Serebral damarların anatomik yapısına zarar vermeden orta serebral arter tıkanıklığı/reperfüzyonunun bir sıçan modeli
17 Mayıs 2024
Mevcut protokol, serebral damarların anatomik yapısını hasara neden olmadan koruyan bir orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu sıçan modelini tanımlar.
Bu çalışma, orta serebral arter tıkanıklığı veya reperfüzyonu için serebral damar entegrasyonunu sağlayan bir sıçan modeli geliştirmektedir. Serebral vasküler anatomiden ödün vermeden bir sıçan iskemik inme modelini indüklemek için yeni bir yöntem sunmaya odaklanmaktadır. Projede mikrocerrahi teknikler ve filamente bağlı iskemi kullanılmıştır.
Ortak karotis artere veya dış karotis sistemine zarar vermeden iskemiyi indüklemek için bir yöntem sunar. Kan akışını kalıcı olarak bozabilen veya serebral vasküler anatomiye zarar verebilen tekniklerin aksine, bu protokol birçok damarın anatomik bütünlüğünü korur. İskemik inmeyi incelemek için daha doğru, daha az zararlı bir yaklaşım sağlar.
Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi bir işletim platformuna yerleştirin. Boğaz ve sol boyun bölgesi çevresindeki kürkü tıraş ettikten sonra, ameliyat bölgesini Betadine ve% 70 etanol ile üç kez dezenfekte edin. Boynun ventral tarafında 1,5 santimetre uzunluğunda orta hat kesisi yapın ve yüzeysel fasyayı açın.
Dış karotis arteri, iç karotis arteri ve ortak karotis arteri ortaya çıkarmak için künt diseksiyon yapın. Ortak karotis arterin etrafına üç adet 4-0 ipek sütür yerleştirin ve internal karotis arter bifurkasyonunun yakınındaki dış karotis arterden başka bir ipek sütür yerleştirin. Proksimal ortak karotis arter üzerine serbest bırakılabilir bir kayma düğümü bağlayın.
Kan akışını engellemek için bir hemostat kullanarak distal ortak karotis arter üzerindeki dikişi sıkın. Damarın tıkanmadığından emin olmak için dikiş sırasında ortak karotis arterin etrafına gevşek bir şekilde başka bir kayma düğümü bağlayın. Şimdi, makas kullanarak, proksimal ipek sütür ile ortak karotis arter üzerindeki orta sütür arasında 0,5 milimetrelik bir kesi yapın.
Ortak karotis artere üç santimetre uzunluğunda 4-0 filament sokun. İntraluminal filamenti sabitlemek ve kanamayı önlemek için ortak karotis arterin etrafındaki ipek dikişleri sıkın. Daha sonra dikişi distal ortak karotis arterden çıkarın.
Dış karotis arter etrafındaki dikişleri kontrol ederek filamenti orta serebral arterin lümenine yerleştirmeye devam edin. Bir zamanlayıcı başlatın ve oklüzyonun başladığı zamanı kaydedin. Boyun kesisini 3-0 ipek dikişlerle dikin.
Hayvanı dikkatlice bir kurtarma kafesine yerleştirin. İskemik modellemeden sonra, anestezi uygulanmış sıçanın boyun insizyonunu tekrar açın. Diseksiyon mikroskobu altında, mikro kelepçeyi intraluminal sütür düğümünün yakınına yatay olarak yerleştirirken tıkayıcı filamenti nazikçe geri çekin.
Ortak karotis arter insizyonunun yakınında beyaz uç açıkça görünene kadar geri çekilmeye devam edin. Ardından filamenti tamamen çıkarın ve güvenli intraluminal sütür düğümünü serbest bırakın. Proksimal ortak karotis arter düğümünün kalp ucu tarafına yakın başka bir mikro kelepçe yerleştirin.
Daha sonra, proksimal ortak karotis arter etrafındaki dikiş düğümünü çıkarın. Kesi bölgesini tuzlu su ile durulayın. Kanı çıkarmak ve net bir cerrahi alan elde etmek için alanı steril bir pamuk topuyla kurulayın.
Şimdi 4x büyütmede, ortak karotis arter insizyonunu 11-0 mikrocerrahi sütürler kullanarak kesintili bir şekilde dikin. Dikişten sonra, kan akışını eski haline getirmek için ortak karotis arterin her iki ucundan mikro kelepçeleri çıkarın. Steril bir pamuk topu ile ortak karotis arter sütür bölgesine 30 saniye boyunca baskı uygulayın.
Kanama olmadığından emin olmak için ortak karotis arteri iki dakika boyunca gözlemleyin. Boyun kesisini dikin ve anestezi iyileşmesi için fareyi 35 santigrat derecelik bir bakım kutusuna yerleştirin. İskemi reperfüzyonundan üç gün sonra, beyni ötenazi yapılan sıçandan çıkarın.
Beyni eksi 20 santigrat derecede 20 dakika dondurun. Dondurulduktan sonra, beyni iki milimetre kalınlığında koronal bölümlere ayırmak için bir neşter kullanın. Beyin bölümlerini 37 santigrat derecede 20 dakika boyunca% 2 TTC ile inkübe edin.
İnkübasyondan sonra, beyin bölümlerini küçük bir Petri kabına aktarın ve% 2 TTC'yi atın. Daha sonra beyin bölümlerini oda sıcaklığında 30 dakika boyunca% 10 formalin ile sabitleyin. Formalini atın ve beyin bölümlerini PBS ile durulayın.
Ardışık dilimlerin dijital fotoğraflarını çekin. ImageJ yazılımını kullanarak enfarktüs alanlarını kantitatif olarak ölçün. TTC boyamasından sonra, serebral iskemiye bağlı enfarktüsler hem striatumda hem de kortekste gözlendi.
İskemik inmeden üç gün sonra, toplam enfarktüslü yüzde, ameliyat sonrası mortalite oranı %16.7 ile hemisferin yaklaşık %30'unda ölçüldü.
Genel Bakış
Bu çalışma, serebral damarların bütünlüğünü koruyan, orta serebral arter oklüzyonu veya reperfüzyonu için bir sıçan modeli geliştirmektedir. Odak noktası, serebral vasküler sistemin anatomik yapısını bozmadan iskemik inme indüklemek için kullanılan yeni bir yöntemdir.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- İnme Araştırmaları
- Cerrahi Teknikler
Arka Plan
- İskemik inme, serebral vasküler yanıtların incelenmesi için önemli bir model sunar.
- Geleneksel yöntemler genellikle vasküler anatomiye zarar verir.
- Damar bütünlüğünün korunması, doğru inme araştırmaları için kritik öneme sahiptir.
- Bu protokol, iskemi modellemesi için daha az zararlı bir yaklaşım sağlamayı amaçlamaktadır.
Çalışmanın Amacı
- Sıçanlarda iskemik inme indüklemek için daha az invaziv bir yöntem geliştirmek.
- Oklüzyon prosedürü sırasında serebral damar mimarisini korumak.
- Gelecekteki inme ile ilgili çalışmalar için pratik bilgiler sunmak.
Kullanılan Yöntemler
- Çalışmada, anestezi altındaki sıçanlar üzerinde mikrocerrahi teknikler uygulanmıştır.
- Temel biyolojik model: sıçan iskemik inme modelidir.
- Vasküler anatomi korunurken iskemi oluşturmak için filamentle tetiklenen bir yöntem kullanılmıştır.
- Detaylar arasında spesifik insizyonlar, sütürleme teknikleri ve iyileşme prosedürleri yer almaktadır.
- İskemi sonrası, beyin kesitleri TTC boyama yoluyla enfarkt analizi için işlenmiştir.
Temel Sonuçlar
- Minimal mortalite (%16,7) ile damar anatomik bütünlüğünün korunduğu gözlemlendi.
- Reperfüzyondan üç gün sonra hemisferin yaklaşık %30'unun infarkt geçirdiği saptandı.
- Teknik, iskemik inmeyi incelemek için kontrollü bir yaklaşım sergiledi.
- ImageJ yazılımı ile nicelleştirme yapılarak yöntemlerin doğrulanması sağlandı.
Sonuçlar
- Çalışma, vasküler hasarı minimize eden güvenilir bir iskemik inme modelini ortaya koymaktadır.
- Bu yaklaşım, geliştirilmiş inme araştırma metodolojileri için yeni yollar açmaktadır.
- Serebral vasküler yanıtların iskemiye karşı anlaşılması geliştirilmiştir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama Uygunluğu
Preklinik inme modellerinde serebral vasküler anatominin korunması, nörovasküler ilaç keşfinde translasyonel sadakat ve mekanistik risk azaltma açısından kritik öneme sahiptir. Bu sıçan modeli, kafa karıştırıcı vasküler hasarı minimize ederken iskemik hasarın kantitatif değerlendirmesine olanak tanıyarak, erken evre hedef doğrulamada prediktif güveni destekler. Bu yaklaşım, nöroprotektif ve reperfüzyon stratejilerini değerlendirmek için fizyolojik olarak daha ilgili bir sistem sunarak portföy karar verme süreçlerini geliştirir.
Biyofarma Ar-Ge'de Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Anatomik karıştırıcı faktörler olmadan nörovasküler yaralanma mekanizmalarının incelenmesine olanak tanır.
- İskemik etkileri cerrahi artefaktlardan ayırarak fonksiyonel hedef doğrulamasını destekler.
- Serebrovasküler endikasyonlarda aday seçiminin öngörü güvenilirliğini artırır.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bileşik etkinliğinin taranması için valide edilmiş in vivo modellerin hazırlanmasını kolaylaştırır.
- TTC boyaması ve dijital görüntü analizi kullanarak tekrarlanabilir enfarkt kantifikasyonu sağlar.
- Çalışmalar arasında nöroprotektif müdahalelerin standartlaştırılmış değerlendirmesine olanak tanır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- İskemi sırasında damar bütünlüğünü koruyarak hastalıkla ilgili patofizyoloji ile uyum sağlar.
- Mekanistik keşiften, terapötik hipotezlerin preklinik validasyonuna kadar olan sürekliliği destekler.
- Klinik olarak ilgili reperfüzyon hasarını modelleyerek translasyonel riski azaltır.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu model, mekanistik çalışmalar ile translasyonel etkinlik testleri arasında köprü kurarak, nörovasküler ilaç geliştirmenin erken keşif ile preklinik validasyon sürekliliğine uyum sağlar.
- Keşif Biyolojisi: Prosedürel karıştırıcı faktörlerin minimize edildiği iskemik hasar mekanizmaları üzerinde hipotez testine olanak tanır.
- Tarama: Bileşiklerin değerlendirilmesi için tekrarlanabilir, kantitatif enfarkt ölçümleri sağlar.
- Analitikler: ImageJ yazılımını kullanarak enfarkt boyutunun dijital görüntü tabanlı kantifikasyonunu sunar.
- Translasyonel Araştırma: Klinik inme patofizyolojisi ile uyumu desteklemek için damar anatomisini korur.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Nörovasküler araştırma portföyleri için standardize edilmiş, yeniden kullanılabilir bir in vivo platform sunar.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Nörovasküler hedef doğrulanmasında öngörüsel güveni artırır ve mekanistik belirsizliği azaltır.
- Operasyonel Değer: Preklinik inme modellemesinin tekrarlanabilirliğini ve standartlaştırılmasını geliştirir.
- Stratejik Değer: Fizyolojik olarak ilgili etkinlik verileri sağlayarak devam/dur kararlarını iyileştirir.
- Portföy Etkisi: Nörovasküler varlıkların ilerlemesi için riskle uyumlu önceliklendirmeyi destekler.
Uygulama Hususları
- Damar onarımı için mikrocerrahi uzmanlığı ve diseksiyon mikroskoplarına erişim gereklidir.
- Filaman yerleştirme ve vasküler sütürleme için hassas enstrümantasyon gerektirir.
- Cerrahi ve analitik protokollerin ekipler arası standardizasyonunu gerektirir.
- Diğer kemirgen modellerine adaptasyon, protokol optimizasyonu gerektirebilir.
- Potansiyel kısıtlamalar arasında cerrahi öğrenme eğrisi ve türe özgü vasküler yanıtlar yer almaktadır.
Biyofarma SSS
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:19
Ischemic Stroke Modeling Through Carotid Artery Manipulation in Rats
3:15
Microsurgical Suturing of the Common Carotid Artery and Post-Operative Brain Tissue Analysis in Rat Models of Ischemia-Reperfusion
5:45
Representative Results
