Name: Serebral damarların anatomik yapısına zarar vermeden orta serebral arter tıkanıklığı/reperfüzyonunun bir sıçan modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T14:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: Keşfedin, sıçanlarda orta serebral arter tıkanıklığı modeli geliştirmek için mikrocerrahi teknikleri kullanarak serebral damar anatomisini koruyan minimal invaziv bir inme yöntemini. Bu protokol, iskemik inme araştırmalarında daha doğru sonuçlar elde etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, 2023'te Hebei Eyaleti Yabancı İstihbaratın Tanıtılması Projesi tarafından desteklenmiştir. Liwen Bianji'den (Edanz) (www.liwenbianji.cn) Dr. Lisa Kreiner'e, bu el yazmasının bir taslağının İngilizce metnini düzenlediği için teşekkür ederiz.

Deneysel prosedür, Yantai Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nden (Onay Numarası: YTDX20230410) onay aldı ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Yönergelerine bağlı kaldı. Bu çalışma için ağırlıkları 300-350 g arasında değişen erkek Sprague-Dawley sıçanları kullanıldı. Kullanılan hayvanların, reaktiflerin ve ekipmanların kapsamlı bir listesi Malzeme Tablosunda verilmiştir.
1. Hayvan hazırlama
<ol>
	<li>Hayvanları 12 saatlik aydınlık/karanlık döngüsünü, kontrollü sıcaklığı ve nemi koruyan bir ortamda barındırın. Yiyecek ve suya sınırsız erişimleri olduğundan emin olun.</li>
</ol>
2. Anestezi
<ol>
	<li>Sıçanları ketamin (80 mg / kg) ve ksilazin (20 mg / kg) içeren bir karışım ile intraperitoneal enjeksiyon yoluyla anestezik hale getirin><.
	NOT: Farelerin başını ve gövdesini aşağı doğru eğin. Enjeksiyon bölgesi, hayvanın karnının sağ alt çeyreğindedir. Enjekte etmeden önce pistonu geri çekin. Ortalama enjeksiyon hacmi 0.4 mL'dir.</li>
	<li>Arka pençenin geri çekilme refleksini ve yanıp sönme refleksini değerlendirerek anestezi indüksiyonunu onaylayın. Yeterli anestezi derinliği elde edilemezse, cerrahi işlem sırasında izofluran ile takviye edin.</li>
</ol>
3. İskemik modelleme prosedürü
<ol>
	<li>Cerrahi aletleri bir otoklav kullanarak sterilize edin. Ameliyat masalarını ve ilgili ekipmanları %70 etanol ile dezenfekte edin.</li>
	<li>Beklenen kesi yerinin etrafındaki kürkü tıraş ederek ameliyat bölgesini hazırlayın. Cerrahi bölgedeki cildi betadin ve% 70 etanol ile üç kez dezenfekte edin.</li>
	<li>Ventral tarafta yaklaşık 1,5 cm uzunluğunda orta hat kesisi yapın ve yüzeysel fasyayı açın.</li>
	<li>Dış karotis arteri (ECA), iç karotis arteri (ICA) ve ortak karotis arteri (CCA) daha önce açıklanan yönteme göre ortaya çıkarmak için keskin ve künt diseksiyon yapın<: sup class="xref">7.</li>
	<li>CCA'nın etrafına üç adet 4-0 ipek sütür yerleştirin ve ECA'dan ICA çatallanmasının yakınına başka bir ipek sütür yerleştirin. Proksimal CCA'ya serbest bırakılabilir bir kayma düğümü bağlayın. Kan akışını engellemek için bir hemostat kullanarak distal CCA'daki dikişi sıkın. Damarın tıkanmadığından emin olmak için dikiş sırasında CCA'nın etrafına gevşek bir şekilde başka bir kayma düğümü atın. 
	NOT: Kayma düğümünün aşırı sıkı olmadığından, vasküler dikiş sırasında serbest bırakılması gerekeceğinden, yalnızca kan akışını engellemeye yetecek kadar olduğundan emin olun.</li>
	<li>CCA üzerinde proksimal ipek sütür ile orta sütür arasında makas kullanarak 0,5 mm'lik bir kesi yapın. 
	NOT: Kesi işleminin filamentin (silikon kaplı uç) CCA'ya girmesine izin verdiğinden emin olun.</li>
	<li>CCA'ya 3 cm uzunluğunda 4-0 filament (silikon kaplı uç) yerleştirin. İntraluminal filamenti sabitlemek ve kanamayı önlemek için CCA'nın etrafındaki ipek dikişleri sıkın; daha sonra dikişi distal CCA'dan çıkarın.</li>
	<li>Filamentin ECA'ya girmediğinden emin olmak için ECA'nın etrafındaki dikişleri kontrol ederek filamenti MCA'nın lümenine yerleştirmeye devam edin. Yerleştirme uzunluğu tipik olarak 18 mm ila 20 mm'dir.</li>
	<li>Bir zamanlayıcı başlatın ve oklüzyonun başladığı zamanı kaydedin. Boyun kesisini 3-0 ipek dikişlerle dikin ve hayvanı dikkatlice bir kurtarma kafesine yerleştirin. İntraperitoral olarak 0.5 mL normal salin uygulayın.</li>
</ol>
4. CCA'nın mikrocerrahi dikilmesi
<ol>
	<li>İskemi sonrası sıçanı 1.5 saat sonra yeniden uyuşturun. Kesi bölgesini %70 etanol ile üç kez dezenfekte edin ve kesiyi tekrar açın.</li>
	<li>CCA insizyonunun yakınında beyaz uç net bir şekilde görünene kadar tıkayıcı filamenti yavaşça geri çekin. CCA çatallanmasının yakınındaki güvenli intraluminal sütür düğümüne yatay olarak yakın bir mikro kelepçe yerleştirin. 
	NOT: Silikon dekolmanı ve ardından trombozu önlemek için beyaz filament ucunu sıkıştırmaktan kaçının.</li>
	<li>Güvenli intraluminal sütür düğümünü serbest bırakın ve filamenti tamamen çıkarın.</li>
	<li>Proksimal CCA düğümünün kalp ucu tarafına yakın başka bir mikro kelepçe yerleştirin. Daha sonra, proksimal CCA. etrafındaki dikiş düğümünü çıkarın
	NOT: Mikrovasküler sütürlemeyi kolaylaştırmak için sonraki adımlarda sabit damarları yükseltmek için kelepçelerin uygun şekilde yerleştirilmesi çok önemlidir. Kaymayı önlemek için kelepçeleri çevredeki kasların üzerine yatay olarak yerleştirin.</li>
	<li>Kesi bölgesini normal tuzlu su ile durulayın ve kanı çıkarmak ve net bir cerrahi alan elde etmek için alanı steril bir pamuk topuyla kurulayın.</li>
	<li>Mikroskop altında (4x büyütme), CCA insizyonunu 11-0 mikrocerrahi sütürler kullanarak kesintili bir düzende dikin, tipik olarak insizyon boyutuna bağlı olarak iki dikiş gerektirir.</li>
	<li>Dikişten sonra, kan akışını eski haline getirmek için CCA'nın her iki ucundan mikro kelepçeleri çıkarın.</li>
	<li>Steril bir pamuk top ile CCA dikiş bölgesine 30 saniye boyunca baskı uygulayın. Kanama olmadığından emin olmak için CCA'yı 2 dakika boyunca gözlemleyin. Sıçanın boynu kesisini dikin ve hayvanı kafese geri göndermeden önce anestezi iyileşmesi için 35 °C'lik bir bakım kutusuna koyun. 
	NOT: Postoperatif analjezi için intraperitoneal olarak meloksikam ile 2 mg / kg'lık bir dozda uygulayın.</li>
</ol>
5. 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC) ile boyama
<ol>
	<li>İskemi-reperfüzyondan üç gün sonra, hayvanlara% 4 izofluran ve servikal çıkık ile derin anestezi altında ötenazi yapın.</li>
	<li>Beyinleri çıkarın ve bir neşter bıçağı8 kullanarak 2 mm kalınlığında koronal bölümler halinde kesin.</li>
	<li>Beyin bölümlerini 37 ° C'de 20 dakika boyunca% 2 TTC ile inkübe edin.</li>
	<li>Beyin bölümlerini iki kez% 10 formalin ile durulayın, daha sonra% 10 formalin ile oda sıcaklığında 30 dakika boyunca sabitleyin.</li>
	<li>Ardışık dilimlerin dijital fotoğraflarını çekin ve Image J yazılımını kullanarak enfarktüs alanlarını kantitatif olarak ölçün.</li>
</ol>
6. Nörolojik fonksiyon testi
NOT: Nörolojik fonksiyon, önceki bir raporun ardından Garcia testi kullanılarak değerlendirildi9.
<ol>
	<li>Spontan aktiviteyi, dört uzuvun tümünün hareketindeki simetriyi, ön pençe uzanmasını, tırmanmayı, vücut propriyosepsiyonunu ve vibrissae dokunuşuna yanıtı değerlendirin. Garcia test kriterlerine göre puanlar atayın ve normal nörolojik fonksiyonu gösteren maksimum 18 puan alın.</li>
</ol>
7. İstatistiksel analiz
<ol>
	<li>Öğrencinin t-testini kullanarak istatistiksel analiz yapmak için GraphPad Prism'i kullanın. Verileri ortalama ± standart sapma olarak ifade edin. P < 0.05 ise istatistiksel olarak anlamlı ortalamalar arasındaki farkları göz önünde bulundurun.</li>
</ol>

Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats with Preserved Vascular Anatomy

<ol><li>Tu, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((China+stroke+surveillance+report+2021%5BTitle%5D)+AND+%22Mil+Med+Res%22%5BJournal%5D)">China stroke surveillance report 2021.</a> Mil Med Res. 10 (1), 33(2023).</li>
<li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+oxidative+stress+and+inflammation+to+prevent+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+in+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Targeting oxidative stress and inflammation to prevent ischemia-reperfusion injury.</a> Front in Mol Neurosci. 13, 28(2020).</li>
<li>Ringelstein, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+and+extent+of+hemispheric+brain+infarctions+and+clinical+outcome+in+early+and+delayed+middle+cerebral+artery+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Type and extent of hemispheric brain infarctions and clinical outcome in early and delayed middle cerebral artery recanalization.</a> Neurology. 42 (2), 289-298 (1992).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%3A+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Jap+J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema: A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jap J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Trueman, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+re-examination+of+the+intraluminal+filament+MCAO+model%3A+Impact+of+external+carotid+artery+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">A critical re-examination of the intraluminal filament MCAO model: Impact of external carotid artery transection.</a> Transl Stroke Res. 2 (4), 651-661 (2011).</li>
<li>Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+%28MCAO%29+model+for+ischemic+stroke+with+laser+Doppler+flowmetry+guidance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser Doppler flowmetry guidance in mice.</a> J Vis Exp. (51), e2879(2011).</li>
<li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Icaritin+inhibits+neuroinflammation+in+a+rat+cerebral+ischemia+model+by+regulating+microglial+polarization+through+the+GPER-ERK-NF-%CE%BAB+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Icaritin inhibits neuroinflammation in a rat cerebral ischemia model by regulating microglial polarization through the GPER-ERK-NF-κB signaling pathway.</a> Mol Med. 28 (1), 142(2022).</li>
<li>Garcia, J. H., Wagner, S., Liu, K. F., Hu, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+Deficit+and+extent+of+neuronal+necrosis+attributable+to+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Neurological Deficit and extent of neuronal necrosis attributable to middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 26 (4), 627-634 (1995).</li>
<li>Bracko, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-Nitropropionic+acid-induced+ischemia+tolerance+in+the+rat+brain+is+mediated+by+reduced+metabolic+activity+and+cerebral+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">3-Nitropropionic acid-induced ischemia tolerance in the rat brain is mediated by reduced metabolic activity and cerebral blood flow.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (9), 1522-1530 (2014).</li>
<li>Goldmacher, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+transplanted+bone+marrow+stem+cells+and+their+effects+in+the+rat+MCAO+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Tracking transplanted bone marrow stem cells and their effects in the rat MCAO stroke model.</a> PLoS One. 8 (3), e60049(2013).</li>
<li>Lee, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+human+umbilical+cord+blood-derived+mesenchymal+stem+cells+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells in Alzheimer's disease.</a> Neurosci Lett. 481 (1), 30-35 (2010).</li>
<li>Connolly, E. S., Winfree, C. J., Solomon, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+and+strain-related+variables+significantly+affect+outcome+in+a+murine+model+of+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Procedural and strain-related variables significantly affect outcome in a murine model of focal cerebral ischemia.</a> Neurosurgery. 38 (3), 523-531 (1996).</li>
<li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13 (4), 683-692 (1993).</li>
<li>Dittmar, M., Spruss, T., Schuierer, G., Horn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((External+carotid+artery+territory+ischemia+impairs+outcome+in+the+endovascular+filament+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">External carotid artery territory ischemia impairs outcome in the endovascular filament model of middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 34 (9), 2252-2257 (2003).</li>
<li>Virtanen, T., Jolkkonen, J., Sivenius, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((External+carotid+artery+territory+ischemia+impairs+outcome+in+the+endovascular+filament+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">External carotid artery territory ischemia impairs outcome in the endovascular filament model of middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 34 (9), 2252-2257 (2004).</li>
</ol>

Yazarların ifşa edecek herhangi bir potansiyel çatışan çıkarları yoktur.

MCAo, iskemi10,11,12'den sonra kan akışını eski haline getirerek hastalarda gözlemlenen inme sürecini etkili bir şekilde kopyalayan, inmenin hayvan modellerini oluşturmak için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Laboratuvarımız, ECA'ya zarar vermeden CCA'dan reperfüzyon sağlayan bir iskemik inme modeli geliştirmiştir. İskemi indüksiyonunu takiben CCA'nın mikrocerrahi onarımı yapılır. CCA kan akışının doğrudan ölçümü yapılmamış olsa da, deneyciler reperfüzyona geçmeden önce CCA'da vasküler nabız gözlemlediler. Bu teknik, boyun damarlarının anatomik bütünlüğünü korurken, hastalardaki inme sürecine çok benzer. Ayrıca, nörolojik fonksiyon ve beyin iskemisi alanının değerlendirilmesi, bu cerrahi yaklaşımın neden olduğu inmenin geçerliliğini doğrulamıştır.
Daha önce açıklanan iskemik inme modelleri çeşitli faktörlerden etkilenebilir. Koizumi ve ark.4 tarafından yapılan yöntemde, kan reperfüzyonu, CCA'nın ligasyonu nedeniyle büyük ölçüde Willis çemberine dayanır. Bununla birlikte, serebral damar sistemindeki varyasyonlar, nihai serebral enfarktüs hacmini etkileyebilir ve düşük kan perfüzyonu nedeniyle inme modelinin ölüm oranını potansiyel olarak artırabilir13,14. Ek olarak, ECA'nın iskemisi yüz kaslarının ve sinirlerinin işlevini bozarak çeşitli nörolojik fonksiyonların değerlendirilmesini etkileyebilir15,16.
Mevcut yöntem, bu zorlukları üç temel adımla ele almaktadır: (1) CCA insizyonunu mümkün olduğu kadar küçük, yalnızca filament yerleştirme için yeterince büyük tutmak, vasküler dikişle ilişkili süreyi ve hasarı azaltmak. (2) Silikon dekolmanına ve tromboza yol açabilecek beyaz filament ucunun klemplenmesini önlemek için distal CCA'yı klemplerken mikrovasküler klemplerin CCA çatallanmasına mümkün olduğunca yakın yerleştirilmesi. (3) Vasküler onarımdan sonra orta hat boyun insizyonunu dikmeden önce nabzın devam etmesi ve önemli kanama olmaması için CCA'nın gözlemlenmesi.
Mevcut yöntemin çeşitli sınırlamaları vardır. İlk olarak, dikiş bölgesinde emboli oluşma olasılığı vardır, bu da ayrılırlarsa daha fazla beyin iskemisine yol açabilir. Bu risk gelecekteki deneylerde dikkatle değerlendirilmeli ve yönetilmelidir. İkincisi, çalışma farelerin vücut ağırlığını izlemedi, bu da yöntemin gıda alımlarını etkileyip etkilemediğini belirlemeyi zorlaştırıyor. Gıda alımı, yöntemin avantajlarının doğrudan bir göstergesidir ve değerlendirilmesi değerli bilgiler sağlayabilir. Son olarak, mevcut yöntem mikrocerrahi operasyonlarda teknik yeterlilik gerektirmektedir ve bu da uygun eğitim ve uzmanlık olmadan yaygın kullanımını sınırlayabilmektedir.
Özetle, MCAo modelleme yöntemi yüksek fizyolojik uygunluk ve yapısal bütünlük sunarken, daha sağlam deneyler için ele alınması gereken sınırlamalarla birlikte gelir. Boyun damarlarının anatomik bütünlüğünün korunması ve hastalarda inme süreçlerinin yakından simüle edilmesi yöntemin önemli güçlü yönlerindendir. Bu yaklaşım şüphesiz iskemik inme araştırmalarına önemli ölçüde katkıda bulunacak ve deneysel modellerin güvenilirliğini ve doğruluğunu artıracaktır. Sonuçta bu, terapötik etkileri test etmek için daha az deney grubuna ihtiyaç duyulmasına yol açarak daha güvenilir deneysel sonuçlara yol açabilir.

Dünya çapında erişkinlerde önde gelen ölüm ve uzun süreli nörolojik disfonksiyon nedeni olan inme, iskemik inme vakaların yaklaşık %81,9'unu oluştururken, serebral kanama ve subaraknoid kanama sırasıyla %14,9 ve %3,1'i oluşturur1. İskemik inme sıklıkla orta serebral arterin (MCA) ateroskleroz veya tıkanmasından kaynaklanır ve bu da lokal serebral kan akışının azalmasına ve ardından beyin hasarına yol açar. İskemik hücrelere besin tedarikindeki bu azalma, enerji tükenmesini tetikleyerek zar bütünlük kaybına, hücre şişmesine ve nihayetinde lizise neden olur. Ek olarak, hücre içi kalsiyumun artması, uyarıcı amino asit salınımı, artmış serbest radikal üretimi ve inflamatuar hücre aktivasyonu gibi faktörler, inme sonrası beyin dokusu hasarına katkıda bulunur2.
İskemik inme için tedavi hedefleri çok yönlüdür: devam eden nörolojik hasarı azaltmak ve mortaliteyi ve uzun vadeli sakatlığı azaltmak; hareketsizlik ve nörolojik disfonksiyondan kaynaklanan komplikasyonları önlemek; ve inme tekrarlama riskini en aza indirmek. İskemik inme patofizyolojisinin karmaşıklığı göz önüne alındığında, iskemik inmeyi hedefleyen tedavilerin araştırılması ve geliştirilmesi için sağlam bir inme modeli gereklidir.
Şu anda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAo), iskemik inmenin yaygın bir hayvan modelidir3. MCAo tipik olarak, orta serebral arterin (MCA) kökenine ulaşana kadar servikal damarlardan silikon uçlu veya alevle körelmiş bir monofilament yerleştirilerek gerçekleştirilir. 1986'da Koizumi ve meslektaşları, ortak karotis arterdeki (CCA) bir kesiden silikon uçlu bir monofilamentin yerleştirilmesini içeren bir teknik geliştirdiler, bu da MCA'nın girişine ulaşmasına ve kan akışını engellemesine izin verdi4. 1989'da Longa'nın grubu, dış karotis arterde (ECA) bir kesi yoluyla bir monofilament sokulmasını içeren başka bir MCAo yöntemi bildirdi. Monofilament daha sonra MCA5'in başlangıç noktasına ulaşmadan önce internal karotis arter (ICA) ve ECA'nın çatallanmasını geçer.
MCAo'yu indüklemek için mevcut iki yöntemin sınırlamaları açıktır. Koizumi'nin yöntemi, ipsilateral CCA'nın kalıcı olarak bloke edilmesini gerektirir ve reperfüzyon yalnızca Willis4 çemberine dayandığından, MCA perfüzyonunun azalmasına yol açar. Tersine, Longa'nın yöntemi, ECA'nın kesilmesini içerir, bu da ECA sistemine zarar verir ve ardından yüz kası fonksiyonunun bozulmasına neden olur5. Bu hasar, yiyecek ve su alımını etkilemenin yanı sıra yüzün duyusal işlev bozukluğuna neden olabilir, rehabilitasyonu ve iskemik inme sonrası nörolojik fonksiyonun değerlendirilmesini etkileyebilir6.
Mevcut protokol, serebral damarların anatomik yapısına zarar vermeden iskemik inme modelini indüklemek için yeni bir yöntem geliştirerek bu sınırlamaları ele almayı amaçlamaktadır. Bu yeni yaklaşım, CCA'yı onarmak için mikrocerrahi teknikleri kullanır ve böylece önceki yöntemlerle ilişkili dezavantajlardan kaçınır.

<table><tbody><tr><td>% 10 formalin</td><td>Pekin Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>BL913A</td><td></td></tr><tr><td>11-0 mikrocerrahi sütürler</td><td>Ningbo Medical Suture Needle Co., Ltd.</td><td>3/8 1& kez; </td><td></td>5</tr><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC)</td> <td>SIGMA</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>3-0 ipek sütür</td><td>Ningbo Medical Suture Needle Co., Ltd.</td><td>3-0</td><td></td></tr><tr><td>%4 izofluran&nbsp; &nbsp;</td><td>Tianjin Ringpu Biyo-Teknoloji Co, Ltd</td><td></td><td></td>20221102</tr><tr><td>6-0 ipek sütür</td><td>Ningbo Tıbbi Sütür İğnesi Co., Ltd.</td><td>6-0</td><td></td></tr><tr><td>%70 etanol</td><td>Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>20230408</tr><tr><td>Filament</td><td>Xinong Teknolojileri Co Ltd.</td><td>2838-A5</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin ve nbsp; &nbsp;</td><td>Jiangsu Hengrui İlaç Co., Ltd.</td><td>230613BL</td><td></td></tr><tr><td>Erkek Sprague Dawley sıçanları</td><td>Jinan Pengyue Deneysel Hayvan Yetiştiriciliği Co., Ltd.</td><td>SCXK (Lu) 20190003</td><td></td></tr><tr><td>Mikroklipsler</td><td>Şangay Jinzhong Tıbbi Cihaz Fabrikası</td><td>W40150</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>ZEISS</td><td>S100 OPMI pico</td><td></td></tr><tr><td>Hemşirelik kutusu</td><td>Beijing Fuyi Electrical Appliance Co., Ltd.</td><td>FYL-YS-100L</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>SIGMA PHR3263</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

serebral damarların anatomik yapısına zarar vermeden orta serebral arter tıkanıklığı/reperfüzyonunun bir sıçan modeli

A Rat Model of Middle Cerebral Artery Occlusion/Reperfusion Without Damaging the Anatomical Structure of Cerebral Vessels

İskemik inme, dünya çapında yetişkinler arasında uzun süreli sakatlık ve mortalitenin birincil nedeni olarak durmaktadır. İskemik inmenin hayvan modelleri, patolojik mekanizmalarını anlamamıza ve potansiyel tedavilerin geliştirilmesine önemli ölçüde katkıda bulunmuştur. Şu anda, serebral iskeminin hayvan modellerini indüklemek için filament (endovasküler sütür) tekniklerini içeren iki yaygın yöntem vardır. Bununla birlikte, bu yöntemlerin beyne kan perfüzyonunun azalması, dış karotis arter sisteminde hasar, bozulmuş gıda ve/veya su alımı ve yüzün duyusal işlev bozukluğu gibi doğal sınırlamaları vardır. Bu makale, serebral vasküler anatomiden ödün vermeden bir sıçan iskemik inme modelini indüklemek için yeni bir yöntem sunmaktadır. Bu çalışmada, Sprague-Dawley sıçanlarının ortak karotis arteri (CCA) ortaya çıkarıldı ve bir insizyon yapıldı. Daha sonra orta serebral arteri tıkamak için insizyondan internal karotid artere bir filament yerleştirildi. 1.5 saatlik indüklenmiş iskemi sonrasında, tıkayıcı filament hem internal karotis arterden hem de CCA'dan tamamen çıkarıldı. CCA'daki insizyon daha sonra mikroskop altında 11-0 mikrocerrahi sütürler kullanılarak dikildi (büyütme 4x). CCA'yı onarmak için mikrocerrahi tekniklerin kullanılmasıyla, bu çalışma, serebral kan damarlarının anatomik bütünlüğünü korurken sıçanlarda iskemik inme modelini indüklemek için başarılı bir şekilde benzersiz bir yöntem geliştirdi.

Mikrosütur süreci 
Beyaz flaman ucu görünene kadar, flaman CCA insizyonu yakınından geri çekildi (Şekil 1A). Ardından CCA üzerine mikro klempler yerleştirildi (Şekil 1B). 4x büyütmede bir mikroskop altında, CCA insizyonu mikrocerrahi süturlar kullanılarak kesikli dikiş modeliyle dikildi (Şekil 1C). Sonrasında mikro klempler CCA'dan çıkarılarak anatomik yapı ve kan akışı yeniden sağlandı (Şekil 1D).
TTC boyaması ve mortalite oranı 
Toplam 12 yetişkin erkek sıçan, rastgele iki gruba ayrılmıştır: sham ve model (her grupta n = 6). Maalesef, sham grubundaki bir hayvan anestezik doz aşımından dolayı, model grubundaki bir hayvan ise 24 saat içinde ölmüştür. Serebral iskemiden kaynaklanan enfarktlar hem striatumda hem de kortekste gözlemlenmiştir (Şekil 2A). İskemik inmeden sonraki 3. günde, toplam enfarkt yüzdesinin hemisferin %29,3 ± 1,6'sı olduğu ölçülmüş (Şekil 2B) ve cerrahi sonrası mortalite oranı %16,7 olarak belirlenmiştir.
Nörolojik fonksiyonun değerlendirilmesi 
İskemik inme sonrası 1. ve 3. günlerde, model grupların skorları sham gruplarına kıyasla anlamlı şekilde azalmıştır (sırasıyla 17,8 ± 0,4 vs. 8,2 ± 1,5, Şekil 3A; 17,6 ± 0,9 vs. 9,6 ± 1,3, Şekil 3B).
<img alt="Cerrahi sütür tekniği diyagramı; dokuyu tutan forseps; adımlar: iğne yerleştirme, düğüm atma." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66635/66635fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Şekil 1"> 
Şekil 1: Mikrosütür süreci. (A) Filament CCA'dan çıkarılır. Mavi oklar mikrovasküler klempleri göstermektedir. (B) Siyah ok, filament tamamen çıkarıldıktan sonraki insizyonu göstermektedir. Mavi oklar mikrovasküler klempleri göstermektedir. (C) Mikroskop altında (4x büyütme), CCA insizyonu 11-0 mikrocerrahi sütürler kullanılarak kesikli paternle dikilmiştir. Mavi oklar mikrovasküler klempleri göstermektedir. Siyah ok, sütüre edilmiş insizyonu göstermektedir. (D) Mikro klempler çıkarılır ve CCA kan akışı yeniden sağlanır. Siyah ok, CCA'nın sütüre edilen bölgesini göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66635/66635fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="İskemik beyin doku kesitleri, süt grafiği, iskemi alanı yüzdesi karşılaştırması, deney sonuçları." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66635/66635fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Şekil 2"> 
Şekil 2İskemi modelinin TTC boyama sonuçları. (A) Serebral iskemi sonrası 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC) ile boyanmış beyin kesitlerinin temsili görüntüleri. Canlı dokuda TTC, dehidrogenazlar tarafından enzimatik olarak indirgenerek kırmızı renkli 1,3,5-trifenilformazana dönüştürülür. Nekrotik alanlardaki dokular, söz konusu enzimatik aktivitenin yokluğu nedeniyle beyaz kalır. (B) Serebral iskemi sonrası 3. gündeki sıçanlarda iskemik alan yüzdesi. Sham grubu ile karşılaştırıldığında, **P &lt; 0.01. Veriler ortalama ± standart sapma olarak ifade edilmiştir. Her grupta beş sıçan bulunmaktaydı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66635/66635fig02large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Sham ve Model gruplarında Garcia skorlarını karşılaştıran ve anlamlı farkı (** ) gösteren sütun grafiği." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66635/66635fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Şekil 3"> 
Şekil 3: Nörolojik fonksiyon değerlendirmesi. (A) Serebral iskemiden 1 gün sonraki Garcia skorları. (B) Serebral iskemiden 3 gün sonraki Garcia skorları. Sham grubu ile karşılaştırıldığında, **P &lt; 0.01. Veriler ortalama ± standart sapma olarak ifade edilmiştir. Her grupta beş sıçan bulunmaktadır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66635/66635fig03large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Mevcut protokol, serebral damarların anatomik yapısını hasara neden olmadan koruyan bir orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu sıçan modelini tanımlar.

Serebral damarların anatomik yapısına zarar vermeden orta serebral arter tıkanıklığı/reperfüzyonunun bir sıçan modeli

Ischemic stroke stands as the primary cause of long-term disability and mortality among adults worldwide. Animal models of ischemic stroke have ...

Bu çalışma, orta serebral arter tıkanıklığı veya reperfüzyonu için serebral damar entegrasyonunu sağlayan bir sıçan modeli geliştirmektedir. Serebral vasküler anatomiden ödün vermeden bir sıçan iskemik inme modelini indüklemek için yeni bir yöntem sunmaya odaklanmaktadır. Projede mikrocerrahi teknikler ve filamente bağlı iskemi kullanılmıştır.Ortak karotis artere veya dış karotis sistemine zarar vermeden iskemiyi indüklemek için bir yöntem sunar. Kan akışını kalıcı olarak bozabilen veya serebral vasküler anatomiye zarar verebilen tekniklerin aksine, bu protokol birçok damarın anatomik bütünlüğünü korur. İskemik inmeyi incelemek için daha doğru, daha az zararlı bir yaklaşım sağlar.Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi bir işletim platformuna yerleştirin. Boğaz ve sol boyun bölgesi çevresindeki kürkü tıraş ettikten sonra, ameliyat bölgesini Betadine ve% 70 etanol ile üç kez dezenfekte edin. Boynun ventral tarafında 1,5 santimetre uzunluğunda orta hat kesisi yapın ve yüzeysel fasyayı açın.Dış karotis arteri, iç karotis arteri ve ortak karotis arteri ortaya çıkarmak için künt diseksiyon yapın. Ortak karotis arterin etrafına üç adet 4-0 ipek sütür yerleştirin ve internal karotis arter bifurkasyonunun yakınındaki dış karotis arterden başka bir ipek sütür yerleştirin. Proksimal ortak karotis arter üzerine serbest bırakılabilir bir kayma düğümü bağlayın.Kan akışını engellemek için bir hemostat kullanarak distal ortak karotis arter üzerindeki dikişi sıkın. Damarın tıkanmadığından emin olmak için dikiş sırasında ortak karotis arterin etrafına gevşek bir şekilde başka bir kayma düğümü bağlayın. Şimdi, makas kullanarak, proksimal ipek sütür ile ortak karotis arter üzerindeki orta sütür arasında 0,5 milimetrelik bir kesi yapın.Ortak karotis artere üç santimetre uzunluğunda 4-0 filament sokun. İntraluminal filamenti sabitlemek ve kanamayı önlemek için ortak karotis arterin etrafındaki ipek dikişleri sıkın. Daha sonra dikişi distal ortak karotis arterden çıkarın.Dış karotis arter etrafındaki dikişleri kontrol ederek filamenti orta serebral arterin lümenine yerleştirmeye devam edin. Bir zamanlayıcı başlatın ve oklüzyonun başladığı zamanı kaydedin. Boyun kesisini 3-0 ipek dikişlerle dikin.Hayvanı dikkatlice bir kurtarma kafesine yerleştirin. İskemik modellemeden sonra, anestezi uygulanmış sıçanın boyun insizyonunu tekrar açın. Diseksiyon mikroskobu altında, mikro kelepçeyi intraluminal sütür düğümünün yakınına yatay olarak yerleştirirken tıkayıcı filamenti nazikçe geri çekin.Ortak karotis arter insizyonunun yakınında beyaz uç açıkça görünene kadar geri çekilmeye devam edin. Ardından filamenti tamamen çıkarın ve güvenli intraluminal sütür düğümünü serbest bırakın. Proksimal ortak karotis arter düğümünün kalp ucu tarafına yakın başka bir mikro kelepçe yerleştirin.Daha sonra, proksimal ortak karotis arter etrafındaki dikiş düğümünü çıkarın. Kesi bölgesini tuzlu su ile durulayın. Kanı çıkarmak ve net bir cerrahi alan elde etmek için alanı steril bir pamuk topuyla kurulayın.Şimdi 4x büyütmede, ortak karotis arter insizyonunu 11-0 mikrocerrahi sütürler kullanarak kesintili bir şekilde dikin. Dikişten sonra, kan akışını eski haline getirmek için ortak karotis arterin her iki ucundan mikro kelepçeleri çıkarın. Steril bir pamuk topu ile ortak karotis arter sütür bölgesine 30 saniye boyunca baskı uygulayın.Kanama olmadığından emin olmak için ortak karotis arteri iki dakika boyunca gözlemleyin. Boyun kesisini dikin ve anestezi iyileşmesi için fareyi 35 santigrat derecelik bir bakım kutusuna yerleştirin. İskemi reperfüzyonundan üç gün sonra, beyni ötenazi yapılan sıçandan çıkarın.Beyni eksi 20 santigrat derecede 20 dakika dondurun. Dondurulduktan sonra, beyni iki milimetre kalınlığında koronal bölümlere ayırmak için bir neşter kullanın. Beyin bölümlerini 37 santigrat derecede 20 dakika boyunca% 2 TTC ile inkübe edin.İnkübasyondan sonra, beyin bölümlerini küçük bir Petri kabına aktarın ve% 2 TTC'yi atın. Daha sonra beyin bölümlerini oda sıcaklığında 30 dakika boyunca% 10 formalin ile sabitleyin. Formalini atın ve beyin bölümlerini PBS ile durulayın.Ardışık dilimlerin dijital fotoğraflarını çekin. ImageJ yazılımını kullanarak enfarktüs alanlarını kantitatif olarak ölçün. TTC boyamasından sonra, serebral iskemiye bağlı enfarktüsler hem striatumda hem de kortekste gözlendi.İskemik inmeden üç gün sonra, toplam enfarktüslü yüzde, ameliyat sonrası mortalite oranı %16.7 ile hemisferin yaklaşık %30'unda ölçüldü.

a-rat-model-middle-cerebral-artery-occlusionreperfusion-without

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Sıçan iskemik beyin hasarı Cerrahi indüksiyon inme araştırma için yaygın olarak kullanılan bir model. Burada orta serebral arter oklüzyonu ile fokal serebral iskemi indüksiyon göstermektedir. Histolojik boyama ve manyetik rezonans görüntüleme ile enfarkt Görselleştirme de gösterilir.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Biz video intraluminal monofilament kullanarak yetişkin farelerde orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Ayrıca beyin enfarktüsü ölçüde 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanarak tarafından nasıl değerlendirileceğini gösterir.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Bu video, iskemik inmeyi modellemek için yaşlı sıçanlarda ortak karotis arter veya CCA ligasyonu ile kalıcı distal orta serebral arter oklüzyonu veya MCAO gerçekleştirme prosedürünü göstermektedir. Bu, beyne giden kan akışını engelleyerek nöronal ölüme yol açar ve inme mekanizmalarını ve potansiyel tedavileri incelemek için bir model oluşturur.

Bir sıçan modelinde orta serebral ve ortak karotis arter tıkanıklığı yoluyla iskemiyi indüklemek

Kaynak: Larpthaveesarp, A., et. al. P10 Sıçanlarda Neonatal İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, bir sıçan yavrusunda Orta Serebral Arter Oklüzyonu modelinin kurulmasını göstermektedir. İç karotis arter (ICA) açığa çıkar ve kan akışını sınırlamak için bir bağ sabitlenir. Orta Serebral Artere ulaşmak için IKA'dan bir oklüd yerleştirilir. Daha sonra daha fazla analizden önce yavrunun iyileşmesine izin verilir.

Lokal beyin iskemisini indüklemek için bir sıçan yavrusunda orta serebral arter tıkanıklığı oluşturmak

Biz bir kemirgen büyük bir beyin damar daimi tıkanıklığı için son derece tekrarlanabilir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik çok az çevresel zarar, en az kan kaybı, uzun süreli sağkalım oranının yüksek ve insan klinik nüfusu ile orantılı tutarlı infarkt hacmi ile gerçekleştirilebilir.

Kalıcı Serebral Gemi Tıkanıklığı<em&gt; Ile</em&gt; Çift Ligature ve transeksiyonu

Neonatal inme, çalışmayı mümkün kılmak için tutarlı fokal yaralanma paternlerine ve yüksek tekrarlanabilirliğe sahip translasyonel bir model gerektiren erken beyin hasarının önemli bir nedenidir. Bu çalışmada, tam terim eşdeğeri kemirgenlerde hemorajik olmayan, tek taraflı fokal iskemi-reperfüzyon hasarı oluşturmak için ayrıntılı cerrahi prosedür anlatılmaktadır.

P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Intraluminal filaman tıkanıklığı orta serebral arter deneysel kontur rodents en sık kullanılan vivo içinde modeldir. Ortak karotid arter onarım izin vermek için başka bir cerrahi yaklaşım burada, reperfüzyon ortak karotid arter ve orta serebral arter bölge tam bir reperfüzyon veren gerçekleştirilir.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Bu protokol, ortak karotis arter yoluyla orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için hazırlık sürecini tanımlar.

Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı

Bu çalışmanın amacı, motor ve mekansal hafıza eksikliklerinin deneysel çalışmalarında uygulanmak üzere sıçanlarda kalıcı, seçici orta beyin arter tıkanması uygulanan kraniektomi uygulanacak tekrarlanabilir bir yöntem oluşturmaktır.

Sıçanlarda Orta Beyin Arterinin Seçici ve Kalıcı Tıkanması: Motor ve Mekansal Hafıza Eksikliklerini İnceleme Deneysel Yaklaşımı

Keşfedin, sıçanlarda orta serebral arter tıkanıklığı modeli geliştirmek için mikrocerrahi teknikleri kullanarak serebral damar anatomisini koruyan minimal invaziv bir inme yöntemini. Bu protokol, iskemik inme araştırmalarında daha doğru sonuçlar elde etmeyi sağlar.

Serebral damarların anatomik yapısına zarar vermeden orta serebral arter tıkanıklığı/reperfüzyonunun bir sıçan modeli

Daha fazla video keşfet