic+analysis+and+their+integration+into+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Sweet systems: Technologies for glycomic analysis and their integration into systems biology.</a> Crit Rev Biochem Mol Biol. 56 (3), 301-320 (2021).</li>
<li>Dwivedi-Agnihotri, H., Srivastava, A., Shukla, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+biotinylation+of+purified+proteins+for+measuring+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Reversible biotinylation of purified proteins for measuring protein-protein interactions.</a> Methods Enzymol. 633, 281-294 (2020).</li>
<li>Shimazaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auto-lectin+dotcoding+by+two+octopuses%3A+Rapid+analysis+of+fluorescence-labeled+glycoproteins+by+an+8-channel+fully-automatic+bead+array+scanner+with+a+rolling-circle+detector%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Auto-lectin dotcoding by two octopuses: Rapid analysis of fluorescence-labeled glycoproteins by an 8-channel fully-automatic bead array scanner with a rolling-circle detector.</a> Anal Chem. 95 (32), 11868-11873 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,2 mL 8 PCR tüpü + düz kapak</td><td>FastGene</td><td>FG-0028FC/SE</td><td>Biyotin etiketleme reaktiflerinin dağıtımı ve saklanması için</td></tr><tr><td>2.0 mL SC Mikro Tüp proteini LB</td><td>SARSTEDT AG&Co. KG</td><td>72.694.600</td><td>Numuneleri LuBEA-VIII Analiz yazılımına yüklemek için</td></tr><tr><td></td><td>SAS Institute Inc.</td><td>JMP 17</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Statik İyonlaştırıcı. 110 volt</td><td>Plas-Labs</td><td>800-AS/SPI</td><td>BIST Ucuna boncuk yerleştirirken kullanın.</td></tr><tr><td>Antistatik cımbız NK2A</td><td>RUBIS&nbsp;</td><td>9-5681-01</td><td>BIST Ucuna boncuk yerleştirirken kullanın.</td></tr><tr><td>Otomatik reaksiyon ölçüm cihazı</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>LuBEA</td><td>: Bu çalışmadaki tüm veriler LuBEA-VIII kullanılarak elde edilmiştir. LuBEA ticarileştirilirken, LuBEA-VIII şu anda geliştirme aşamasındadır. LuBEA ve LuBEA-VIII ürün detayları için web sitesi aşağıdaki URL'de (https://www.pss.co.jp/english/technology/apit/bist02.html) bulunabilir.</td></tr><tr><td>Biotin-(AC5)2 Sulfo-Osu</td><td>Dojindo</td><td>341-06801</td><td>Biyotinilasyon reaktifi olarak</td></tr><tr><td>BIST ara parça boncuğu- V-11</td><td>Precision System Science Co., Ltd.</td><td>F4938000</td><td>Çapı: 1 mm</td></tr><tr><td>BIST uç ve kılıf</td><td>Hassas Sistem Science Co., Ltd.</td><td>F4930-000</td><td>Bu boş ucu boncuklarla doldurun.</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Wako</td><td>039-00475</td><td>Tampon çözeltileri hazırlamak için</td></tr><tr><td>Sinyal Çözeltisi 2</td><td>alabilir TOYOBO</td><td>NKB-301</td><td>Bu engelleme reaktifi bu yöntem için iyidir</td></tr><tr><td>CentriVap Tezgah Üstü Vakum Konsantratörleri</td><td>Labconco</td><td>7810010</td><td>Biyotinilasyon reaktifinin kuruması için. Diğer şirketler tarafından sağlanan ikame mümkündür.</td></tr><tr><td>Berraklık Batı ECL Substratı&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1705060</td><td>LuVEA VIII</td></tr><tr><td>Soğuk tuzak CentriVap serisi</td><td>Labconco</td><td>7460040</td> ile <td>numunelerin ölçülmesi için Biotinilasyon reaktifinin kurutulması için. Diğer şirketler tarafından sağlanan ikame mümkündür.</td></tr><tr><td>Glisin</td><td>Wako</td><td>077-00735</td><td>Tampon çözeltileri hazırlamak için</td></tr><tr><td>Manganez (II) Klorür Tetrahidrat</td><td>Wako</td><td>139-00722</td><td>Tampon çözeltileri hazırlamak için</td></tr><tr><td>Milli-Q referansı</td><td>MERCK</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>Reaktiflerin ve tamponların seyreltilmesi için deiyonazlaştırılmış su olarak</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wako</td><td>162-19321</td><td>Tampon çözeltileri hazırlamak için</td></tr><tr><td>Peroksidaz Streptavidin</td><td>Jackson</td><td>016-030-084</td><td>Bu antikor, GlycoBIST analizi için iyidir. Batı lekelenmesinin tespiti için yararlıdır, ancak ikameler diğer şirketler tarafından sağlanabilir.</td></tr><tr><td>Prob boncuk</td><td>Hassas Sistem Bilimi Co., Ltd.</td><td>FP4936000</td><td>Lektinle sabitlenmiş boncuklar hazırlamak için. Ayrıntılar için referans bölümündeki Shimazaki, H. ve diğerleri, Protein Biliminde Güncel Protokoller, 2020'ye bakın.</td></tr><tr><td>Protein LoBind Tüpleri 1.5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>0030108442</td><td>Biyotinilasyon gibi örnekleri hazırlarken kullanın.</td></tr><tr><td>Silika jel (kurutucu için)</td><td>Kanto kimyasalı</td><td>37039-02</td><td>GlycoBIST ucunu ve kurutulmuş biyotinilasyon reaktifini saklarken kullanın.</td></tr><tr><td>Statik elektrik giderme levhası M</td><td>TRUSCO NAKAYAMA</td><td>SD5050</td><td>BIST Ucuna boncuk yerleştirirken kullanın.</td></tr><tr><td>SV Kartuş II</td><td>Daido Kimya Endüstrisi</td><td>ED041</td><td>LuVEA VIII ile numuneleri ölçmek için</td></tr><tr><td>Tablo Mikrosantrifüj-CAPSULEFUGE</td><td>TOMY</td><td>PMC-060</td><td>Her proseste karışımın döndürülmesi için</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Nacalai tesque</td><td>35501-15</td><td>Tampon çözeltileri hazırlamak için</td></tr></tbody></table>

tam otomatik bir sistem kullanılarak rekombinant proteinlerin hızlı gliko-kalitatif değerlendirmesi

Rapid Glyco-Qualitative Assessment of Recombinant Proteins Using a Fully Automated System

Tam Otomatik Bir Sistem Kullanılarak Rekombinant Proteinlerin Hızlı Gliko-Kalitatif Değerlendirmesi

Protein glycosylation, a critical post-translational modification, influences the stability, efficacy, and immunogenicity of recombinant proteins, ...

rapid-glyco-qualitative-assessment-recombinant-proteins-using-fully

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu çalışmada, özel proteinlerin glikozilasyon profil kullanılabilir lektin saptama yöntemi ile çoklanır yüksek verim antikoru mikroarray için geliştirilmiş bir protokol açıklanmaktadır. Bu protokol, yeni, güvenilir reaktif özellikleri ve önemli ölçüde daha önceki prosedüre göre zaman, maliyet ve laboratuar ekipmanları gereksinimlerini azaltır.

Kompleks Örnekleri spesifik protein Glikozilasyon arasında Multiplexed Yüksek verim Profilleme için Kimyasal-bloke Antikor Mikroarray

Bu çalışmada, hedef insan rekombinant proteininin farklı üretim platformlarındaki ekspresyonu karşılaştırıldı. Geleneksel fermentör bazlı kültürlere ve bitkilere odaklandık, her bir sistemin kurulumunu açıkladık ve rapor edilen sonuçlara dayanarak her platform için doğal sınırları ve avantajları vurguladık.

Bakteriler, Böcek Hücreleri ve Bitki Sistemleri: Rekombinant Protein Farklı Biofactories İfade Karşılaştırmalı Analizi

Küçük ölçekte mikrobiyal ekzopolisakkaritlerin tanımlanması ve karakterizasyonu için otomatikleştirilmiş modüler yüksek verimli bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, yeni izole edilen bakteri suşlarının veya tüm suş koleksiyonlarının hızlı bir şekilde taranmasını sağlamak için salgılanan polisakkaritlerin toplam miktarını ayrıntılı bir karbonhidrat parmak izi ile analiz etmek için hızlı bir ön seçimi birleştirir.

Otomatik Modüler Yüksek Verimli Ekzopolisakkarit Tarama Platformu Oldukça hassas Karbonhidrat Parmak İzi Analizi ile birleştiğinde

Plazmada kombine proteomik ve glikomik saflaştırma ve LC-MS/MS miktar tayini için yüksek verimli bir protokol geliştirilmiştir. N-bağlı glikozilasyon motiflerinin deamidasyon analizi, deglikosile edilmiş bölgelere özgüydü. N-glikanların doğru kantitasyonu, glikan hidrazid etiketleri stratejisi ile etiketleme yapılırken filtre destekli N-glikan ayrımının bireysellik normalizasyonuna bağlanmasıyla elde edildi.

Nicel Glycomics ve Proteomik Kombine Arıtma Stratejisi

Bu kağıt, ECM protein bileşiminin (1) analizi, glikozilasyon yerleri (2) tespit edilmesi ve glıkan formlarının (3) yapısal karakterizasyon için sağlar, MS analizi için kardiyovasküler doku örnekleri hazırlamak için bir yöntem anlatılmaktadır. Bu metodoloji, diğer dokularda ECM'nin çalışma, minör modifikasyonlarla, uygulanabilir.

Hücre dışı Matrix Glycoproteomics: Kütle Spektrometresi kullanarak Sağlam GLİKOPEPTİT Analizi için Bir Yöntem

Bu eser basılı glycan dizi (PGA) teknoloji küçük hayvanlarda Anti-karbonhidrat antikorlar dolaşan analiz için potansiyelini gösterir.

Basılı Glycan dizi: Anti-karbonhidrat antikorlar küçük hayvanlarda dolaşan repertuar analizi için hassas tekniği

Detaylı bir protokol 48 paralel hücre kültürlerinde bir microbioreactor sisteminde çeşitli koşullar altında eşzamanlı işlem için sunulmaktadır. Hücre kültür süreci, hasat ve sonraki antikor titresi analiz anlatılmıştır.

Yüksek üretilen iş kullanımı otomatik Microbioreactor sistemi modeli Igg1 CHO hücrelerdeki imalatı için

Otomatik microbioreactors hasat hücre kültürü sıvı (HCCF) bir monoklonal antikor arıtma ve sonraki analizi için ayrıntılı bir protokol açıklanmıştır. Kritik kalite niteliklerini (CQAs) belirlemek ve önemli bilgileri ayıklamak için sınırlı numune hacmini maksimize etmek için analitiklerin kullanılması da sunulmaktadır.

Otomatik bir Mikrobioreactor sistemi kullanılarak Çin hamster yumurtlama hücrelerinden bir monoklonal antikor arıtma ve analitik

İmmünoglobulin G (IgG) N-glikan hidrofilik etkileşim kromatografiu UPLC ile karakterizedir. Buna ek olarak, IgG N-glikan yapısı açıkça ayrılır. Burada sunulan yaygın araştırma ortamlarında kullanılabilir, böylece bu deneysel yönteme bir giriştir.

Ultra-Performans Sıvı Kromatografi ile İmmünoglobulin G N-Glikan Analizi

Bir antikorun glikozilasyon paterni klinik performansını belirler, bu nedenle glikozilasyonu kontrol etmek için endüstriyel ve akademik çabalar devam eder. Tipik glikomühendislik kampanyaları zaman ve emek yoğun olduğundan, geçici susturma kullanarak glikozilasyon genlerinin etkisini karakterize etmek için hızlı bir protokolün oluşturulması yararlı olacaktır.

Çin Hamster Yumurtalık Hücrelerinde Hızlı Antikor Glikomühendisliği

Bu protokol, rekombinant insan SLFN14 ribonükleazının üretimini ve kütle fotometrisiyle stoikiyometrik analizini tanımlar.<br...

Rekombinant İnsan SLFN14 ribonükleazının hızlı üretimi ve kütle fotometrisi ile stoikiyometrik analiz

Öğrenin, tam otomatik sistemle rekombinant proteinlerin gliko-kalitatif değerlendirmesini. Lectin tabanlı teknolojiler ve otomatik ölçüm süreçleri kullanılarak glikan analizi verimliliği artırılır.

Tam Otomatik Bir Sistem Kullanılarak Rekombinant Proteinlerin Hızlı Gliko-Kalitatif Değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet