Yenidoğan Fare Kemik İliği İzolasyonu ve Kemik İliği Kaynaklı Makrofajların Hazırlanması
May 24th, 2024
Bu protokol, 7-9 günlük yenidoğan fare kemik iliği hücrelerini izole etmek ve granülosit koloni uyarıcı faktör (M-CSF) kaynağı olarak L929 hücrelerinin bir süpernatantını kullanarak farklılaşmış makrofajlar oluşturmak için enzimatik olmayan ve basit bir yöntemi tanımlar. Kemik iliği kaynaklı makrofajlar, yüzey antijenleri F4/80, CD206, CD11b ve fonksiyonel yeterlilik açısından daha fazla analiz edildi.
Bu çalışmanın kapsamı, bakteriyel enfeksiyona karşı erken yaşam bağışıklık tepkisindeki bazı sınırlamaları anlamaktır. Bunu başarmak için yenidoğanlara özgü araştırma modelleri geliştirmemiz ve kullanmamız gerekiyor. Yedi günlük bir yavrudan kemik iliğinin izolasyonu zordur ve iyi bilinmemiştir.
Neonatal kemik iliği kaynaklı makrofajlar, diğer KMY'lerle karşılaştırıldığında hassas ve strese yatkındır. Bu protokolde kullanılan teknik basit ve tekrarlanabilirdir. Bu yöntem, kullanıcılara herhangi bir enzim kullanmadan yedi ila dokuz günlük yenidoğan farelerden kemik iliğini izole etmede rehberlik eder.
Bu çalışma, neonatal farelerden kemik iliği kaynaklı makrofajlar üretmek için neonatal immünoloji ile ilgili soruları ele almak için kullanılabilecek standart bir strateji sunmaktadır. Bu tekrarlanabilir yöntem, birçok uzmanlık alanında yenidoğan bağışıklık araştırmalarını ilerletmek için yaşa özgü bir model sağlar.
Genel Bakış
Bu protokol, neonatal fare kemik iliği hücrelerini izole etmek ve farklılaşmış makrofajlar üretmek için enzimsiz bir yöntemi ana hatlarıyla belirtir. Çalışma, 7-9 günlük neonatal farelerle çalışmanın zorluklarına ve kemik iliği kaynaklı makrofajlannın duyarlılığını üzerine yoğunlaşır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Immunoloji
- Hücre Biyolojisi
Arka Plan
- Bakteryel enfeksiyonlara karşı erken yaş bağışıklık tepkilerinin anlaşılması.
- Neonatal farelerden kemik iliği izole etmenin zorlukları.
- Neonatal kemik iliği kaynaklı makrofajlar duyarlıdır ve strese yatkındır.
- Neonatal araştırmalarda tekrarlanabilir tekniklere duyulan ihtiyaç.
Çalışmanın Amacı
- Neonatal farelerden kemik iliği izole etmek için güvenilir bir yöntem geliştirmek.
- Bağışıklık tepki çalışmaları için işlevsel makrofajlar üretmek.
- Neonatal bağışıklık tepkilerinin anlaşılmasına katkıda bulunmak.
Kullanılan Yöntemler
- 7-9 günlük neonatal farelerden kemik iliği izole etmek.
- Hücre izolasiyonunda enzimsiz teknik.
- M-CSF kaynağı olarak L929 hücre süpernatanı kullanımı.
- Makrofajların yüzey antijenlerinin ve fonksiyonel yetkinliğinin analizi.
Ana Sonuçlar
- Neonatal kemik iliği kaynaklı makrofajların başarılı bir şekilde izole edilmesi.
- Makrofajların F4/80, CD206 ve CD11b yüzey antijenleri kullanılarak karakterize edilmesi.
- Üretilen makrofajların fonksiyonel yetkinliğinin gösterilmesi.
- Yöntemin basit ve tekrarlanabilir olarak doğrulanması.
Sonuçlar
- Protokol, neonatal bağışıklık tepkilerini incelemek için güvenilir bir yöntem sağlar.
- İzole edilen makrofajlar daha ileri immünoloji araştırmalarında kullanılabilir.
- Bu teknik, neonatal sağlık çalışmalarında ilerlemeye katkıda bulunabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
